專利名稱：一種治療糖尿病神經病變的中藥制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及中藥技術領域，特別是涉及一種治療糖尿病神經病變的中藥制劑及其制備方法。

背景技術：
糖尿病是最常見的慢性病之一，隨著人們生活水平的提高，人口老齡化以及肥胖發生率的增加，糖尿病的發病率呈逐年上升趨勢。糖尿病在中國的發病率達到2％，據統計，中國已確診的糖尿病患者達4000萬，并以每年100萬的速度遞增。糖尿病是由于胰島功能減退而引起碳水化合物代謝紊亂的代謝障礙性疾病，主要特點是血糖過高、糖尿、多尿、多飲、多食、消瘦、疲乏，其主要危害在于它的并發癥。
糖尿病的并發癥分為急性并發癥、慢性并發癥和神經并發癥，神經并發癥為 (1)感覺神經疼痛、麻木、感覺過敏； (2)運動神經可見單神經麻痹引起的運動障礙，局部肌肉可萎縮； (3)植物神經出汗異常、血壓及心率變化、尿失禁或尿潴留、腹瀉或便秘以及陽痿等。
西藥對糖尿病的治療以降血糖為主，對糖尿病慢性并發癥治療效果不大。而且由于西藥中含很多對人體毒副作用強的化學成份，故長期服用西藥對人體的肝、腎損傷嚴重。
與服用降糖西藥相比，糖尿病患者使用胰島素能減輕損傷人體的肝、腎等臟器組織，但是，不是每個糖尿病人都能使用胰島素，有的糖尿病人不能使用胰島素，特別是高胰島素血癥的糖尿病患者不能使用。并且，胰島素如果使用不當容易產生低血糖，因此必須根據胰島功能的測定才能正確使用胰島素，還有些糖尿病患者伴有胰島素抗體，這時用胰島素治療效果就不明顯，所以要注意對有胰島素抗體的糖尿病患者進行消除胰島素抵抗的治療，這樣使用胰島素才能達到平穩降糖的目的。更為重要的是，使用胰島素和服用西藥一樣，只有降糖作用，沒有治療功效，對糖尿病并發癥沒有明顯的治療效果。
目前，市場上有很多在中藥中加入降糖西藥的產品，這樣的產品對患者的危害就更大了，很多患者覺得服用某些中藥產品后血糖迅速下降得到控制，便認為此種中藥是治療糖尿病的好藥，殊不知其中必有西藥(降糖)成份，由于其中的西藥(降糖)成份劑量不詳，患者服用時往往服用了成倍的劑量，這樣不但對臟腑器官的危害更大，而且容易導致低血糖，長期服用損傷人體器官和加快糖尿病并發癥的發生、發展，更為重要的是耽誤了患者治療糖尿病的最佳時機，延誤了病情，給患者生理和心理上造成更大的痛苦。
中藥產品有調節臟腑、緩慢降糖作用，主要是辨癥施治，也就是對癥用藥，隨癥加減，起到標本兼治的作用，采用中藥治療糖尿病能達到從人體內部調理各臟腑器官功能及提高患者自身免疫力的效果，從而從根本上治療了糖尿病，使患者恢復健康。所以，研究和開發治療糖尿病的中成藥對糖尿病的治療有重要的意義。


發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種治療糖尿病神經病變的中藥制劑及其制備方法，該中藥制劑無毒副作用、療效佳，從根本上調理人體各臟腑器官功能，提高人體免疫力，保護神經細胞，達到標本兼治的目的。
為了解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案 按照重量份計算，本發明治療糖尿病神經病變的中藥制劑是由中藥原料丹參570～660份、三七100～170份和水飛薊素10～30份制備而成。
優選的，上述治療糖尿病神經病變的中藥制劑是由中藥原料丹參610～620份、三七125～145份和水飛薊素15～25份制備而成。
最佳的，前述治療糖尿病神經病變的中藥制劑是由中藥原料丹參612份、三七136份和水飛薊素20份制備而成。
本發明還提供了一種前述治療糖尿病神經病變的中藥制劑的優選的制備方法取三七粉碎，備用，取丹參，加乙醇提取，過濾，濾液回收乙醇，藥渣加水提取，過濾，濃縮，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，按常規制劑工藝制成各種劑型。
具體的，上述制備方法為取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入4～8倍量75％～95％乙醇提取1～3次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加6～12倍量水煎煮提取2～4次，每次0.5～2小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，按常規制劑工藝制成各種劑型。
本發明膠囊劑的制備方法為取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入6倍量85％乙醇提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加8倍量水煎煮提取3次，每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，在-0.06MPa～-0.08MPa條件下微波真空干燥成干浸膏，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，加入輔料，混勻，裝入膠囊，即得膠囊劑。
本發明中藥制劑的功能主治具有益氣養陰、扶正合營、行滯通脈、活絡止痛之功，用于糖尿病神經病變包括外周神經炎、糖尿病植物神經功能紊亂等癥。
