專利名稱：藥物化合物巴西蘇木紅素的新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及以蘇木為原料提取的巴西蘇木紅素的在醫藥方面的新用途，屬于中藥
技術領域。
背景技術：
蘇木，為豆科植物蘇木Caesalpinia s即pan L.的干燥心材。分布于我國的廣西， 廣東，臺灣，貴州，云南，四川等地。全年可采。除去外皮及邊材，取心材，曬干。含有巴西蘇 木紅素(brazilein， brasilein)等成分。《本草綱目》記載蘇木具有"破血，排膿止痛"的功效。主治婦人血氣心腹痛，消癰 腫撲損瘀血"，《中藥大辭典_上冊》記載蘇木具有"行血破瘀，消腫止痛"的功效。蘇木為 常用中藥，具有活血化瘀、消腫止痛的作用。臨床上常用于治療跌打損傷、血瘀腫痛等癥。
近年來的研究表明，蘇木中的活性化合物巴西蘇木紅素(C16H1205)具有改善心肌收 縮力(Study on cardioactive effect of Brazilein. Pharmacology, 2006， 76， 76-83)、保 護缺血再灌所弓l起的腦損傷(Brazilein protects the brain against focal cerebral ischemia r印erfusion injurycorrelating to inflammatory response suppression. European J of Pharmacology. 2007， 558， 88-95)、抗氧化(Antioxidant Activity In Vitro of Three Constituents from Caesalpinia sappan L TSINGHUA SCIENCE AND TECHNOLOGY, 2008， 13(4) :474-479)、降血壓(專利:ZL200710122084. 6)等藥理作用。但未 見有對5-HL受體作用的報道。

發明內容
本發明的目的是提供巴西蘇木紅素對阻斷5-羥色胺2亞型受體(5_HT2)的作用， 即提供化合物巴西蘇木紅素在醫藥方面的又一種新用途，該用途為 化合物巴西蘇木紅素在治療因5-羥色胺2亞型受體激動所引起的病癥的藥物中 的應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動所引起 的腦供血不足的藥物中的應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動所引起 的心肌供血不足的藥物中的應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因子宮平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動所引起 的痛經的藥物的中應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因大腸和小腸平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動 所引起的腸易激綜合征的藥物中的應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因腦神經元上的5-羥色胺2亞型受體激動所引起的 焦慮的藥物中的應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因外周神經元上的5-羥色胺2亞型受體激動所引起
3的疼痛的藥物中的應用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因淋巴細胞上的5-羥色胺2亞型受體激動所引起的 免疫功能亢進的藥物中的應用。 本發明的實驗結果表明，化合物巴西蘇木紅素具有明顯的阻斷5-羥色胺2亞型受 體(5-HT》的作用。以該化合物為活性成分，可以用來制備治療因5-HT2受體激動所引起的 病癥，如各種類型的血管痙攣、頭痛、腦供血不足、冠心病心絞痛，胃腸平滑肌收縮功能紊亂 的腸易激綜合征，腦神經元5-HT2受體興奮的煩躁焦慮，外周神經元上的5-HT2受體激動所 引起的疼痛，子宮平滑肌痙攣的痛經，淋巴細胞5-HL受體激動所引起的免疫功能亢進等。


