專利名稱：興奮性氨基酸前藥的制作方法
技術領域：
本發明提供合成的興奮性氨基酸前藥(式I化合物)及其制備方法。本發明進一步涉及其使用方法，及包括式I化合物的、用于治療神經系統疾病和精神疾病的藥物組合物。
背景技術：
神經系統或精神疾病，例如焦慮癥的治療與代謝型的興奮性氨基酸受體的選擇性激活有關。例如，1997年11月18日出版的美國專利No.5,688,826(‘826專利)公開了(+)-4-氨基-2-磺酰雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸作為活性mGluR2受體激動劑。此外，1999年9月28日出版的美國專利No.5,958,960(“960專利)公開了(+)-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸作為活性mGluR2受體激動劑。
本發明提供mGluR2受體激動劑化合物的前藥形式，其可提高各母體藥物的體內藥效，并產生更高的母體藥物口腔接觸。本發明的化合物代表了保持以前公開的mGluR2受體激動劑的安全性和療效，并增強口服生物利用度的最佳進展。
系列號為PCT/US01/45866和PCT/US02/00488的PCT申請公開了合成的興奮性氨基酸前藥及其制備方法。
發明概述本發明提供式I的化合物或其可藥用的鹽。
其中，
A為H-(Q)p-；Q每次出現時獨立選自氨酰基；P為1-10的整數；X為O、S、SO、SO2或CR3R4；R3為氟、X’OR5、SO3H、四唑-5-基、CN、PO3R62、羥基或NO2，且R4為氫；或R3和R4各自代表氟；或R3和R4一起代表＝O、＝NOR7或CR8R9；或R3或R4中的一個代表氨基而另一個代表羧基；或R3代表N3、(CH2)mCOOR5a、(CH2)mPO3R6a2、NHCONHR5b或NHSO2R5c，且R4代表氫；或R3和R4一起代表＝CHCOOR5b、＝CHPO3R6a2或＝CHCN；X’代表鍵、CH2或CO；m為1-3的整數；R5、R5a、R5b、R5c、R7、R8和R9獨立為氫原子；任選取代的(1-6C)烷基；任選取代的(2-6C)烯基；任選取代的(2-6C)炔基；任選取代的芳基；任選取代的雜芳基；非芳碳環基團；非芳雜環基團；與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環碳環基團；或與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環雜環基團；R6和R6a獨立代表氫或(1-6C)烷基；R10為氫或氟；和R11為氫、氟或羥基；本發明還提供了式I化合物，其中取代基如上面定義，但化合物不是其中X為CR3R4，其中R3為氟，且R4為氫，p為1，且Q為L-丙氨酰基的化合物；或其可藥用的鹽。
本發明還提供了式I化合物，其中A為H-(Q)p-；Q每次出現時獨立選自氨酰基；P為1-3的整數；X為O、S、SO、SO2或CR3R4；R3為氟或羥基，且R4為氫；或R3和R4一起代表＝O；R10為氫或氟；且R11為氫、氟或羥基；或其可藥用的鹽。
本發明還提供了式I化合物，其中A為H-(Q)p-；Q為L-丙氨酰基；p為1；X為CR3R4；R3為氟且R4為氫；R10為氫；且R11為氫；或其可藥用的鹽。
值得一提的是，式I化合物含有至少四個不對稱碳原子。本發明包括式I化合物的所有立體異構形式，包括各單獨的對映異構體及其混合物，例如‘826專利中公開的化合物的前藥形式，如1SR，4RS，5RS，6RS-4-氨基-(2-磺酰基雙環[3.1.0]己烷)-4，6-二羧酸。
本發明又一方面提供了藥物制劑，其包括結合可藥用的載體、稀釋劑或賦型劑的式I化合物或其可藥用的鹽。
本發明又一方面提供了一種影響病人體內cAMP連接的代謝型谷氨酸受體的方法，其包括將藥物有效量的式I化合物給藥于需要受調制的興奮性氨基酸神經傳遞的病人。本發明還提供了一種式I化合物的用途，用于制造影響病人體內cAMP耦聯的代謝型谷氨酸受體的藥物。
本發明又一方面提供了給予有效量的式II化合物的方法，包括將藥物有效量的式I化合物給藥于需要受調制的興奮性氨基酸神經傳遞的病人。本發明還提供了一種式I化合物的用途，用于制造給予有效量的式II化合物的藥物。
本發明又一方面提供了一種治療病人神經系統疾病的方法，包括將藥物有效量的式I化合物給藥于需要該治療的病人。本發明還提供了一種式I化合物的用途，用于制造治療病人神經系統疾病的藥物。
本發明又一方面提供了一種治療病人精神疾病的方法，包括將藥物有效量的式I化合物給藥于需要該治療的病人。本發明還提供了一種式I化合物的用途，用于制造治療病人精神疾病的藥物。
式I化合物可按照類似于化學領域已知的制備結構類似的雜環化合物的方法制備，或按照本文描述的新方法制備。這種方法及用于制備上述式I化合物的有用中間體在下面步驟中進行說明，其中，除非另有說明，否則一般基團的含義為此處的定義。
本發明提供了一種制備式I化合物的方法，包括用相應的式III的氨酰基酰化式(ii)的化合物
PgN-A-(III)其中PgN為氮保護基團，A如上述定義；然后，對于上述任意一個步驟，如果使用保護基團對官能團進行保護，則除去保護基團；然后，對于上述任意一個步驟如果需要式I化合物的可藥用的鹽，則使堿形式的這種式I化合物與提供可藥用的平衡離子的酸進行反應；或對于含有酸部分的式I化合物，使酸形式的這種化合物與提供可藥用的陽離子的堿反應；或對于式I的兩性離子化合物，中和酸加合鹽形式或堿加合鹽形式的式I化合物；或采用任何其它傳統方法。
本發明還提供了式I化合物，其中X為CH2，R10為氟，其它變量如上述定義。
發明詳述已發現本發明化合物為代謝型谷氨酸受體選擇性激動劑化合物的有用的前藥，并因此用于治療中樞神經系統疾病，如神經系統疾病，例如神經退化病，并作為抗精神病藥、抗焦慮藥、藥物戒除、抗抑郁藥、抗驚厥藥、止痛藥和止吐藥。
值得一提的是，式I化合物含有至少四個不對稱碳原子，三個位于環丙烷環上，一個為氨基酸基團的α-碳原子。因此，本發明的化合物可存在于光學純形式、外消旋形式或非對映異構體混合物中，或從中分離出來。
氨基酸部分優選具有天然氨基酸構型，即，相對于D-甘油醛的L-構型。
本發明包括式I化合物的可藥用的鹽。這些鹽可與分子的酸性或堿性部分結合存在，且可作為酸加合鹽，伯、仲、叔或季銨鹽，堿金屬或堿土金屬鹽存在。通常，酸加合鹽可通過酸與式I化合物的反應來制備。另外，酸加合鹽還可這樣制備使倒數第二步的化合物(被保護的中間體)與適當當量的酸反應生成相應的鹽形式，該鹽然后再反應制備式I化合物或其它鹽。堿金屬和堿土金屬鹽通常由希望的金屬的一些特定鹽的晶型帶來特定的制劑優點。非晶體的無定形化合物可具有吸濕性。有時更希望獲得晶型的藥物化合物，因為其顯示出有利的固態性質。
通常用于形成這種鹽的酸包括無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸或磷酸，或有機酸，如有機羧酸，例如羥基乙酸、馬來酸、羥基馬來酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、水楊酸、鄰乙酰氧基苯甲酸，或有機磺酸，2-羥基乙磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸或乙磺酸。
除了可藥用的鹽，本發明還包括其它鹽。其可作為純化化合物的中間體，或作為制備其它可藥用的酸加合鹽的中間體，或用于鑒別、表征或純化。
本發明中，式I化合物包括其溶劑化物。尤其，式I化合物包括其水合物。
而且，本發明還預見了國際申請PCT/JP99/03984、PCT/JP99/00324和PCT/JP01/05550中公開的氟化合物的前藥。分別參見國際公開專利WO/0012464、WO/9938839和WO/0200605。例如，本發明預見了1S，2R，5S，6S-2-氨基-6-氟-4-氧代雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸；1S，2R，4S，5S，6S-2-氨基-6-氟-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸；1S，2R，3R，5S，6S-2-氨基-3-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸；和1S，2R，3S，5S，6S-2-氨基-6-氟-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸。
各種生理機能已顯示出受過量或不當的興奮性氨基酸傳遞的刺激影響。相信本發明的式I化合物具有治療哺乳動物與這種癥狀相關的各種神經系統疾病的能力，包括急性神經系統疾病，如心臟旁路手術和移植后的腦缺陷、中風、大腦局部缺血、脊髓創傷、頭部創傷、產期缺氧、心動停止和低血糖神經損傷。相信式I化合物具有治療各種慢性神經系統疾病的能力，如早老性癡呆、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化、艾滋病誘發的癡呆、眼睛創傷和視網膜病、認知疾病及先天性和藥物誘發的帕金森氏病。本發明還提供了治療這些疾病的方法，包括向需要該治療的病人給予有效量的式I化合物或其可藥用的鹽。
本發明的式I化合物治療病人的其它各種與谷氨酸機能障礙有關的神經系統疾病，包括肌肉痙攣、驚厥、偏頭痛、尿失禁、疼痛、經前煩躁(PDD)、精神病(如精神分裂癥)、藥物耐受性、戒除、停藥和藥物渴望(例如，尼古丁、鴉片劑、可卡因、苯二氮和酒精)、焦慮和相關疾病、嘔吐、腦水腫、慢性疼痛和遲發性運動障礙。式I化合物還可用作抗抑郁藥和止痛藥。因此，本發明還提供了治療這些疾病的方法，包括向需要該治療的病人給藥有效量的式I化合物或其可藥用的鹽。
下面的定義用于闡明此處所用的各種術語的意義和范圍。此處所用的常用術語具有其通常的意義。
術語“影響”指式II化合物作為興奮性氨基酸受體的激動劑。術語“興奮性氨基酸受體”指代謝型谷氨酸受體，一種經GTP-結合蛋白質與細胞效應器偶合的受體。術語“cAMP耦聯的代謝型谷氨酸受體”指經偶合抑制腺苷酸環化酶活性的代謝型受體。
術語“神經系統疾病”指急性和慢性神經變性病癥，包括心臟旁路手術和移植后的腦缺陷、腦缺血(例如，心動停止引起的中風)、脊髓創傷、頭部創傷、早老性癡呆、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化、艾滋病誘發的癡呆、產期缺氧、低血糖神經損傷、眼部創傷和視網膜病、認知疾病及先天性和藥物誘發的帕金森氏病。該術語還包括其它由谷氨酸機能障礙引起的神經系統病癥，包括肌肉痙攣、偏頭痛、尿失禁、藥物耐受性、戒除、停藥和藥物渴望(即，鴉片劑、.苯二氮、尼古丁、可卡因、或酒精)、戒煙、嘔吐、腦水腫、慢性疼痛、睡眠疾病、驚厥、Tourette綜合癥、注意力不集中癥和遲發性運動障礙。
術語“精神疾病”指急性和慢性精神病癥，包括精神分裂癥、焦慮和相關疾病(如，恐慌和與壓力有關的心血管疾病)、抑郁、兩極性異常、精神紊亂、強迫性疾病、廣泛性焦慮癥、急性壓力性疾病和恐慌疾病。
此處使用的術語“有效量”指化合物的量或劑量，基于病人單次或多次的給藥劑量，其對病人的診斷或治療提供需要的效果。
作為本領域熟練技術人員，主治醫師通過使用已知方法并觀察類似情況下的結果很容易確定其有效量。在確定給藥化合物的有效量和劑量中，主治醫師要考慮很多因素，包括但不限于哺乳動物種類；其身材大小、年齡和總的健康狀況；涉及的具體疾病；疾病的涉及程度或嚴重程度個體病人的反應；給藥的特定化合物；給藥方式；給藥制劑的生物利用度特性；選擇的藥劑服用法；伴隨的藥療法的使用；及其它相關情況。例如，通常每日劑量中可含有約5mg-約300mg活性成分。可通過各種途徑進行化合物的給藥，包括口服、直腸、經皮、皮下、靜脈內、肌內、口或鼻內途徑。另外，化合物可通過連續輸液進行給藥。
此處使用的術語“病人”指哺乳動物，如小鼠、豚鼠、大鼠、狗或人。應該理解優選的病人是人。
此處使用的術語“進行治療”(或“治療”)包括其通常認可的含義，其包括阻止、防治、遏止和緩解、停止或逆轉所患病癥的進行。這樣，本發明的方法包括治療性給藥和預防性給藥。
此處使用的一般化學術語具有其通常的含義。例如，術語“(1-6C)烷基”意指直鏈或支鏈基團。(1-6C)烷基基團的示例值包括(1-4C)烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基和異丁基。術語“(2-6C)烯基”包括(2-4C)烯基，如烯丙基。術語“(2-6C)炔基”包括(2-4C)炔基，如丙炔基。
術語“任選取代的(1-6C)烷基基團”、“任選取代的(2-6C)烯基基團”和“任選取代的(2-6C)炔基基團”中所用的術語“任選取代的”，在此處表示可存在一個或多個取代基，優選1-3個，所述取代基選自這樣的原子和基團其存在于式I化合物中時，不妨礙式I化合物調節代謝型谷氨酸受體的功能。
存在于任選取代的(1-6C)烷基基團、任選取代的(2-6C)烯基基團和任選取代的(2-6C)炔基基團中的原子和基團的例子為，任選取代的芳基基團、任選取代的雜芳基基團、非芳碳環基團、非芳雜環基團、與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環碳環基團和與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環雜環基團。
術語“雜芳基”包括含有1-4個選自氧、硫和氮的雜原子的芳香族5-6元環，和含有1-4個選自氧、硫和氮的雜原子的5-6元環與苯環或含有1-4個選自氧、硫和氮的雜原子的5-6元環稠合組成的芳香族雙環基團。雜芳基的例子為呋喃基、噻吩基、唑基、異唑基、噻唑基、異噻唑基、咪唑基、嘧啶基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并唑基、苯并噻唑基和吲哚基。
術語“芳香族基團”包括苯基和多環芳香族碳環，如萘基。
術語“任選取代的雜芳基團”和“任選取代的芳香基團”中所用的術語“任選取代的”，在此處表示可存在一個或多個取代基，所述取代基選自這樣的原子和基團其存在于式I化合物中時，不妨礙式I化合物調節代謝型谷氨酸受體的功能。
存在于任選取代的雜芳基團或任選取代的芳香基團中的原子和基團的例子為，氨基、羥基、硝基、鹵代、(1-6C)烷基、(1-6C)烷氧基、(1-6C)烷硫基、羧基、(1-6C)烷氧羰基、氨基甲酰基、(1-6C)烷酰基氨基、(1-6C)烷基磺酰基、(1-6C)烷基磺酰氨基、任選取代的苯基、苯氧基、苯硫基、苯磺酰基、苯磺酰基氨基、甲苯磺酰氨基、(1-6C)氟烷基和(1-6C)氟烷氧基。具體例子為氨基、羥基、氟、氯代、溴代、碘代、甲基、甲氧基、甲硫基、羧基、乙酰氨基、甲磺酰基、硝基、乙酰基、苯氧基、苯硫基、苯磺酰基、甲磺酰氨基和三氟甲基。
任選取代的芳香基團的示例為1-萘基、2-萘基、苯基、2-聯苯基、3-聯苯基、4-聯苯基、2-羥基苯基、3-羥基苯基、4-羥基苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2，4-二氟苯基、3，4-二氟苯基、五氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、3，4-二氯苯基、3-氯-4-氟苯基、3，5-二氯苯基、2-溴苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2，3-二甲氧基苯基、2，5-二甲氧基苯基、3，4-二甲氧基苯基、3，5-二甲氧基苯基、2-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、2-氟-3-三氟甲基苯基、3-三氟甲基-4-氟苯基、3-三氟甲基-5-氟苯基、2-氟-5-三氟甲基苯基、2-苯氧基苯基、3-苯氧基苯基、3-羧基苯基和4-羧基苯基。
術語“非芳碳環基團”包括單環基團，例如(3-10C)環烷基、如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基或環癸基，和稠合多環基團，例如1-金剛烷基或2-金剛烷基，1-十氫萘基(decalyl)，2-十氫萘基，4a-十氫萘基，雙環[3，3，0]辛-1-基、-2-基或-3-基，雙環[4，3，0]壬-1-基、-2-基、-3-基或-7-基，雙環[5，3，0]癸-1-基、-2-基、-3-基、-4-基、-8-基或-9-基和雙環[3，3，1]壬-1-基、-2-基、-3-基或-9-基。
術語“非芳雜環基團”包括含一或兩個雜原子的芳香族4-7元環，該雜原子選自氧、硫和氮，例如氮雜環丁烷-1-基或-2-基，吡咯烷-1-基、-2-基或-3-基，哌啶-1-基、-2-基、-3-基或-4-基，六氫氮雜-1-基、-2-基、-3-基或-4-基，氧雜環丁烷-2-基或-3-基，四氫呋喃-2-基或-3-基，四氫吡喃-2-基、-3-基或-4-基，hexahydrooxepin-2-基、-3-基或-4-基，硫丁環-2-基或-3-基，四氫噻吩-2-基或-3-基，四氫噻喃-2-基、-3-基或-4-基，六氫硫雜(hexahydrothiepin)-2-基、-3-基或-4-基，哌嗪-1-基或-2-基，嗎啉-1-基、-2-基或-3-基，硫代嗎啉-1-基、-2-基或-3-基，四氫嘧啶-1-基、-2-基、-4-基或-5-基，咪唑啉-1-基、-2-基或-4-基，咪唑烷-1-基、-2-基或-4-基，唑啉-2-基、-3-基、-4-基或-5-基，唑烷-2-基、-3-基、-4-基或-5-基，噻唑啉-2-基、-3-基、-4-基或-5-基，或噻唑烷-2-基、-3-基、-4-基或-5-基。
術語“與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環碳環基團”包括與苯環或含有1-4個選自氧、硫和氮的雜原子的芳香族5-6元環稠合的(3-10C)環烷基，例如茚滿基、1，2，34-四氫化萘-1-基或-2-基，5，6，7，8-四氫喹啉-5-基、-6-基、-7-基或-8-基，5，6，7，8-四氫異喹啉-5-基、-6-基、-7-基或-8-基，4，5，6，7-四氫苯并噻吩-4-基、-5-基、-6-基或-7-基，二苯并[2，3，6，7]環庚-1-基或-4-基，二苯并[2，3，6，7]環庚-4-烯-1-基或-4-基，或9-芴基。
術語“與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環雜環基團”包括含有一或兩個選自氧、硫和氮的雜原于的4-7元環，其與苯環或含有1-4個選自氧、硫和氮雜原子的芳香族5-6元環稠合，例如2，3-二氫苯并吡喃-2-基、-3-基或-4-基，氧雜蒽-9-基，1，2，3，4-四氫喹啉-1-基、-2-基、-3-基或-4-基，9，10-二氫吖啶-9-基或-10-基，2，3-二氫苯并噻喃-2-基、-3-基或-4-基，或二苯并噻喃-4-基。
此處使用的，由“PgN”表示的術語“氮保護基團”指意圖保護或阻塞氮基團在合成步驟中進行不希望的反應的那些基團。適當的所用氮保護基團的選擇要取決于隨后被保護的反應的條件，其對本領域普通技術人員來說是公知的。T.W.Greene和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups In Organic Synthesis，第3版(John Wiley&Sons，紐約(1999))中公開了常用的氮保護基團。優選的氮保護基團為叔丁氧羰基。
此處使用的，由“PgC”表示的術語“羧基保護基團”指化合物的其它官能團進行反應時，常用于阻塞或保護羧酸基團的一種羧酸酯衍生物。具體例子包括，例如甲基、乙基、叔丁基、芐基、甲氧基甲基、三甲基甲硅烷基等。這種基團的其它例子可在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protecting Groupsin Organic Synthesis，第3版(JohnWiley&Sons，紐約(1999))中找到。優選的羧基保護基團為甲基和乙基。使用傳統的不影響分子其它部分的方法使該酯分解。
術語“羥基保護基團”表示有機化學領域熟練技術人員理解的、Greene和P.G.M.Wut.在第2章中描述的基團。代表性的羥基保護基團包括，例如，醚基團、取代的乙醚基團、異丙醚基團、苯和取代苯醚基團、芐基和取代芐基醚基團、烷基甲硅烷基醚基團、酯保護基團等。所用羥基保護基團的種類要求并不嚴格，只要衍生的羥基基團在隨后的中間體分子其它位置的反應中穩定，且可在適當時候被選擇除去而對包括任何其它羥基保護基團的剩余分子不產生干擾。
術語“氨酰基”指由氨基酸衍生而來的氨酰基，該氨基酸選自此處定義的天然或非天然氨基酸組成的基團。天然氨基酸根據側鏈上的取代基可為中性、正性或負性。“中性氨基酸”指含有不帶電的側鏈取代基的氨基酸。示范性中性氨基酸包括丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸和谷氨酰胺和天門冬酰胺。“正氨基酸”指生理pH下側鏈取代基為正電性的氨基酸。示范性正氨基酸包括賴氨酸、精氨酸和組氨酸。“負氨基酸”指生理pH下側鏈取代基為凈負電性的氨基酸。示范性負氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。優選的氨基酸為α-氨基酸。最優選的氨基酸為α-碳原子上為L-立體化學的α-氨基酸。示范性天然α-氨基酸為纈氨酸和異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天門冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。
“非天然氨基酸”指無核酸密碼子的氨基酸。非天然氨基酸的例子包括，例如，上述天然α-氨基酸的D-異構體；Aib(氨基丁酸)、βAib(3-氨基異丁酸)、Nva(正纈氨酸)、β-Ala、Aad(2-氨基己二酸)、βAad(3-氨基己二酸)、Abu(2-氨基丁酸)、Gaba(γ-氨基丁酸)、Acp(6-氨基己酸)、Dbu(2，4-二氨基丁酸)、α-氨基庚二酸、TMSA(三甲基甲硅烷基-Ala)、alle(別-異亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、叔-Leu、Cit(瓜氨酸)，Orn、Dpm(2，2’-二氨基庚二酸)、Dpr(2，3-二氨基丙酸)、α-或βNal、Cha(環己基-Ala)、羥基脯氨酸、Sar(肌氨酸)、O-甲基酪氨酸、苯基甘氨酸等；環氨基酸；Na-烷基化氨基酸，其中Na-烷基化氨基酸為Na-(1-10C)烷基氨基酸，例如MeGly(Na-甲基甘氨酸)、EtGly(Na-乙基甘氨酸)和EtAsn(Nα-乙基天門冬酰胺)，和α-碳上含有兩個側鏈取代基的氨基酸。示范性非天然α-氨基酸包括D-丙氨酸、D-亮氨酸和苯基甘氨酸。此處使用的天然和非天然氨基酸及其殘基的命名遵循IUPAC-IUB的生物化學命名聯合委員會(JCBN)建議的命名慣例，正如其在歐洲生物化學雜志(European Journal of Biochemistry)，138，9-37(1984)，“Nomenclature and Symbolism for Amino Acid andPeptides(Recommendations，1983)”中所闡述的。如本說明書及所附權利要求書中使用的氨基酸及其殘基的命名和縮寫與上述習慣命名有所不同，則將對不同的命名和縮寫進行澄清。
雖然所有式I化合物都是有用的活性mGluR2受體激動劑，但優選某些化合物。下面段落定義了優選種類。
A)Q為甘氨酰基、丙氨酰基、纈氨酰基、亮氨酰基、異亮氨酰基、脯氨酰基、苯丙氨酰基、酪氨酰基、色氨酰基、甲硫氨酰基、賴氨酰基或絲氨酰基。
B)Q為丙氨酰基。
C)Q為甲硫氨酰基。
D)P為1。
E)P為2。
F)X為SO2。
G)X為CR3R4。
H)R3為氟，且R4為氫。
I)R3為羥基，且R4為氫。
J)R3和R4一起代表＝O。
K)R10為氫。
L)R10為氟。
M)R11為氫。
N)化合物為游離堿。
O)化合物為鹽。
P)化合物為鹽酸鹽。
Q)化合物為甲磺酸鹽。
R)化合物為乙磺酸鹽。
S)化合物為甲苯磺酸鹽。
前面段落可結合起來定義另外優選的化合物種類。
式I化合物對于治療哺乳動物疾病有用，優選的哺乳動物為人。
本發明的化合物可使用多種方法制備，下列方案中說明了其中一些方法。制備式I化合物所需的各步驟的特定順序取決于合成的特定化合物、起始化合物和取代部分的相對不穩定性。為了清楚起見，下列方案中的一些取代基可能已被除去，且該取代基并不意圖以任何方式限制對方案的教導。正如本領于普通技術人員所理解的，取代基R15和R16代表適當的側鏈，以形成希望的氨酰基。
如果不能商購獲得，則可由選自有機和雜環化學標準技術的方法制備下列方案中的必要起始原料，該技術與已知的、結構相似化合物的合成類似，該方法在制備和實施例中有所描述，且還包括新方法。
方案1 如上面方案1中所示，式I化合物在體內經酶或水解過程進行轉化。尤其，式I化合物的晶體形式可根據下面方案2中概述的途徑制備。
方案2 二酯保護的式(iii)的肽酰化合物在適當溶劑，如THF或THF/水溶劑中，與適當的堿，如氫氧化鋰或氫氧化鈉作用得到二酸保護的式(iv)的肽酰化合物。式(iv)化合物可在適當溶劑中用適當的酸進行脫保護。這種條件可產生式I鹽所示的相應二酸肽酰化合物的酸鹽，其可為無定形固體，或直接為結晶固體，其中X”代表對應的陰離子。對于無定形固體，其隨后可由適當溶劑中結晶出來。通過例如乙酸鈉試劑引入陽離子物質從而可形成羧酸鹽。最后，用適當的堿處理結晶鹽化合物可得到兩性化合物。
例如，二酸保護的式(iv)的肽酰化合物在適當溶劑中用氯化氫氣體處理可得到脫保護的無定形固體鹽酸鹽。然后無定形鹽酸鹽化合物可從丙酮和水中結晶出來生成結晶鹽酸鹽化合物。對于直接形成的結晶固體，反應混合物經過濾可得到結晶鹽。用氫氧化鈉處理結晶鹽酸鹽可得到兩性化合物。本領域普通技術人員應理解的是，式I化合物可經一個步驟制備而不分離所示中間體。
方案3 使用適當的偶合試劑用式III化合物酰化式(ii)的二酯，以得到式(iii)的二酯保護的肽酰化合物。另外，使用式III化合物的酰氯也能獲得這種轉換。
適當的肽偶合試劑包括雙環己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)、氯甲酸異丁酯、氯膦酰二苯酯、2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(CDMT)、雙(2-氧代-3-唑烷基)膦酰氯和苯并三唑-1-基氧化三(二甲氨基)六氟磷酸酯。
方案4 上面的方案4中，用適當的羧基保護試劑，如催化鹽酸或亞硫酰氯和甲醇或乙醇處理式II的二酸化合物，得到了相應的式(ii)的二酯。另外，可先用氮-保護試劑，如BOC2O處理式II化合物，以得到氮-保護的式(i)化合物。接下來可在堿，如碳酸鉀存在下，用羧基保護試劑，如，碘甲烷處理式(i)化合物，然后再用氮脫保護試劑，如鹽酸或三氟乙酸處理式(i)化合物，以獲得式(ii)化合物。
此外，本領域普通技術人員應認識到，取決于X，還可能需要適當的保護試劑。例如，如果X代表CR3R4，R3代表羥基，且R4代表氫，那么本領域普通技術人員應理解的是，進行上述任何一個方案之前都需要適當的羥基保護基團。
式II化合物在本領域已知。例如，可在美國專利5,688,826(‘826專利)和5,958,960(‘960專利)中找到這些化合物的制備。
針對式II化合物的合成途徑，已經對之前公開的方法進行了各種改進。該改進包括硫和醇氧化，以及下面描述的各種中間體的光學拆分。
第一種改進涉及“826專利第8欄，22-34行和第7欄中所述的轉化，從第33欄(式V)開始，涉及‘826專利的式VII化合物 的氧化以形成‘826專利的式V化合物。
已發現，現有技術中已知的許多氧化方法中，優選的是三氧化硫-吡啶絡合物或三氟乙酸酐與DMSO的結合。
其次，對于拆分‘826專利的式III化合物， 其中，R2代表羧基基團，參考第8欄，3-7行，和第6欄第1行開始，已發現優選(R)-α-甲基芐基胺和奎寧。特別優選(R)-α-甲基芐基胺。
再次，已發現，參考‘826專利第8欄，39-53行，‘826專利中X為硫的式III硫化物進行氧化形成‘826專利中X為磺酰基的式III化合物時，優選堿性水溶液體系和過氧化氫與催化劑結合使用。