在本方中丹參，唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖，苦，微寒，歸心、肝經，具有祛瘀止痛，活血通經，清心除煩之功效，用于月經不調，經閉痛經，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛等癥。三七(Panax Notoginseng)，以根、根狀莖入藥，是名貴中藥材，味甘微苦，性溫，歸肝、胃經，生用可止血化瘀、消腫止痛。水飛薊素(Silymarin)，淡黃色或棕黃色粉末，無特殊氣味，是由菊科藥用植物水飛薊種籽經科學方法精制而成的黃酮類化合物，其主要成分為水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊亭、飛水薊寧等，具有保肝、抗輻射及降血脂作用。以上三味中藥協同增效，共奏益氣養陰、扶正合營、行滯通脈、活絡止痛之功效。
試驗例一、提取工藝及成型工藝條件的確定 1、丹參提取工藝 1.1丹參醇提工藝 醇提工藝采用丹參醇提正交優選工藝。稱取丹參藥材60g，以乙醇濃度、回流時間、乙醇量為考查因素均提取2次，進行L9(34)正交試驗，并以丹參酮IIA含量為評價指標，篩選出最佳工藝。
1.1.1丹參酮IIA含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗用碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(75∶25)為流動相；檢測波長為270nm，理論塔板數按丹參酮IIA峰計應不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對照品適量，置10ml棕色瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1ml含0.18mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取醇提取液直接濾過，取繼濾液，即得。
測定法精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
1.1.2試驗安排及結果見表1、表2、表3 表1.實驗因素水平
表2.以丹參酮IIA為指標優選水提工藝的正交試驗數據
數據直觀分析 比較各因素不同水平實驗結果的平均值，對因素A，最大水平為2，對因素B，最大水平為2，對因素C，最大水平為2，因素D為空白列。比較各因素極差R值的大小，得出對指標丹參酮IIA含量影響因素由大到小順序為C＞B＞A。
方差分析 表3.以丹參酮IIA為指標優選醇提工藝的正交試驗數據方差分析

F0.05(2，2)＝19，F0.01(2，2)＝90 結果表明三個因素有顯著性差異。根據直觀分析和方差分析確定醇提工藝85％乙醇6倍量，回流提取2次，每次2小時。試驗結果表明丹參酮IIA轉移率為64.01％，總固物得率為15.79％，RSD＝3.3％。
1.2丹參水提工藝 水提工藝采用丹參醇提后所剩藥渣進行正交優選。以加水量、提取時間、提取次數考查因素均，進行L9(34)正交試驗，并以丹酚酸B含量為評價指標，篩選出最佳工藝。
1.2.1丹酚酸B含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗用碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)為流動相；檢測波長為286nm，理論塔板數按丹酚酸B峰計應不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75％甲醇溶解，制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取水提取液直接濾過，取繼濾液，即得。
測定法精密吸取對照品溶液、供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
1.2.2試驗安排及結果見表4、表5、表6 表4實驗因素水平
表5以丹酚酸B為指標優選水提工藝的正交試驗數據

數據直觀分析 比較各因素不同水平實驗結果的平均值，對因素A，最大水平為3，對因素B，最大水平為1，對因素C，最大水平為1，因素D為空白列。比較各因素極差R值的大小，得出對指標丹酚酸B含量影響因素由大到小順序為C＞B＞A。
方差分析 表6.以丹酚酸B為指標優選水提工藝的正交試驗數據方差分析 F0.05(2，2)＝19，無顯著性差異。
結果表明三個因素無顯著性差異。根據直觀分析確定水提工藝8倍量水，煎煮3次，每次1小時。試驗結果表明丹酚酸B轉移率為88.0％，總固物得率為15.79％，RSD＝0.3％。
1.3總固體物收率 總固體物收率(收膏率)測定精密吸取提取液25ml，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，揮干，于105℃干燥5小時，移至干燥器中，冷卻30分鐘，于105℃再干燥1小時，移至干燥器中，冷卻，迅速精密稱定重量，計算，即得總固物收率。
表7醇提工藝丹參酮IIA轉移率、總固體收率
表8水提工藝丹酚酸B轉移率及總固體收率
2、濃縮與干燥工藝的優選 由于原方制備成中藥制劑需要進行濃縮干燥后方可成型，因此，對濃縮干燥前后丹參酮IIA、丹酚酸B的變化進行了對比研究。
2.1濃縮條件對膠囊劑的影響 取6120g丹參藥材，按擬訂的工藝提取，濾液采用旋轉薄膜蒸發儀濃縮，醇提液在真空度-0.07MPa，水浴溫度55℃濃縮至乙醇揮盡得溶液1500ml，水提液在真空度-0.07MPa，水浴溫度65℃濃縮至相對密度1.05，濃縮得1600ml溶液。將兩份溶液混合。取樣測定丹參酮IIA、丹酚酸B的含量，計算轉移率。
