專利名稱：注射用l－鹽酸賴氨酸無菌粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及注射用L-鹽酸賴氨酸無菌粉針劑及其制備方法，屬于醫藥技術領域。
背景技術：
L-鹽酸賴氨酸(化學名稱L-2，6-二氨基乙酸鹽酸鹽；英文名稱Lysine hydrochloridefor Injection)是人體8種必需氨基酸之一，是合成腦神經生殖細胞核蛋白、血紅蛋白不可缺少的成份。進入人體內可代謝生成乙酰輔酶A。乙酰輔酶A是合成Achc乙酰膽堿的重要條件之一，能促進人體發育、增強免疫功能，并提高中樞神經組織功能的作用，還可抑制單純皰疹病毒的復制。L-鹽酸賴氨酸在人體內不能合成，必須從食物中補充。一旦人體組織細胞處于失活狀態、且各種神經肽鏈的功能受到抑制時，如能及時補充足夠的賴氨酸，就可激活組織細胞，恢復神經肽的功能。
L-鹽酸賴氨酸是營養劑和代謝改善劑，可用于治療蛋白質營養不良等疾病，幼兒給予足夠補充能促進生長，利于智力發育；妊娠期婦女服用能促進胎兒發育，防止流產。賴氨酸能提高血屏障的通透性，有助于藥物進入細胞內，用作配合治療腦病的輔助藥物。臨床上還可用于慢性腦組織缺血、缺氧性疾病的腦保護劑。若與氯化鈣配成合劑，可治療缺鈣癥。L-鹽酸賴氨酸還對臨床外傷、燒傷、大手術病后恢復、癌癥化療、放療后康復具有顯著效果。
現有的L-鹽酸賴氨酸注射劑一般為小水針劑和大輸液劑型，其存在的問題是1，現有的小水針(10ml3g)由于在略低于常溫的條件下(10℃)有結晶析出，因此易出現在運輸過程、臨床使用中遇低溫析出結晶現象。
2，大輸液中藥液由于會不停地與輸液瓶膠塞接觸，導致溶液澄明度不易合格。

發明內容
本發明就是針對上述問題提供一種注射用L-鹽酸賴氨酸無菌粉針劑及其制備方法，所制備的無菌粉針劑在儲存、運輸、臨床使用中無結晶析出、澄明度好。
本發明提供的技術方案是注射用L-鹽酸賴氨酸無菌粉針劑，每瓶含L-鹽酸賴氨酸0.5-3克。
本發明還提供了上述無菌粉針劑的制備方法①將L-鹽酸賴氨酸溶解于可藥用的有機溶劑或水中，用微孔濾膜過濾除菌，冷卻析出固體；②在析出固體的中加入可藥用的有機溶劑或水，攪拌，冷卻析出固體；③析出固體用無水乙醇洗滌，真空干燥，真空包裝。
步驟①、②中所述可藥用的有機溶劑分別選自低級醇、低級酮、醚、乙腈、低級羧酸酯、低級鹵代烴和這些溶劑的混合物。
在本發明的實例中，低級醇可包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇或異丁醇，優選乙醇；低級酮可包括丙酮、甲乙酮或戊酮，優選丙酮；醚可包括乙醚、二丙基醚、異丙醚、四氫呋喃、1，4二氧六環或石油醚，異丙醚；低級羧酸酯可包括甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸乙酯，乙酸乙酯；低級鹵代烴可包括氯甲烷、二氯甲烷或1，2二氯甲烷。
本發明的可藥用的有機溶劑或水的用量優選為為50～1000ml/每摩爾L-鹽酸賴氨酸。
本發明所制備的無菌粉針劑在儲存、運輸、臨床使用中無結晶析出、澄明度好。
具體實施例方式
以下通過實施例進一步說明本發明，并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍中。
實施例1用新鮮煮沸的注射用水45ml和55g L-鹽酸賴氨酸頃入反應瓶中攪拌溶解，加入0.1克活性炭脫色，趁熱過濾。再將濾液用0.22μm微孔濾膜過濾，濾液冷卻1小時，有結晶析出。加45mL乙醇，攪拌30分鐘后，-10℃冷卻放置12小時，結晶析出，抽濾，結晶用無水乙醇洗滌3次，置60℃真空干燥。得49.4g無菌L-鹽酸賴氨酸結晶。經粉碎、檢查，合格后，進行分裝。
實施例2向反應瓶中投入100g L-鹽酸賴氨酸，加入110mL沸騰的30％乙醇水溶液溶解，加入0.1g活性炭脫色，過濾，濾液再通過濾膜過濾除菌，冷卻待結晶析出。加入60mL丙二醇，常溫下，攪拌30分鐘，-10℃以下冷卻過夜。過濾，結晶用無水乙醇洗滌3次。40℃真空干燥。得無菌L-鹽酸賴氨酸90.6g.經粉碎、檢查，合格后，進行分裝。