下面實施例進一步說明了本發明的化合物及其合成方法。該實施例并不意圖在任何方面限制本發明的范圍，也不應這樣理解。所有試驗都是在干燥氮氣或氬氣的正壓下進行。除非另有說明，所有溶劑和試劑都商購獲得并以所購形式使用。干燥的四氫呋喃(THF)可在使用前由鈉或二苯甲酮羰游基鈉中蒸餾獲得。在500MHz的Bruker AvanceII bay-500上、200MHz的Bruker Avance I bay-200上或500MHz的Varian Inova/Varian 300/Varian400上獲得質子核磁共振(1H NMR)譜圖。在Agilent MSD/B儀上使用乙腈/醋酸銨水溶液作為流動相進行電噴霧質譜分析(ESI)。在VG ZAB-2SE儀上進行自由原子轟擊質譜分析(FABMS)。使用VG 70SE或Varian MAT 731儀進行場解吸附質譜分析(FDMS)。用Perkin-Elmer 241旋光儀測定旋光度。通常使用文章中指出的線性梯度溶劑在Waters Prep 500 LC上進行色譜分離。通常使用薄層色譜(TLC)監測反應進行是否完全。使用E.Merck Kieselgel60 F254板，5cm×10cm，0.25mm厚，進行薄層色譜分析。使用UV和化學檢測法(將板浸在鉬酸鈰銨溶液[500mL 10％硫酸水溶液中的75g鉬酸銨和4g硫酸鈰(IV)]中，然后在加熱板上加熱)檢測斑點。按照Still等，Still，Kahn和Mitra在J.Org.Chem.43，2923(1978)中描述的方法進行快速色譜法。在控制裝置公司440元素分析儀(ControlEquipment Corporation 440 Elemental Analyzer)上確定碳、氫和氮的元素分析，或由Universidad Complutense Analytical Center(Facultad deFarmacia，馬德里，西班牙)進行測定。在Gallenkamp熱空氣浴熔點儀或Büchi熔點儀的開口玻璃毛細管中測定熔點，且測得的熔點是未校正的。
實施例中使用的縮寫、符號和術語具有下列含義。
Ac＝乙酰基Anal.＝元素分析ATR＝衰減全內反射Bn或Bzl＝芐基Bu＝丁基BOC＝叔丁氧羰基calcd＝計算的D2O＝氧化氘DCC＝雙環己基碳二亞胺DCM＝1，2-二氯甲烷DIBAL-H＝二異丁基氫化鋁DMAP＝4-二甲基氨基吡啶DMF＝二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲基亞砜DSC＝差示掃描量熱法DEC＝N-乙基-N’N’-二甲基氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽ES＝電噴霧質譜Et＝乙基EtOH＝乙醇FAB＝快速原子轟擊(質譜分析)FDMS＝場解吸附質譜FTIR＝傅立葉轉換紅外光譜HOAt＝1-羥基-7-氮雜苯并三唑HOBt＝1-羥基苯并三唑HPLC＝高效液相色譜HRMS＝高分辨率質譜i-PrOH＝異丙醇IR＝紅外光譜L＝升Me＝甲基MeOH＝甲醇MPLC＝中壓液相色譜MP＝熔點MTBE＝叔丁基甲基醚NBS＝N-溴代丁二酰亞胺NMR＝核磁共振PC-TLC＝制備性離心薄層色譜Ph＝苯基p.o.＝口服給藥i-Pr＝異丙基Rochelle’s Salt＝酒石酸鉀鈉rt＝室溫SM＝起始原料TBS＝叔丁基二甲基甲硅烷基TEA＝三乙胺
Temp.＝溫度TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃TLC＝薄層色譜t-BOC＝叔丁氧基羰基一般方法A胺與N-BOC-(L)-氨基酸之間的EDC偶合將起始物氨基二烷基酯(1.0當量)(方案3，式ii化合物)懸浮在氮氣氛下、干燥的二氯甲烷中。順序加入相應的N-Boc-(L)-氨基酸(1.5-2.0當量)、EDC(1.5-2.0當量)、HOBt(1.5-2.0當量)和二甲基氨基吡啶(DMAP，0.1-0.2當量)。若非另有說明，則室溫下攪拌反應混合物直至用TLC判斷反應完全。用乙酸乙酯稀釋反應混合物，并依次用飽和NaHCO3水溶液和/或NaHSO4水溶液及鹽水洗滌。硫酸鈉干燥和真空蒸發后，使用適當洗脫液(通常為乙酸乙酯/己烷)用硅膠色譜精制粗品殘余物(式iii化合物)。
一般方法B胺與N-BOC-(L)-氨基酸異丁酸酐之間的酸酐偶合在-20℃，氮氣氛下，向相應的N-Boc-(L)-氨基酸(1.5當量)在干燥的二氯甲烷(10mL)中形成的溶液中加入N-甲基嗎啉(NMM，1.5當量，1mL CH2Cl2中)，之后以一定速度滴加氯甲酸異丁酯(IBCF，1.5當量，5mL CH2Cl2中)，以使內部反應溫度不超過-15℃。在-20℃下將所得反應混合物攪拌30分鐘，之后以一定速度加入-20℃的、(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’-氨基-丙酰胺基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(1.0當量)在二氯甲烷(10mL)中形成的溶液，以使內部反應溫度不超過-15℃。滴加結束后，移去冷水浴并在室溫下攪拌反應混合物直至TLC判斷反應完全。用乙酸乙酯稀釋反應混合物，并依次用飽和NaHCO3水溶液、NaHSO4水溶液及鹽水洗滌。硫酸鎂干燥和真空蒸發后，使用適當洗脫液(通常為己烷/乙酸乙酯)用硅膠色譜精制粗品殘余物。
一般方法C順序除去N-Boc和酯保護基團室溫下，在THF/2.5N LiOH(10-20當量)的1∶1混合物中攪拌相應的N-Boc二酯肽衍生物(式iii化合物，方案2)(1.0當量)達4小時。用水稀釋反應物，并用乙酸乙酯洗滌。棄去有機層。用1N HCl(將NaCl加入水相中以按需要提高可萃取性)將水相調節至pH為2，并用乙酸乙酯完全萃取出N-boc二羧酸產物(式iv化合物)。合并所有有機物，鹽水洗滌，MgSO4干燥，并真空濃縮至干燥，以獲得希望的泡沫狀固體的羧酸酯產物。溶解在乙酸乙酯中并冷卻至0℃。用無水HCl氣體吹掃反應混合物直到HCl飽和。0℃下攪拌所得反應混合物達4小時。氮氣氛下過濾，將完全脫保護的肽衍生物(式I化合物)以鹽酸鹽分離出來，或將反應混合物濃縮至干燥，隨后再用乙酸乙酯或Et2O研磨并濃縮成白色粉末。任選地，為了除去殘余溶劑和過量HCl，在水中重組產物、凍結，隨后冷凍干燥可獲得希望的鹽酸鹽產物。
制備例1(1R，4S，5S，6S)4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯 室溫下，用20分鐘將亞硫酰氯(15.5mL，212.6mmol)滴加至(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(10g，42.5mmol，美國專利號5,688,826)在100mL 2B乙醇中形成的漿液中，隨后用40mL乙醇漂洗。將漿液加熱至回流并攪拌過夜。以500MHz1HNMR(CD3OD)分析濃縮的等分試樣，結果顯示起始原料和中間體單酯被完全消耗掉。將所得溶液冷卻至室溫，然后濃縮至膠狀剩余物。向已進一步濃縮為固體的凝膠中加入EtOAc(50mL)，然后用另一份94mL EtOAc稀釋。將15％碳酸鈉水溶液(70mL)緩慢加入混合物中，并用手旋轉以逐漸溶解，所得最終pH為7.95。萃取各層之前對所得碳酸鈉沉淀進行過濾。用EtOAc(2×100mL)反萃取水層。用鹽水(1×100mL)洗滌合并的有機萃取物、干燥(MgSO4)、過濾并真空濃縮，從而獲得淡黃色油狀物，其固化得到為灰白色固體的標題化合物(11.71g，95％收率)。
重結晶將EtOAc(800μL)中的標題化合物(200mg)混合物加熱至56℃，此時發生溶解。56℃下攪拌15分鐘后，將庚烷(1mL)滴加至溶液中。關掉加熱。將溶液冷卻至52℃，此時發生沉淀作用。在冷卻和用庚烷(600μL)進一步溶解的過程中形成了漿液。過濾前，在室溫下攪拌所得漿液1小時，用庚烷(2×500μL)洗滌，并在45℃下干燥過夜，從而得到145mg(73％回收率)標題化合物，為白色固體。
mp 80-83℃。25D-57.7°(c 1.04，CH3OH)。
500MHz1HNMR(CD3Cl3)δ4.31(q，2H，J＝7.0Hz)，4.20(m，2H)，3.78(d，1H，J＝15.0Hz)，3.36(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.93(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.81(d，1H，J＝15.0Hz)，2.46(t，1H，J＝4.0)，1.34(t，3H，J＝7.0)，1.30(t，3H，J＝7.0).
13C NMR(125MHz，CD3Cl3)δ171.68，168.57，63.26，62.42，59.96，56.06，43.78，32.25，22.49，14.31，14.25。
FTIR(ATR)3364.15(s)，1725.95(s)，1304.91(s)，1259.24(s)，1200.84(s)，1104.91(s)，1022.99(s)，896.45(s)，851.21(s)cm-1。
C11H17NO6S的分析計算值C，45.35；H，5.88；N，4.81。實測值C，45.02；H，5.75；N，4.82。
制備例2(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯 -30℃下，用10分鐘將氯甲酸異丁酯(30.4mL，234mmol)滴加至N-Boc-L-丙氨酸(43.52g，230mmol)和N-甲基嗎啉(25.5mL，232mmol)在457mL二氯甲烷中形成的溶液中。在-25--30℃下攪拌所得稀漿液30分鐘，此時用25分鐘時間加入(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯(63.90g，219mmol，制備例1)在213mL二氯甲烷中形成的溶液，以使反應溫度不超過-25℃。加完后，移去冷水浴并在環境溫度下攪拌60分鐘，此時反應溫度達到19℃，顏色變為淡橙色。用350mL 1NHCl處理反應物并分離各層。用飽和NaHCO3水溶液(1×350mL)和鹽水(1×350mL)洗滌有機層、干燥(Na2SO4)、過濾，并真空濃縮為白色泡沫狀物(105.2g，104％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.62(brs，1H)，4.90(brd，1H，J＝7.1Hz)，4.34-4.10(m，6H)，3.39(ddd，1H，J＝7.2，3.9，1.0Hz)，3.00(dd，1H，J＝7.1，3.9Hz)，2.90(brd，1H，J＝14.9Hz)，2.43(t，1H，J＝4.1Hz)，1.46(s，9H)，1.31(m，9H，)。
13C NMR(75 MHz，CD3Cl3)δ173.0，168.6，167.6，80.9，76.5，63.3，62.3，59.9，55.7，42.8，31.5，28.2，22.7，16.6，14.0，13.9。MS(ES)m/z 461.0[M-H]-。
制備例3(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸 室溫下，向(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯(181.4g，392mmol理論值，制備例2)在292mL THF內形成的溶液中加入490mL(980mmol)2N氫氧化鈉.室溫下劇烈攪拌該兩相混合物1.25小時，此時反應均相進行.用490mL乙酸乙酯稀釋混合物并分離各層.用490mL乙酸乙酯稀釋水層，并用濃鹽酸將混合物pH降至1.5.分離各層并用245mL乙酸乙酯反萃取水層。干燥合并起來的有機層(Na2SO4)、過濾并濃縮，從而得到167.9g(105％)為白色泡沫狀物的標題化合物。該物質未經表征就用于實施例1和2中。
制備例4(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 將亞硫酰氯(6.2mL，85.0mmol)滴加至快速攪拌的(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(10.0，42.5mmol，美國專利5,688,826)在MeOH(170mL，5℃)中形成的懸浮液中。加完后將反應混合物緩慢升溫至室溫，之后在回流溫度下保溫48小時。減壓除去揮發物，并使剩余物在飽和NaHCO3溶液(200mL)和乙酸乙酯(400mL)之間進行分配。分離各層，并用乙酸乙酯(2×400mL)萃取水層。用K2CO3干燥合并起來的有機層并減壓濃縮，從而以72％的收率得到8.10g(30.8mmol)標題化合物。23D＝-84°(c＝0.5，MeOH)。
C9H13NO6S的分析計算值C，41.06；H，4.98；N，5.32。實測值C，40.94；H，4.93；N，5.30。
MS(ES)m/z 264.0[M+H]+.
制備例5(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-苯基-丙酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯
按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-苯丙氨酸和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例4)進行制備。使反應混合物回流過夜。用PC-TLC，4mmSiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)精制。獲得0.85g(88％，1.67mmol)白色泡沫狀物。23D＝-35.2°(c＝0.45，CHCl3)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.43(9H，s)，2.38-2.40(1H，m)，2.86(1H，d，J＝15.0Hz)，2.91(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.04(2H，d，J＝7.3Hz)，3.35-3.39(1H，m)，3.77(3H，s)，3.84(3H，s)，4.11(1H，d，J＝14.3)，4.30(1H，app.q，J＝7.3)，4.96(1H，bd，J＝6.6Hz)，6.96(1H，bs)，7.22-7.36(5H，m)。
C23H30N2O9S 0.1H2O的分析計算值C，53.92；H，5.94；N，5.47。
實測值C，53.62；H，5.90；N，5.28。
MS(ES)m/z 509.16[M-H]-；411.2 [M-Boc]+。
制備例6(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’S-甲基-戊酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-異亮氨酸和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例4)進行制備。使反應混合物回流過夜。用PC-TLC，4mmSiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)精制。獲得0.75g(83％，1.57mmol)白色泡沫狀物。23D＝-32.65°(c＝0.49，CHCl3)。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ 0.91(3H，t，J＝7.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.6Hz)，1.10-1.18(1H，m)，1.46(9H，s)，1.42-1.52(1H，m)，1.81-1.86(1H，bm)，2.51(1H，t，J＝4.0Hz)，2.95(1H，d，J＝15.0Hz)，3.06(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.43(3H，dd，J＝3.7，7.0Hz)，3.78(3H，s)，3.85(3H，s)，3.82-3.90(1H，m)，4.20(1H，d，J＝14.7Hz)，4.94(1H，d，J＝8.4Hz)，7.15(1H，bs)。
C20H32N2O9S的分析計算值C，50.41；H，6.77；N，5.88。實測值C，50.32；H，6.92；N，5.76。
MS(ES)m/z 475.1[M-H]-。
制備例7(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-甲基-丁酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-纈氨酸和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例4)進行制備。使反應混合物回流過夜。用PC-TLC，4mmSiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)精制。獲得0.41g(47％，0.89mmol)白色泡沫狀物。23D＝-35.36°(c＝0.51，CHCl3)。
1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ0.93(3H，t，J＝7.0Hz)，0.96(3H，d，J＝6.6Hz)，1.46(9H，s)，2.06-2.13(1H，m)，2.50(1H，t，J＝4.0Hz)，2.94(1H，d，J＝15.0Hz)，3.04(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.43(1H，dd，J＝3.3，6.6)，3.78(3H，s)，3.80-3.86(1H，m)，3.86(3H，s)，4.24(1H，d，J＝15.0Hz)，4.94(1H，d，J＝8.1Hz)，7.15(1H，bs)。
C19H30N2O9S的分析計算值C，49.34；H，6.54；N，6.06。實測值C，49.33；H，6.44；N，6.05。
MS(ES)m/z 461.2[M-H]-。
制備例8(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲基-戊酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-亮氨酸一水合物和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例4)進行制備。使反應混合物回流過夜。用PC-TLC，4mm SiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)純化。獲得0.85g(94％，1.78mmol)白色泡沫狀物。23D＝-46.15°(c＝1.04，CHCl3)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.92(3H，d，J＝6.2Hz)，0.95(3H，d，J＝6.6Hz)，1.47(9H，s)，1.42-1.47(1H，m)，1.63-1.67(1H，m)，2.46(1H，t，J＝3.7Hz)，2.87(1H，d，J＝15.0Hz)，3.04(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.41(1H，dd，J＝3.7，7.0)，3.78(3H，s)，3.86(3H，s)，4.00-4.05(1H，m)，4.20(1H，d，J＝15.0Hz)，4.75(1H，d，J＝6.6Hz)，7.43(1H，bs)。
C20H32N2O9S的分析計算值C，50.41；H，6.77；N，5.88。實測值C，50.30；H，6.82；N，5.75。
MS(ES)m/z 475.2[M-H]-。
制備例9(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S，6-雙-叔丁氧基羰基氨基-己酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯
按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-Lys(BOC)-OH和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例4)進行制備。使反應混合物回流過夜。用PC-TLC，4mmSiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)純化。獲得1.04g(93％，1.76mmol)白色泡沫狀物。23D＝-32.0°(c＝0.5，CHCl3)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.44(9H，s)，1.46(9H，s)，1.39-1.53(3H，m)，1.56-1.65(1H，m)，1.77-1.84(2H，m)，2.50(1H，t，J＝4.4Hz)，2.98-3.20(4H，m)，3.42(1H，dd，J＝3.7，7.0Hz)，3.76(3H，s)，3.86(3H，s)，4.01(1H，dd，J＝7.7，13.2Hz)，4.09-4.19(1H，m)，4.71(1H，t，J＝7.3Hz)，5.13(1H，bs)，7.59(1H，bs)。
C25H41N3O11S的分析計算值C，50.75；H，6.98；N，7.10。實測值C，50.36；H，6.99；N，6.87。
MS(ES)m/z 590.2 [M-H]-。
制備例10(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-(三苯甲基-氨基甲酰基)-丁酰氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯
按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-谷氨酰胺(Trt)-OH和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例4)進行制備。使反應混合物回流過夜。用PC-TLC，4mm SiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)精制。獲得0.53g(48％，0.72 mmol)白色泡沫狀物。23D＝-8.0°(c＝0.50，MeOH)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.83-1.88(1H，m)，2.03-2.18(1H，m)，2.16(1H，t，J＝4.0Hz)，2.57-2.64(1H，m)，2.60(1H，d，J＝15.0Hz)，2.64-2.80(1H，m)，2.88(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.26(1 H，dd，J＝4.0，7.0Hz)，3.47(3H，s)，3.76-3.90(1H，m)，3.81(3H，s)，4.05(1H，d，J＝15.0Hz)，5.47(1H，bs)，7.02(1H，bs)，7.20-7.35(15H，m)，8.68(1H，bs)。
C38H43N3O10S的分析計算值C，62.20；H，5.91；N，5.73。實測值C，61.83；H，6.09；N，5.57。
MS(ES)m/z 731.9[M-H]-。
C38H43N3O10S[M+Na]+的HRMS計算值，756.2567。實測值，756.2585。
制備例11(1R，4S，5S，6S)-4-[(1’-叔丁氧基羰基-吡咯烷-2’S-羧基)-氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的Boc-(L)-脯氨酸(0.61g，2.9mmol)和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6二效酸二甲酯(0.5g，1.9mmol，制備例4)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.87g(99.2％)標題化合物。23D＝-61.2(c＝0.49，CHCl3)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.51(9H，s)，1.75-1.98(3H，m)，2.35-2.5(2H，m)，2.84(1H，d，J＝14.7Hz)，2.9-3.03(1H，m)，3.25-3.4(1H，m)，3.3-4.1(2H，m)，3.76(3H，s)，3.86(3H，s)，4.14-4.31(2H，m)，8.66(1H，s)。MS(ES)m/z 459.2[M-I]-。
制備例12(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲基硫基-丁酰氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的Boc-(L)-蛋氨酸(0.71g，2.9mmol)和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.5g，1.9mmol，制備例4)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.85g(90.5％)標題化合物。23D＝-20.4(c＝0.49，CHCl3)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.46(9H，s)，1.69(1H，s)，1.8-2.05(2H，m)，1.9-2.0(1H，m)，1.95-2.3(3H，bs)，2.0-2.2(1H，m)，2.4-2.8(2H，m)，2.48(1H，t，J＝4.0Hz)，2.58(1H，bs)，2.92(1H，d，J＝14.7Hz)，3.01(1H，dd，J＝4.4，7.0Hz)，3.42(1H，dd，J＝3.7，7.3Hz)，3.78(3H，s)，3.87(3H，s)，4.22-4.24(2H，m)，5.06(1H，d，J＝7.7Hz)，7.27(1H，s)。MS(ES)m/z 493.1[M-1]-。
制備例13(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-(1-叔丁氧基羰基-1H-吲哚-3-基)-丙酰氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯
按照一般方法A，使用可商購獲得的Boc-(L)-色氨酸(Boc)(1.1g，2.8mmol)和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.5g，1.9mmol，制備例4)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.7g(56.7％)標題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.44(9H，s)，1.67(9H，s)，2.37(1H，bs)，2.86(1H，d，J＝15.0Hz)，2.88(1H，t，J＝4.4Hz)，3.15(2H，d，J＝6.6Hz)，3.39(1H，dd，J＝3.7，7.0Hz)，3.73(3H，s)，3.83(3H，s)，4.18(1H，d，J＝14.7Hz)，4.37-4.44(1H，m)，5.01(1H，bd，J＝8.1Hz)，7.11(1H，bs)，7.25-7.59(4H，m)，8.14(1H，bd，J＝8.4Hz)。23D＝-19.6(c＝0.51，CHCl3)。
C30H39N3O11S·1.0C4H8O2的分析計算值C，55.35；H，6.42；N，5.70。
實測值C，54.98；H，6.09；N，6.07。
C30H39N3O11Na1S的HRMS計算值，672.2203。實測值，672.2180。
制備例14(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-(4-叔丁氧基羰氧基-苯基)-丙酰氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的2S-叔丁氧基羰基氨基-3-(4-叔丁氧基羰氧基-苯基)-丙酸(1.1g，2.9mmol)和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.5g，1.9mmol，制備例4)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.94g(79.0％)標題化合物。23D＝+4(c＝1.00，CH3OH)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.44(9H，s)，1.56(9H，s)，2.44(1H，t，J＝4.0Hz)，2.88(1H，d，J＝14.7Hz)，2.98(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.04(2H，d，J＝7.3Hz)，3.38(1H，dd，J＝4.0，7.3Hz)，3.77(3H，s)，3.83(3H，s)，4.11(1H，d，J＝14.3Hz)，4.22-4.29(1H，app q，J＝7.3Hz)，4.92(1H，bd，J＝7.7Hz)，7.07(1H，bs)，7.1-7.26(4H，m)。
C28H38N2O12SNa的HRMS計算值，649.2043。實測值，649.2001.