試驗結果表明，濃縮前后丹參酮IIA轉移率為62.42％，平均損失率為1.59％，濃縮前后丹酚酸B轉移率為78.41％，平均損失率為10.35％，說明濃縮工藝對膠囊劑質量無明顯影響。
2.2不同干燥條件比較 合并以上濃縮液，分為6份，每份500ml，不同條件下干燥，取樣測定丹參酮IIA、丹酚酸B含量，結果見表9。
表9不同干燥條件的影響
試驗結果表明，常壓干燥時間長，丹參酮IIA、丹酚酸B轉移率低于微波真空干燥。真空干燥時間短，丹參酮IIA、丹酚酸B轉移率高，樣品質地疏松，易于粉碎。微波真空條件下，-0.08MPa和-0.06MPa干燥對丹參酮IIA、丹酚酸B轉移率有一定影響，故可在-0.06MPa～-0.08MPa條件下真空干燥。
3、成型工藝 藥粉經干燥后，粉碎，過5號篩。三七粉碎成細粉，與水飛薊素一同加入上述細粉中，混勻，裝入膠囊，即得。
試驗例二、藥效學實驗 摘要動物實驗結果表明(1)經絡舒對糖尿病后坐骨神經的傳導速度及動作電位不應期有明顯的保護作用，可明顯提高糖尿病坐骨神經的傳導速度，縮短其動作電位不應期，并對坐骨神經的病理學改變有改善作用。(2)對糖尿病大鼠坐骨神經升高的丙二醛(MDA)及山梨醇水平有一定的降低作用，對谷胱甘肽過氧化物酶GSH PX的活性有明顯的提高作用，對下降的超氧化物歧化酶(SOD)活性也有一定的提高作用。(3)經絡舒可明顯降低糖尿病大鼠的糖化血紅蛋水平及全血比粘度。(4)經絡舒具有明顯的鎮痛作用 試驗目的“經絡舒膠囊”(本發明膠囊劑)的功能主治為益氣養陰，扶正合營，行滯通脈，活絡止痛之功。用于糖尿病神經病變包括外周神經炎，糖尿病植物神經功能紊亂。根據其功能主治，本實驗在鏈脲佐菌素性糖尿病動物模型上觀察其對糖尿病周圍神經病變的保護作用，觀察其對糖尿病后坐骨神經出現的多元醇代謝通路和SOD、MDA、GSH-PX水平紊亂的改善作用，觀察其對糖尿病動物血液流變學及糖化血紅蛋白的影響，并觀察其抗炎、鎮痛作用。為其臨床應用提供實驗依據。
材料及主要儀器 1、受試藥及提供單位 (1)經絡舒膠囊，受試物為其內容物藥粉。每粒膠囊裝0.35克藥粉，每粒膠囊含原生藥材1.0克(即0.35克藥粉相當于原生藥材1.0克)，臨床每日擬用量相當于原生藥材9～12g/60kg(即相當于藥粉3.15～4.2g/60kg)。貴州省中藥制劑研究開發中心提供，批號20050601。
(2)糖脈康顆粒，功能主治養陰清熱，活血化瘀，益氣固精。用于糖尿病氣陰兩虛兼血瘀癥，癥見倦怠乏力、少氣懶言、自汗、盜汗、五心煩熱、口渴喜飲、胸中悶痛、肢體麻木或刺痛、便秘等和糖尿病II型及其并發癥見上述癥狀者。用法用量口服，一次1袋，一日3次。劑型規格顆粒劑，每袋5克，每盒10袋。成都中匯制藥有限公司，批號050617。
2、其它藥品和試劑 (1)鹽酸嗎啡注射液，1ml∶10mg/10支，沈陽第一制藥廠生產，批號040201(有效期至2009.01)。
(2)精蛋白鋅胰島素注射液，10ml∶400u/2支，中國江蘇萬幫生化醫藥股份有限公司生產，批號0306208(有效期至2005.06)。
(3)馬來酸氯苯那敏注射液(撲爾敏)，1ml∶10mg/10支，無錫市第七制藥有限公司，批號03031213(有效期至2006.03)。
(4)地塞米松磷酸鈉注射液，1ml∶5mg/10支，無錫市第七制藥有限公司，批號04082013(有效期至2006.07)。
(5)鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)；美國Sigma產品，98％HPLC，S0130-1G，015K1279。
(6)丙二醛試劑盒(MDA)、超氧化物歧化酶試劑盒(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒(GSH-PX)、糖化血紅蛋白試劑盒(GHb)，均為南京建成生物工程研究所生產，批號均為20051107。
(7)巴豆油由藥理學教研室制備，批號20040511。
(8)山梨醇，25克/瓶，國藥集團化學試劑有限公司，批號T20050815。
(9)高碘酸，100克/瓶，國藥集團化學試劑有限公司，批號F20050829。
(10)變色酸，25克/瓶，天津市光復精細化工研究所，批號20041222。
(11)肝素鈉注射液，2ml∶12500u/10支，上海第一生化藥業有限公司，批號030803(有效期至2006.07)。
(12)五氧化二砷，250g/瓶，國藥集團化學試劑有限公司，由我校化學教研室備案保存提供。
3、動物 (1)雄性Wistar大鼠，體重200～250g； (2)昆明種小鼠，體重18～25g，雌雄兼用。
4、主要儀器 One-Touch血糖測定儀，BL-420生物機能實驗系統，721分光光度計，TDL-5離心機，LG-R-80A血液粘度儀。
方法選擇 根據受試藥的功能主治，進行以下項目的藥效學研究 1、對糖尿病大鼠周圍神經病變的影響 (1)對大鼠坐骨神經傳導速度及動作電位不應期的影響 (2)坐骨神經作組織學觀察 (3)坐骨神經山梨醇含量、丙二醛含量(MDA)、過氧化物歧化酶活性(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶活性(GSH-PX)的觀察 2、對糖尿病小鼠周圍神經病變的影響 3、對糖尿病大鼠血糖、糖化血紅蛋白的影響 4、對大鼠糖尿病血液流變學指標的影響 5、鎮痛作用 試驗對照 1、正常對照組給予生理鹽水； 2、模型對照組給予生理鹽水； 3、陽性對照藥為中藥對照組(糖脈康顆粒)和西藥對照組(胰島素、嗎啡、地塞米松、撲爾敏等對照組)。
