1-[3-丁基-1(3h)-異苯并呋喃酮-6-基]-1h-吡唑-5(4h)-酮衍生物及制備方法和醫藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一類新的1-[3-丁基-1(3H)-異苯并呋喃酮- 6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物、其制備方法、含它們的藥物制劑及其作為抗血小板聚集、 抗氧劑和抗腦缺血藥物的用途。
【背景技術】
[0002] 缺血性腦卒中，是一種高致殘、高致死的疾病，發病機制非常復雜。丁苯酞(3-11-butylphthalide，3_ 丁基-1(3H)_異苯并咲喃酮)是我國近年來自主開發的新藥之一，臨床 上主要用于治療輕、中度缺血性腦卒中。丁苯酞通過抑制血小板聚集，改善腦微循環及能量 代謝發揮治療作用。
[0004] 依達拉奉(edaravone，1-苯基-3-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮)是一種新型腦神經保 護劑，由三菱東京制藥株式會社開發，2001年在日本上市，臨床上主要用于治療急性缺血性 腦卒中。依達拉奉具有脂溶性，易透過血腦屏障，有很強的自由基清除及抗脂質過氧化活 性，是目前臨床上使用的重要的自由基清除藥物。
[0005] 依達拉奉和丁苯酞是兩種作用靶點和作用機制完全不同的腦缺血治療藥物。鑒于 腦缺血致病機理復雜，作用于多個靶點的多種藥物同時使用是比較有效的策略。近年來，臨 床上將兩種藥物聯合使用，研究表明，聯合應用組總有效率顯著高于單一用藥組。但是聯合 用藥增加了患者負擔，也不方便，因此，開發基于丁苯酞-依達拉奉藥效團拼合的"一藥多 革巴"型衍生物，對于尋找效果更好的新型腦缺血治療藥物具有重要意義。

【發明內容】

[0006] 本發明公開了一種1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍 生物、其制備方法以及醫藥用途。初步藥理實驗結果表明，本發明的1-[3_丁基-1(3H)_異苯 并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物具有優良的抗氧化和一定的抗血小板活性，因 此可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
[0007] 本發明的第一個目的是提供一類結構新穎并具有抗氧化和抗血小板聚集活性的 1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物，所述化合物具有以下 結構通式(I):
[0009] 其中：R代表HXi-Cn)直鏈或支鏈烷基或C6-C1Q芳香基，其中芳香基可任選一個或多 個以下的基團取代:F、Cl、Br、N02、NH：^0H;
[0010] 具體來說，通式I所示卜[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮 衍生物優選下列化合物：
[0011] 3-甲基-l-[3-丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（h);
[0012] 3-丙基-l-[3-丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（12);
[0013] 3-異丙基-l-[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮（13);
[0014] 3-苯基-l-[3-丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（14);
[0015] 3-(4-甲氧苯基）-1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮 (Is)；
[0016] 3-(4-乙氧苯基）-l-[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮 (16);
[0017] 3-(4-氯苯基）-卜[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮（17);
[0018] 3-三氟甲基-l-[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮（18);
[0019] 3-(4-溴苯基)-1-[3_ 丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（19);
[0020] 下面藥理實驗中涉及的化合物代號等同于此處代號所對應的化合物。
[0021] 本發明的另一個目的在于提供通式I所示化合物的制備方法，具體通過以下步驟 實現：
[0023]其中R的定義如前所述。
[0024] (1)制備中間體3-丁基-6-肼基-1(3H)_異苯并呋喃酮(b)
[0025]化合物a參考文獻的方法合成（CN102260233A)。在0~5°C條件下，將3-丁基-6-氨 基-1(3H)_異苯并呋喃酮(a)加入體積百分比為30%的酸性水溶液中，a與體積百分比為 30%的酸性水溶液的質量比為1: (5~20)，攪拌均勻，冰浴冷卻;再向其中緩慢滴入亞硝酸 鈉溶液，a與亞硝酸鈉的摩爾比為1: (1.0~1.2)，保溫攪拌0.5h，得淡黃色重氮鹽溶液;將二 水氯化亞錫溶于濃酸溶液中，二水氯化亞錫和濃酸溶液質量比為1: (2~5)，攪拌均勻，冰浴 冷卻至0~5°C。將含氯化亞錫的酸溶液在0_5°C條件下，緩慢滴入到上述淡黃色重氮鹽溶液 中，制得淡黃色溶液的a與氯化亞錫的摩爾比為1: (3~5)，滴畢，0-5°C繼續攪拌lh，室溫繼 續反應3h，停止反應，過濾，濾餅緩慢加至80mL冰水中，攪拌溶解，用30~50 %的氫氧化鈉溶 液調節pH至12~14,析出固體。抽濾，真空干燥，得淡黃色粉末狀固體。