圖1為巴西蘇木紅素化學結構式。 圖2為巴西蘇木紅素阻斷5_HT2受體激動劑麥角新堿對血管收縮的作用。
圖3為巴西蘇木紅素阻斷5_HT2受體激動劑麥角新堿對小鼠子宮的收縮幅度。
圖4為不同濃度的巴西蘇木紅素阻斷5_HT2受體激動劑麥角新堿收縮子宮平滑肌 的活性。
具體實施例方式實施例1 、理化及波譜特征 本發明所用巴西蘇木紅素(英文名brazilein或brasilein ;) (C16H1205)的結構 式如圖l。為紅棕色晶體(MeOH)，mp 260_265°C (dec.)。
TLC檢查紫外燈365nm下顯亮白色熒光。
EI-MSm/z :284(M+)。 IR(KBr)cm—1 :3400， 1705 (C = 0) ， 1670， 1600， 1520， 1410， 1390， 1100。
UV (MeOH) nm : 272 ， 445 ， 552 。 'H NMR(DMS0-d6) S :2.85，2H， s (H_7) ， 4. 01， 1H， d， J = 11. 5， 4. 47， 1H， d， J = 11. 5(H-6) ，6. 33， 1H， s(H_8) ，6. 36， 1H， d， J = 2. 0(H_4) ，6. 57， 1H， dd， J = 8. 5，2. 0(H_2)， 7. 11， 1H， s(H-ll) ，7. 81， 1H， d， J = 8. 5(H_1)。 13C NMR(DMS0-d6) S :72. 9 (C-6) ， 74. 2 (C-6a) ， 102. 8 (C-4) ， 104. 1 (C-11)， 110. 8 (C_la) ， 110. 8 (C_2) ， 117. 5 (C_8) ， 126. 0 (C_lla) ， 130. 5 (C_l) ， 151. 5 (C_12)， 152. 3 (C-10) ， 157. 7 (C_4a) ， 158. 9 (C_7a) ， 162. 2 (C_3) ， 179. 3 (C_9)。
實施例2、對血管平滑肌5_HT2受體的作用 本發明所用巴西蘇木紅素，批號070131，純度98% (HPLC標定)。
將巴西蘇木紅素以匿SO溶解，以生理鹽水配制成所需濃度。實驗所用動物為 Wistar大鼠，雌雄兼用，清潔級，體重180 250g ;購自北京維通利華實驗動物技術有限公 司，合格證號SCXK(京)2007-0001。 實驗所用儀器有麥氏浴槽(25ml) (Kent Science Corporation, USA);肌肉張力 換能器(JZJ01型，30g)(成都儀器廠)；RM6240BD多通道生理信號采集處理系統(成都儀 器廠)；恒溫蠕動泵(MODEL 210) (PolyScience， USA)。 實驗所用試劑有麥角新堿(Ergometrine Maleate)，上海禾豐制藥有限公司生產。分離血管及灌流所用的Krebs緩沖液成分(mmol/L) :NaCl 118， KC1 4.7， CaCl2 1.5， MgS04 1. 2， NaHC0325，葡萄糖5. 5， KH2P04 1. 2， pH 7. 4。
實驗具體步驟如下 離體血管環制備和血管平滑肌張力測定方法。取大鼠，禁食不禁水24小時，用 10%戊巴比妥鈉(lml/0. 1kg)麻醉后迅速剪開胸腔分離胸主動脈，在冷凍及95%02+5%0)2 飽和的克氏液里用眼科鑷除去血管上的脂肪及結締組織，剪成約4mm的血管環，固定在麥 氏浴槽里的拉鉤與固定鉤上，拉鉤連接量程為30g的張力換能器。麥氏浴槽里是持續通混 合氣，20ml的Krebs液。浴槽外套與恒溫蠕動泵連接，以37±0. 5。C循環水灌流溫育。張力 換能器接RM6240BD多通道生理信號采集處理儀，在電腦上觀察張力變化，將血管環張力調 節為lg，平衡約30分鐘；血管張力穩定后，調節張力為2g，平衡30分鐘或以上，直到血管張 力平穩，期間每15分鐘換Krebs液一次。用50mM KC1重復剌激血管環三次，以誘發血管環 的最大收縮幅度。待血管環重新穩定后加入藥物，觀察血管收縮舒張引起的張力變化。以 KC1誘發最大收縮幅度為100X，藥物誘發血管收縮的幅度與KC1誘發最大收縮幅度之間的 比率為血管收縮率。 巴西蘇木紅素對麥角新堿預作用的影響。穩定后的血管環加入ImM的麥角新堿， 待血管環收縮穩定后，加入100 M巴西蘇木紅素，記錄30分鐘以上。并以ImM的麥角新堿 對血管環的作用為對照，考察5-HT受體對對巴西蘇木紅素舒張胸主動脈血管平滑肌作用 的影響。 所得數據經EXCEL軟件處理。SPSS10. 0軟件處理，方差分析，組間t檢驗。