給藥途徑、給藥體積及配藥方法 1、給藥途徑 經絡舒及糖脈康顆粒均為灌胃(i.g)給藥。
2、灌胃給藥體積 大鼠10ml/kg，小鼠20ml/kg 3、配藥方法 經絡舒稱取適量藥粉，以適量蒸餾水溶解配制至所需濃度(保證給藥體積不變)。
糖脈康顆粒直接取其顆粒，以蒸餾水溶解配制至所需濃度(保證給藥體積不變)。
4、其他對照藥 胰島素大鼠直接注射每只50μl；小鼠10u/kg(取0.25ml以注射生理鹽水稀釋10倍，注射2.5ml/kg)； 嗎啡原液以注射用生理鹽水稀釋10倍(含嗎啡1mg/ml)，給予小鼠腹腔注射10ml/kg(10mg/kg)。
地塞米松原液以注射用生理鹽水稀釋1倍(含地塞米松2.5mg/ml)，給予大鼠皮下注射1.6ml/kg(4mg/kg)。
撲爾敏原液以注射用生理鹽水稀釋10倍(含撲爾敏1mg/ml)，給予大鼠腹腔注射4ml/kg(4mg/kg)。
數據處理 采用華西醫科大學衛生統計學教研室的《中國醫學百科全書醫學統計學》統計軟件包(第二版)進行有關檢驗。計量數據以x±s表示。
實驗方法和結果 1、對糖尿病大鼠坐骨神經傳導速度(簡稱MNCV，下同)、動作電位不應期及其病理學改變的影響 取雄性Wistar大鼠，體重200～250g，實驗前禁食12h，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，48mg/kg，臨用前用枸櫞酸緩沖液配制)造模，72h后以One-Touch血糖測定儀測定動物禁食12h的空腹血糖，血糖水平＞15mmol/L者為糖尿病大鼠。
取糖尿病大鼠，隨機分為模型對照組、西藥陽性對照組(胰島素，肌肉注射)、中藥陽性對照組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。另取大鼠不注射鏈脲佐菌素，作為正常對照組。糖尿病30天后，分別從模型對照組、正常對照組各取5只大鼠測定MNCV，如模型組MNCV及動作電位不應期出現改變趨勢，即可開始給藥，每天1次，連續60天。并于給藥后第15、30、45、60天測量每組的體重，給藥期間記錄每天的飲水量。給藥30天后各組取部分大鼠測定MNCV及動作電位不應期，測定方法及步驟如下 大鼠麻醉后，俯臥位固定，充分暴露右側坐骨神經，刺激電極置于坐骨切跡處的坐骨神經傳出部位(近端)，記錄電極置于脛骨內踝處(遠端)，連接BL-420生物機能實驗系統，選擇適當的刺激參數(單脈沖、波寬0.1ms、刺激強度1.5倍閾值、刺激間隔5s以上)，控制室溫(20±0.5℃)，保持大鼠體溫37℃。從計算機記錄坐骨神經動作電位不應期(潛伏期)，每只大鼠重復刺激3次，取其平均值，準確測量刺激電極到記錄電極之間的距離，代入公式坐骨神經傳導速度(m/s)＝刺激電極到記錄電極之間的距離/動作電位不應期。
給藥60天后，對各組剩余大鼠觀察其MNCV及動作電位不應期，并對坐骨神經進行組織學觀察。結果如下 (一)對大鼠體重、飲水量的影響 結果表明，經絡舒各劑量組對糖尿病大鼠的體重下降及飲水量增加均未見有保護作用，見表1、表2(a)及表2(b)。
表1經絡舒對糖尿病大鼠體重的影響(x±s，g，n＝5)
與正常對照組比較**P＜0.01 表2(a)經絡舒對糖尿病大鼠每天飲水量的影響(x±s，ml/只，n＝5)

與正常對照組比較**P＜0.01 表2(b)經絡舒對糖尿病大鼠每天飲水量的影響(x±s，ml/只，n＝5) 與正常對照組比較**P＜0.01 (二)對MNCV及動作電位不應期的影響 (1)結果表明，糖尿病30天后，正常對照組的大鼠MNCV為30.29±5.93(x±s，n＝5)，動作電位不應期為0.51±0.10(x±s，n＝5)；糖尿病模型組大鼠MNCV為22.60±5.55(x±s，n＝5)，動作電位不應期為0.70±0.19(x±s，n＝5)。與正常對照組比較，糖尿病大鼠的動作電位不應期延長37.25％，MNCV出現下降25.39％，見表3。
(2)給藥治療30天后，經絡舒各劑量組對糖尿病大鼠的MNCV下降均有一定的改善作用，與模型組比較提高11.54％，對動作電位不應期顯示一定的縮短作用，與模型組比較縮短11.71％，見表3。給藥治療60天后，經絡舒高劑量組能明顯縮短坐骨神經動作電位不應期時間，對MNCV減慢有明顯的改善作用，見表4。
表3經絡舒給藥30天對糖尿病大鼠坐骨神經傳導速度及動作電位不應期的影響(x±s) 與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01 表4經絡舒給藥60天對糖尿病大鼠坐骨神經傳導速度及動作電位不應期的影響(x±s)
與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01 (三)對坐骨神經病理學改變的影響 給藥后60天后，對各組糖尿病大鼠坐骨神經進行了組織學觀察，并對組織學病理改變級別評分(1)坐骨神經的外膜、束膜、神經鞘膜結構清楚，雪旺氏細胞形態正常、間質毛細血管及神經纖維軸突均正常，記分為0分；(2)間質內部分區域毛細血管內膜增厚，記分為1分；(3)間質內部分區域毛細血管內膜增厚，其周圍神經鞘膜缺失，表現脫髓鞘現象，記分為2分；(4)間質內部分區域毛細血管內膜增厚，其周圍神經鞘膜缺失、脫髓鞘，相應軸突輕度腫脹等，記分為3分。