實施例3100L乙睛投入到反應釜中，加熱至70～75℃，攪拌下加入5kg L-鹽酸賴氨酸。溶解后，加0.01kg活性炭攪拌20分鐘。粗過濾，再無菌過濾。在符合GMP要求的無菌生產環境條件下，冷卻，有結晶析出。加30L丙酮∶乙醇(體積比5∶2)混合液，攪拌1小時，-15℃冷卻10小時以上。將無菌濾液中析出的結晶抽濾，結晶用丙酮∶乙醇(體積比5∶2)溶液洗滌3次，減壓干燥，得無菌L-結晶鹽酸賴氨酸4.52kg。
實施例4向反應瓶中投入36g L-鹽酸賴氨酸，加入溫度為約40℃的2％二氯甲烷水溶液50ml。攪拌5分鐘后，加藥用活性炭脫色。粗過濾后，再經濾膜過濾，放置30分鐘。然后，攪拌中加入50ml丙酮。冷卻至-20℃過夜。結晶析出，抽濾，結晶用丙酮洗滌3次。常溫下真空干燥，得無菌L-鹽酸賴氨酸結晶32.8g。
實施例560℃，向反應瓶中投入25.6％L-鹽酸賴氨酸和1，4二氧六環的水溶液(1∶1)55g，加藥用活性炭0.1g，攪拌10分鐘，趁熱過濾。冷卻，再用微孔為0.22μm濾膜過濾，在符合GMP要求的無菌生產環境條件下，加入70ml 1，4二氧六環∶甲醇(1∶1)混合溶液，攪拌1小時，放置-15℃以下冷卻12小時。析出結晶，抽濾，結晶用1，4二氧六環洗滌2次，得結晶無菌L-鹽酸賴氨酸47.9g。
實施例650g L-鹽酸賴氨酸溶在65℃的400ml 15％乙酸乙酯甲醇溶液中，攪拌20分鐘，加藥用活性炭0.1g。保溫10分鐘后，過濾。濾液經濾膜過濾，除菌。濾液冷卻，結晶析出，加200ml甲醇攪拌20分鐘。-10℃以下放置12小時，析晶完全，抽濾，用10ml×3甲醇洗滌。抽干，置60℃真空干燥。得44.76g無菌L-鹽酸賴氨酸結晶。
實施例750g L-鹽酸賴氨酸加到反應瓶中，攪拌中加入70ml熱的異丙醇(約70℃)，溶解后，加藥用活性炭，繼續攪拌20分鐘。趁熱粗濾，再經濾膜過濾除菌，濾液冷卻30分鐘。加50ml四氫呋喃，攪拌30分鐘后，于-10℃放置過夜。然后，抽濾，結晶用四氫呋喃洗滌3次。抽干后，于60℃真空干燥12小時。得無菌L-鹽酸賴氨酸結晶45.1g。
實施例8攪拌中，將5kg L-鹽酸賴氨酸加裝有35L50％甲醇水溶液(60℃)反應釜中。溶解后，加0.01kg藥用活性炭，繼續攪拌30分鐘。粗濾，濾液再通過0.22μm濾膜過濾除菌。濾液冷卻1小時后，加35L無水乙醇，攪拌30分鐘后，于-15℃放置12小時。然后，抽濾，結晶用無水乙醇洗滌3次。抽干后，于60℃真空干燥12小時。得結晶無菌L-鹽酸賴氨酸4.59kg。粉碎、檢查合格后，進行分裝。
用法與用量成人每日一次，每次1-3克。在使用時，需用5％或10％葡萄糖注射液或0.9％氯化鈉注射液稀釋后注射。20次為一個療程。
本發明藥物質量對本發明藥物的質量進行了性狀、鑒別、檢查(pH值、澄清度、有關物質、干燥失重、澄明度、無菌、熱原)及含量測定。采用高效液相色譜法對樣品進行有關物質檢查及L-鹽酸賴氨酸含量測定，并進行了線性關系、回收率、精密度等試驗，試驗結果符合一般分析試驗要求。根據本發明試制的三批樣品含量測定結果分別為L-鹽酸賴氨酸為標示量的98.4％、99.2％、99.8％。因此規定本品的標示含量限度為95.0～105.0％。L-鹽酸賴氨酸的有關物質不超過1.5％。
結果表明本發明的藥物的質量符合藥用要求。
穩定性試驗影響因素試驗結果表明本發明藥物在高溫(60℃)條件下放置10天，有關物質呈上升趨勢，其它項目均無明顯變化；在光照(4500LX)條件下，各項目無明顯變化，符合藥用質量標準，說明本發明藥物在此條件下基本穩定。
加速試驗結果表明本發明藥物經40℃考察6個月，六個批號的樣品其性狀，澄明度、pH值、含量與0個月相比，均無明顯變化。有關物質略有增加。因此，注射用L-鹽酸賴氨酸在40℃條件下還是比較穩定的，可將其有效期定為二年。
長期試驗結果表明本發明藥物在25℃RH60％的條件下放置18個月，六個批號的樣品其性狀、澄明度、PH值、有關物質、含量與0個月相比，均無明顯變化。6個月、12個月、18個月細菌內毒素和無菌檢查均符合規定。
本發明藥物在0℃條件下放置18個月，六個批號的樣品其性狀、澄明度、PH值、有關物質、含量與0個月相比，均無明顯變化。6個月、12個月、18個月細菌內毒素和無菌檢查均符合規定。