[0026]本發明所述的酸為濃鹽酸、濃硫酸、濃磷酸中的一種。優選濃鹽酸。
[0027] (2)制備1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物（I)
[0028] 在室溫下，將3-丁基-6-肼基-1 (3H)-異苯并呋喃酮(b)加入溶劑中，攪拌，溶解，滴 加取代酰基乙酸乙酯衍生物，其中b和取代酰基乙酸乙酯衍生物的摩爾比為1: (1~1.5)，滴 畢，回流反應3~5h。冷卻，減壓蒸除溶劑。產物經硅膠柱層析色譜分離[石油醚：乙酸乙酯(v :V) = (3~12):1]，得黃色油狀或粉末狀固體1。
[0029] 本發明所述的反應溶劑選自乙醇、冰醋酸、四氫呋喃、氯仿。優選冰醋酸。反應的溫 度為室溫至所選溶劑的沸點。
[0030] 本發明的再一目的是提供通式I所示化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應 用，尤其是治療腦缺血藥物中的應用。
[0031] 以下是本發明代表化合物的藥理學實驗及數據：
[0032] 1.化合物抗血小板聚集的活性
[0033]以阿司匹林(ASP)及丁苯酞(NBP)為對照藥物，采用微量板比濁法對丁苯酞衍生物 進行了體外ADP誘導的抗血小板聚集活性進行了測定。
[0034]試驗方法：
[0035] (1)富血小板血漿(PPP)與貧血小板血漿(PRP)的制備：家兔心臟取血，以3.8%的 枸椽酸鈉抗凝(V血:劍=9:1)，將其800r/min離心lOmin后吸取上清液即制得PRP，將剩余 部分以3000r/min離心lOmin后吸取上清液即得PPP。新鮮制備的PRP在2h內用完。
[0036] (2)血小板聚集率的測定:在96孔板中加入90yLPRP，再加入5yL受試化合物(終濃 度100μΜ)，渦旋儀渦旋混勻，于37°C溫育床中振搖溫育lOmin。將96孔板振搖混勻后，置于酶 標儀上，655nm下測定吸光度，連續測定3次，記每孔三次吸光度平均值為AbspRp(Absppp為90μ LPPP加5yLDMS0同法處理測得）。加入5yL誘導劑ADP(終濃度為ΙΟμΜ)，渦旋混勻，振搖5min， 記平行孔的吸光度均值為Abs_ple。
[0037] (3)數據處理：結果0D655nm以x±s表示，按以下公式計算各組血小板聚集率 (aggregationrate，AR)及血小板聚集抑制率（aggregationinhibitionrate，AIR)，并單 因素方差分析法(AN0VA)分析實驗組與陽性組之間是否有統計學差異。
[0040] 式中AbsPRP為加入ADP前吸光度;Abssampie為加入ADP振搖5min后吸光度;Absppp為PPP組吸光度;AR_trQi為空白對照組血小板聚集率;ARexperiment為給藥組血小板聚集率。
[0041] 測定結果見表1。
[0042]表1通式I所示化合物對血小板聚集的影響p±s, n=5)
[0043]
[0044] 2.化合物清除羥自由基活性
[0045]以維生素C和依達拉奉為陽性藥物，采用H202-Fe2+氧化法評價丁苯酞衍生物體外 清除輕自由基（· 0H)的能力。
[0046]試驗方法：在3mL試管中加入9·OmMFeS〇4( 1 ·OmL)，0 · 3%H2〇2( 1 ·OmL)，9·OmM水楊 酸乙醇溶液(0.5mL)，分別加入陽性對照和受試化合物的DMSO溶液(0.5mL)，加蒸餾水補齊， 配成2mM溶液。于37°C水浴30min，在510nm下測定各組吸光度。
[0047] 羥基自由基清除率(scavengingrate，CR)計算公式為：
[0049] 式中:Ao為空白對照組的吸光度;Ax為化合物干預組的吸光度;AxQ為化合物物對照 組吸光度，即樣品本底吸收值。
[0050] 實驗結果見表2。
[0051]表2通式I所示化合物對羥自由基清除作用p±s，
[0053]以上藥理數據顯示，本發明通式I化合物中一些1-[1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]_ 2-吡唑啉-5-酮衍生物，比如h、12、13，具有一定的抗血小板聚集活性和較強的抗氧化活性， 可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
【具體實施方式】：
[0054]本發明結合實施例做進一步的說明。以下實施例只是說明本發明，而并非以任何 方式限制本發明。
[0055] 實施例1
[0056] 步驟一:3_丁基-6-肼基-1(3H)_異苯并呋喃酮(b)的制備
[0057] 在0~5°C條件下，將3-丁基-6-氨基-1(3H)_異苯并呋喃酮(a)加入體積百分比為 30%的鹽酸水溶液中，a與體積百分比為30%的鹽酸水溶液的質量比為1: (5~15)，攪拌均 勻，冰浴冷卻;再向其中緩慢滴入亞硝酸鈉溶液，a與亞硝酸鈉的摩爾比為1:(1.0~1.1)，保 溫攪拌0.5h，得淡黃色重氮鹽溶液;將二水氯化亞錫溶于濃鹽酸溶液中，二水氯化亞錫和濃 鹽酸溶液質量比為1: (2~4)，攪拌均勻，冰浴冷卻至0~5°C。將含氯化亞錫的鹽酸溶液在0-5°C條件下，緩慢滴入到上述淡黃色重氮鹽溶液中，制得淡黃色溶液的a與氯化亞錫的摩爾 比為1:(3~4)，滴畢，0-5°C繼續攪拌lh，室溫繼續反應3h，停止反應，過濾，濾餅緩慢加至 80mL冰水中，攪拌溶解，用30~35 %的氫氧化鈉溶液調節pH至12~13，析出固體。抽濾，真空 干燥，得淡黃色粉末狀固體。m.p: 86.7-87.9°C。
[0058]步驟二:3_甲基-1-[