結果表明，正常對照組大鼠坐骨神經的外膜、束膜、神經鞘膜結構清楚，雪旺氏細胞形態正常、間質毛細血管及神經纖維軸突均正常；糖尿病模型組大鼠坐骨神經均出現間質內部分區域毛細血管內膜增厚，其周圍神經鞘膜缺失，表現脫髓鞘現象，相應軸突輕度腫脹等改變；胰島素、糖脈康、經絡舒各給藥組的組織學病理改變級別評分有所降低，提示經絡舒對糖尿病大鼠坐骨神經的病理學改變有一定的保護作用，見表5。
表5經絡舒給藥60天對糖尿病大鼠坐骨神經病理學改變的保護作用

與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01 2、對糖尿病小鼠坐骨神經傳導速度、動作電位不應期的影響 雄性小鼠靜脈注射200mg/kg STZ，72小時后以ONE TOUCH血糖試紙測定尾靜脈血糖，大于15mol/L(與后面不一致)的小鼠為糖尿病小鼠。糖尿病小鼠隨機分為糖尿病模型對照組、胰島素對照組、中藥陽性對照組、以及經絡舒膠囊高、中、低劑量組。每組20只左右。另取未注射STZ的10小鼠作為正常對照組。分組后即開始給藥，每天1次，連續60天。于第61天處死小鼠測定小鼠坐骨神經傳導速度及動作電位不應期，測定方法及步驟如下 小鼠麻醉后，俯臥位固定，充分暴露右側坐骨神經，刺激電極置于坐骨切跡處的坐骨神經傳出部位(近端)，記錄電極置于脛骨內踝處(遠端)，連接BL-420生物機能實驗系統，選擇適當的刺激參數(單脈沖、波寬0.1ms、刺激強度1.5倍閾值、刺激間隔5s以上)，保持室溫25℃，保持小鼠體溫37℃。從計算機記錄坐骨神經動作電位不應期(即潛伏期，ms)，每只小鼠重復刺激3次，取其平均值，準確測量刺激電極到記錄電極之間的距離(cm)，代入公式坐骨神經傳導速度(m/s)＝刺激電極到記錄電極之間的距離/動作電位不應期。
結果表明，經絡舒高劑量組能明顯縮短糖尿病小鼠坐骨神經的動作電位不應期時間，對MNCV減慢有明顯的改善作用，見表6。
表6經絡舒給藥60天對糖尿病小鼠坐骨神經傳導速度及動作電位不應期的影響(x±s)
與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05 3、對糖尿病大鼠坐骨神經山梨醇水平的影響 取雄性Wistar大鼠，體重200～250g，實驗前禁食12h，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(48mg/kg，臨用前用枸櫞酸緩沖液配制)造模，72h后以One-Touch血糖測定儀測定動物禁食12h的空腹血糖，血糖水平＞15mmol/L者為糖尿病大鼠。
取糖尿病大鼠，隨機分為模型對照組、西藥陽性對照組(胰島素，肌肉注射)、中藥陽性對照組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。另取大鼠不注射鏈脲佐菌素，作為正常對照組。糖尿病造模30天后，各組開始給藥，每天1次，連續60天，于給藥60天后，取坐骨神經勻漿，取上清液按參考文獻的化學法測定山梨醇水平。
結果表明，糖尿病大鼠坐骨神經山梨醇水平明顯升高，高劑量、中劑量及低劑量組經絡舒對糖尿病大鼠坐骨神經山梨醇水平降低率分別為29.74、24.38、17.47％。見表7。
表7經絡舒對糖尿病大鼠坐骨神經山梨醇水平的影響(x±s) 與正常對照組比較*P＜0.05；與模型對照組比較△P＜0.05 4、對糖尿病大鼠坐骨神經SOD、MDA、GSH-PX水平的影響 取雄性Wistar大鼠，體重200～250g，實驗前禁食12h，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(48mg/kg，臨用前用枸櫞酸緩沖液配制)造模，72h后以One-Touch血糖測定儀測定動物禁食12h的空腹血糖，血糖水平＞15mmol/L者為糖尿病大鼠。
取糖尿病大鼠，隨機分為模型對照組、西藥陽性對照組(胰島素，肌肉注射)、中藥陽性對照組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。另取大鼠不注射鏈脲佐菌素，作為正常對照組。糖尿病造模30天后，各組開始給藥，每天1次，連續60天，于給藥60天后，取坐骨神經勻漿，取上清液按試劑盒方法及文獻方法測定坐骨神經丙二醛含量(MDA)、超氧化物歧化酶活性(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力水平。
MDA測試原理過氧化脂質降解產物中的MDA可與硫代巴比妥(TBA)縮合，形成紅色產物，在532nm處有最大吸收峰值。SOD測試原理黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶反應能產生超氧陰離子自由基(O2-·)，后者氧化羥基形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈紫紅色，用可見光分光光度計測其吸光度。當被測樣品含SOD時，則對超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時吸光度值降低，通過公式即可計算出樣品中的SOD活力。
GSH-PX測試原理還原型谷胱甘肽(GSH)和二硫代二硝基苯甲酸作用生成五硫代二硝基苯甲酸陰離子，呈現較穩定的黃色。機體中的谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)可以特異地催化GSH對過氧化氫(H2O2)的還原反應，形成H2O及氧化型谷胱甘肽。測定酶促反應中還原型谷胱甘肽(GSH)的消耗，則可計算出谷胱甘肽過氧化物酶的活力。