制備例15(1R，4S，5S，6S)-4-(3’-乙酰氧基-2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯 按照一般方法A，不使用DMAP，使用3-乙酰氧基-2S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(0.25g，1.0mmol，制備例44)和(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.2g，0.8mmol，制備例4)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.19g(48.2％)標題化合物。23D＝-24(c＝1.0，CH3OH)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.47(9H，s)，2.10(3H，s)，2.51(1H，t，J＝4.4Hz)，2.99-3.07(2H，m)，3.43(1H，dd，J＝4.0，7.3Hz)，3.77(3H，s)，3.86(3H，s)，4.14-4.40(4H，m)，5.29(1H，bd，J＝7.3 Hz)，7.64(1H，bs)。
C19H28N2O11SNa的HRMS計算值，515.1312。實測值，515.1305。
制備例16
(1R，2S，4R，5R，6R)-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 室溫下，用20分鐘時間將亞硫酰氯(26mL，356mmol)滴加至(1R，2S，4R，5R，6R)-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(14.45g，71.12mmol，美國專利5,958,960)在202mL無水乙醇中形成的漿液中。將漿液加熱至回流并攪拌3小時。使其冷卻至室溫并攪拌過夜。將所得溶液真空濃縮為剩余物，然后用136mL乙酸乙酯稀釋，并以306mL 10％的碳酸鈉水溶液用手旋轉著處理15分鐘，從而使最終pH為10。分離各層，并用乙酸乙酯(1×136mL)洗滌水層。用鹽水(1×136mL)洗滌合并起來的有機萃取物、過濾并真空濃縮，從而得到17.07g(93％)為白色固體的標題化合物。23D＝+20.37°(c＝1.1，MeOH)。
m.p.＝64-66℃1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.28(3H，t，J＝7.3Hz)，1.31(3H，t，J＝6.8Hz)，1.34-1.45(1H，m)，1.85(2H，bs)，2.17-2.21(2H，m)，2.32-2.34(1H，m)，2.49(1H，dd，J＝7.8，14.1Hz)，4.24(2H，dq，J＝1.5，7.3Hz)，5.33-5.52(1H，m)。
C12H18FNO4的分析計算值C，55.59；H，7.00；N，5.40。實測值C，55.29；H，6.75；N，5.45。
MS(ES)m/z實測值260.3[M+H]+。
制備例17(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯
-22℃下，用15分鐘時間向氮氣氛下的、N-Boc-L-丙氨酸(38.62g，204mmol)在396mL二氯甲烷中形成的溶液中滴加N-甲基嗎啉(22.44mL，204mmol)，隨后再滴加氯甲酸異丁酯(26.48mL，204mmol)，以使反應溫度不超過-18℃。在-20℃下攪拌所得稀漿液30分鐘，此時再用40分鐘時間加入247mL二氯甲烷中的(1R，2S，4R，5R，6R)-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(49.46g，191mmol，制備例16)溶液，以使反應溫度不超過-16℃。加完后，將反應物從冷水浴中移去，并在環境溫度下攪拌70分鐘，此時反應溫度達到15℃，顏色變為淡橙色。用408mL 1NHCl處理反應物并攪拌5分鐘，然后分離各層。用飽和NaHCO3水溶液(1×408mL)洗滌有機層、干燥(Na2SO4)、過濾，并真空濃縮為白色泡沫狀物(88.16g)。
C20H31FN2O70.1CH2Cl2的分析計算值C，55.00；H，7.16；N，6.38。
實測值C，55.18；H，7.18；N，6.49。
MS(ES)m/z實測值431.3[M+H]+，331.2[M+H-Boc]+。
制備例18(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 室溫下，向(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(88.16g，191mmol，制備例17)在238mL THF中形成的溶液中加入238mL(477mmol)2N氫氧化鈉。室溫下將該兩相混合物劇烈攪拌2.5小時，此時反應均相進行。用238mL叔丁基甲基醚稀釋混合物，之后進行混合，并分離各層。用238mL水進-步稀釋水層，并過濾除去顆粒物質。用濃鹽酸(42.9mL，515mmol)處理溶液30分鐘，任選隨后加入標題化合物作為晶種，并攪拌1小時。過濾所得漿液，用水(2×100mL)洗滌，45℃下真空干燥40小時，從而得到72.2g標題化合物，其為白色固體。將一部分固體(69.5g)與490mL丙酮一起攪拌1小時制得霧狀溶液；過濾并用丙酮(2×100mL)洗滌。將該濾出液真空濃縮為白色泡沫狀物，并在45℃真空下進一步干燥16小時，從而得到61.8g(86％，校準有12％wt/wt丙酮)標題化合物。該物質未經表征就用于實施例14-18中。
制備例19(1S，2S，4S，5R，6R)-4-乙酰氧基-2-(叔丁氧基羰基)氨基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 氮氣氛下，向(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基)氨基-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(1.50g，4.20mmol，美國專利5958960)、吡啶(0.365mL，4.62mmol)和DMAP(0.513g，4.20mmol)在二氯甲烷(40mL)中形成的溶液中加入乙酸酐(0.514mL，5.0mmol)。室溫下攪拌16小時，用二氯甲烷稀釋，并傾入10％的檸檬酸水溶液(50mL)。用水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌有機層。用MgSO4干燥、過濾，并真空濃縮，制得標題化合物，其為白色固體(1.295g，75％)。
LCMSm/z 400 [M+H]+和m/z 300[M+H-CO2Bu]+@RT1.39分鐘。
制備例20(1S，2S，4S，5R，6R)-4-乙酰氧基-2-氨基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯
將(1S，2S，4S，5R，6R)-4-乙酰氧基-2-(叔丁氧基羰基)氨基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(1.25g，3.13mmol，制備例19)溶解于95％TFA與二氯甲烷(60mL)形成的溶液中，并在室溫氮氣氛下攪拌5分鐘。之后真空除去TFA/二氯甲烷。將粗產物溶解在NaHCO3(1.00g)與二氯甲烷(50mL)形成的懸浮液中，并攪拌30分鐘。過濾該懸浮液，用二氯甲烷(3×25mL)洗滌，并真空濃縮，獲得916mg(98％)產物，其為黃色油狀物。
LCMSm/z 400[M+H]+@RT0.92分鐘。
制備例21(1S，2S，4S，5R，6R)-4-乙酰氧基-2-[2’S-(叔丁氧基)羰基氨基丙酰基]氨基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 氮氣氛下，向(1S，2S，4S，5R，6R)-4-乙酰氧基-2-氨基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(0.80g，1.94mmol，制備例20)和Boc-L-Ala(0.477g，2.52mmol)在無水二氯甲烷(50mL)中形成的懸浮液中順序加入EDC(0.519g，2.72mmol)、HOBt(0.314g，2.32mmol)、催化量的DMAP(0.024g，0.19mmol)和三乙胺(1.08mL，7.76mmol)。室溫下攪拌約15分鐘后，最初的白色懸浮物完全溶解。將反應物攪拌16小時，用二氯甲烷稀釋，并用飽和NaHCO3水溶液(50mL)、1.0N HCl水溶液(3×20mL)和飽和鹽水溶液(40mL)洗滌。用MgSO4干燥有機層并過濾和真空干燥。用乙酸乙酯和己烷的(4∶1)混合物作為洗脫液，由柱色譜純化所得的粗酰胺，得到638mg(75％)產物，其為白色固體。
1H NMR(CD3OD)*δ5.05(1H，d，5.7Hz)，4.09(2H，q，7.3Hz)，4.02(2H，q，7.3Hz)，4.01-3.94(1H，m)，2.65-2.59(2H，m)，2.38(1H，d，14Hz)，2.10-2.03(3H，m)，1.91(3H，s)，1.78(1H，dd，5.9Hz，16Hz)，1.59(1H，brs)，1.34(9H，s)，1.16(6H，2xt，7.3Hz)；*N.B.NMR＝2未觀察到的可交換質子。
LCMSm/z 471[M+H]+和m/z 371 [M+H-CO2tBu]+@RT1.30分鐘。Rf0.50(80％乙酸乙酯∶庚烷)制備例22(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 將(1S，2S，4S，5R，6R)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(5.0g，14.0mmol，US 5958960)在乙酸乙酯中形成的溶液冷卻至0℃。向溶液中鼓入無水HCl(g)直至飽和并攪拌0.5小時。將反應升溫至室溫并攪拌1小時。濃縮反應混合物并使其在乙酸乙酯和H2O之間進行分配。用NaHCO3(aq)處理水層，并用乙酸乙酯萃取。用K2CO3干燥有機物并進行濃縮，獲得2.2g(59.7％)白色固體。23D＝-30.8(c＝0.52，CH3OH)。
1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ1.26(3H，t，J＝7.33Hz)，1.36(3H，t，7.33Hz)，1.60(1H，dd，J＝5.87，15.40Hz)，1.64(1H，t，J＝2.93Hz)，2.27(2H，bs)，2.15-2.29(3H，m)，3.93(1H，bs)，4.13(2H，q，J＝6.97Hz)，4，27-4.36(3H，m)。C12H19NO5的分析計算值C，56.02；H，7.44；N，5.44。實測值C，55.75；H，7.36；N，5.40。
MS(ES)m/z 258.1[M+H]+。
制備例23(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’-叔丁氧基羰基氨基-乙酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯
按照一般方法A，使用Boc-甘氨酸(458mg，2.62mmol，Aldrich)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(450mg，1.75mmol，制備例22)進行制備。在35g二氧化硅上純化，用洗脫梯度為50/50-20/80的己烷/乙酸乙酯洗脫。收率560mg(77％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.28(3H，t，J＝7.3Hz)，1.29(3H，t，J＝7.3Hz)，1.48(9H，s)，1.57(2H，m)，2.21(1H，m)，2.41(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，2.81(1H，d，J＝15.6Hz)，3.76(1H，d，J＝5.8Hz)，4.10-4.18(3H，m)，4.26(2H，q，J＝7.3Hz)，4.33(1H，m)，5.1 0(1H，bs)，6.86(1H，bs)。
C19H30N2O8的分析計算值C，55.06；H，7.30；N，6.76。實測值C，55.24；H，7.50；N，6.76.
MS(ES)m/z 41 5.2[M+H]+，437.2[M+Na]+。
制備例24(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-甲基丁酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用Boc-L-纈氨酸(569mg，2.62mmol，Sigma)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(450mg，1.75mmol，制備例22)進行制備。在35g二氧化硅上純化粗產物；用洗脫梯度為70/30-20/80的己烷/乙酸乙酯洗脫。收率694mg(87％)白色泡沫狀物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.95(3H，d，J＝6.8Hz)，1.00(3H，d，J＝6.8Hz)，1.29(6H，t，J＝7.3Hz)，1.45(9H，s)，1.52-1.60(2H，m)，2.08(1H，m)，2.20(1H，m)，2.42(1H，m)，2.81(1H，d，J＝15.6Hz)，3.86(1H，dd，J＝6.3，8.8Hz)，4.14(2H，q，J＝7.3Hz)，4.2 1-4.32(4H，m)，5.00(1H，d，J＝8.3Hz)，6.63(1H，s)。
C22H36N2O8的分析計算值C，57.88；H，7.95；N，6.14。實測值C，57.87；H，8.03；N，6.12。
MS(ES)m/z 457.2 [M+H]+，479.2 [M+Na]+。
制備例25(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲基戊酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用Boc-L-亮氨酸(606mg，2.62mmol，Chemlog)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(450mg，1.75mmol，制備例22)進行制備。在35 g二氧化硅上純化粗產物；用洗脫梯度為70/30-20/80的己烷/乙酸乙酯洗脫。收率689mg(84％)白色泡沫狀物。
1HNMR(400 MHz，CDCl3)δ0.96(6H，m)，1.28(3H，t，J＝7.3Hz)，1.29(3H，t，J＝7.3Hz)，1.46(9H，s)，1.45-1.73(5H，m)，2.20(lH，m)，2.42(1H，m)，2.80(1H，d，J＝16.1Hz)，4.07-4.35(7H，m)，4.81(1H，bd)，6.86(1H，bs)。
C23H38N2O8·0.1H2O的分析計算值C，58.48；H，8.15；N，5.93。實測值C，58.22；H，7.94；N，5.92。
MS(ES)m/z 471.2[M+H]+，493.2[M+Na]+。
制備例26
(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’S-甲基戊酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用Boc-L-異亮氨酸(606mg，2.62mmol，Aldrich)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(450mg，1.75mmol，制備例22)進行制備。在35 g二氧化硅上純化粗產物，用洗脫梯度為70/＝30-20/80的己烷/乙酸乙酯洗脫。收率731mg(89％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.92(3H，t，J＝7.3Hz)，0.97(3H，d，J＝6.8Hz)，1.17(1H，m)，1.29(6H，t，J＝6.8Hz)，1.46(9H，s)，1.53(1H，dd，J＝5.8，15.6Hz)，1.58(1H，t，J＝2.4Hz)，1.74(1H，m)，1.83(1H，m)，2.20(1H，m)，2.43(1H，m)，2.80(1H，d，J＝15.6Hz)，3.88(1H，dd，J＝7.3，8.8Hz)，4.12-4.32(6H，m)，4.98(1H，d，J＝7.3Hz)，6.60(1H，s)。
C23H38N2O8·0.2H2O的分析計算值C，58.25；H，8.16；N，5.91。
實測值C，58.17；H，8.11；N，5.91.
MS(ES)m/z 471.2 [M+H]+，493.2 [M+Na]+。
制備例27(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰氨基)-乙酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯
按照一般方法A，使用Boc-Gly-Gly(474mg，2.04mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(400mg，1.36mmol，制備例22中未用堿處理)進行制備，但有下列例外。未使用DMAP。加入1當量三乙胺。在35g二氧化硅上純化粗產物，用乙酸乙酯洗脫。收率517mg(81％)。23D＝-18.18(c＝0.55，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.26(3H，t，J＝6.8Hz)，1.27(1H，t，J＝7.3Hz)，1.28(3H，t，J＝6.8Hz)，1.46(9H，s)，1.59(1H，t，J＝3.4Hz)，1.62(1H，dd，J＝6.3，16.1Hz)，2.21(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，2.46(1H，dd，J＝2.4，5.8Hz)，2.73(1H，d，J＝15.6Hz)，3.78-3.91(3H，m)，4.01-4.15(3H，m)，4.24(2H，q，J＝6.8Hz)，4.32(1H，d，J＝5.8Hz)，5.28(1H，b)，6.87(1H，bt，J＝4.9Hz)，7.39(1H，bs)。
C21H34N3O9的HRMS(質譜)計算值，472.2295。實測值，472.2303。
HPLC16.755分鐘。柱對稱C18，3.5um，4.6×150 mm.λ＝230nM。
流速1mL/分鐘。梯度10％-50％ACN/含0.1％TFA的水，時間25分鐘。
制備例28(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰氨基)-乙酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0] 己烷-2，6-二羧酸二乙酯
按照一般方法A，使用Boc-Ala-Gly(502mg，2.04mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(400mg，1.36mmol，制備例22中未用堿處理)進行制備，但有以下例外。未使用DMAP。加入1當量三乙胺。在35g二氧化硅上純化粗產物，用乙酸乙酯洗脫。收率500mg(76％)。23D＝-31.37(c＝0.55，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.27(3H，t，J＝6.8Hz)，1.28(3H，t，J＝6.8Hz)，1.42(3H，d，J＝6.8Hz)，1.45(9H，s)，1.58(1H，t，J＝3.4Hz)，1.64(1H，dd，J＝5.8，15.6Hz)，2.23(1H，dd，J＝3.4，5.8Hz)，2.50(1H，dd，J＝2.9，6.3Hz)，2.69(1H，d，J＝15.6Hz)，二重峰的ABq(2H，νA＝3.87，νB＝3.98，JAB＝17.1Hz，Jd＝6.3Hz)，3.92(1H，m)，4.07-4.16(3H，m)，4.24(2H，q，J＝7.3Hz)，4.32(1H，b)，5.08(1H，b)，6.84(1H，bt，J＝4.88 Hz)，7.14(1H，bs)。
C22H36N3O9的HRMS計算值，486.2452。實測值，486.2451。
制備例29(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’-叔丁氧基羰基氨基-3’-苯基-丙酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用Boc-L-苯丙氨酸(772mg，2.91mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(480mg，1.94mmol，制備例22)進行制備。濃縮粗反應混合物、溶解于二氯甲烷、用乙酸乙酯/DCM(1∶1)快速通過一段短的硅膠填料，并真空濃縮得到黃色油狀物。用硅膠色譜進一步純化，用30％乙酸乙酯/己烷至80％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到852mg(87％)標題化合物。23D＝-23.66(c＝0.93，MeOH)。
1HNMR(400 MHz，CD30D)δ1.22-1.30(6H，m)，1.35(9H，s)，1.59(1H，t，J＝2.9Hz)，1.70(1H，dd，J＝5.5，15.4Hz)，2.06(1H，m)，2.40(1H，d，J＝15.4Hz)，2.63(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.76(1H，dd，J＝9.2，13.9Hz)，4.08-4.33(6H，m)，7.20-7.29(5H，m)。
MS實測值505.0[M+H]+。
C26H36N2O8的HRMS計算值，505.2550。實測值，505.2559。
制備例30(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-叔丁氧基羰基氨基-4’-(三苯甲基-氨基甲酰基)-丁酰氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 除不使用DMAP外，按照一般方法A，用Boc-L-谷氨酰胺(三苯甲基)-OH(1.40g，2.86mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(490mg，1.90mmol，制備例22)進行制備。濃縮粗反應混合物、溶解于二氯甲烷、用乙酸乙酯快速通過一段短的硅膠填料，并真空濃縮得到黃色油狀物。用硅膠色譜進一步純化，用30％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到1.3g(94％)標題化合物。23D＝-21.28(c＝0.94，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ 1.18-1.26(6H，m)，1.44(9H，s)，1.62-1.74(3H，m)，1.91-2.00(1H，m)，2.05(1H，m)，2.38-2.48(3H，m)，2.54(1H，m)，4.00-4.27(6H，m)，7.18-7.30(15H，m)。
MS實測值728.2[M+H]+。
C41H49N3O9的HRMS計算值，728.3547。實測值，728.3533。
制備例31(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S，6’-雙叔丁氧基羰基氨基-己酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 除不將DMAP加入反應混合物外，按照一般方法A，用Boc-L-賴氨酸(Boc)-OH(910mg，2.63mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(450mg，1.75mmol，制備例22)進行制備。濃縮粗反應混合物、溶解于二氯甲烷、用乙酸乙酯快速通過一段短的硅膠填料，并真空濃縮得到黃色油狀物。用硅膠色譜進一步純化，用乙酸乙酯/己烷(1∶1)洗脫，得到800mg(78％)標題化合物。23D＝-30.19(c＝0.53，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.21-1.24(6H，m)，1.26-1.77(27H，m)，2.07(1H，m)，2.42(1H，d，J＝15.8Hz)，2.59(1H，dd，J＝2.6，5.5Hz)，3.03(1H，t，J＝6.2Hz)，3.99(1H，m)，4.07-4.28(5H，m)。
MS實測值586.1[M+H]+。
C28H47N3O10的HRMS計算值，586.3340。實測值，586.3348。
制備例32(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-叔丁氧基羰基氨基-3’-(三苯甲基-氨基甲酰基)丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯
除不將DMAP加入反應混合物外，按照一般方法A，用Boc-L-天門冬酰胺(三苯甲基)-OH(1.35g，2.84mmol)和(1 S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(476mg，1.85mmol，制備例22)進行制備。濃縮粗反應混合物、溶解于二氯甲烷、用乙酸乙酯快速通過一段短的硅膠填料，并真空濃縮得到黃色油狀物。用硅膠色譜進一步純化，用20％乙酸乙酯/己烷-50％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到1.07g(81％)標題化合物。23D＝-25.45(c＝0.55，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.19-1.26(6H，m)，1.45(9H，s)，1.61-1.69(2H，m)，2.05(1H，m)，2.44(1H，d，J＝15.4Hz)，2.51-2.72(3H，m)，4.02-4.21(4H，m)，4.25(1H，d，J＝5.5Hz)，4.36(1H，dd，J＝4.8，8.8Hz)，7.18-7.30(15H，m)。
MS實測值714.1[M+H]+。
C40H47N3O9的HRMS計算值，714.3391。實測值，714.3380。
制備例33(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-叔丁氧基羰基氨基-3’-(1’-叔丁氧基羰基-1H-吲哚-3’-基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯
按照一般方法A，使用Boc-L-色氨酸(Boc)-OH(1.18g，2.91mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(520mg，1.90mmol，制備例22)進行制備。濃縮粗反應混合物、溶解于二氯甲烷、用乙酸乙酯快速通過一段短的硅膠填料，并真空濃縮得到黃色油狀物。用硅膠色譜進一步純化，用乙酸乙酯/己烷DCM(1∶1)洗脫，得到1.2g(92％)標題化合物。23D＝-12.5(c＝0.96，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.18-1.27(6H，m)，1.34(9H，s)，1.62(IH，t，J＝2.9Hz)，1.67(9H，s)，1.74(IH，dd，J＝5.9，15.2Hz)，2.07(1H，m)，2.46(1H，d，J＝15.7Hz)，2.60(1H，d，J＝2.9，5.9Hz)，2.89(1H，dd，J＝9.3，15.0Hz)，3.16(1H，dd，J＝4.9，15.2Hz)，4.04-4.12(2H，m)，4.18-4.24(2H，m)，4.27(1H，d，J＝5.4Hz)，4.43(1H，dd，J＝5.4，9.3Hz)，7.26(2H，m)，7.52(1H，s)，7.64(1H，d，J＝7.3Hz)，8.10(1H，d，J＝8.3Hz)。
MS實測值644.8[M+H]+，666.8[M+Na]+。
C33H44N3O10的HRMS計算值，666.3002。實測值，666.2988。
制備例34(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(1’-叔丁氧基羰基-吡咯烷-2’S-羰基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用Boc-L-脯氨酸和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例22)進行制備。在ISCO體系的110g二氧化硅上純化粗物質，用梯度為80％的乙酸乙酯/己烷-100％的乙酸乙酯洗脫，得到699mg(84％)標題化合物。23D＝-52.53(c＝0.99，MeOH)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.26(6H，m)，1.44(9H，s)，1.62(1H，m)，1.73(1H，dd，J＝5.4，15.3Hz)，1.84(1H，m)，1.97(1H，m)，2.07(4H，m)，2.41(1H，d，J＝15.3Hz)，2.50(1H，m)，2.59(1H，m)，4.12(2H，m)，4.20(1H，q，J＝7.4Hz)，4.27(1H，d，J＝5.4Hz)。
MS實測值454.9[M+H]+，476.8 [M+Na]+。
C22H34N2O8Na的HRMS計算值，477.2213.實測值，477.2210。