藥理試驗結果北京醫科大學基礎醫學院藥理系等研究單位通過用大鼠腦中動脈阻斷模型對其腦保護作用進行觀察并與鈣拮抗劑尼莫地平進行比較，用此模型研究藥物對腦缺血、特別是腦梗塞的影響。結果通過試驗數據表明L-鹽酸賴氨酸兩個劑量組(612.5mg.kg-1及310.8mg.kg-1)均能減少梗塞面積，且與它降低半影區變性壞死神經元所占百分比呈正相關。據此說明L-鹽酸賴氨酸可以挽救瀕危的急性缺血區神經元，抑制半影區的進行性退化，減少半影區轉化為梗塞區，為受損神經元功能恢復提供機會。L-鹽酸賴氨酸的這種作用可能是通過非增加缺血區血流的途徑實現的。
從文獻報道的實驗數據顯示，L-鹽酸賴氨酸612.5mg.kg-1，ip，能明顯改善神經功能缺失，恢復肌體降低行為評分，這種功能除與其神經元的保護作用有關外，可能還與其參加體內的某些代謝有關。研究證明補充賴氨酸可以被充分吸收，在肝臟代謝成乙酰輔酶A，結合有賴氨酸的蛋白質可轉化成肉毒堿，這兩種物質均有助于能量產生和肌力的恢復本發明對L-鹽酸賴氨酸對腦損傷后大鼠的胰高血糖素，胰島素及血糖含量的影響的進行試驗采用落體法致大鼠損傷；傷后立刻一次腹腔注射L-鹽酸賴氨酸，24h后斷頭處死，用免疫組織化學ABC法結合圖像分析技術，觀察L-鹽酸賴氨酸(612.5mg.kg-1及310.8mg.kg-1)及310.8mg.kg-1)對腦損傷后大鼠胰島A細胞內高血糖素(Glu)及B細胞內胰島素(Ins)免疫反應強度和光密度值的影響；用生化分析儀器測定血糖含量。結果L-鹽酸賴氨酸能顯著增強A細胞內Glu免疫反應強度，提高平均光密度值，增加Glu的含量，并降低血糖水平，但對B細胞內Ins的免疫反應強度及光密度值無明顯影響。結論L-鹽酸賴胺酸可抑制Glu的釋放并產生顯著的降血糖作用。
根據文獻提示L-鹽酸賴氨酸具有中樞作用。能明顯對抗小鼠斷頭后乳酸的升高及ATP、磷酸肌酸的降低，延長人工呼吸停止后腦電消失的時間，降低局灶腦缺血大鼠的腦梗死面積并減少相關腦區神經元變性、壞死數目，改善缺血后的癥狀，減輕腦外傷后大鼠的腦水腫并能降低死亡率。
本發明藥物進行血管刺激性、過敏性、溶血性試驗，結果未見顯著血管刺激性反應，對受試動物無致敏作用，也未見溶血現象。
試驗表明，本發明藥物質量穩定，安全有效，制備工藝合理。
權利要求
1.注射用L-鹽酸賴氨酸無菌粉針劑。
2.按照權利要求1所述的無菌粉針劑，其特征是每瓶含L-鹽酸賴氨酸0.5-3克。
3.權利要求1所述注射用L-鹽酸賴氨酸無菌粉針劑的制備方法，其特征是①將L-鹽酸賴氨酸溶解于可藥用的有機溶劑或水中，用微孔濾膜過濾除菌，冷卻析出固體；②在析出的固體中加入可藥用的有機溶劑或水，攪拌，冷卻析出固體；③析出固體用無水乙醇洗滌，真空干燥，真空包裝。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是步驟①、②中所述可藥用的有機溶劑分別選自低級醇、低級酮、醚、乙腈、低級羧酸酯、低級鹵代烴和這些溶劑的混合物。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征是低級醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇或異丁醇；低級酮為丙酮、甲乙酮或戊酮；醚為乙醚、二丙基醚、異丙醚、四氫呋喃、1，4二氧六環或石油醚；低級羧酸酯為甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸乙酯；低級鹵代烴為氯甲烷、二氯甲烷或1，2二氯甲烷。
6.根據權利要求3或4或5所述的制備方法，其特征是可藥用的有機溶劑或水的用量為10～10000ml/每摩爾L-鹽酸賴氨酸。
全文摘要
本發明涉及注射用L－鹽酸賴氨酸無菌粉針劑，其制備方法為①將L－鹽酸賴氨酸溶解于可藥用的有機溶劑或水中，用微孔濾膜過濾除菌，冷卻析出固體；②在析出固體的中加入可藥用的有機溶劑或水，攪拌，冷卻析出固體；③析出固體用無水乙醇洗滌，真空干燥，真空包裝。本發明所制備的無菌粉針劑在儲存、運輸、臨床使用中無結晶析出、澄明度好。
文檔編號A61K31/185GK1650852SQ20041006116
公開日2005年8月10日 申請日期2004年11月23日 優先權日2004年11月23日
發明者周恩惠, 王紅, 曾藝, 黃毅 申請人:武漢同源藥業有限公司