結果表明，糖尿病大鼠坐骨神經丙二醛含量(MDA)水平明顯升高，谷胱甘肽過氧化物酶活性(GSH-PX)、過氧化物歧化酶活性(SOD)明顯降低。
與糖尿病模型組比較，經絡舒高劑量、中劑量及低劑量組對糖尿病大鼠坐骨神經升高的MDA水平有降低作用，降低率分別為21.32、15.23、10.78％；對GSH-PX的活性有明顯的提高作用，提高率分別為18.82、12.81、9.90％；經絡舒高劑量、中劑量對下降的SOD活性也有提高作用，提高率分別為14.00、11.79％；見表8。
表8經絡舒對糖尿病大鼠坐骨神經MDA、GSH-PX、SOD的影響(x±s)

與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05 5、對糖尿病大鼠血糖、糖化血紅蛋白含量水平的影響 取雄性Wistar大鼠，體重200～250g，實驗前禁食12h，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(48mg/kg，臨用前用枸櫞酸緩沖液配制)造模，72h后以One-Touch血糖測定儀測定動物禁食12h的空腹血糖，血糖水平＞15mmol/L者為糖尿病大鼠。
取糖尿病大鼠，隨機分為模型對照組、西藥陽性對照組(胰島素，肌肉注射)、中藥陽性對照組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。另取大鼠不注射鏈脲佐菌素，作為正常對照組。分組后即開始給藥，每天1次，連續60天，于第61天測定大鼠空腹血糖，以1％肝素抗凝全血3～4ml，1000轉/分離心10分鐘，棄上清液留沉淀紅細胞，用生理鹽水按上述方法洗滌2～3次，再按試劑盒說明書方法及文獻方法測定糖化血紅蛋白含量(原理為血紅蛋白中具有酮胺鍵的糖化血紅蛋白在酸性環境中加熱，使己糖部分脫水，生成5-羥甲基糠醛化合物，后者可與硫代巴比妥(TBA)反應呈黃色，進行比色定量) 結果表明，給藥60天后，與模型組比較，高劑量和中劑量組的經絡舒對糖尿病大鼠空腹血糖有降低的趨勢，降低率分別為20.4％、13.3％。高劑量組的經絡舒能明顯降低糖尿病大鼠糖化血紅蛋白水平，見表9。
表9經絡舒對糖尿病大鼠血糖、糖化血紅蛋白的影響(x±s) 與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05 6、對糖尿病大鼠血液流變學的影響 取雄性Wistar大鼠，體重200～250g，實驗前禁食12h，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(48mg/kg，臨用前用枸櫞酸緩沖液配制)造模，72h后以One-Touch血糖測定儀測定動物禁食12h的空腹血糖，血糖水平＞15mmol/L者為糖尿病大鼠。
取糖尿病大鼠，隨機分為模型對照組、西藥陽性對照組(胰島素)、中藥陽性對照組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。另取大鼠不注射鏈脲佐菌素，作為正常對照組。分組后即開始給藥，每天1次，連續60天，于第61天采全血用1％肝素抗凝，在LG-R-80A血液粘度儀上測定血液流變學。
結果表明，經絡舒高劑量、中劑量組能明顯降低糖尿病大鼠血液全血的高切變率、中切變率、低切變率的全血比粘度，見表10。
表10經絡舒對糖尿病大鼠血液流變學全血粘度的影響(x±s)
與正常對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；與模型對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01 7、經絡舒的抗炎作用 7.1對巴豆油致小鼠耳廓腫脹的作用 取小鼠72只，雌雄兼用，體重18～22g，隨機分為空白對照組、西藥陽性組(地塞米松，皮下注射)、中藥陽性組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。每組12只。分組后開始給藥，每天1次，連續3天，空白對照組給等量生理鹽水(20ml/kg)。末次給藥后30分鐘將2％巴豆油混合致炎劑(2％巴豆油，20％無水乙醇，5％蒸餾水和73％乙醚)50μl均勻涂在小鼠右耳廓致炎，致炎4小時后將小鼠處死，剪下雙耳并用6mm打孔器在同一部位打下圓耳片，用電子天平稱重，以右左耳片重之差為腫脹度，評價藥物對巴豆油所致耳廓炎癥的影響。
結果表明，經絡舒對小鼠巴豆油至耳廓腫脹的急性炎癥反應未見有抑制作用，見表11。
表11經絡舒對巴豆油性炎癥的影響(x±s) 與空白對照組比較**P＜0.01 7.2對大鼠棉球肉芽腫形成的影響 取Wistar大鼠60只，雌雄兼用，體重200～250g，乙醚麻醉，在無菌條件下作胸部切口，將5mg的滅菌棉球植入兩側腋窩部皮下，術后隨機分為空白對照組、西藥陽性組(地塞米松，皮下注射)、中藥陽性組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組。每組10只。術后第2天開始給藥，空白對照組給等量生理鹽水(10ml/kg)，每天1次，連續8天，第9天處死大鼠，剝離并取出棉球肉芽腫組織，放入60℃烘箱內干燥12h，然后取出精確稱重，減去原棉球重量，即為肉芽腫凈重，以此評價藥物對棉球肉芽腫增生的影響。
結果表明，高劑量組經絡舒對棉球肉芽腫的形成有明顯的抑制作用，見表12。