制備例35(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-(4-叔丁氧基羧氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用2S-叔丁氧基羰基氨基-3-(4-叔丁氧基羰氧基-苯基)-丙酸和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例22)制備標題化合物。在Isco體系的110g二氧化硅上純化粗物質，用梯度為60％的乙酸乙酯/己烷-90％的乙酸乙酯/己烷洗脫，得到1.09g(91％)標題化合物。23D＝-12(c＝1.0，MeOH)。
1HNMR(400 MHz，CD3OD)δ1.25(6H，m)，1.37(9H，s)，1.52(9H，s)，1.68(1H，dd，J＝5.4，15.3Hz)，2.06(1H，m)，2.38(1H，d，J＝15.3Hz)，2.64(1H，m)，2.79(1H，dd，J＝8.4，13.9Hz)，3.05(1H，dd，J＝5.4，13.9Hz)，4.20(6H，m)，7.04(2H，d，J＝8.4Hz)，7.26(2H，d，J＝8.4Hz)。
MS實測值621.8[M+H]+，643.8[M+Na]+。
C31H44N2O11Na的HRMS計算值，643.2843。實測值，643.2845。
制備例36(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲基硫基-丁酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用(Boc-L-蛋氨酸)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例22)制備標題化合物。在Isco體系的110g二氧化硅上純化粗物質，用梯度為80％的乙酸乙酯/己烷-100％的乙酸乙酯洗脫，得到1.0g(92％)標題化合物。23D＝-30(c＝1.0，MeOH)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.26(6H，m)，1.43(9H，s)，1.84(6H，m)，2.06(1H，m)，2.2(1H，m)，2.48(1H，m)，2.61(1H，m)，3.37(1H，m)，2.49(1H，m)，4.2(6H，m)。
MS實測值488.8[M+H]+，510.8[M+Na]+。
C22H36N2O8SNa的HRMS計算值，511.2090。實測值，511.2071。
制備例37(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法A，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-丙氨酸和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例22)進行制備。將反應混合物回流過夜。用制備HPLC，1×500g的SiO2柱，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)純化。獲得3.0g(90％，7.00mmol)白色泡沫狀物。23D＝-32.31°(c＝0.37，CHCl3)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.28(6H，t，J＝7.3Hz)，1.34(3H，d，J＝7.3Hz)，1.46(9H，s)，1.51-1.58(2H，m)，1.64(1H，s)，2.19(1H，dd，J＝3.3，6.2Hz)，2.40(1H，dd，J＝2.9，6.2Hz)，2.80(1H，d，J＝15.8Hz)，4.10-4.36(6H，m)，4.92(1H，bs)，6.94(1H，bs)。
C20H32N2O8·0.1H2O的分析計算值C，55.83；H，7.54；N，6.51。
實測值C，55.57；H，7.64；N，6.44。
MS(ES)m/z 429.2[M+H]+，329.1[M-Boc]+。
制備例38(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽 0℃下，用無水HCl氣體吹掃(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(2.95g，6.88mmol，制備例37)在乙酸乙酯(30mL)中形成的溶液，直至該溶液被HCl飽和。0℃下攪拌所得反應混合物，直到TLC判斷反應完全。用N2吹掃反應混合物30分鐘以除去過量HCl氣體。真空下將所得懸浮液濃縮至干燥，得到2.47g(98％，6.78mmol)希望的氨基鹽酸鹽。無需進一步純化。23D＝28.0°(c＝0.50，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.24(3H，t，J＝7.0Hz)，1.28(3H，t，J＝7.3Hz)，1.50(3H，d，J＝7.3Hz)，1.61(1H，t，J＝2.9Hz)，1.76(1H，dd，J＝5.9，15.8Hz)，2.10(1H，dd，J＝3.3，5.9Hz)，2.43(1H，d，J＝15.4Hz)，2.60(1H，dd，J＝2.9，6.2Hz)，3.90(1H，q，J＝7.0，13.9Hz)，4.15(2H，q，J＝7.3Hz)，4.14-4.31(3H，m)。
C15H24N2O6·HCl·0.7H2O的分析計算值C，47.73；H，7.05；N，7.42。計算值C，47.96；H，6.91；N，7.04。
MS(ES)m/z 329.1[M+H]+。
制備例39(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 除不使用DMAP外，按照一般方法A，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(0.2g，0.55mmol，制備例38)和Boc-(L)-丙氨酸(0.16g，0.82mmol)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.13g(47.3％)標題化合物。23D＝-46.2(c＝0.52，CHCl3)。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.27(3H，t，J＝7.0Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz)，1.36(3H，d，J＝7.0Hz)，1.37(3H，d，J＝7.0Hz)，1.44(9H，s)，1.58-1.65(2H，m)，2.19(1H，dd，J＝3.0，5.9Hz)，2.46(1H，dd，J＝2.6，5.9Hz)，2.70(1H，d，J＝15.4Hz)，4.09-4.33(7H，m)，4.48(1H，app p，J＝7.0Hz)，5.05(1H，bd，J＝6.6Hz)，6.79(1H，bd，J＝7.7Hz)，7.26(1H，s)。
C23H38N3O9的HRMS計算值，500.2608。實測值，500.2598。
制備例40(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 除不使用DMAP外，按照一般方法A，使用Boc-甘氨酸(0.29g，1.6mmol)和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(0.4g，1.1mmol，制備例38)進行制備。用PC-TLC(乙酸乙酯/己烷)純化，獲得0.14g(26.2％)標題化合物。23D＝-14(c＝1.00，CDCl3)。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.27(3H，t，J＝7.3Hz)，1.29(3H，t，J＝7.3Hz)，1.38(3H，d，J＝7.0Hz)，1.45(9H，s)，1.57-1.65(2H，m)，2.19(1H，dd，J＝3.3，5.9Hz)，2.44(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.74(1H，d，J＝15.8Hz)3.70-3.86(2H，m)，4.08-4.34(6H，m)，4.56(1H，app p，J＝7.0Hz)，5.31(1H，bs)，6.88(1H，bd，J＝7.0Hz)，7.50(1H，s)。
C22H36N3O9的HRMS計算值，486.2452。實測值，486.2444。
制備例41(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-叔丁氧基羰基氨基-4-甲基-戊酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法B，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-亮氨酸一水合物和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(0.2g，0.55mmol，制備例38)進行制備。用PC-TLC，4mm的SiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)純化。獲得0.54g(62％，1.00mmol)白色泡沫狀物。23D＝-61.2°(c＝0.49，MeOH)。
1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ0.93(3H，d，J＝6.2Hz)，0.94(3H，d，J＝6.2Hz)，1.25(3H，t，J＝7.3Hz)，1.27(3H，t，J＝7.3Hz)，1.36(3H，d，J＝7.0Hz)，1.43(9H，s)，1.53(1H，d，J＝9.5Hz)，1.55-1.69(5H，m)，2.18(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.44(1H，dd，J＝2.9，6.2Hz)，2.70(1H，d，J＝15.8Hz)，4.06(1H.bs)，4.13(4H，q，J＝7.3Hz)，4.18-4.28(2H，m)，4.31(1H，d，J＝5.9Hz)，4.41-4.45(1H，m)，4.85(1H，bs)，6.57(1H，d，J＝7.3Hz)，6.97(1H，bs)。
C26H43N3O9·0.1H2O的分析計算值C，57.46；H，8.01；N，7.73。
實測值C，57.18；H，8.00；N，7.64。
C26H43N3O9[M+Na]+的HRMS計算值，564.2897。計算值，564.2922。
制備例42(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 按照一般方法B，使用可商購獲得的N-BOC-(L)-纈氨酸和(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(0.2g，0.55mmol，制備例38)進行制備。用PC-TLC，4mm的SiO2轉子，(10％乙酸乙酯/己烷-67％乙酸乙酯)純化。獲得0.36g(43％，0.68mmol)白色泡沫狀物。23D＝-65.5°(c＝0.58，MeOH)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 0.91(3H，d，J＝7.0Hz)，0.97(3H，d，J＝6.6Hz)，1.27(3H，t，J＝7.3Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz)，1.37(3H，d，J＝17.3Hz)，1.44(9H，s)，1.54-1.61(3H，m)，2.12-2.20(2H，m)，2.42(1H，dd，J＝2.6，5.9Hz)，2.70(1H，d，J＝15.4Hz)，3.90(1H，t，J＝6.6Hz)，4.13(2H，q，J＝7.0Hz)，4.20-4.29(2H，m)，4.31(1H，d，J＝5.9Hz)，4.40-4.48(1H，m)，4.93(1H，bs)，6.41(1H，d，J＝7.3Hz)，6.91(1H，bs)。
C25H41N3O9·0.2CH2Cl2的分析計算值C，55.58；H，7.66；N，7.72。
實測值C，55.76；H，7.27；N，7.49。
MS(ES)m/z 528.3 [M+H]+。
制備例43(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-乙酰氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 0℃下，攪拌(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯鹽酸鹽(0.30g，0.82mmol，制備例38)在CH2Cl2(30mL)中形成的溶液，同時按順序先加入三乙胺(0.16g，1.6mmol)，然后是乙酰氯(0.10g，1.18mmol)。將反應混合物攪拌過夜并讓其升溫，用乙酸乙酯(700mL)稀釋反應混合物，并用NaHSO4水溶液和鹽水洗滌。以硫酸鎂干燥有機層。用PC-TLC，4mm的SiO2轉子純化，(10％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯)，得到0.24g(79％，0.65mmol)白色泡沫狀物。23D＝-48°(c＝0.5，MeOH)。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.27(3H，t，J＝7.3Hz)，1.28(3H，t，J＝7.3Hz)，1.37(3H，d，J＝7.0Hz)，1.55-1.62(2H，m)，1.99(3H，s)，2.19(1H，dd，J＝3.3，6.6Hz)，2.40(1H，dd，J＝2.6，5.9Hz)，2.77(1H，d，J＝15.8Hz)，4.07(2H，q，J＝7.0Hz)，4.21-4.31(2H，m)，4.33(1H，d，J＝6.2Hz)，4.43-4.47(1H，m)，6.13(1H，bs)，7.06(1H，bs)。
C17H26N2O7的分析計算值C，55.13；H，7.08；N，7.56。計算值C，55.05；H，7.12；N，7.29。
C17H26N2O7[M+Na]+的HRMS計算值，393.1638。實測值，393.1644。
制備例443-乙酰氧基-2S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸 將N-甲基嗎啉(2.8g，27.2mmol)和重碳酸二叔丁酯(5.8g，25.2mmol)加入O-乙酰基-L-絲氨酸(3.7g，25.2mmol)在1∶1二氧六環∶水中形成的溶液中。攪拌反應24小時，然后使其在乙酸乙酯和水之間進行分配。用乙酸乙酯萃取水溶液并棄去有機物。用NaHSO4水溶液將pH調節至0-1。乙酸乙酯萃取、Na2SO4干燥、過濾并真空濃縮。經閃蒸色譜純化得產物2.6g(41.7％)。所得物質未經表征即用于制備例15中。
制備例45(1S，5R)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(叔丁氧基羰基)-6-氧雜雙環[3.1.0]己烷 30分鐘內將THF(385mL)中的甲基丙二酸叔丁酯(129g，0.75mmol)溶液加入THF(900mL)中的LiH(14.9g，1.875mol)與N，N-二甲基亞丙烯脲(DMPU，155g，1.2mol)形成的漿液中，并保持溫度為0-5℃。將反應混合物加熱至65℃，并在5.5小時內加入THF(100mL)中的順-1，4-二氯-2-丁烯(95％，100g，0.8mol，1.08當量)溶液，保持溫度為63-67℃。65℃下將反應混合物攪拌4小時。反應混合物經水/MTBE處理得1-(甲氧基羰基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.57(s，2H，CH＝CH)，3.71(s，3H，CH3)，2.95(s，4H，2CH2)，1.42(s，9H，C(CH3)3)。
IR(膜)1734(C＝O)，1646，1268，1149cm-1。
將含有1-(甲氧基羰基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯的反應溶液冷卻至10-15℃，并在30分鐘內將其加入到1N NaOH(1.3L，1.3mol)的冷卻溶液(10-15℃)中。25℃下攪拌反應溶液24小時并用GC試驗監測。水解反應完全后，將MTBE(645mL)加入到反應混合物中并將溶液攪拌5分鐘。靜置各層并分離。丟棄有機層。加入1.5M NaHSO4溶液(1470mL)以使水層酸化(pH2-3)。加入MTBE(1.3L)并分離各層。用MTBE(385mL)萃取水層，并用5％LiCl溶液洗滌合并在一起的有機層。真空濃縮有機層并用庚烷(780mL)稀釋。將溶液濃縮至約500mL，室溫下攪拌所得漿液1小時。過濾固體、用庚烷(250mL)洗滌并在35℃下真空干燥，得到103.29g(61％的收率)1-(羧酸)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯，其為白色固體。
mp＝119℃。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ5.61(s，2H，CH＝CH)，3.00(s，4H，2CH2)，1.46(s，9H，C(CH3)3)。
IR3800-3000(br，COOH)，1741(CO2R)，1705(CO2H)，1283)，1149cm-1。
氮氣氛下，在帶有機械攪拌器的1L燒瓶中，將1-(羧酸)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯(50g，236mmol)溶于850mL70∶30的甲苯∶MTBE中，將亞硫酰氯(33.6g，283mmol，1.2當量)加入到被攪拌的反應混合物中，保持溫度為23℃。將反應溶液冷卻至0-5℃并在30分鐘內滴加三乙胺(32.2g，318mmol，1.35當量)。將反應混合物升溫至23℃并攪拌1小時。將反應混合物快速滴加至去離子水(625mL)中，保持溫度為20-25℃。分離各層并用500mL 1M的NaHCO3溶液洗滌有機層。濃縮有機層分離1-(氯羰基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯，其為淡黃色液體。
1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ5.61(s，2H，CH＝CH)，3.04(app q，J＝15.1Hz，4H，2CH2)，1.49(s，9H，C(CH3)3)。
IR(膜)1796(COCl)，1743(CO2R)，1274，1233，1158cm-1。
將去離子水(700mL)中的四丁基銨硫酸氫鹽(0.81g，2.4mmol)溶液加入疊氮化鈉(20.16g，310mmol)中。45分鐘內，將MTBE/甲苯中的含有1-(氯羰基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯的溶液加入疊氮溶液中。23℃下攪拌反應混合物3小時，直至反應溶液的GC分析已確定1-(氯羰基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯被消耗掉。分離各層并用1MNaHCO3(540mL)和去離子水(540mL，然后270mL)洗滌有機層。用NaSO4干燥有機層并過濾。真空濃縮獲得1-(酰基疊氮)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯，其為油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.58(s，2H，CH＝CH)，2.96(app t，J＝2.3Hz，4H，2CH2)，1.46(s，9H，C(CH3)3)。
IR(膜)2137(CON3)，1720(CO2R)，1246(s，1185，1136cm-1)。
95℃下，1小時內，將1-(酰基疊氮)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯加入到110mL甲苯中。在此條件下放出的氮氣以滴加的速度控制。在加入過程中從反應中蒸餾出MTBE。95℃下攪拌反應1小時，并使其冷卻過夜至23℃。真空濃縮溶劑得到1-(異氰酸酯基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯，其為油狀物。
1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ5.67(s，2H，CH＝CH)，3.01(d，J＝15.6Hz，2H)，2.61(d，J＝15.6Hz，2H)，1.50(s，9H，C(CH3)3)。
IR(膜)2258(-NCO)，1732(-CO2R)，1157cm-1。
氮氣氛下將叔丁醇(35g，471mmol)加入叔丁醇鉀(1M，THF中，471mL，471mmol)。將反應溶液冷卻至0-5℃，60分鐘內加入含有1-(異氰酸酯基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯的甲苯溶液，保持溫度為0-10℃。使反應升溫至23℃，攪拌2小時，用GC測定異氰酸酯起始物質的消失。15℃下，將反應混合物加入去離子水(1.2L)和MTBE(1.2L)的混合物中。攪拌溶液20分鐘并分離各層。經蒸餾濃縮將有機層變為約250mL。加入庚烷(500mL)，并將溶液總體積濃縮至250mL。將所得漿狀溶液冷卻至0℃，攪拌2小時，過濾。用冷庚烷(2×100mL)洗滌濾餅并真空干燥，獲得34.54g(52％，由1-(羧酸)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯計算收率)1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯，其為白色固體。
m.p.87-89℃。
1HNMR(500 MHz，CDCl3)δ5.63(s，2H，CH＝CH)，5.1(bs，1H，NH)，2.99(d，J＝17.2Hz，2H)，2.57(d，J＝16.0Hz，2H)，1.46(s，9H)，1.44(s，9H)。
13C NMR(CDCl3)δ173.3，154.9，127.7，81.1，64.5，44.8，28.3，27.8。IR(KBr)3451，2981，2932，1712，1489，1369，1154cm-1。
MS(FIA)m/e(％相對強度)284.2(M++1，56)，228.2(73)，172.1(97)，128.0(100)。
將100mL乙酸乙酯中的1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)環戊-3-烯(20.00g，71mmol)溶液加入四丁基銨硫酸氫鹽(4.08，10mmol，0.17當量)、單過氧化鄰苯二甲酸鎂水合物(MMPA，52.4g，4.76％活性氧＝2.1當量)和去離子水(100mL)的混合物中。用機械攪拌器攪拌反應19小時。30分鐘內，將去離子水(100L)中的亞硫酸鈉溶液加入反應混合物中。用100mL乙酸乙酯稀釋混合物并分離各層。用去離子H2O(100mL)、2N NaOH(2×100mL)和去離子H2O(2×100mL)洗滌有機層。在75-90℃的大氣壓下蒸餾有機層，直至體積達40mL。將溶液冷卻至75℃并加入庚烷(120mL)。將溶液冷卻至65℃并任選以希望的產物為晶種。使所得漿液冷卻至室溫，然后在冰浴中冷卻1小時。過濾產物，用80mL冷的4∶1的庚烷∶EtOAc洗滌，之后在40℃下真空干燥，得15.45g(73％收率)目標產物，為白色固體。化合物可進一步從2∶1的異丙醇∶水中重結晶純化。
m.p.130-133℃1HNMR(500MHz，CDCl3)δ5.0(bs，1H)，3.58(s，2H)，2.41(d，J＝15.3Hz，2H)，2.20(d，J＝15.2Hz，2H)，1.43(s，9H)，1.40(s，9H)。
13C NMR(CDCl3)δ171.3，154.3，81.2，79.5，62.8，57.0，38.6，28.3，27.7。
IR(KBr)3453，2982，2932，1726，1708，1489，1369，1293，1156，840cm-1。
MS(FLA)m/e(％相對強度)300.3(M++1，65)，244.4(68)，188.2(100)144.1(99)。
制備例46(1S，3R)-1，3-二(甲基芐基氨基)丙烷二鹽酸鹽
氮氣氛下，將(R)-α-甲基芐基胺(98％ee，121g，1mol)加熱至100℃。用70分鐘滴加二溴丙烷(25.4mL，50.5g，250mmol)。將混合物另外加熱3小時，之后冷卻至80℃。用10分鐘滴加濃(50％)NaOH溶液。加水(30mL)溶解固體，30分鐘內將混合物冷卻至室溫。加入MTBE(100mL)。加入100mL水溶解沉淀物，并分離各層。用50mL鹽水洗滌有機層、干燥(Na2SO4)并真空濃縮，得到126.0g淡黃色油狀物。70℃下(頂部溫度)，使用12-英寸的柱子真空蒸餾該油狀物，以除去過量的(R)-α-甲基芐基胺。在帶有攪拌器的2L燒瓶內，將釜底剩余物(68g粗二胺)溶于1L異丙醇中。用10分鐘滴加濃HCl(12M，45mL，540mmol)。另外加入100mL異丙醇，以保證濃漿液完全混合。將混合物攪拌90分鐘并過濾。用異丙醇洗滌濾餅，40℃下真空干燥，獲得64.32g(72％收率，基于二溴丙烷)標題化合物，為白色固體。
1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.93(bs，2H)，9.47(bs，2H)，7.56(d，J＝7.0Hz，4H)，7.37(m，6H)，4.27(m，2H)，2.84(m，2H)2.48(m，2H)，2.1(m，2H)，1.56(d，J＝6.7Hz，6H)。
制備例47(1S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)-環戊-4-烯-3-酮 邊攪拌邊將(1R，3R)-1，3-二(甲基芐基氨基)丙烷二鹽酸鹽(24.65g，69.3mmol，制備例46)溶于150mL水中。向溶液中加入35mL(175mmol)5N NaOH溶液，隨后再加入150mL MTBE。攪拌15分鐘后分離各層，并用100mL MTBE萃取水層。用100mL鹽水洗滌合并的有機層，用Na2SO4干燥并真空濃縮，得到18.06g(92％收率)1R，3R-二(甲基芐基氨基)丙烷，為無色油狀物。
在帶有頂部攪拌器的500mL四口燒瓶中，在N2氣流下，將20.59g(73.5mmol)的1R，3R-1，3-二(甲基芐基氨基)丙烷分別溶解在30mL干燥的MTBE和THF中。將溶液冷卻至-45℃并在17分鐘內滴加59mL(147mmol)正丁基鋰溶液(2.5M，己烷中)。-45℃下攪拌淡黃色溶液2小時。用28分鐘時間將(1S，3S，5R)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(叔丁氧基羰基)-6-氧雜雙環[3.1.0]己烷(10.00g，33.4mmol)在55mL干燥的THF中的溶液滴加進去，保持溫度低于-40℃。用額外的5mL THF漂洗滴加的漏斗。-45℃下攪拌反應混合物18小時，之后通過滴加4N的硫酸水溶液(75mL)淬滅反應。加完酸后移去冷水浴。分離各層，并用50mL MTBE萃取水層。分別用50mL水和50mL鹽水洗滌混合的有機層，用Na2SO4干燥，并真空濃縮，得到9.78g粗578242，為白色固體。將該固體溶解在33mL熱MTBE中，并分批加入庚烷(66mL)。使攪拌的溶液冷卻至室溫，之后在0℃下攪拌混合物1小時。過濾該固體，用2×10mL冷的2∶1的庚烷∶MTBE洗滌，并在35℃下真空干燥4小時，得到8.52g(85％收率)(1S，3R)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)-3-羥基環戊-4-烯，為白色固體。
m.p.111-112℃。
手性HPLC分析99.7％ee。D＝+114(c 1，MeOH)。
1HNMR(500 MHz，CDCl3)δ 6.1(bs，1H)，5.9(bs，1H)，5.55(d，J＝5.0Hz，1H)，4.8(m，1H)，4.44(d，J＝10.5Hz，1H)，2.87(dd，J＝14.5，7.5Hz，1H)，2.00(d，J＝14.5Hz，1H)，1.45(s，9H)，1.42(s，9H)。IR(KBr)3413，2983，1703，1491，1370，1309，1255，1155，1055cm-1。MS(FIA)m/e(％相對強度)300.3(M++1，15)，226.2(29)，170.1(100)，126.1(89)，108.3(20)。
將2，2，6，6，-四甲基-1-哌啶氧基(自由基)(TEMPO)(0.84，5.3mmol)和KBr(0.63g，5.3mmol，2mL水中)加入(1S，3R)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)-3-羥基環戊-4-烯(20g，66.8mmol)在MTBE(200mL)中形成的溶液里。將反應混合物冷卻至0℃，滴加含有NaHCO3(8.4g)的NaOCl(3.14％，240g，100mmol)溶液，保持溫度低于5℃。0℃下攪拌反應1小時并加熱至室溫。分離各層，用MTBE(2×200mL)萃取水層。用含有2.21g KI的200mL 1NHCl溶液洗滌合并的有機層，之后用10％Na2SO3溶液(200mL)洗滌。用水(2×200mL)洗滌有機層，并真空濃縮至干燥。50℃下，將粗產物溶解在MTBE(60mL)中，并加入庚烷(200mL)結晶1小時。2小時內將混合物冷卻至0℃，然后過濾。用100mL冷的庚烷∶MTBE(65∶35)洗滌濾餅并真空干燥，得16.99g(89％收率)標題化合物，為白色固體。
m.p.116-18℃。D＝+123(c1，MeOH)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4(bs，1H)，6.32(d，J＝5.5Hz，1H)，5.6(bs，1H)，2.87(d，J＝18.2Hz，1H)，2.9(d，J＝18.2Hz，1H)，1.43(s，18H)。