本實驗所得結果如下 選用5_HT2受體激動劑麥角新堿，并采用預先加入和后加入麥角新堿兩種加藥方 式進行研究。結果顯示加入麥角新堿后，血管出現明顯的強收縮。預先加入麥角新堿并使 血管達到最大且平穩的收縮狀態后，再加入巴西素木紅素作用30分鐘，血管張力沒有明顯 變化，收縮幅度與麥角新堿組相比無明顯差異。先加入巴西素木紅素30分鐘后，再加入麥 角新堿后，血管收縮幅度未見明顯增強，再加入KCL進行剌激，血管張力明顯增加。巴西蘇 木紅素能夠有效阻斷麥角新堿對血管的收縮作用。如圖2所示，巴西蘇木紅素阻斷5-HT2 受體激動劑麥角新堿對血管收縮的作用。KC1激活血管收縮濃度為50mM。三組(麥角新 堿對照組、巴西蘇木紅素先加入組和巴西蘇木紅素先后入組)結果比較。圖中數據為均值 ±標準偏差，各組均用3個動脈條重復實驗(n = 3) 。 *與麥角新堿組相比有顯著性差異， P < 0. 05。 本結果顯示，巴西蘇木紅素能作用于5_HT2受體而阻斷該受體激動劑麥角新堿對 血管的張力。 實施例3、對子宮平滑肌5_HT2受體的作用 本發明所用巴西蘇木紅素，批號070131。將巴西蘇木紅素以匿SO溶解，以生理鹽 水配制成所需濃度。實驗所用動物為ICR小鼠，雌性，清潔級，體重18 22g，購自北京維通 利華實驗動物技術有限公司，合格證號SCXK(京)2007-0001。 實驗所用儀器有麥氏浴槽(25ml) (Kent Science Corporation, USA);肌肉張力 換能器(JZJ01型，30g)(成都儀器廠)；RM6240BD多通道生理信號采集處理系統(成都儀 器廠)；恒溫蠕動泵(MODEL 210) (PolyScience， USA)。
實驗所用試劑有5-羥色胺(5-HT) (Sigma公司)、麥角新堿(上海禾豐制藥有限 公司)。分離血管及灌流所用的Krebs緩沖液成分(mmol/L) :NaCl 118， KC1 4. 7， CaCl2 1. 5， MgS04 1. 2， NaHC03 25，葡萄糖5. 5， KH2P04 1. 2， pH 7. 4。
本發明所用實驗方法如下 小鼠離體子宮平滑肌張力測定方法。取雌性未孕小鼠，禁食不禁水24小時，頸椎 脫臼處死，卵巢與子宮分叉處之間的中段子宮，剪除周圍組織。子宮肌條一端分別用手術縫 線將肌條扎緊打結連于張力換能器，另一端打結后再結一個直徑約0. 5cm的環固定于浴槽 底部的玻璃彎鉤上，浴槽中裝入20ml恒溫(37°C )通氣(95% 02+5% C02)的Krebs液。肌 條給予lg的前負荷溫育，子宮平滑肌條溫育15 20分鐘后，待肌條的自發活動平穩后加 入所受試的藥物。記錄給藥前10分鐘，給藥后10分鐘的收縮波的頻率、平均振幅和張力。 其中張力以每次收縮最低點表示，強度幅度以每次收縮所達到的最高點表示。
巴西蘇木紅素對小鼠離體子宮平滑肌的作用。自律性收縮穩定的子宮平滑肌記錄 IO分鐘的收縮波，加入不同濃度的巴西蘇木紅素(50iiM、100iiM和200iiM)，繼續記錄10 分鐘以上收縮波，觀察巴西蘇木紅素對小鼠離體子宮平滑肌的作用。 5-HT和麥角新堿對巴西蘇木紅素舒張血管作用。(1)自律性收縮穩定的子宮平滑 肌，加入100iiM巴西蘇木紅素，記錄10分鐘后，分別加入5-HT(lmM)和麥角新堿(lmM)，繼 續記錄10分鐘以上的收縮波。(2)自律性收縮穩定的子宮平滑肌，分別加入5-HT(lmM)和 麥角新堿(l慮)，記錄10分鐘后，加入100iiM巴西蘇木紅素，繼續記錄10分鐘以上的收縮 波。 不同濃度的巴西蘇木紅素對麥角新堿收縮子宮平滑肌活性的影響。自律性收縮穩 定的子宮平滑肌，分別加入不同濃度的巴西蘇木紅素(50 ii M、 100 ii M和200 ii M)，記錄10分 鐘后，加入麥角新堿(lmM)，繼續記錄IO分鐘以上的收縮波。 所得數據經EXCEL軟件處理。SPSS10. 0軟件處理，方差分析，組間t檢驗。