表12經絡舒對大鼠棉球肉芽腫形成的影響(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05 8經絡舒的鎮痛作用 8.1熱板法 置鋁制槽于55±0.5℃恒溫水浴中，預熱10分鐘，每次取雌性小鼠1只，放入槽內，記錄小鼠出現添后足所需時間(秒/s)作為該鼠痛閾值。凡添足時間少于5s或大于30s或有跳躍逃避者，棄之不用。取合格小鼠72只，體重18～22g，隨機分為空白對照組、西藥陽性組(嗎啡，腹腔注射)、中藥陽性組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組，每組12只。分組后各小鼠分別給藥，每天1次，連續3天，空白對照組給等量生理鹽水(20ml/kg)。分別測定末次給藥后30、60分鐘的痛閾值。每次觀察1min，如1min內無痛覺反應，痛閾值則以60秒計算。
結果表明，經絡舒高劑量組給藥后30、60min均能延長小鼠首次舔足的時間，表明經絡舒能提高小鼠痛閾值，具有明顯的鎮痛作用，見表13。
表13經絡舒的鎮痛作用(熱板法)(x±s) 與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01 8.2扭體法 取小鼠72只，雌雄兼用，體重18～22g，隨機分為空白對照組、西藥陽性組(嗎啡，腹腔注射)、中藥陽性組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組，每組12只。分組后各小鼠分別給藥，每天1次，連續3天，空白對照組給等量生理鹽水(20ml/kg)。末次給藥后30分鐘，各小鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，觀察小鼠在注射醋酸后20分鐘內出現的扭體反應次數。
結果表明，高劑量組的經絡舒能明顯減少小鼠扭體次數，表明有鎮痛作用，見表14。
表14經絡舒的鎮痛作用(扭體法)(x±s)

與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01 9、對大鼠毛細血管通透性的影響 取Wistar大鼠50只，雌雄兼用，體重200～250g，隨機均分為空白對照組、西藥陽性對照組(撲爾敏，肌肉注射)、中藥陽性對照組(糖脈康)、經絡舒高劑量組、經絡舒中劑量組、經絡舒低劑量組，每組10只。分組后各大鼠分別給藥，每天1次，連續3天，空白組給等量生理鹽水(10ml/kg)。末次給藥后30分鐘，在大鼠背部皮下注射1ug/ml(0.1mg％)組胺0.1ml，立即靜脈注射1％伊文思藍生理鹽水4ml/kg，20min后處死大鼠，切取背部著色皮斑，剪碎置于5ml生理鹽水--丙酮(3∶7)混合液中浸泡24h，離心取上清液用721分光光度計于610nm處測定光密度值(0D)，以光密度值大小反映毛細血管通透性。
結果表明，經絡舒高、中劑量組對組胺所致的大鼠毛細血管通透性增加有一定的抑制作用，其中以高劑量組、中劑量組的抑制率分別為21.1、9.14％，見表15。
表15經絡舒對大鼠毛細血管通透性的影響(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05 以上結果為經絡舒膠囊用于糖尿病神經病變包括外周神經炎，糖尿病植物神經功能紊亂提供了良好的實驗依據。
與現有技術相比，本發明中藥制劑是一種治療糖尿病神經并發癥的中藥新藥，對糖尿病后坐骨神經具有明顯的保護作用，可提高糖尿病坐骨神經的傳導速度，對升高的丙二醛(MDA)及山梨醇水平有一定的降低作用、對谷胱甘肽過氧化物酶GSH-PX的活性有明顯的提高作用、對下降的超氧化物歧化酶(SOD)活性也有一定的提高作用，可明顯降低糖化血紅蛋水平及全血比粘度，還具有明顯的鎮痛作用，對糖尿病的神經并發癥有很好的治療效果，為廣大患者提供了一種新的用藥選擇，其原料種類少，產品質量易于控制，本發明所提供的經實驗篩選出的優選制備方法簡單、易于生產。

具體實施例方式 實施例1膠囊劑的制備 原料丹參612g、三七136g、水飛薊素20g 制備方法取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入6倍量85％乙醇提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加8倍量水煎煮提取3次，每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，在-0.06MPa～-0.08MPa條件下微波真空干燥成干浸膏，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，加入輔料，混勻，裝入膠囊，制成膠囊1000粒。
用法用量口服，一日三次，每次3～4粒。
實施例2片劑的制備 原料丹參570g、三七160g、水飛薊素30g 制備方法取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入4倍量95％乙醇提取2次，每次3小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加12倍量水煎煮提取2次，每次0.5小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，加入輔料，混勻，壓片，制成片劑1000片。
用法用量口服，一日三次，每次3～4片。