13C NMR(CDCl3)δ206.1，170.2，160.8，154.9，136.1，84.5，66.1，46.6，28.9，28.4。
IR(KBr)3419，2983，1722，1487，1730，1300，1259，1151，1012cm-1。
MS(FIA)m/e(％相對強度)254.2(M++1，11)，242.3(18)，228.2(13)，186.1(76)，143.2(11)，242.3(100)。
制備例48溴化1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)四氫噻吩 在22L燒瓶中，用30-60分鐘時間，將溴代乙酸叔丁酯(2.44L，16.52摩爾，1當量)加入四氫噻吩(2.19L，24.8摩爾，1.5當量)在丙酮(11.38L)中形成的溶液里，期間用水浴保持溫度為15-25℃。攪拌反應22小時，用1H NMR分析試樣，以確定反應完全。過濾沉淀物，用丙酮(2L)洗滌，并在28-33℃下真空干燥3天，得4.328Kg(92.5％收率)標題化合物。1H NMR(500MHz，DMSO d-6)δ4.40(s，1H)，3.51(m，2H)，3.48(m，2H)，2.23(m，2H)，2.13(M，2H)，1.42(s，9H)。
制備例49
(1S，2S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯 氮氣氛下，用10分鐘時間將KOtBu(42mL，42mmol，THF中的1M溶液，2.5當量)加入到0℃下、乙腈(30mL)中的溴化1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)四氫噻吩(11.9g，42mmol，2.5當量，制備例48)溶液中，保持溫度低于5℃。攪拌該乳狀液，冷卻1.5小時。滴加三氟乙醇(6.9g，69mmol，4.1當量)。5分鐘內，加入(1S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)-環戊-4-烯-3-酮(5g，16.8mmol，制備例47)和三氟乙醇(13.3g，132mmol，7.9當量)在乙腈(20mL)中的溶液，保持溫度為3-5℃。0-5℃下攪拌溶液4.5小時。向冷卻的反應混合物中加入MTBE(155mL)和H2O(80mL)。分離各層，用H2O(50mL)洗滌有機層，之后用20％鹽水(50mL)洗滌。經常壓蒸餾將有機層濃縮至約30mL。加入庚烷(100mL)并濃縮溶液。按需要另外再加入庚烷直至餾出物的蒸汽溫度達到93℃。加入THF(65mL)，得目標產物溶液。
制備例50(1S，2S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯將1.7L飽和K2CO3水溶液加入到0℃的、2.2L CH2Cl2中的溴化1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)四氫噻吩(757g，2.67mol，制備例48)溶液中，保持溫度低于10℃。將該兩相混合物攪拌1.5小時后，分批加入223mL 50％的NaOH溶液，保持溫度低于5℃。攪拌混合物3小時并過濾。用CH2Cl2漂洗該鹽。分離各層，并用600mL CH2Cl2萃取水層。用固體K2CO3干燥合并的有機層并真空濃縮，得533.3g(98％收率)(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)四氫噻吩，為淺黃色油狀物。在冰箱儲存時，該油狀物結晶為白色固體。
mp 48-50℃。
1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ3.12(m，2H)，3.00(m，2H)，2.85(s，1H)，2.41(m，2H)，1.84(m，2H)，1.38(s，9H)。
將474mL(6.5mol，10當量)三氟乙醇加入0℃下的、650mL CH2Cl2中的(1S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(叔丁氧基羰基)-環戊-4-烯-3-酮(194g，653mmol)溶液中。用40分鐘時間滴加325mL CH2Cl2中的(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)四氫噻吩(396g，1.96mol)溶液，保持溫度低于10℃。1小時后移去冰浴。加入去離子水(680mL)并分離各層。用400mLCH2Cl2萃取水層。用500mL鹽水洗滌合并的有機層，用Na2SO4干燥，并真空濃縮，得587g淡黃色油狀固體。將固體溶解在400mLCH2Cl2中，用5∶1∶1的己烷∶甲基叔丁基醚∶CH2Cl2為洗脫液，經1.6Kg的硅膠充填柱洗脫，得總體積為13.2L的洗脫液。濃縮該洗脫液，得398.7g白色固體。將固體溶解在3L回流的70∶30的己烷∶MTBE中。將溶液冷卻至室溫過夜，然后在冰浴上冷卻1小時。過濾固體，用冷溶劑(約700mL)漂洗，35℃下真空干燥，得173g(64％收率)(1S，2S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯，為白色固體。
mp 144-46℃。D＝+30.5(c1，CHCl3)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ5.36(d，1H)，2.88(m，1H)，2.64(dd，J＝5.2，3.2Hz，1H)，2.37(d，J＝2.7Hz，1H)，2.23(bs，1H)，1.45(s，9H)，1.43(s，18H)。
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 206.2，171.2，168.5，155.3，83.4，82.7，80.7，61.2，43.2，36.0，34.3 28.4，28.2，28.0，25.3。
IR(CHCl3)2982，1744，1719，1485，1394，1309cm-1。
MS(ES+)m/e(％相對強度)412.2(M++1，79)，356.2(50)，300.1(97)，276.1(68)，244.1(100)。
C21H33NO7(411.29)的分析計算值C，61.30；H，8.08；N，3.40。
實測值C，61.32；H，8.04；N，3.51。
制備例51(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯
氮氣氛下，將制備例49的溶液冷卻至0℃，并滴加三仲丁基硼氫化鋰(L-SelectrideTM，1M，THF中，21mL，21mmol)。0℃下攪拌反應混合物45分鐘。滴加2M的碳酸鈉溶液(31mL)，保持溫度低于8℃。加入在20mL水中形成的30％H2O2溶液(7.15g，63mmol)，保持溫度低于15℃。攪拌10分鐘后，加入MTBE(210mL)和去離子水(100mL)。分離各層，并用飽和Na2SO3溶液(40mL)和1M NaHSO4溶液(40mL)洗滌有機層。在常壓下將有機層體積蒸餾濃縮至約90mL。繼續蒸餾并加入庚烷以保持體積恒定。餾出物蒸汽溫度達到93℃時，將溶液冷卻至70℃并加入7mL THF。將溶液冷卻至0℃并攪拌1小時。過濾固體，用冷庚烷(10mL)洗滌，50℃下真空干燥，得到4.68g(67％收率)(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯，為白色固體。
m.p.187-88℃。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ 5.31(bs，1H)，4.38(d，JAB＝10.5Hz，1H)，4.30(dd，J＝11.0，6.0Hz，1H)，2.68(d，J＝15.3Hz，1H)，2.17(m，1H)，2.07(m，1H)，1.58(m，J＝15.2Hz，1H)，1.45(s，9H)，1.44(s，9H)，1.43(s，9H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ175.2，170.5，155，83.2，81.3，80.1，73.7，66.9，43.1，36.0，34.4，29.3，28.3，28.1，27.4，22.1。
IR(CHCl3)3445，2982，1714，1485，1361cm-1。
MS(ES+)m/e(％相對強度)414.2(M++1，58)，358.1(75)，302.1(78)，246.0(100)。D＝-28.6(c1，MeOH)。
制備例52(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基)氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸
2小時內，將CH2Cl2(230mL)中的(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯(25.00g，60.5mmol，制備例51)溶液加入到-78℃的、CH2Cl2(105mL)中的Deoxofluor(16.05g，72.6mmol，1.2當量)溶液中。攪拌反應混合物1.5小時，另外再加入1.66g DeoxofluorTM。攪拌溶液30分鐘并升溫至-10℃。20分鐘內滴入飽和NaHCO3(105mL)溶液，保持溫度低于5℃。加入160mL飽和NaHCO3溶液將水層的pH調節至7。將混合物升溫至室溫并分離各層。用100mL CH2Cl2萃取水層。用250mL鹽水洗滌合并的有機層，之后用Na2SO4干燥。真空下除去溶劑并將庚烷(75mL)加至粗產物中。將所得混合物加熱至50℃，直至所有固體都溶解，并在室溫下攪拌24小時。在冰浴中將混合物冷卻至0℃并過濾。用冷庚烷漂洗產物并真空干燥，得到20.23g(80％收率)(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯，為白色固體。
m.p.140-143℃。D＝+20.6(c1，CHCl3)。
1HNMR(CDCl3，500MHz)δ 5.45(dd，JH-F＝56，JH-H＝4.8Hz，1H)，5.28(bs，1H)，3.00(m，1H)，2.23(bs，1H)，2.11(m，1H)，2.08(m，1H)，1.46(s，9H)，1.45(s，9H)，1.43(s，9H)，1.37(m，1H)。
13C NMR(CDCl3，75MHz)δ177.7，170.5，155.0，94.4，92.0，82.2，81.5，80.2，64.7，37.7，33.2，29.7，29.3，28.3，28.1，27.8，20.4。MS(ES+)m/e(％相對強度)416.2(M++1，66)，360.1(67)，304.1(100)，248.0(60)。
IR(CHCl3)3444，2981，1715，1485，1369cm-1。
不帶冷卻的條件下，用10分鐘將SOCl2(21.29g，13.05mL，0.179摩爾，5當量)滴加至(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二叔丁酯(14.87g，0.036摩爾)在EtOH(abs，149mL)中形成的溶液中，以制備緩慢回流的溶液。將溶液回流過夜。真空下從反應中除去溶劑。將剩余物溶解在EtOAc(150mL)中，并在5-10分鐘內，邊攪拌邊滴加10％的Na2CO3(75mL)溶液。分離各層并用EtOAc(50mL)萃取水層。用鹽水(1×50mL)洗滌合并的有機萃取物，用Na2SO4干燥，過濾并將產物，(1R，2S，4R，5R，6R)-2-氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯真空濃縮為稠密液體，其靜置成為固體(11.02g)。
-22℃的氮氣氛下，將N-甲基嗎啉(22.44mL，204mmol)加至N-Boc-L-丙氨酸(38.62g，204mmol)在396mL二氯甲烷中形成的溶液中，之后用15分鐘滴加氯甲酸異丁酯(26.48mL，204mmol)，從而使反應溫度不超過-18℃。-20℃下攪拌所得稀漿液30分鐘，然后用40分鐘向其中加入(1R，2S，4R，5R，6R)-2-氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(49.46g，191mmol)在247mL二氯甲烷中形成的溶液，從而使反應溫度不超過-16℃。從冷水浴中移去該反應并在室溫下攪拌70分鐘。加入408mL 1N鹽酸，攪拌5分鐘，并分離各層。用飽和碳酸氫鈉溶液(1×408mL)洗滌有機層、干燥(Na2SO4)、過濾并將產物，(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基)氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯真空濃縮為白色泡沫狀物(88.16g)。
室溫下，將46.7mL(93.4mmol)2N氫氧化鈉加至粗(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基)氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(17.5g，37.3mmol理論值)在46.6mL四氫呋喃中形成的溶液中。室溫下劇烈攪拌該兩相混合物直至混合均勻，然后再攪拌1小時(總計3小時)。用46mL叔丁基甲基醚稀釋混合物，之后再混合10分鐘，然后分離各層。在分液漏斗中加入93mL水，再加入8.4mL(101mmol)濃HCl。任選向該酸性溶液中加入(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基)氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸晶種，之后再加入上述的水層。先緩慢加入水層，這樣就形成適度稠密的漿液。此時再提高添加速率(總添加時間為40分鐘)。用水(16mL)漂洗滴液漏斗。攪拌所得漿液2小時、過濾、用水(2×32mL)洗滌，并在45℃下真空干燥至恒重，得到13.9g(99％)標題化合物，為白色固體。
制備例53(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯 室溫下，用20分鐘時間將亞硫酰氯(15.5mL，212.6mmol)滴加至(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(10g，42.5mmol，美國專利5,688,826)在100mL 2B乙醇中形成的溶液中，之后用40mL乙醇漂洗。將漿液加熱至回流并攪拌過夜。將所得溶液冷卻至室溫并濃縮為膠狀剩余物。向剩余物中加入乙酸乙酯(50mL)，隨后用另外的94mL乙酸乙酯稀釋。邊用手旋轉邊向混合物中緩慢加入15％的碳酸鈉水溶液(70mL)以使其逐漸溶解，所得最終pH為7.95。過濾并分離各層。用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水層。用鹽水(1×100mL)洗滌合并的有機萃取物、干燥(MgSO4)、過濾并真空濃縮，得到淡黃色油狀物的標題化合物，其固化為近于純白色的固體(11.71g，95％收率)。
m.p.80-83℃。25D-57.7(c 1.04，CH3OH)。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ 4.31(q，2H，J＝7.0Hz)，4.20(m，2H)，3.78(d，1H，J＝5.0Hz)，3.36(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.93(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.81(d，1H，J＝15.0Hz)，2.46(t，1H，J＝4.0)，1.34(t，3H，J＝7.0)，1.30(t，3H，J＝7.0)。
13C NMR(125MHz，CD3C13)δ 171.68，168.57，63.26，62.42，59.96，56.06，43.78，32.25，22.49，14.31，14.25。
FTIR(ATR)3364.15(s)，1725.95(s)，1304.91(s)，1259.24(s)，1200.84(s)，1104.91(s)，1022.99(s)，896.45(s)，851.21(s)cm-1。
C11H17NO6S的分析計算值C，45.35；H，5.88；N，4.81。實測值C，45.02；H，5.75；N，4.82。
制備例54
(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯 -22℃的氮氣氛下，將N-甲基嗎啉(14.4mL，130.9mmol)加至N-Boc-L-蛋氨酸(32.64g，130.9mmol)在110mL二氯甲烷中形成的澄清溶液中，之后用7分鐘滴加氯甲酸異丁酯(17mL，130.9mmol)，以使反應溫度保持在-22℃。滴加結束則形成所得的稀漿液。在-22--26℃下攪拌30分鐘。15分鐘內，向其中加入(1R，4S，5S，6S)-4-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯(35.65g，122.4mmol，制備例53)在107mL二氯甲烷中形成的溶液，之后用36mL二氟甲烷漂洗。從冷水浴中移去該反應并在室溫下攪拌70分鐘。向溶液中加入51mL 5N鹽酸，然后分離各層。用二氯甲烷(2×107mL)反萃取水層。用飽和碳酸氫鈉溶液(2×107mL)洗滌合并的有機層、干燥(MgSO4)、過濾并真空濃縮，得到65.82g(103％重量收率)標題化合物，為白色泡沫狀物。25D-12.7(c 1.2，CH3OH)。
500 MHz1H NMR(CDCl3)δ7.53(s，1H)，5.06(d，1H，J＝8.0Hz)，4.34-4.20(m，6H)，3.41(dd，1H，J＝4.0，7.0)，2.97-2.89(m，2H)，2.64-2.59(m，2H，J＝4.0)，2.12-1.89(m，5H)，1.47(s，9H)，1.32(t，6H，J＝7.0)。
13C NMR(125MHz，CD3OD)δ 172.53，169.03，167.88，156.00，80.62，63.45，62.56，60.20，55.33，52.78，42.81，31.52，31.38，30.12，28.49，22.69，15.44，14.23，14.143。
FTIR(ATR)3341.88(w)，2979.38(s)，1733.03(s)，1674.92(s)，1514.58(s)，1315.80(s)，1255.15(s)，1161.47(s)，1142.63(s)，1025.68(s)，854.85(s)，763.53(s)cm-1。
制備例55(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸單鈉鹽室溫下，將141mL(282mmol)2N氫氧化鈉加至(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯(58.95g，112.8mmol理論值，制備例54)在141mL四氫呋喃中形成的溶液中。室溫下將混合物劇烈攪拌2分鐘。用141mL叔丁基甲基醚稀釋溶液，然后分離各層。用141mL水進一步稀釋水層，并滴加濃鹽酸將pH降至4.46。攪拌10分鐘得到稀漿液。向漿液中加入更濃的鹽酸將pH降至1.4(共使用17mL濃HCl，204mmol)。攪拌2小時后，過濾該漿液。用水(2×118mL)洗滌濾餅，送至稱盤稱量之前在45℃下真空干燥1小時。然后在45℃下再干燥16小時，在58℃下再干燥5小時，得到52.96g(96％重量收率)標題化合物，為白色固體。
mp(分解)258℃。23D-25.2(c 1.03，H2O)。
500MHz1H NMR(D2O)δ4.07-4.01(m，2H)，3.45-3.43(m，1H)，3.11(d，1H，J＝15.0Hz)，2.85(m，1H)，2.71(s，3H)，2.47-2.35(m，3H)，1.96-1.90(m，4H)，1.78-1.72(m，1H)，1.28(s，9H)。
13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ 174.45，173.58，172.80，157.46，81.71，61.41，55.04，53.24，42.29，31.71，30.85，29.41，27.79，23.65，14.41。FTIR(ATR)3287.62(s)，1698.00(s)，1528.91(s)，1327.36(s)，1283.74(s)，1245.90(s)，1174.81(s)，1109.06(s)，1053.05(s)，874.27(s)，808.95(s)cm-1。
制備例56(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸 室溫下，將397mL(795mmol)2N氫氧化鈉加至(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二乙酯(166.15g，318mmol，制備例54)在480mL四氫呋喃中形成的溶液中。室溫下將混合物劇烈攪拌2分鐘，此時反應變為均相進行，形成澄清的淡黃色/綠色溶液。室溫下再攪拌2小時。用480mL叔丁基甲基醚稀釋溶液，然后分離各層。將水層滴加至濃鹽酸(71.5mL，858mmol)在水(960mL)中形成的溶液中。加入乙酸乙酯(500mL)，之后加入剩余的水層，得到乳狀液，再用乙酸乙酯(460mL)進一步稀釋。將乳狀液攪拌40分鐘，過濾并水(2×250mL)洗。分離濾出液的各層并用乙酸乙酯(500mL)反萃取水層。用鹽水(75mL)洗滌混合的有機層、干燥(MgSO4)、過濾并真空濃縮，得到125.26g(84％校準收率)標題化合物，為白色泡沫狀物。
制備例572-溴-2-氟-2-(3-氧代環戊基)乙酸乙酯 -20℃下，將8.45mL(50.4mmol)三乙基氯硅烷加至無水乙腈(100mL)中的2.99g活化Zn(45.8mmol)懸浮液中，并攪拌5分鐘。加入8.0mL(57.3mmol)2，2-二溴-2-氟乙酸乙酯，并在-20℃下攪拌混合物90分鐘。加入1.86mL(22.9mmol)2-環戊烯-1-酮，并將反應混合物攪拌過夜，使溫度緩慢升至室溫。加入HCl 1N(125mL)和EtOAc(100mL)。用飽和NaHCO3(2×150mL)、水(2×150mL)和鹽水(2×150mL)洗滌有機層，用無水MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。以EtOAc/己烷(1∶8)為洗脫液，用柱色譜純化剩余物，得到標題化合物(5.36g，88％總收率)，為無色油狀物，是非對映異構體混合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.34-1.41(m，6H)，1.91-1.95(m，1H)，2.04-2.68(m，11H)，3.12-3.31(m，2H)，4.33-4.43(m，4H)。
Zn的活化將10mL濃HCl加至100g Zn粉在水(900mL)中形成的懸浮液中。室溫下將混合物攪拌20分鐘。傾出水，并用水(3×250mL)、丙酮(3×250mL)和乙醚(2×100mL)洗滌剩余物。35℃下，將剩余物減壓干燥過夜。
制備例58(1RS，5RS，6RS)-6-氟-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 0℃下，將13.0mL(75.0mmol)乙基二異丙基胺加至DMF(8mL)中的2.0g(7.5mmol)2-溴-2-氟-2-(3-氧代環戊基)乙酸乙酯(制備例57)溶液中，并在室溫下將混合物攪拌過夜。加入HCl 1N(20mL)、水(15mL)和EtOAc(75mL)溶液。萃取有機層，用飽和NaHCO3(2×100mL)、水(2×100mL)和鹽水(2×100mL)洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。以EtOAc/己烷(1∶4)為洗脫液，用柱色譜純化剩余物，得到反∶順為5∶1的標題化合物混合物(1.17g，84％收率)，為無色油狀物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.33(t，3H，J＝7.1Hz)，2.19-2.34(m，3H)，2.41-2.49(m，1H)，2.59(d，1H，J＝6.6Hz)，2.71-2.76(m，1H)，4.29(q，2H，J＝7.1Hz)。
制備例59(1RS，2SR，5RS，6RS)-2-螺-5’-乙內酰脲-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸 在冰浴下，將(1RS，5RS，6RS)-6-氟-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(0.1g，0.54mmol，制備例58)與1N NaOH(0.55mL，0.55mmol)的混合物在乙醇(1mL)中攪拌10分鐘。向混合物中滴加1N HCl直至pH為1，并使其在EtOAc和鹽水之間進行分配。用EtOAc萃取水相兩次，并用MgSO4干燥合并的有機層，然后減壓濃縮。60℃下，將剩余物、(NH4)2CO3(0.31g，3.2mmol)和KCN(0.11g，1.62mmol)混合物在EtOH和水(1∶1)(2mL)中攪拌過夜。在冰浴中冷卻，用1N KHSO4處理使混合物酸化。減壓除去溶劑，并將剩余物溶解在MeOH中，過濾并真空濃縮。粗產品可不經進一步純化就使用。
制備例60(1R，2S，5R，6R)-2-(2’R-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯和(1S，2R，5S，6S)-2-(2’R-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 異構體A異構體B將1.59g(5.0mmol)Ba(OH)2加至0.32g(1.5mmol)(1R*，2S*，5R*，6R*)-2-螺-5’-乙內酰脲-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸(制備例59)與水(10mL)形成的溶液中，并在105℃下將混合物攪拌過夜。0℃下，用1NHCl將溶液酸化至pH為1，然后減壓濃縮。用絕對無水EtOH溶解剩余物并減壓濃縮若干次直至固體完全干燥。0℃下，將0.37mL(5.0mmol)SOCl2加至溶解在無水EtOH中的剩余物中，然后回流攪拌5小時。用飽和NaHCO3堿化溶液，并加入EtOAc(25mL)。分離有機層，用更多EtOAc(2×25mL)萃取水層。用無水MgSO4干燥混合的有機層，過濾并減壓濃縮。將剩余物溶解在DCM-DMF(4∶1)、0.73g(1.9mmol)HATU、0.26g(1.9mmol)HoAt、0.35g(1.8mmol)L-Ala的20mL混合物中。加入2.7mL(15.3mmol)二異丙基乙基胺并在Ar氣氛下將混合物攪拌過夜。加入DCM(15mL)，分離并用飽和NaHCO3(2×25mL)、水(2×25mL)和鹽水(2×25mL)洗滌。用無水MgSO4干燥有機層、過濾并減壓濃縮。以EtOAc/己烷(1∶2)為洗脫液，用柱色譜純化剩余物，得到標題化合物(0.33g，51％總收率)，其為1∶1的非對映體混合物，為無色油狀物。
用手性HPLC，按照下列分析方法分離非對映體混合物ChiralpakAD 10m，4.6×250mm；洗脫液己烷中的10％IPA；流速1.0mL/分鐘；UV215nm。異構體A保留時間＝5.9分鐘。異構體B保留時間＝9.2分鐘。
異構體A(1R，2S，5R，6R，2’R)-2-(2’-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯1HNMR(300 MHz，CDCl3)1.18(t，3H，J＝7.1Hz)，1.23(t，1H，J＝7.1Hz)，1.36(s，9H)，1.56-1.68(m，1H)，2.03-2.11(m，2H)，2.21-2.31(m，1H)，2.37-2.45(m，1H)，2.61-2.63(m，1H)，4.09-4.16(m，5H)，5.10(bd，1H，J＝6.6 Hz)，7.11(bs，1H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)13.9，14.0，17.7，24.9(d，J＝1.0Hz)，28.1，31.5(d，J＝10.9Hz)，34.9(d，J＝9.4Hz)，36.4(d，J＝8.8Hz)，49.1，61.5，61.8，67.4，77.2，81.5(d，J＝242.6Hz)，155.4，168.6(d，J＝25.1Hz)，171.8和172.7ppm。
異構體B(1S，2R，5S，6S，2’R)-2-(2’-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯1HNMR(300 MHz，CDCl3)1.13(t，3H，J＝7.1Hz)，1.18(t，1H，J＝7。1Hz)，1.31(s，9H)，1.51-1.60(m，1H)，1.98-2.07(m，2H)，2.15-2.22(m，1H)，2.26-2.39(m，1H)，2.55-2.60(m，1H)，4.07-4.12(m，5H)，5.20(sd，1H)，7.22(bs，1H)。
13C-NMR(75 MHz，CDCl3)13.7，13.8，18.0，24.7，28.0，31.4(d，J＝10.9Hz)，34.5(d，J＝8.9 Hz)，36.3(d，J＝9.4Hz)，49.1，61.4，61.7，67.3，77.2，81.4(d，J＝242.6Hz)，155.2，168.5(d，J＝25.1 Hz)，171.7和172.8ppm。