本實驗所得結果如下 不同濃度的巴西蘇木紅素(50 ii M、100 ii M和200 ii M)對子宮的收縮幅度和頻率無 明顯影響。 分別預先加入非選擇性5-HT受體激動劑5-HT和5_HT2受體激動劑麥角新堿，后 加入100i!M的巴西蘇木紅素均不能升高或降低子宮平滑肌的張力。而子宮平滑肌經過 100 i！ M的巴西蘇木紅素作用后，分別后加入5-HT和麥角新堿，此時加入5-HT仍可增加子宮 平滑肌的張力，而加入麥角新堿并未增強子宮平滑肌張力，與麥角新堿組相比子宮平滑肌 張力顯著降低，與麥角新堿組相比子宮平滑肌頻率無明顯影響。圖3為巴西蘇木紅素阻斷 5-HT2受體激動劑麥角新堿對小鼠子宮的收縮幅度，A:各組小鼠子宮收縮幅度的比較。與 對照組相比^P〈0.05。 B:各組小鼠子宮收縮頻率的比較。圖中數據為均值士標準偏差， 各組均用3個子宮條重復實驗(n = 3)。 子宮平滑肌預先加入不同濃度的巴西蘇木紅素(50iiM、100iiM和200iiM)作用20 分鐘后，加入麥角新堿，結果顯示100 ii M和200 ii M的巴西蘇木紅素能明顯阻斷麥角新堿所 引起的子宮平滑肌張力增加。圖4為不同濃度的巴西蘇木紅素阻斷5-HT2受體激動劑麥角 新堿收縮子宮平滑肌的活性。圖中數據為均值±標準偏差，各組均用3個子宮條重復實驗 (n = 3) 。 *與對照組(生理鹽水)相比，P < 0. 05。
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本結果顯示巴西蘇木紅素能夠明顯阻斷麥角新堿對血管和子宮平滑肌的收縮效 應；但不能阻斷5-HT對血管及子宮平滑肌的收縮效應。由于麥角新堿為5-HL受體激動劑， 因此可知巴西蘇木紅素通過阻斷5-HT2受體而起發揮效應。又5-HT為5-HT受體的配體， 對所有5-HT受體亞型均有激動作用，巴西蘇木紅素不能夠有效阻斷5-HT對血管和子宮平 滑肌的作用，證明了巴西蘇木紅素作用于5-HT2受體的特異性。
權利要求
化合物巴西蘇木紅素在治療因5-羥色胺2亞型受體激動所引起的病癥的藥物中的應用。
2. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型 受體激動所引起的腦供血不足的藥物中的應用。
3. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型 受體激動所引起的心肌供血不足的藥物中的應用。
4. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因子宮平滑肌上的5-羥色胺2亞型 受體激動所引起的痛經的藥物的中應用。
5. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因大腸和小腸平滑肌上的5-羥色胺 2亞型受體激動所引起的腸易激綜合征的藥物中的應用。
6. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因腦神經元上的5-羥色胺2亞型受 體激動所引起的焦慮的藥物中的應用。
7. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因外周神經元上的5-羥色胺2亞型 受體激動所引起的疼痛的藥物中的應用。
8. 如權利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因淋巴細胞上的5-羥色胺2亞型受 體激動所引起的免疫功能亢進的藥物中的應用。
全文摘要
藥物化合物巴西蘇木紅素的新用途，屬于中藥技術領域。經體外試驗證明，化合物巴西蘇木紅素具有明顯的阻斷5-羥色胺2亞型受體(5-HT2)的作用。以該化合物為活性成分，可以用來制備治療因5-HT2受體激動所引起的病癥，如各種類型的血管痙攣、頭痛、腦供血不足、冠心病心絞痛，胃腸平滑肌收縮功能紊亂的腸易激綜合征，腦神經元5-HT2受體興奮的煩躁焦慮，外周神經元上的5-HT2受體激動所引起的疼痛，子宮平滑肌痙攣的痛經，淋巴細胞5-HT2受體激動所引起的免疫功能亢進等。
文檔編號A61P1/00GK101773493SQ20101011181
公開日2010年7月14日 申請日期2010年2月11日 優先權日2010年2月11日
發明者李伯男, 李慧穎, 杜力軍, 王玉剛, 王秀坤, 胡珺, 邢東明, 雷帆 申請人:清華大學