實施例3滴丸劑的制備 原料丹參640g、三七100g、水飛薊素10g 制備方法取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入8倍量75％乙醇提取1次，每次3小時，過濾，濾液回收乙醇，藥渣加6倍量水煎煮提取4次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素及輔料，按常規制劑工藝制成滴丸1000丸。
用法用量口服，一日三次，每次3～4丸。
實施例4膠囊劑的制備 原料丹參660g、三七110g、水飛薊素12g 制備方法取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入7倍量80％乙醇提取3次，每次1小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加10倍量水煎煮提取3次，每次2小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，加入輔料，裝入膠囊，制成膠囊劑1000粒。
用法用量口服，一日三次，每次3～4片。
實施例5顆粒劑的制備 原料丹參590g、三七170g、水飛薊素27g 制備方法取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入5倍量90％乙醇提取3次，每次3小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加9倍量水煎煮提取4次，每次0.5小時，過濾，合并濾液，濃縮至50℃相對密度為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，制粒，干燥，裝袋，制成顆粒劑1000袋。
用法用量口服，一日三次，每次3～4袋。
權利要求
1.一種治療糖尿病神經病變的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，該中藥制劑是由中藥原料丹參570～660份、三七100～170份和水飛薊素10～30份制備而成。
2.按照權利要求1所述治療糖尿病神經病變的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，該中藥制劑是由中藥原料丹參610～620份、三七125～145份和水飛薊素15～25份制備而成。
3.按照權利要求2所述治療糖尿病神經病變的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，該中藥制劑是由中藥原料丹參612份、三七136份和水飛薊素20份制備而成。
4.權利要求1-3任一所述治療糖尿病神經病變的中藥制劑的制備方法，其特征在于取三七粉碎，備用，取丹參，加乙醇提取，過濾，濾液回收乙醇，藥渣加水提取，過濾，濃縮，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，按常規制劑工藝制成各種劑型。
5.按照權利要求4所述治療糖尿病神經病變的中藥制劑的制備方法，其特征在于取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入4～8倍量60％～90％乙醇提取1～3次，每次1～3小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加6～12倍量水煎煮提取2～4次，每次0.5～2小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度50℃時為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，干燥，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，按常規制劑工藝制成各種劑型。
6.按照權利要求5所述治療糖尿病神經病變的中藥制劑的制備方法，其特征在于取三七粉碎成細粉，備用，取丹參，加入6倍量85％乙醇提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，藥渣加8倍量水煎煮提取3次，每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度50℃時為1.05，合并濃縮液和乙醇提取液，在-0.06MPa～-0.08MPa條件下微波真空干燥成干浸膏，粉碎，加入三七細粉和水飛薊素，加入輔料，混勻，裝入膠囊，即得膠囊劑。
全文摘要
本發明公開了一種治療糖尿病神經病變的中藥制劑，它是由中藥原料丹參、三七和水飛薊素經醇提、水提和粉碎制備而成，該中藥制劑是一種治療糖尿病神經并發癥的中藥新藥，對糖尿病后坐骨神經具有明顯的保護作用，可提高糖尿病坐骨神經的傳導速度，對升高的丙二醛(MDA)及山梨醇水平有一定的降低作用、對谷胱甘肽過氧化物酶GSH-PX的活性有明顯的提高作用、對下降的超氧化物歧化酶(SOD)活性也有一定的提高作用，可明顯降低糖化血紅蛋水平及全血比粘度，還具有明顯的鎮痛作用，對糖尿病的神經并發癥有很好的治療效果，為廣大患者提供了一種新的用藥選擇，其原料種類少，產品質量易于控制。
文檔編號A61K36/185GK101647855SQ20081030370
公開日2010年2月17日 申請日期2008年8月13日 優先權日2008年8月13日
發明者孔德明, 張永萍, 劍 徐, 王明強 申請人:貴陽中醫學院