制備例61(1R，2S，5R，6R)-2-氨基-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 將30mg(0.07mmol)制備例60中的異構體A置于6N HCl(2mL)中回流過夜。減壓除去溶劑，用乙醚洗滌，溶于MeOH(1mL)中，并加入環氧丙烷(propilene oxide)(2mL)。室溫下攪拌過夜。傾去溶劑，用乙醚洗滌剩余物，并用Ar氣流干燥，得到標題化合物(12mg，85％)，為白色固體。D＝-25.0(c＝0.80mg/mL，H2O)。
制備例62(1S，2R，5S，6S)-2-氨基-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 用制備例60的異構體B為起始原料，基本上按照制備例61的方法制備標題化合物。D＝21.7(c＝0.46mg/mL，H2O)。
制備例63(6S)-4-硫雜雙環[3.1.0]己-2-烯-6-羧酸乙酯 在5升的三頸瓶上安裝攪拌器，熱電偶，一個聚四氟乙烯加烯管和一個N2入口，裝入2000mL噻吩(d＝1.05g/ml，開始為25.0mol，隨著重氮乙酸乙酯在噻吩中的溶液加入而增至45mol，基于加入的重氮乙酸乙酯的總量且未校正EDA效能為17.1當量，基于校正的重氮乙酸乙酯為19.0當量)。氮氣氛下，向其中加入0.968g辛酸銠[Rh2(oct-anoate)4](1.24mmoles，基于未校效能的重氮乙酸乙酯為0.0472mol％，基于純的重氮乙酸乙酯的摩爾數為0.052mol％，Johnson Matheylot.No.059255001)。將懸浮液加熱至46℃，并在46℃下攪拌10分鐘，從而溶解為綠色溶液。經正排量泵，向該溶液中加入300g重氮乙酸乙酯(90％純，2.63摩爾，2.37摩爾純品，1.00當量，Aldrich批號(LotNo.)17603PI)溶于1600mL噻吩中所形成的溶液。加入速率應使總加入時間為8小時；加入速度慢抑制馬來酸乙酯和富馬酸乙酯的形成。沒有重氮乙酸乙酯剩余時(約30分鐘)，將深琥珀色反應物(3，985g)冷卻至23℃。將反應混合物分為幾部分，較多的部分(3,240g/3,985g＝81.3％)直接濃縮為油狀物。1.5托、23℃下，使粗產物通過轉膜蒸餾裝置，使產物脫氣并除去剩余的噻吩。然后在120℃和1.3托下蒸餾產物。目標產物(淡黃色)收集為兩批餾分，155.0g和32.2g。經HPLC分析確定兩批各自的效能為78％和76％。對上述餾出物進行結晶將其溶解在甲醇(2mL/g餾出物)并冷卻至-10℃，此時若未觀察到晶體生長可任選向溶液中加入晶種。一旦晶體開始生長，就將混合物進一步冷卻至-45℃并攪拌2-3小時，過濾并用冷(-45℃)甲醇(1×1mL/g餾出物)洗滌。24℃下真空干燥該物質，得到標題化合物，為白色-近白色固體，回收率80-85％，效能＞98％。
制備例64(4S，6S)-4-羥基-2-硫雜雙環[3.1.0]己烷-6-羥酸乙酯 在15-20分鐘內，向0℃、氮氣氛下、(6S)-4-硫雜雙環[3.1.0]己-2-烯-6-羧酸乙酯(22.2g，131mmol)在136mL四氫呋喃中形成的溶液中加入硼烷-THF絡合物(98mL，98mmol)。0℃下攪拌30分鐘后，使反應升溫至15℃并攪拌直至HPLC判斷反應完全(1.5-2小時)。將反應冷卻至0℃，并用10-15分鐘時間將其轉移至111mL已預冷卻(0℃)的1N pH為7的緩沖溶液中，保持溫度為0℃。分五次向混合物中加入過硼酸鈉一水合物(15.6g，157mmol)固體，以使溫度保持在低于20℃。使溶液升溫至室溫并攪拌1小時，隨后加入222mL水。攪拌2小時后，加入溶解在24mL水中的硫代硫酸鈉五水合物(9.7g)淬滅過氧化物，之后攪拌10分鐘。用乙酸乙酯(2×222mL)萃取混合物。用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×222mL)洗滌混合的有機萃取物，之后用鹽水(1×222mL)洗滌，并真空濃縮至干燥。將粗產品溶解在1，2-二氯乙烷(1mL/1g粗油)中，并上硅膠柱(4g硅膠/1g成漿和裝填在15％乙酸乙酯-庚烷中的粗油)。用15％乙酸乙酯-庚烷洗脫柱子，直至產物在TLC上可見，此時將溶劑變為50％乙酸乙酯-庚烷。將所有含目標產物的部分混合起來，并真空濃縮為油狀物。總收率為55-65％。
制備例65(6S)-4-氧代-2-硫雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 在30分鐘內，向-70℃下、二甲亞砜(33.4mL，471mmol)在194mL二氯甲烷中形成的溶液中緩慢加入三氟乙酸酐(33.2mL，235mmol)在73mL二氯甲烷中形成的溶液(溫度保持在低于-66℃)。攪拌20分鐘后，用60分鐘時間向其中加入(4S，6S)-4-羥基-2-硫雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(34.1g，181mmol)在194mL二氯甲烷中形成的溶液，以使溫度保持在低于-60℃。攪拌1小時后，用三乙胺(75.7mL，543mmol)將反應物處理35分鐘，以使溫度保持在低于-50℃。再攪拌反應1小時，此時移去冷水浴并加入400mL2N的鹽酸。升溫至0℃后，分離各層，并用2N鹽酸(1×300mL)、1N碳酸氫鈉水溶液(1×670mL)和水(1×300mL)洗滌有機層，之后用硫酸鈉干燥，過濾，并真空濃縮為紅色油狀物，其靜置產生固化。讓粗產物上硅膠填充柱(2g/1g填充了二氯甲烷的起始醇)，并用二氯甲烷(200-300mL)洗脫。收集所有含產物的部分并濃縮，得到目標產物，為橙色/棕色固體。通常校正收率為85-90％。
制備例66(6S，11S)-8，10-二氧代-2-硫雜螺[雙環[3.1.0]己烷-4，5’-咪唑烷]-6-羧酸 將碳酸銨(2.46g，25.6mmol)和氰化鉀(0.817mg，12.5mmol)混合在19.9mL甲醇中，攪拌30分鐘。用19.9mL甲醇中的(6S)-4-氧代-2-硫雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(2.39g，12.8mmol)溶液處理混合物，將反應加熱至30℃，并攪拌23小時。蒸發出揮發物，將剩余物溶解在2.75N氫氧化鈉(13.1mL)中，攪拌1小時。用13.1mL水稀釋后，用濃鹽酸將pH降至3.1，并任選以(6S，11R)-8，10-二氧代-2-硫雜螺[雙環[3.1.0]己烷-4，5’-咪唑烷]-6-羧酸為晶種。將pH降至1.0，將懸浮液冷卻至0℃，并攪拌1.25小時。收集褐色固體，用冷水(2.3mL和0.8mL)洗滌，并在40℃下真空干燥過夜，得到2.00g(55％校正純度)(6S，11R)-8，10-二氧代-2-硫雜螺[雙環[3.1.0]己烷-4，5’-咪唑烷]-6-羧酸。用50mL乙酸乙酯稀釋濾出液并用18mL氯化鈉處理。攪拌15分鐘后，分離各層，進一步用乙酸乙酯(2×50mL)洗滌水層。用硫酸鈉干燥混合的有機層，過濾，真空濃縮為漿液(約5mL)，向其中加入叔丁基甲基醚(25mL)，之后攪拌過夜。收集固體，用叔丁基甲基醚洗滌，并在40℃下真空干燥2小時，得到0.64g(10％校正純度)標題化合物，其為非對映乙內酰脲的1∶1混合物。將第二批乙內酰脲與第一批乙內酰脲混合起來，進行下面的步驟。
拆分向外消旋酒石酸(15g，65.7mmol，非對映乙內先脲的比例約6∶1)在300mL乙醇和75mL水中形成的溶液中加入(R)-苯基甘氨醇(9.0g，65.7mmol)中。將混合物加熱至約80℃以促進溶解。將該深色溶液緩慢冷卻，40-45℃可觀察到沉淀。將該漿液進一步冷卻至0℃并保持1-1.5小時。收集固體，用4∶1的乙醇∶水(1×60mL，預冷卻至0℃)洗滌(同時攪拌)，65℃下真空干燥12-24小時。通常拆分的鹽的產率為37-45％，且觀察到＞98％de和＞98％ee。將拆分的鹽溶于6體積(mL/g)水中，之后用1.1當量的濃HCl處理。將漿液冷卻至0℃并攪拌1小時，之后過濾，用1體積的冷水漂洗，并在60℃下真空干燥。通常標題化合物產率＞90％，且％de和％ee＞99％。
制備例67(6S，11S)-2，2，8，10-四氧代-2-硫雜螺[雙環[3.1.0]己烷-4，5’-咪唑烷]-6-羧酸
向6.8mL水、0.7mL50％氫氧化鈉水溶液和186mg(0.74mmol)鎢酸中加入(6S，11S)-8，10-二氧代-2-硫雜螺[雙環[3.1.0]己烷-4，5’-咪唑烷]-6-羧酸(3.4g，14.9mmol)。將所得溶液加熱至50℃，并在66分鐘內，用35％過氧化氫(7.7mL，74.5mmol)緩慢處理。之后在47-48℃下攪拌反應5小時，隨后冷卻至0℃，用一薄層硅藻土過濾，并用冷水(1×2mL)漂洗。將濾出液加熱至50℃，用濃鹽酸處理使pH＝1.5。使漿液冷卻至室溫并攪拌過夜。冷卻至0℃后，過濾漿液，用冷水(2×2mL)洗滌，55℃下真空干燥至恒重，得3.19g(82％)標題化合物，為白色固體[α]25D-48.6(c 1.19，1N NaOH)。
mp 275℃(灰色)，295℃(棕色)。
500MHz1H NMR(DMSO-d6)δ13.15(br s，1H)，10.99(s，1H)，8.13(s，1H)，3.85(d，1H，J＝15.0Hz)，3.74(dd，1H，J＝7.0，4.0Hz)，3.03(d，1H，J＝15.5Hz)，2.80(dd，1H，7.0，4.0Hz)，2.39(t，1H，J＝4.0Hz)。13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ174.39，169.87，156.35，62.67，52.59，44.16，31.69，21.92；FTIR(KBr)3317(s)，3250(s)，3211(s)，3086(w)，1791(s)，1742(s)，1713(s)，1327(s)，1192(s)，1140(s)cm-1。
C8H8N2O6S的分析計算值C，36.93；H，3.10；N，10.77。實測值C，36.76；H，3.07；N，10.60。
制備例68(1R，4S，5S，6S)-4-[(2’S)-(2’氨基)-丙酰基]氨基-(2-磺酰雜雙環[3.1.0]己烷)-4，6-二羧酸
向不銹鋼Parr反應器中加入(6S，11S)-2，2，8，10-四氧代-2-硫雜螺[雙環[3.1.0]己烷-4，5’-咪唑烷]-6-羧酸(2.50g，9.60mmol)和2N氫氧化鈉(24.0mL，48.0mmol)。混合物加熱至95℃并攪拌21小時后，再將混合物冷卻至室溫并用活性碳(1.25g)處理。用硅藻土過濾混合物，并將餾出液濃縮為17g，再用H2O稀釋得重量24g。用濃HCl將pH降至6.5，并將混合物加熱至62℃。用濃HCl將pH降至2.5后，發生結晶作用。先使懸浮液冷卻至30℃，再將pH調節至1.7，再將溫度降至5℃。懸浮液在此溫度下保持18小時后，收集固體并用冷H2O(2×2.9mL)洗滌。45℃下真空干燥該白色固體，得到標題化合物(1.81g，80％)。使標題化合物在10體積水中成漿并在3-4小時內加熱至85℃，冷卻至室溫，攪拌2-3小時，過濾，并用水(1×1體積)洗滌。回收率＞95％。
制備例69(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 室溫下，用15分鐘時間向溴化(乙氧基羰基甲基)二甲基锍(134g，585mmol)在486mL乙腈中形成的懸浮液中滴加87.4mL(585mmol)1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯。攪拌1小時后，用40g(487mmol)2-環戊烯-1-酮處理黃色混合物10分鐘。將混合物攪拌過夜，再加入480mL叔丁基乙基醚，隨后用1N鹽酸(1×240mL)洗滌，水層用甲基叔丁基醚(1×240ml)洗。用鹽水(1×400mL)洗滌合并的有機萃取物、干燥(MgSO4)、過濾，并真空濃縮，得到粗(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯，為橙色固體(84.8g)。可通過蒸餾(～138℃，10mmHg)、隨后使固化的餾出物在庚烷中成漿、過濾、干燥來純化粗物質。
制備例70(±)(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸
室溫下，向粗(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(30.2g，180mmol，未校正)在30mL乙醇中形成的溶液中加入89mL(178mmol)2N氫氧化鈉。攪拌80分鐘后，用叔丁基甲基醚(1×90mL)洗滌反應混合物，并用濃鹽酸(18mL)處理水層使pH＝1.0。用15g氯化鈉處理混合物，之后用乙酸乙酯(3×90mL)洗滌。干燥混合的有機萃取物(Na2SO4)，過濾，真空濃縮，得到23.8g(94％，未校正)標題化合物，為近白色固體。
制備例71(±)(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸N-芐基-α-甲基芐基胺鹽 向回流溫度下、粗(±)(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸(11.9g，84.9mmol，假設100％效能)在119mL6∶1乙酸乙酯∶乙醇中形成的溶液中加入18g(85.1mmol)(S)-N-芐基α-甲基芐基胺。溶解后，將混合物冷卻至52℃并任選隨后在此溫度下加入晶種。冷卻至室溫，且再攪拌13.5h后，收集晶體并用6∶1的乙酸乙酯∶乙醇(2×48mL)洗滌。真空干燥，得到10.8g(36％，77％de)拆分的鹽，其為固體。
通過衍生的甲基酯的手性GC分析來確定鹽的de，其制備如下將150mg拆分的鹽溶于5mL二氯甲烷中，用1N硫酸(2×1mL)洗滌。干燥有機層，過濾，用2mL甲醇稀釋，并用己烷中的1mL 2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷處理。室溫下攪拌15分鐘后，真空濃縮混合物，得到適于手性GC分析的甲基酯。GC條件30m×0.25mm×0.25μβ-DEX 325柱，140℃烘箱溫度，氦載氣@1mL/分鐘，250℃下FID檢測，1μL份1∶100，試樣@1mg/mL于二氯甲烷中。
制備例72
(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 向46.3g(132mmol)(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸N-芐基-α-甲基芐基胺鹽在200mL乙酸乙酯中形成的溶液中加入198mL(198mmol)2N氫氧化鈉。混合良好后，分離備層，并用乙酸乙酯(1×200mL)洗滌水層。用18mL(211mmol)濃鹽酸和100g氯化鈉處理水層。攪拌混合物30分鐘，之后用乙酸乙酯(2×200mL)洗滌。干燥合并的有機物(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到18.3g(99％)拆分的酸[(+)(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸]，為白色固體。
接下來，將10g(71mmol)上述的粗拆分酸產物溶解在42mL乙醇中，并滴加4mL(71mmol)濃硫酸進行處理。將混合物加熱至45℃并攪拌75分鐘。冷卻至室溫后，加入45mL水，并一起加入20mL乙酸乙酯和12g碳酸氫鈉。攪拌幾分鐘后，用乙酸乙酯(2×50mL)洗滌混合物。干燥合并的有機物(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得11g(92％)粗(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯，為白色固體。由6∶1/庚烷∶叔丁基甲基醚(3.5mL/g底物)中結晶得標題化合物，產率約80％，且通過手性GC分析＞98％ee。
制備例73(6S)-6-(乙氧基羰基)雙環[3.1.0]己-2-烯-2-基乙酸酯 使用Dean-Stark裝置，將異丙烯基乙酸酯(2.26L)中的(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(380.1g，2.26mol)和硫酸(18M，6.3mL，0.11mol)混合物加熱回流2.5小時，此時GC分析顯示，標題化合物與(6S)-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯為9∶1的混合物。蒸餾1小時除去950mL溶劑后，GC顯示產物/起始物質比為17∶1。加入另外的異丙烯基乙酸酯(900mL)和濃H2SO4(3.15mL)，在回流溫度下再攪拌混合物15小時，此時GC顯示27∶1產物/起始物質。蒸餾除去另外的1.35L溶劑后，將混合物冷卻至室溫，然后用MTBE(2L)、H2O(250mL)和飽和NaHCO3水溶液(800ml)稀釋。分離各層，用鹽水(400mL)洗滌有機層。用MTBE(400mL)萃取合并的水層，干燥合并的有機層(Na2SO4)，過濾并濃縮至暗紅/棕色油狀物(540g)。將粗油分為兩等分并用快速SiO2層(每批713g)過濾，用10∶1/庚烷∶乙酸乙酯洗脫。將來自兩個充填柱的合產物部分結合起來并進行濃縮，得到目標混合物，為黃色油狀物(460g，97％；用NMR對溶劑進行校正后為90％)。用乙酸乙酯/己烷(1∶5)洗脫的硅膠柱色譜制得標題化合物的分析純試樣，為無色油狀物。25D+185(c 1.48，CHCl3)。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ5.19-5.18(m，1H)，4.12(q，1H，J＝7.0Hz)，4.11(q，1H，J＝7.0 Hz)，2.74-2.69(m，1H)，2.48-2.43(m，2H)，2.22-2.19(m，1H)，2.16(s，3H)，1.39(dd，1H，J＝2.5，2.5Hz)，1.25(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 173.37，169.01，152.26，111.56，61.28，32.47，32.40，29.72，24.97，21.67，14.95。
FTIR(CHCl3)3026(m)，2985(m)，1724(s)，1272(s)，1187(s)cm-1。
C11H18NO4[M+NH4]+的ES HRMS計算值228.1236，實測值228.1252。
制備例74(3S，1R，6R)-7-氧雜-5-氧代三環[4.1.0.0<2，4>]庚烷-3-羧酸乙酯 將2.02L 1，4-二氧六環中的(6S)-6-(乙氧基羰基)雙環[3.1.0]己-2-烯-2-基乙酸酯(212.2g，1.01mol)和2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(252.0g，1.11mol)混合物加熱至回流，并攪拌17小時，此時GC分析顯示完全轉化為(6S)-4-氧代雙環[3.1.0]己-2-烯-6-羧酸乙酯。將混合物冷卻至室溫并用THF(564mL)稀釋。混合物冷卻至8℃后，用30分鐘時間加入1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(377mL，2.52mol)，以使反應溫度保持在低于10℃。然后將混合物冷卻至5℃，并在50分鐘內加入叔丁基過氧化氫(70wt％，水中，210mL，1.51mol)，保持反應溫度低于9℃。將混合物再攪拌50分鐘后，過濾反應物并用MTBE(2×800mL)洗滌棕色濾餅。向濾出液中加入1.20L 1NHCl，混合良好后，分離各層。依次用飽和NaHCO3(1.20L)水溶液、飽和Na2S2O3(1.20L)水溶液和鹽水(600mL)洗滌有機層。溶液經干燥(Na2SO4)后，濃縮為橙色泥狀沉積物，并用200mL庚烷稀釋。蒸發出揮發物，制得橙色固體，用350mL庚烷研磨，過濾，用另外的庚烷(2×175mL)洗滌濾餅。室溫下將被收集的固體真空干燥17小時，制得138.7g(75％)標題化合物，為棕黃色固體。由MTBE中結晶制得標題化合物的分析純試樣，為白色固體。25D+2.3(c 1.20，CHCl3)，+8.4°(c 1.28，丙酮)；mp 129-130℃。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ 4.16(q，2H，J＝7.0Hz)，3.99(t，1H，J＝2.5Hz)，3.24-3.23(m，1H)，2.96-2.94(m，1H)，2.21-2.19，(m，1H)，2.08(t，1H，J＝3.0Hz)，1.26(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ201.19，168.84，62.42，57.04，51.25，31.16，30.54，29.60，14.79。
FTIR(KBr)3087(w)，3059(w)，3051(w)，3007(w)，2993(w)，2963(w)，1753(s)，1719(s)，1273(s)，1191(s)，1009(m)，848(m)cm-1。
C9H10O4的分析計算值C，59.34；H，5.53。實測值C，59.32；H，5.43。
制備例75(6S)-4-氧代雙環[3.1.0]己-2-烯-6-羧酸乙酯 雖然標題化合物通常原位用于制備(3S，1R，6R)-7-氧雜-5-氧代三環[4.1.0.0<2，4>]庚烷-3-羧酸乙酯，但也可獲得標題化合物的分析純試樣過濾含有此化合物的反應混合物，并蒸發濾出液以得到棕色固體。將該固體重新懸浮在乙酸乙酯中，過濾懸浮液并濃縮濾出液。剩余物經硅膠和乙酸乙酯/己烷(1∶5-1∶2)色譜法制得標題化合物，其由熱乙酸乙酯中重結晶出來，再按前面的條件經色譜處理，得到標題化合物，為白色固體。25D-268(c 1.17，CHCl3)。
mp 97-98℃。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ 7.60(ddd，1H，J＝5.5，2.5，0.75Hz)，5.73(dd，1H，J＝5.0，0.5Hz)，4.15(q，2H，J＝7.0Hz)，2.96-2.94(m，1H)，2.63-2.61(m，1H)，2.60(t，1H，J＝2.5Hz)，1.26(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 203.96，168.61，160.33，130.29，62.03，46.53，30.72，29.62，14.82。
FTIR(KBr)3080(m)，2996(m)，1717(s)，1695(s)，1266(s)，1291(m)，1191(s)，1179(s)cm-1。
C9H10O3的分析計算值C，65.05；H，6.07。實測值C，64.97；H，6.01。
制備例76(4S，6S)-4-羥基-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 依次用醋酸鈉(36.1g，0.44mol)、碘化鈉(65.8g，0.44mol)和乙酸(27.5mL，0.48mol)處理攪拌條件下的、667mL丙酮中的(3S，1R，6R)-7-氧雜-5-氧代三環[4.1.0.0<2，4>]庚烷-3-羧酸乙酯(36.3g，0.20mol)。30℃下攪拌混合物15小時，之后真空除去丙酮，剩余棕色固體，使固體在乙酸乙酯(323mL)和H2O(323mL)之間進行分配。分離各層，用乙酸乙酯(3×323mL)洗滌水層。依次用飽和Na2S2O3(364mL)水溶液和飽和NaHCO3(364mL)水溶液洗滌合并的有機物。用乙酸乙酯(323mL)反萃取每次的洗滌水溶液。干燥合并的有機物(Na2SO4)，過濾并濃縮為紅-棕色油狀物，將其溶解在300mL乙醇中。蒸發揮發物得到目標產物，其為紅-棕色油狀物(41.8g，114％)。經乙酸乙酯/己烷(1∶2～2∶1)硅膠柱色譜，之后再由MTBE中重結晶，得到標題化合物的分析純試樣，為白色固體。25D+3.9(c 1.39，CHCl3)，+6.0°(c 1.69，MeOH)。
mp 81-82℃。
500MHz1HNMR(CDCl3)δ 4.60(br s，1H)4.1 6(q，2H，J＝7.0Hz)，2.66(dd，1H，J＝5.0，4.0Hz)，2.42-2.40(m，1H)，2.34(dd，1H，J＝19.0，5.5Hz)，2.24，(br d，1H，J＝3.0Hz)，2.07(d，1H，J＝19.0Hz)，1.91(t，1H，J＝3.0Hz)，1.27(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125MHz，CDCl3)δ209.74，170.07，69.04，62.32，43.47，36.89，34.95，26.14，14.83。
FTIR(CHCl3)3607(w)，3447(w)，3025(m)，2985(w)，1739(s)，1728(s)，1270(s)，1187(s)cm-1。
C9H12O4的分析計算值C，58.69；H，6.57。計算值C，58.48；H，6.63。
制備例772-[((1R)-1苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-2-氰基-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 向乙醇(332mL)和H2O(332mL)中的(4S，6S)-4-羥基-2-氧代雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(68.2g，由于乙醇雜質，經校正為60.0g，0.326mol)溶液中加入(R)-甲基芐基胺(46.3mL，0.359mol)和NaCN(20.8g，0.424mol)，保持溫度介于20-25℃之間。然后用10分鐘時間加入濃HCl(35.3mL，0.424mol)，期間保持上述反應溫度。將暗棕色混合物攪拌1小時，之后任選以標題化合物為晶種引發結晶作用。將懸浮液攪拌1小時，之后加入H2O(664mL)。將懸浮液再攪拌1.75小時，收集標題化合物，其為褐色固體，用H2O(332mL)洗滌。使空氣從過濾器上的濕濾餅中通過25分鐘，然后將該物質直接用于腈水解(濕濾餅重145g)。雖然真空干燥過程中的溫度高于25℃，則標題化合物迅速分解，但可在室溫下真空干燥少量試樣而不產生分解。25D+81.6(c 1.18，CHCl3)。
mp 70-72℃。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ 7.39(d，2H，J＝7.0Hz)，7.26-7.16(m，3H)，4.31(d，1H，J＝5.0Hz)，4.22(q，1 H，J＝6.5Hz)，3.93-3.85(m，2H)，2.33(d，1H，J＝15.0Hz)，2.01(br t，1H，J＝4.5Hz)，1.64(dd，1H，J＝15.0，5.0Hz)，1.55-1.54(m，1H)，1.40-1.39(m，4H)，1.17(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125MHz，CDCl3)δ170.54，144.85，128.61，127.45，127.38，121.88，72.17，61.02，60.66，56.57，45.82，36.70，34.45，25.83，21.75，14.22。
FTIR(KBr)3568(m)，3489(m)，3285(m)，2923(m)，2228(w)，1712(s)，1298(m)，I 197(m)cm-1。
C18H23N2O3[M+H]+的FAB HRMS計算值315.1709，實測值315.1704。
制備例782-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 向DMSO(220mL)中的2-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-2-氰基-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯濕濾餅(0.326mmol理論值)溶液中緩慢加入30％H2O2(44.5mL，0.426mol)，保持溫度低于27℃。將溫度降至19℃，首先用15分鐘時間小心緩慢地加入5N NaOH(52.3mL，0.262mol)，保持溫度為22-27℃。需要使用適當容積的冰浴處理反應熱。在上述溫度范圍內攪拌該棕色、均相混合物20分鐘后，HPLC顯示起始物質已被消耗掉，生成了酰胺中間體。將反應混合物再攪拌1.5小時后，加入Na2SO3(13.7g，0.109mol)，并攪拌混合物15分鐘，此時用淀粉-碘化物試紙測試其對過氧化物為陰性。加入3N NaOH(291mL，0.873mol)后，將混合物加熱至85℃并攪拌18小時。將均相的棕色混合物冷卻至30℃，加入濃HCl使pH降至3.6，保持溫度為30-35℃。PH為3.6時結晶開始，之后再攪拌懸浮液15分鐘，然后將pH降至2.5。將混合物再攪拌10分鐘后，冷卻至2℃并攪拌2小時，之后收集灰色固體并用冷H2O(400mL)和EtOH(300mL)洗滌。45℃下將收集到的固體真空干燥17小時，得到42.9g(43％，由制備例18的起始物質計算得)標題化合物。為了進一步加工反應中制得的標題化合物，按下列方式由母液中進行回收。蒸發母液中的乙醇部分，將剩余物與母液中的水溶液部分結合。減壓蒸除H2O(485mL)，用70mL5N NaOH和5mL50％NaOH將母液pH調節至12.9。用n-BuOH(3×800mL)洗滌溶液，用濃HCl將pH調節至2.5，并濃縮溶液。用EtOH(100mL)稀釋剩余物并蒸發出(2×)揮發物。用EtOH(150mL)稀釋剩余物，并用EtOH(75mL)洗滌含另外的標題化合物和鹽的褐色固體，50℃下真空干燥至重量為102g。兩批標題化合物都用在隨后的酯化反應中。25D+4.5(c 1.41，1N NaOH)。
mp 220℃(由近白色變為灰色)，280℃(棕色)。
500MHz1H NMR(D2O，KOD)δ7.39(d，2H，J＝7.0Hz)，7.19-7.04(m，5H)，3.92(d，1H，J＝5.0Hz)，3.67(q，1H，J＝7.0Hz)，1.76(d，1H，J＝15.0Hz)，1.54-1.52(m，1H)，1.37(dd，1H，J＝15.0，5.0Hz)，1.15(d，3H，J＝6.5Hz)，1.12(dd，1H，J＝6.0，3.0Hz)，0.92(t，1H，J＝3.3Hz)。
13C NMR(125MHz，D2O，KOD)δ185.82，182.96，148.01，131.31，129.97，129.78，74.99，73.84，58.78，46.91，38.05，35.02，27.34，27.15。
FTIR(KBr)3366(m)，3072(s)，2886(s)，1696(m)，1611(m)，1560(m)，1455(m)，1377(m)，1278(m)，1202(m)，1188(m)cm-1。
C16H19NO5的分析計算值C，62.94；H，6.27；N，4.59。實測值C，62.70；H，6.21；N，4.67。
制備例792-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-2-氨基甲酰基-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 雖然標題化合物通常原位用于制備2-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸，但也可對化合物進行分離，只是由于腈水解過程中伴隨有酯的水解，因此會帶來一些產率損失。分離中，只要2-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-2-氰基-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯被消耗，就使腈水解的反應混合物在CH2Cl2和H2O之間進行分配。有機層被干燥(MgSO4)和濃縮后，剩余物經硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷(2∶1)-EtOAc洗脫純化，得到標題化合物，為白色泡沫狀物。25D+61.3(c 1.20，CHCl3)。
500MHz1HNMR(CDCl3)δ 7.32-7.20(m，5H)，7.19(br d，1H，J＝4.0Hz)，5.49(br d，1H，J＝4.0Hz)，4.88(d，1H，J＝11.5Hz)，4.24(dd，1H，J＝11.5，6.0Hz)，4.06-4.00(m，2H)，3.77(q，1H，J＝7.0Hz)，2.21(d，1H，J＝15.0Hz)，2.18-2.15(m，2H)，1.71(br s，1H)，1.54(dd，1H，J＝14.5，6.0 Hz)，1.38，(d，3H，J＝6.5Hz)，1.32(t，1H，J＝3.3Hz)，1.24(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ 180.42，171.47，146.05，128.97，127.43，126.48，73.16，70.76，61.08，56.00，42.82，35.97，35.67，26.13，21.53，14.34。
FTIR(CHCl3)3441(m)，3345(m)，2975(w)，1725(s)，1665(s)，1288，1186(m)cm-1。
C18H24N2O4的分析計算值C，65.04；H，7.28；N，8.43。實測值C，65.41；H，7.58；N，8.32。
制備例802-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R)-2-(乙氧基羰基)-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯
室溫下，經滴液漏斗向48mL乙醇中的2-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R))-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸(4g，13mmol)懸浮液中加入乙酰氯(11.2mL，157mmol)，以使反應保持在溫和的回流狀態。回流下將所得溶液再攪拌16小時，冷卻至室溫后，真空濃縮為固體剩余物。用100mL水中的碳酸氫鈉(6.6g)溶液緩慢處理固體，之后用乙酸乙酯(2×100mL)洗滌。合并的有機物經干燥(MgSO4)，過濾和真空濃縮，得到4.7g(99％)標題化合物，其為固體。經硅膠柱色譜，用CH2Cl2/MeOH(95∶5)洗脫，之后再由Et2O中結晶出來，得到標題化合物的分析純試樣，為白色固體。25D+52.5(c 1.30，CHCl3)。
mp 73-74℃。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ 7.29-7.14(m，5H)，4.25(dq，1H，11.0，7.0Hz)，4.18(dd，1H，J＝9.5，5.5Hz)，4.10(dq，1H，J＝11.0，7.0Hz)，3.92(dq，1H，J＝11.0，7.0Hz)3.82(dq，1H，J＝11.0Hz，7.0Hz)，3.67(q，1H，J＝7.0Hz)，2.73(d，1H，J＝9.5Hz)，2.15-2.12(m，2H)，2.01-1.99(m，1H)，1.89(dd，1H，J＝6.0，3.0Hz)，1.61(dd，1H，J＝15.0，6.0Hz)，1.36(t，1H，J＝3.5Hz)，1.33-1.30(m，6H)，1.18(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125 MHz，CDCl3)0δ178.11，171.59，146.32，128.41，127.07，126.85，73.33，70.15，62.07，60.75，56.66，44.72，36.78，33.61，26.24，20.07，14.37，14.23。
FTIR(KBr)3492(s)，3303(m)，3055(w)，2981(w)，2896(w)，1722(s)，1705(s)，1289(m)，1251(m)，1177(m)cm-1。
C20H27NO5的分析計算值C，66.46；H，7.52；N，3.88。實測值C，66.42；H，7.44；N，3.92。
制備例812-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4R，6R)-2-(乙氧基羰基)-4-氟雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯 -20℃下，用15分鐘時間，向CH2Cl2(690mL)中的2-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R))-2-(乙氧基羰基)-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(59.0g，0.163mol)溶液中加入Deoxo-Fluor(45.1mL，0.245mol)，保持溫度為-15--20℃。在此溫度下攪拌混合物20分鐘，0℃下再攪拌15分鐘，之后緩慢加入15％的Na2CO3水溶液(650mL)，期間保持溫度低于10℃。分離備層，并用CH2Cl2(150mL)反萃取水層。混合的有機層經干燥(Na2SO4)和濃縮成為棕色油狀物(73g)。在硅膠層上用EtOAc/庚烷(1∶6)洗脫純化，得到標題化合物，為黃色油狀物(49.7g，84％)。25D+36.2(c 1.30，CHCl3)。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ7.29-7.14(m，5H)，5.22(ddt，1H，J＝8.0，4.5Hz，JHF＝56.0Hz)，4.16(dq，1H，J＝11.0，7.0Hz)，4.05(dq，1H，11.0，7.0Hz)，3.96(dq，1H，10.5，7.0Hz)，3.85(dq，10.5，7.0Hz)，3.66(q，1H，6.5Hz)，2.45(dd，1H，J＝14.0，8.0Hz)，2.16-2.12(m，1H)，1.95(t，1H，J＝3.5Hz)，1.81(dt，1H，J＝3.5Hz，JHF＝3.5Hz)，1.51(ddd，1H，J＝14.0，8.0Hz，JHF＝22.0Hz)，1.32(d，3H，J＝6.5Hz)，1.27(t，3H，J＝7.0Hz)，1.21(t，3H，J＝7.0Hz)。
13C NMR(125MHz，CDCl3)δ 175.29，171.66，146.21，128.45，127.03，126.90，92.65(d，JCF＝182 Hz)，68.68(d，JCF＝4.9 Hz)，61.70，60.92，56.13，38.60(d，JCF＝23.0Hz)，33.07(d，JCF＝7.6Hz)，32.23(d，JCF＝22.0Hz)，26.26，20.22(d，JCF＝3.9Hz)，14.41，14.24。
FTIR(CHCl3)3028(w)，2983(w)，1724(s)，1705(s)，1293(m)，1242(m)，1190(m)，1037(m)，1013(m)cm-1。
C20H26FN04的分析計算值C，66.10；H，7.21；N，3.85。實測值C，66.02；H，7.00；N，3.95。
制備例82
1R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 將2-[((1R)-1-苯基乙基)氨基](2S，4S，6R))-2-(乙氧基羰基)-4-氟雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(68.4g，0.188mol)、濃HCl(15.7mL，0.188mol)和10％Pd/C(干燥的，13.7g)在EtOH(400mL)中的混合物在氫氣氛(50psi)下放置18小時。過濾出催化劑，蒸餾出餾出物，得到標題化合物，為近白色泡沫狀物(59.2g，106％，由于EtOH雜質經校正為97％)。由EtOH/MTBE中結晶出來，得到標題化合物的分析純試樣，為白色固體。25D+55.6(c 1.17，CHCl3)。
mp 86-88℃。
500MHz1H NMR(CDCl3)δ9.20(br s，2H)，5.50(ddt，1H，J＝8.0，4.5Hz，JHF-56.0Hz)，4.31(q，1H，J＝7.0Hz)，4.20-4.07(m，3H)，2.88(t，1H，J＝3.0Hz)，2.71(dd，1H，J＝14.5，8.0Hz)，2.48-2.43(m，2H)，2.16(ddd，1H，J＝14.5，7.5Hz，JHF＝22.0Hz)，1.34(t，3H，J＝7.0Hz)，1.25(t，3H，J＝7.0Hz)13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ171.12，169.41，91.94(d，JCF＝189Hz)，63.85，63.66(d，JCF＝3.8Hz)，61.73，34.55(d，JCF＝26.4Hz)，31.58(d，JCF＝7.8Hz)，30.80(d，JCF＝-24.1Hz)，20.22，14.31，14.21。
FTIR(KBr)3353(m)，3173(w)，2745(m)，1729(s)，1547(m)，1294(m)，1269(m)，1195(m)，1011(m)cm-1。
C12H18FNO4C，48.74；H，6.48；N，4.74。實測值C，48.80；H，6.41；N，4.76。
制備例831R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸
將3N NaOH(251mL，0.753mol)溶液緩慢加至1R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽(59.2g粗物質，0.188mol理論值)中，保持溫度低于26℃。混合物攪拌10分鐘后成為均相。室溫下攪拌混合物1.25小時，之后用濃HCl將pH緩慢降至pH2.8，期間保持溫度為20-26℃。PH為2.8下，混合物開始結晶，在此pH下攪拌懸浮液10分鐘，之后用濃HCl將pH降至2.1。再攪拌15分鐘后，加入i-PrOH(67mL)并將懸浮液冷卻至0℃，攪拌2小時。收集固體，用37mL冷H2O/i-PrOH(4∶1)洗滌。40℃下將收集的固體真空干燥18小時，得到標題化合物，為白色固體(33.1g，87％，由制備例23的起始物質計算得)。
制備例841R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸再漿液攪拌下，用1小時，將H2O(165mL)中的1R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(33.0g，0.162mmol)懸浮液升溫至89℃，并加入i-PrOH(41mL)。然后回流(83℃)攪拌5分鐘，再冷卻至室溫并攪拌4小時。收集產物，用i-PrOH/H2O(1∶4，40mL)和i-PrOH(25mL)洗滌，40℃下真空干燥18小時，得到標題化合物，為白色固體(30.6g，93％)。
制備例851R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 室溫下，用20分鐘，向202mL絕對無水乙醇中的1R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(14.45g，71.12mL)漿液中滴加亞硫酰氯(26mL，356mol)。將漿液加熱至回流并攪拌3小時，之后冷卻至室溫過夜。將所得溶液真空濃縮為剩余物，經136mL乙酸乙酯稀釋，邊用手旋轉邊用306mL 10％碳酸鈉水溶液處理15分鐘，使最終pH為0。分離各層，用乙酸乙酯(1×136mL)洗滌水層。合并的有機萃取物經鹽水(1×136mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，得到17.07g(93％)標題化合物，為白色固體。
FDMSM++1＝260。
C12H18FNO4·0.1 H2OC，55.21；H，7.03；N，5.37。實測值C，55.10；H，6.96；N，5.22。
m.p.＝64-66℃。25D＝+20(c＝0.96，甲醇)，[α]25D＝+15(c＝1.21，DMSO)。
制備例861R，2S，4R，5R，6R-2-[2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯 用15分鐘，向-22℃、氮氣氛下、396mL二氯甲烷中的N-Boc-L-丙氨酸(38.62g，204mmol)溶液中滴加N-甲基嗎啉(22.44mL，204mmol)，之后滴加氯甲酸異丁酯(26.48mL，204mmol)，以使反應溫度不超過-18℃。-20℃下攪拌混合稀漿液30分鐘，此時用40分鐘加入1R，2S，4R，5R，6R-2-氨基-4-氟雙環[3-1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(49.46g，191mmol)在247mL二氯甲烷中形成的溶液，以使反應溫度不超過-16℃。滴加結束后，從冷水浴中移出反應物，在室溫下攪拌70分鐘，，此時反應溫度達到15℃，顏色變為淡橙色。用408mL 1N鹽酸處理反應物，之后攪拌5分鐘，并分離各層。用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×408mL)洗滌有機層，干燥(硫酸鈉)，過濾，真空濃縮為白色泡沫狀物(88.16g)。
FDMSM++1＝260。
C12H18FNO4·0.1 H2OC，55.21；H，7.03；N，5.37。實測值C，55.10；H，6.96；N，5.22。
m.D.＝64-66℃。25D＝+20(c＝0.96，MeOH)，[α]25D＝+15(c＝1.21，DMSO)。
制備例871R，2S，4R，5R，6R-2-[2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 室溫下，向238mL四氫呋喃中的1R，2S，4R，5R，6R-2-[2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(88.16g，191mmol)溶液中加入238mL(477mmol)2N氫氧化鈉。室溫下劇烈攪拌該兩相混合物2.5小時，此時反應均相進行。用238mL叔丁基甲基醚稀釋混合物，之后進行混合，再分離各層。用238mL水進一步稀釋水層，過濾除去顆粒狀物質。用濃HCl(42.9mL，515mmol)處理溶液30分鐘，任選隨后以標題化合物為晶種，并攪拌1小時。過濾所得漿液，用水(2×100mL)洗滌，45℃下真空干燥40小時，得到72.2g標題化合物，為白色固體。將部分固體(69.5g)與490mL丙酮一起攪拌1小時，制得霧濁溶液，經過濾，丙酮(2×100mL)洗滌。將濾出液真空濃縮為白色泡沫狀物，45℃下進一步真空干燥16小時，得到61.8g(校正了12w％wt/wt的丙酮)標題化合物。
實施例1(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基丙酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽
用20分鐘，向(1 R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(110.0g，271mmol，制備例3)在563mL乙酸乙酯中形成的懸浮液中加入乙酸乙酯中的氯化氫溶液(3.7M，514mL)。將懸浮液攪拌2.5小時后，過濾并用乙酸乙酯(1×200mL，1×115mL)洗滌濾餅。46℃下真空干燥18小時后，收集標題化合物，為白色固體(85.77g，92％)。
1HNMR(300MHz，甲醇-d4)δ4.12(brd，1H，J＝14.6Hz)，3.94(q，1H，J＝7.1Hz)，3.52(ddd，1H，J＝7.0，3.9，0.9Hz)，3.16(d，1H，J＝14.6Hz)，3.02(dd，1H，J＝7.0，4.4Hz)，2.49(t，1H，J＝4.1Hz)，1.52(d，3H，J＝7.1Hz)。
實施例2(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸甲苯磺酸鹽 將甲苯(3mL)中的(1 R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(300mg，0.738mmol，制備例3)和甲苯磺酸一水合物(140mg，0.738mmol)懸浮液加熱至75℃，并攪拌45分鐘，之后冷卻至室溫，再攪拌16小時。過濾懸浮液，用甲苯(2×1mL)洗滌。45℃下真空干燥1小時后，收集307mg(87％)標題化合物，為白色固體。
mp(DSC)233℃。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ 7.70(d，2H，J＝8.5Hz)，7.24(d，2H，J＝8.0Hz)，4.11(d，1H，J＝15Hz)，3.94(q，1H，J＝7.0Hz)，3.53(dd，1H，J＝7.0，4.0Hz)，3.13(dd，1H，J＝14，1.0Hz)，3.02(dd，1H，J＝7.0，4.5Hz)，2.48(t，1H，J＝4.5Hz)，2.37(s，3H)，1.52(d，3H，J＝7.5Hz)。
13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ170.70，170.32，169.80，142.04，140.78，128.79，125.79，60.20，54.73，48.77，42.44，30.84，22.22，20.20，16.09。
實施例3(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-3’-羥基-丙酰基)-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(3’-乙酰氧基-2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基)-氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(380mg，0.77mmol，制備例15)進行制備。23D＝-19.32(c＝0.52，甲醇)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ2.48(1H，t，J＝4.0Hz)，3.04(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.17(1H，d，J＝14.7Hz)，3.51(1H，dd，J＝4.4，7.0Hz)，3.77(1H，dd，J＝7.0，10.6Hz)，3.94-4.12(3H，m)。
C10H14N2O8S·HCl·H2OC，31.88；H，4.55；N，7.44；Cl，9.41。實測值C，31.53；H，4.40；N，7.32；Cl，9.24。
C10H15N2O8S的HRMS計算值，323.0549。實測值，323.0533。
實施例4(1R，4S，5S，6S)-4-[(吡咯烷-2’S-羰基)-氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1 R，4S，5S，6S)-4-[(1’-叔丁氧基羰基-吡咯烷基-2’S-羰基)-氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.8g，1.7mmol，制備例11)進行制備，得到0.42g(67.0％)標題化合物。23D＝-32(c＝1.00，甲醇)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 1.98-2.12(3H，m)，2.40-2.50(1H，m)，2.52(1H，t，J＝4.4Hz)，2.99(1H，dd，J＝4.4，7.0Hz)，3.2(1H，d，J＝14.7Hz)，3.29-3.42(3H，m)，3.54(1H，m)，4.13(1H，d，J＝15.8Hz)，4.30(1H，dd，J＝6.2，9.2Hz)。
C12H17N2O7S的HRMS計算值，333.0756。實測值，333.0740。
實施例5(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-4’甲硫基-丁酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲硫基-丁酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.77g，1.6mmol，制備例12)進行制備，得到0.41g(54.9％)標題化合物。23D＝+4(c＝1.00，MeOH)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.1-2.2(2H，m)，2.13(3H，s)，2.47(1H，t，J＝4.4Hz)，2.58-2.63(2H，m)，3.02(1H，dd，J＝4.0，7.0Hz)，3.12(1H，d，J＝14.7Hz)，3.52(1H，dd，J＝3.3，6.6Hz)，3.98(1H，t，J＝6.2Hz)，4.14(1H，d，J＝14.7Hz)。
C12H19N2O7S2的HRMS計算值，367.0634。實測值，367.0634。
實施例6(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-氨基-3’-(1H-吲哚-3-基)丙酰基氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-(1-叔丁氧基羰基-1H-吲哚-3-基)-丙酰基氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.54g，0.83mmol，制備例13)進行制備，得到0.28g(73.6％)標題化合物。23D＝+7.8(c＝1.02，CH3OH)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.47-2.53(1H，m)，3.05-3.18(3H，m)，3.44-3.57(2H，m)，4.13-4.23(2H，m)，7.07-7.41(3H，m)，7.71-7.78(2H，m)，8.22(1H，app d，J＝7.7Hz)。
C18H19N3O7S·HCl的分析計算值C，47.22；H，4.40；N，9.18。實測值C，46.51；H，3.96；N，8.54。
MS(ES)m/z 420.1[M-1]-。
實施例7(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-氨基-3’-(4-羥基-苯基)-丙酰基氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽
按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-(4-叔丁氧基羰基-苯基)-丙酰基氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.33g，0.53mmol，制備例14)進行制備，得到0.13g(56.4％)標題化合物。23D＝-6(c＝1.00，H2O)。
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ2.47(1H，t，J＝4.0Hz)，2.87(1H，dd，J＝9.2，14.7Hz)，3.05-3.12(2H，m)，3.23(1H，dd，J＝5.1，14.7Hz)，3.55(1H，dd，J＝4.0，7.0Hz)，4.00(1H，dd，J＝4.8，9.2Hz)，4.13(1H，d，J＝14.7Hz)，6.80(2H，d，J＝8.4Hz)，7.13(2H，d，8.8Hz)。
C16H19N2O8S的HRMS分析計算值，399.0862。實測值，399.0844。
實施例8(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-3’-苯基-丙酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-苯基-丙酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例5)進行制備。得到0.55g(85％，1.31mmol)白色固體。23D＝+4.17(c＝0.48，MeOH)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.45(1H，t，J＝4.0Hz)，2.98(1H，dd，J＝9.2，14.7Hz)，3.06(1H，dd，J＝4.4，7.0Hz)，3.10(1H，d，J＝14.6Hz)，3.33(1H，dd，J＝4.8，13.6 Hz)，3.52(1H，dd，J＝3.3，7.3Hz)，4.08(1H，dd，J＝5.1，8.8Hz)，4.10(1H，d，J＝15.4Hz)，7.31-7.42(5H，m)。
13C NMR(300MHz，D2O w/1，4-二氧六環)δ172.55，171.94，170.01，134.31，130.39，130.27，130.01，129.00，61.38，54.76，S4.37，43.07，37.36，31.57，23.18。
C16H18N2O7S·1.5HCl的分析計算值C，43.97；H，4.50；N，6.41。實測值C，43.59H，4.17N，6.46。
MS(ES)m/z實測值383.1[M+H]+。
C16H19N2O7S [M+H]+的HRMS計算值383.0913。實測值383.0923。
實施例9(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-3’S-甲基-戊酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’S-甲基-戊酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例6)進行制備。得到0.43g(80％，1.12mmol)白色固體。23D＝+4.08(c＝0.49，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ0.98(3H，t，J＝7.3Hz)，1.07(3H，d，J＝7.0Hz)，1.15-1.24(1H，m)，1.53-1.62(1H，m)，1.95-2.04(1H，m)，2.44(1H，t，J＝4.0Hz)，3.06(1H，dd，J＝4.4，7.0 Hz)，3.14(1H，d，J＝15.0Hz)，3.52(1H，dd，J＝3.7，7.0Hz)，3.73(1H，d，J＝5.1Hz)，4.10(1H，d，J＝14.7Hz)。
C13H20N2O7S·HCI·0.5H2O的分析計算值C，39.64；H，5.63；N，7.11。實測值C，39.38；H，5.39；N，7.04。
MS(ES)m/z實測值349.1[M+H]+。
C13H21N2O7S[M+H]+的HRMS(ES)計算值，349.1069。實測值，349.1086。
實施例10(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-3’-甲基-丁酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-甲基-丁酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例7)進行制備。得到0.18g(88％，0.49mmol)HCl鹽白色固體。23D＝+7.84(c＝0.51，MeOH)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 1.04(3H，d，J＝6.6Hz)，1.09(3H，d，J＝7.0Hz)，2.22-2.29(1H，m)，2.44(1H，t，J＝4.0Hz)，3.05(1H，dd，J＝4.4，7.0Hz)，3.10(1H，d，J＝14.7Hz)，3.52(1H，dd，J＝4.0，7.3Hz)，3.67(1H，d，J＝5.5Hz)，4.10(1H，d，J＝14.7Hz)。
C12H18N2O7S·HCl·0.4H2OC，38.12；H，5.20；N，7.41。實測值C，37.78；H，4.90；N，7.15。
MS(ES)m/z實測值335.1 [M+H]+。.
實施例11(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-4’-甲基-戊酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽
按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲基-戊酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例8)進行制備。得到0.50g(76％，1.30mmol)HCl鹽白色固體。23D＝-4.0(c＝0.50，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.00(3H，d，J＝5.5Hz)，1.02(3H，d，J＝5.9Hz)，1.62-1.79(3H，m)，2.42(1H，t，J＝4.0Hz)，3.04(1H，dd，J＝4.4，7.3Hz)，3.13(1H，d，J＝15.0Hz)，3.52(1H，dd，J＝3.3，7.0Hz)，3.84-3.89(1H，m)，4.10(1H，d，J＝15.0Hz)。
C13H20N2O7S·HCl·0.3H2OC，40.01；H，5.58；N，7.18。實測值C，39.66；H，5.57；N，6.99。
MS(ES)m/z實測值349.1[M+H]+。
實施例12(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S，6’-二氨基-己酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S，6’-雙叔丁氧基羰基氨基-己酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(制備例9)進行制備。得到0.56g(86％，1.28mmol)白色固體，其為二鹽酸鹽。23D＝-4.0(c＝0.50，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.48-1.55(2H，m)，1.67-1.74(2H，m)，1.89-1.97(2H，m)，2.47(1H，t，J＝4.0Hz)，2.97(2H，app t，J＝4.0)，3.08(1H，dd，J＝4.4，7.0Hz)，3.20(1H，d，J＝15.0Hz)，3.53(1H，dd，J＝3.7，7.0Hz)，3.93(1H，app.t，J＝6.2Hz)，4.08(1H，d，J＝14.7Hz)。
C13H21N3O7S·2HCl·0.2H2O計算值C，35.49；H，5.36；N，9.55.實測值C，35.30；H，5.48；N，9.42。
MS(ES)m/z實測值364.1 [M+H]+。
實施例13(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基-4’-氨基甲酰基-丁酰基氨基)-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽 室溫下，將2.5N LiOH和THF(總體積6mL)1∶1混合物中的(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-(三苯甲基-氨基甲酰基)-丁酰基氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸二甲酯(0.48g，0.65mmol，制備例10)攪拌4小時。用1NHCl將混合物調節至pH＝2，并用乙酸乙酯萃取產物。合并所有有機物，用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，得到0.46g(1R，4S，5S，6S)-4-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-(三苯甲基-氨基甲酰基)-丁酰基氨基]-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸，其為白色泡沫狀物。將該二酸溶解在DCM中，室溫下邊攪拌邊將苯甲醚(0.28g，2.6mmol)及隨后的TFA(3.70g，32.5mmo1)依次加入。室溫下攪拌所得反應混合物2小時，并真空濃縮。在Et2O中研磨所得黃色油狀物，直至形成自由流動的白色沉淀物。氮氣保護下真空過濾收集TFA。將產物溶解在1mL HCl中并冷凍干燥，得到希望的HCl產物，得到0.16g(62％，0.40mmol)白色固體。23D＝+8.0(c＝1.0，H2O)。
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ2.00-2.08(2H，m)，2.37-2.41(3H，m)，2.93(1H，dd，J＝4.4，7.3 Hz)，3.04(1H，d，J＝14.7Hz)，3.45(1H，dd，J＝3.7，7.0Hz)，3.86(1H，app.t，J＝5.9Hz)，4.05(1H，d，J＝14.7Hz)。C12H17N3O8S·HCl·2.0H2O計算值C，33.07；H，5.09；N，9.64，實測值C，33.37；H，4.69；N，9.39。
MS(ES)m/z實測值363.9[M+H]+。
C12H18N3O8S[M+H]+的HRMS(ES)計算值364.0815，實測值364.0825。
實施例14(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 50℃下，將(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(校正丙酮后53.0g，142mmol)在447mL丙酮中形成的漿液攪拌35分鐘。過濾霧濁溶液得澄清溶液，之后用100mL丙酮漂洗。用5分鐘，將22.1mL(265mmol)濃鹽酸滴加至澄清、近白色濾出液中。將混合物保溫至45-50℃，并攪拌90分鐘，任選以(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽作為混合物的晶種，之后停止加熱并逐漸冷卻至室溫。2小時后，溫度達到25℃，用90分鐘將丙酮(942mL)加至漿液中。再攪拌漿液16小時，之后過濾，用丙酮(2×200mL)洗滌，45℃下真空干燥9小時，室溫下再干燥64小時，得到40.2g(91％)標題化合物，為白色固體。
重結晶50℃下邊加熱邊在0.5mL水和2.12mL丙酮中溶解1.06g，之后用另外的5.3mL丙酮稀釋，并任選加入晶種。向模糊的云霧狀混合物中加入另外的4.2mL丙酮，任選之后再加入晶種，關掉加熱，并在1小時內逐漸冷卻至室溫。30分鐘內，用另外的9.5mL丙酮進一步稀釋所得漿液，之后攪拌15小時。過濾后，用丙酮(2×5mL)洗滌，45℃下真空干燥10小時，室溫下再干燥60小時，得到0.905g(85％回收率)標題化合物，為白色固體。
mp(DSC)183℃。25D+33°(c 1.06，CH3OH)。
500MHz1H NMR(CD3OD)δ5.58-5.42(m，1H)，3.92(q，1H，J＝7.0Hz)，2.96(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.41-2.39(m，1H)，2.35-2.30(m，1H)，2.10(t，1H，J＝3.0Hz)，1.52(d，3H，J＝7.5Hz)，1.51-1.42(m，1H)。
13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ173.74，173.62，170.00，93.48和92.04(C-F裂分)，63.95和63.92(C-F裂分)，48.80，36.89和36.70(C-F裂分)，32.97和32.91(C-F裂分)，30.05和29.87(C-F裂分)，19.37，16.28。FTIR(DRIFT)3430(w)，3016(s)，1721(s)，1662(s)，1496(s)，1190(m)，1024(m)，637(w)cm-1。
實施例15(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽 50℃下，將(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(校正后1.87g，4.98mmol，制備例18)在16.8mL丙酮中形成的漿液攪拌15分鐘。過濾霧濁溶液得澄清溶液，之后用丙酮(3×1.25mL)漂洗。用0.935mL水稀釋澄清的濾出液，放置在50℃的加熱浴中，用0.647mL(9.97mmol)甲磺酸滴加處理(觀察到氣體放出)。25分鐘后制得白色漿液。共攪拌2小時后，用5-10分鐘加入另外的35.5mL丙酮。停止加熱并在2小時內使漿液逐漸冷卻至室溫，之后過濾，用丙酮(2×8mL)洗滌，45℃下真空干燥14小時，得到1.77g(95％)標題化合物，為淡粉色固體。該物質的試樣按下列方法進行重結晶50℃下，邊加熱邊在1.16mL水和4.95mL丙酮中溶解1.65g，之后用另外的1.65mL丙酮稀釋，任選加入晶種。停止加熱，使混合物逐漸冷卻至室溫。同時用40分鐘加入丙酮(2.64mL)。再將所得漿液攪拌3小時。過濾，用丙酮(2×6mL)洗滌，45℃下真空干燥6小時，室溫下再干燥60小時，得到1.59g(96％回收率)標題化合物，為白色固體mp(DSC)206℃。25D+30(c1.05，CH3OH)。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ5.58-5.42(m，1H)，3.92(q，1H，J＝7.0Hz)，2.96(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.70(s，3H)，2.41-2.39(m，1H)，2.35-2.30(m，1H)，2.10(t，1H，J＝3.0Hz)，1.52(d，3H，J＝7.5Hz)，1.51-1.42(m，1H)。
13C NMR(125MHz，CD3OD)δ 173.73，173.61，170.02，93.50和92.05(C-F裂分)，63.91，48.79，38.30，36.89和36.70(C-F裂分)，32.97和32.91(C-F裂分)，30.02和29.84(C-F裂分)，19.37，16.26。
FTIR(DRIFT)3472(w)，3077(s)，1717(s)，1691(s)，1557(m)，1220(s)，1019(m)，781(m)，563(m)cm-1。
C12H19FN2O8S的分析計算值C，38.92；H，5.17；N，7.56。實測值C，38.96；H，4.97；N，7.51。
實施例16(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸乙磺酸鹽
50℃下，將(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(0.2g，0.534mmol，制備例18)在1.8mL丙酮中形成的漿液攪拌5分鐘。過濾霧濁溶液得澄清溶液，之后用丙酮(1×0.4mL)漂洗。用0.1mL水稀釋澄清的濾出液，放置在50℃的加熱浴中，用0.124mL(1.07mmol)乙磺酸滴加處理(觀察到氣體放出)。90分鐘后制得白色漿液。共攪拌2小時后，用5分鐘加入另外的1.8mL丙酮。停止加熱并在1小時內使漿液逐漸冷卻至室溫，之后再攪拌2小時。過濾，用丙酮(2×1mL)洗滌，45℃下真空干燥4小時，室溫下再干燥60小時，得到0.173g(84％)標題化合物，為白色固體。mp(DSC)210℃(分解)。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ 5.58-5.42(m，1H)，3.92(q，1H，J＝7.0Hz)，2.96(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.80(q，2H，7.3Hz)，2.42-2.37(m，1H)，2.35-2.30(m，1H)，2.09(t，1H，J＝3.0 Hz)，1.52(d，3H，J＝7.5Hz)，1.51-1.40(m，1H)，1.30(t，3H，J＝7.5Hz)。
實施例17(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸苯磺酸鹽 50℃下，將(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(0.402g，1.07mmol，制備例18)在3.6mL丙酮中形成的漿液攪拌10分鐘。用一小勺硅藻土處理霧濁溶液，并過濾得澄清溶液，之后用丙酮(2×0.4mL)漂洗。將澄清的濾出液放置在50℃加熱浴中，用226mg(90％，1.29mmol)苯磺酸溶于0.113mL水中形成的溶液處理，之后用0.4mL丙酮漂洗(觀察到氣體放出)。溫和回流攪拌4小時后，停止加熱并用8mL丙酮處理反應物10分鐘，之后任選加入晶種。經1小時形成漿液，用3.2mL丙酮稀釋，之后在室溫下再攪拌15.5小時。過濾，用丙酮(2×10mL)洗滌，45℃下真空干燥24小時，得到313mg(62％，校正了10wt％丙酮)標題化合物，為白色固體。
mp(DSC)132℃。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.86-7.80(m，2H)，7.46-7.37(m，3H)，5.58-5.42(m，1H)，3.92(q，1H，J＝7.0Hz)，2.96(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.42-2.37(m，1H)，2.35-2.30(m，2H)，2.09(t，1H，J＝3.0Hz)，1.52(d，3H，J＝7.5 Hz)，1.51-1.40(m，1H)。
實施例18(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲苯磺酸鹽 50℃下，將(1R，2S，4R，5R，6R)-2-[2’S-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(1.04g校正值，2.78mmol，制備例18)在9.36mL丙酮中形成的漿液攪拌15分鐘。用一小勺硅藻土處理霧濁溶液，并過濾得澄清溶液，之后用丙酮(1×2.08mL，之后1×1.04mL)漂洗。將澄清的濾出液放置在50℃加熱浴中，用634mg(3.33mmol)對甲苯磺酸單水合物溶于0.317mL水中形成的溶液處理，之后用0.317mL丙酮漂洗(觀察到氣體放出)。溫和回流攪拌4小時后，由加熱浴上移去反應物，用10.4mL丙酮處理反應物10分鐘。任選向澄清、無色溶液中加入晶種，經30分鐘觀察到沉淀物形成，此時經20分鐘時間加入另外的10.4mL丙酮。再攪拌漿液4小時，之后過濾，用丙酮(2×10mL)洗滌，45℃下真空干燥14小時，得到995mg(78％，校正了3wt％丙酮)標題化合物，為白色固體。
mp(DSC)155℃。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ 7.70(d，2H，J＝7.5Hz)，7.34(d，2H，J＝8.5Hz)，5.58-5.42(m，1H)，3.92(q，1H，J＝7.0Hz)，2.96(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.42-2.30(m，2H)，2.24(s，3H)，2.09(t，1H，J＝3.0Hz)，1.52(d，3H，J＝7.5Hz)，1.51-1.40(m，1H)。
實施例19(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 50℃下，向1mL水中的(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽(0.5g，1.35mmol，實施例15)溶液中加入5mL3A乙醇，幾分鐘之后加入0.27mL(1.35mmol)5N氫氧化鈉水溶液。停止加熱，用2.5mL乙醇稀釋該澄清無色的溶液，任選加入晶種，再用7.5mL乙醇進一步稀釋30分鐘。攪拌所得漿液，經1h冷卻至室溫，之后在室溫下再攪拌2小時。收集固體，用乙醇(1×10mL)洗滌，之后在45℃下真空干燥18.5小時，得到0.301g(78％收率，校正了1.6wt％甲磺酸鈉和3wt％乙醇)標題化合物，為白色固體。
1HNMR(500MHz，D2O)δ 5.45-5.30(m，1H)，3.88(q，1H，J＝7.0Hz)，2.58(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.33-2.30(m，1H)，2.27-2.26(m，1H)，1.92(t，1H，J＝3.0 Hz)，1.36(d，3H，J＝7.1Hz)，1.41-1.32(m，1H)。
13C NMR(125MHz，D2O)δ 177.46，176.92，170.42，94.56和93.19(C-F裂分)，65.36，49.01，36.75和36.57(C-F裂分)，33.61和33.55(C-F裂分)，30.54和30.36(C-F裂分)，20.27，16.67。
實施例20(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二鈉鹽 60℃下，向420μL甲醇中的(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-氨基-丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽(70mg，0.19mmol，實施例15)溶液中加入乙酸鈉(46.5mg，0.57mmol)在470μL甲醇中形成的溫熱溶液，并用230μL甲醇漂洗。停止加熱。邊攪拌邊用280μL甲醇稀釋該霧濁溶液，任選之后加入晶種以助于結晶。經1小時將所得漿液緩慢冷卻至室溫，并在室溫下攪拌2小時。過濾分離產物，用甲醇(2×280μL)洗滌，45℃下真空干燥15小時，得到52.5mg(85％收率，校正了2.3wt％甲磺酸鈉和0.2wt％甲醇)標題化合物，為白色固體。
1HNMR(500MHz，D2O)δ 5.44-5.29(m，1H)，3.89(q，1H，J＝7.0Hz)，2.65(s，3H)，2.56(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.16-2.13(m，1H)，2.10-2.09(m，1H)，1.74(t，1H，J＝3.1Hz)，1.38(d，3H，J＝7.1Hz)，1.36-1.28(m，1H)。
13C NMR(125 MHz，D2O)δ 180.00，178.72，170.13，95.40和93.99(C-F裂分)，65.97，49.06，37.25和37.07(C-F裂分)，33.01和32.94(C-F裂分)，29.64和29.46(C-F裂分)，22.48，16.68。
實施例21(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基丙酰基)氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
向THF(30mL)和水(30mL)中的(1S，2S，4S，5R，6R)-4-乙酰氧基-2-[2’S-(叔丁氧基)羰基氨基丙酰基]-氨基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(0.600g，1.28mmol，制備例21)溶液中加入氫氧化鋰單水合物(0.535g，12.8mmol)。室溫下攪拌3小時后，用水稀釋反應物，用乙酸乙酯(2×25mL)洗滌。用1N HCl將水層酸化至pH1，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的有機萃取物經濃縮后，溶解在乙酸乙酯(60mL)中的1N HCl中，之后在室溫的氮氣氛下攪拌16小時。真空除去溶劑，得到400mg(99％)產物，為白色固體。
LCMSm/z 273[M+H]+@RT0.20分鐘。
1HNMR(CD3OD)*4.13(1H，d，5.9Hz)，3.80(1H，q，6.7Hz)，2.41-2.31(2H，m)，1.93(1H，dd，6.0Hz，2.7Hz)，1.62(1H，dd，5.9Hz，15.5Hz)，1.44(1H，t，3.0Hz)，1.38(3H，d，6.8Hz)；*N.B.NMR未觀察到的可交換質子數為6。
實施例22(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’-氨基-乙酰基氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’-叔丁氧基羰基氨基-乙酰氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(300mg，0.84mmol，制備例23)進行制備。收率156mg(63％)。23D＝-36(c＝0.5，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.56(1H，t，J＝2.9Hz)，1.74(1H，dd，J＝5.8，15.4Hz)，2.12(1H，m)，2.48(1H，d，J＝15.4Hz)，2.61(1H，m)，3.62(2H，s)，4.32(1H，d，J＝5.49Hz)。
C10H14N206·1.3HCl·H2OC，37.11；H，5.39；N，8.66。實測值C，37.36；H，4.99；N，8.30。
MS(ES)m/z 258.8[M+H]+。
實施例23(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-3’-甲基-丁酰基氨基)-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-甲基-丁酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(480mg，1.19mmol，制備例24)進行制備。收率307mg(76％)。23D＝+8.33(c＝0.48，MeOH)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.07(3H，d，J＝6.8Hz)，1.11(3H，d，J＝7.3Hz)，1.55(1H，t，J＝2.9Hz)，1.76(1H，dd，J＝5.8，15.6Hz)，2.14(1H，dd，J＝3.4，5.8Hz)，2.24(1H，m)，2.50(1H，d，J＝15.6Hz)，2.64(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，3.66(1H，d，J＝5.4Hz)，4.32(1H，d，J＝5.8Hz)。
C13H20N2O6·HCl·1.1H2O分析計算值C，43.79；H，6.56；N，7.86。實測值C，43.77；H，6.20；N，7.47。
C13H21N2O6的HRMS計算值，301.1400。實測值，301.1400。
實施例24(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-4’-甲基-戊酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲基-戊酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(460mg，1.11mmol，制備例25)進行制備。收率371mg(95％)。23D＝+4(c＝0.5，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ 1.01(3H，d，J＝5.8Hz)，1.03(3H，d，J＝6.3Hz)，1.54(1H，t，J＝2.9Hz)，1.63-1.82(4H，m)，2.14(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，2.49(1H，d，J＝15.6Hz)，2.62(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，3.83-3.86(1H，m)，4.32(1H，d，J＝5.8Hz)。
C14H22N2O6·HCl·1.4H2O計算值C，44.72；H，6.92；N，7.45。實測值C，44.52；H，6.57；N，7.13。
C14H23N206的HRMS計算值，315.1556。實測值，315.1569。
實施例25(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-3’S-甲基-戊酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’S-甲基-戊酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(410mg，0.99mmol，制備例26)進行制備。收率330mg(95％)。25D＝+8(c＝0.5，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ 0.99(3H，t，J＝7.3Hz)，1.08(3H，t，J＝7.3Hz)，1.17-1.27(1H，m)，1.53(1H，t，J＝2.9Hz)，1.59-1.65(1H，m)，1.76(1H，dd，J＝5.8，15.6Hz)，1.96-2.00(1H，m)，2.14(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，2.46(1H，d，J＝15.6 Hz)，2.66(1H，dd，J＝2.9，5.8Hz)，3.70(1H，d，J＝5.4 Hz)，4.31(1H，d，J＝5.8Hz)。
C14H22N2O6·1.1HCl·1.2H2O計算值C，44.71；H，6.83；N，7.45。實測值C，44.38；H，6.51；N，7.08。
C14H23N2O6的HRMS計算值，315.1556。實測值，315.1566。
實施例26(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2-氨基-乙酰基氨基)-乙酰基氨基]-4-羥基雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 用過量的二氧六環中的4M HCl處理(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-乙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(360mg，0.77mmol，制備例27)，并攪拌40分鐘，真空濃縮，加入乙酸乙酯并濃縮。用THF(3M)和1N LiOH(3.0當量)處理該固體。攪拌1小時，之后加入1N HCl直至pH＝3。真空濃縮反應物。經DOWEX50WX8-100離子交換樹脂純化。收率188mg(78％)。23D＝+3.92(c＝0.51，H2O)。
1HNMR(300MHz，D2O)δ1.43(1H，t，J＝2.9Hz)，1.53(1H，dd，J＝5.9，15.4Hz)，1.98(1H，m)，2.23-2.31(2H，m)，3.70(2H，s)，3.82(2H，app d，J＝1.1Hz)，4.16(1H，d，J＝5.9Hz)。
C12H18N3O7的HRMS計算值，316.1145。實測值，316.1123。
實施例27(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-氨基-丙酰基氨基)-乙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 按照實施例26中概述的一般方法，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-乙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(410mg，0.84mmol，制備例28)。收率200mg(72％)。23D＝+23.53(c＝0.51，H2O)。
1H NMR(300MHz，D2O)δ1.36(3H，d，J＝7.0Hz)，1.37(1H，t，J＝3.3Hz)，1.49(1H，dd，J＝5.9，15.4Hz)，1.91(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.15(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.27(1H，d，J＝15.4Hz)，3.79(2H，s)，3.95(1H，q，J＝7.0Hz)，4.13(1H，d，J＝5.5Hz)。
C13H19N3O7的HRMS計算值，330.1301。實測值，330.1290。
實施例28(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-3’-苯基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’-叔丁氧基羰基氨基-3’-苯基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(400mg，0.89mmol，制備例29)進行制備。收率290mg(85％)。23D＝+3.64(c＝0.55，MeOH)。
1HNMR(400 MHz，CD3OD)δ1.45(1H，t，J＝3.3Hz)，1.60(1H，dd，J＝5.5，15.4Hz)，2.03(1H，dd，J＝2.6，5.9Hz)，2.37(1H，d，J＝15.4Hz)，2.55(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.90(1H，dd，J＝8.4，14.3Hz)，3.22(1H，dd，J＝5.1，14.7Hz)，3.97(1H，dd，J＝5.5，8.8Hz)，4.21(1H，d，J＝5.5Hz)，7.19-7.31(5H，m)。
C17H21N2O6的HRMS計算值，349.1400。實測值，349.1388。
C17H21N2O6·HCl·H2O的分析計算值C，50.69；H，5.76；N，6.95；Cl，8.80.實測值C，50.66；H，5.65；N，6.85；Cl，8.20。
MS實測值349.0[M+H]+。
實施例29(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-4’-氨基甲酰基-丁酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
制備標題化合物將(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-叔丁氧基羰基氨基-4’-(三苯甲基-氨基甲酰基)-丁酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(1.18mmol，制備例30)溶解于THF(10mL)中，并用2.5NLiOH(12mL)處理該溶液。攪拌溶液3小時，之后用2.5NHCl調節至pH＝2。用乙酸乙酯萃取產物四次，用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到白色粉末。將二酸產物(0.74mmol)溶解在1，2-二氯乙烷(3.7mL)中，并用苯甲醚(0.3mL)和三氟乙酸(3.72mL)處理。23℃下攪拌反應物2.5小時，之后真空濃縮，得到棕色油狀物。將該棕色油狀物溶解在水中，用二氯甲烷萃取五次，真空濃縮水層，用1N HCl(0.74mL)處理，并凍干。用另一份1N HCl(2mL)處理并再次凍干，得到446mg(定量)標題化合物。23D＝+8.16(c＝0.49，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.60(1H，t，J＝3.3Hz)，1.79(1H，dd，J＝5.5，15.4Hz)，2.10-2.17(3H，m)，2.46-2.55(3H，m)，2.60(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，3.94(1H，t，J＝6.2Hz)，4.33(1H，d，J＝5.5Hz)。MS實測值330.0[M+H]+，351.9[M+Na]+。
C13H19N3O7的HRMS計算值，330.1301。實測值，330.1295。
實施例30(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S，6’-二氨基-己酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二鹽酸鹽 按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S，6’-雙-叔丁氧基羰基氨基-己酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例31)進行制備。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.47-1.59(3H，m)，1.66-1.78(2H，m)，1.84(1H，dd，J＝5.4，15.2Hz)，1.91(2H，m)，2.16(1H，dd，J＝3.4，5.7Hz)，2.45(1H，d，J＝15.7Hz)，2.66(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.97(2H，t，J＝7.3Hz)，3.92(1H，t，J＝6.4Hz)，4.33(1H，d，J＝5.4Hz)。MS實測值330.0[M+H]+。
實施例31(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-3’-氨基甲酰基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 制備標題化合物將(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-叔丁氧基羰基氨基-3’-(三苯甲基-氨基甲酰基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(1.07mmol，制備例32)溶解于THF(12mL)中，并用2.5NLiOH(12mL)處理該溶液。攪拌溶液3小時，并用2.5N HCl調節至pH＝2。用乙酸乙酯萃取產物四次，用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到白色粉末。將二酸產物(1.22mmol)溶解在1，2-二氯乙烷(6mL)中，并用苯甲醚(1mL)和三氟乙酸(6mL)處理。23℃下攪拌反應物10小時，之后真空濃縮，得到棕色油狀物。用乙醚稀釋該棕色油狀物，產物結晶出來，為白色固體。過濾，并用大量乙醚洗滌。將固體溶解在最少量水中，用0.5N HCl(5mL)處理，并凍干3次，得到386mg(90％)標題化合物。23D＝0(c＝0.5，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.59(1H，t，3.4Hz)，1.76(1H，dd，J＝5.9，16.1Hz)，2.11(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.53(1H，d，J＝16.1Hz)，2.55(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.74(1H，dd，J＝9.8，17.1Hz)，2.95(1H，dd，J＝3.9，17.1Hz)，4.19(1H，dd，J＝3.9，9.8Hz)，4.32(1H，d，J＝5.9Hz)。
MS實測值316.0[M+H]+，337.9[M+Na]+。
C12H16N3O7Na的HRMS計算值，338.0964。實測值，338.0953。
實施例32(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-氨基-3’-(1H-吲哚-3-基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 制備標題化合物將2-[2’-叔丁氧基羰基氨基-3’-(1’-叔丁氧基羰基-1H-吲哚-3’-基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(0.93mmol，制備例33)溶解于THF(11 mL)中，并用2.5N LiOH(11mL)處理該溶液。攪拌溶液3小時，之后用2.5N HCl調節至pH＝2。用乙酸乙酯萃取產物四次，用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到白色粉末。將二酸產物(0.78mmol)溶解在二氧六環(20mL)中的4M HCl中，并在23℃下攪拌反應物3小時。濃縮反應混合物，用二氯甲烷稀釋，再真空濃縮。將粗產物溶解在甲醇中，涂布于徑向色譜(硅膠)板，旋轉干燥，用MeOH(10％)/NH4OH(1％)/CHCl3-MeOH(60％)/NH4OH(2％)/CHCl3洗脫。將產物溶解在水中并凍干兩次，得到139mg(46％)標題化合物。23D＝+19.23(c＝0.52，MeOH)。
1HNMR(400 MHz，CD3OD)δ1.43(1H，t，J＝2.9Hz)，1.57(1H，dd，J＝5.9，15.2Hz)，2.05(1H，dd，J＝3.4，6.4Hz)，2.41(1H，d，J＝14.7Hz)，2.46(1H，dd，J＝2.4，5.9Hz)，3.15(1H，dd，J＝5.4，14.7Hz)，3.49(1H，dd，J＝5.4，14.7Hz)，4.05(1H，dd，J＝5.4，9.3Hz)，4.17(1H，d，J＝5.4Hz)，7.09(2H，m)，7.27(1H，s)，7.37(1H，d，J＝8.3Hz)，7.75(1H，d，J＝7.8Hz)。
MS實測值388.0[M+H]+，409.9 [M+Na]+。
C19H21N3O6的HRMS計算值，388.1508。實測值，388.1502。
實施例33(1S，2S，4S，5R，6R)-4-羥基-2-[(吡咯烷基-2’S-羰基)-氨基]-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(1’-叔丁氧基羰基-吡咯烷基-2’S-羰基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例34)進行制備。23D＝-40(c＝0.5，MeOH)。
1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ1.59(1H，t，J＝3Hz)，1.78(1H，dd，J＝5.9，15.3Hz)，2.06(4H，m)，2.42(1H，m)，2.59(2H，m)，3.35(m，3H)，4.27(1H，m)，4.32(1H，d，J＝5.9 Hz)。
C13H19N2O6的HRMS計算值，299.1243。實測值，299.1242。C13H18N2O6·HCl·H2O計算值C，44.26；H，6.00；N，7.94.實測值C，44.13；H，5.78；N，7.62。
實施例34(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-氨基-3’-(4-羥基-苯基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-叔丁氧基羰基氨基-3’-(4-叔丁氧基羰氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例35)進行制備。收率199mg(50％)。23D＝+8(c＝0.5，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ 1.48(1H，t，J＝3Hz)，1.62(1H，dd，J＝5.9，15.3Hz)，2.03(1H，m)，2.38(1H，d，J＝15.3 Hz)，2.55(1H，m)，2.8(1H，dd，J＝8.9，14.4Hz)，3.12(1H，dd，J＝5.4，14.4Hz)，3.90(1H，q，J＝5.4Hz)，4.21(1H，d，J＝5.9Hz)，6.7(2H，d，J＝8.4Hz)，7.95(2H，d，J＝8.4Hz)。
C17H21N2O7的HRMS計算值，365.1349。實測值，365.1374。
C17H20N2O7·1.1HCl·1.1H2OC，48.12；H，5.54；N，6.60。實測值C，47.89；H，5.37；N，6.50。
實施例35(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基-4’-甲硫基-丁酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二銨鹽
除用二氧六環中的4M HCl除去叔丁氧基羰基保護基團以外，按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-4’-甲硫基-丁酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例36)進行制備。用MeOH將最終產物點在2mm色譜板上，用50/49.5/0.5CHCl3/MeOH/NH4OH洗脫。洗脫過程中將NH4OH量增至1％，得到兩性離子化合物。收率136mg(37％)。23D＝+28(c＝1.0，MeOH)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ1.63(1H，dd，J＝6.0，15.6Hz)，2.03(2H，m)，2.12(3H，s)，2.18(1H，m)，2.35(1H，m)，2.49(1H，d，J＝15.6Hz)，2.65(2H，t，J＝8.4Hz)，3.84(1H，t，J＝6.0Hz)，4.19(1H，d，J＝6.0Hz)。
C13H21N2O6S的HRMS計算值，333.1120。實測值，333.1105。
實施例36(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2S-氨基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 將1ml二氧六環中的4N HCl中的(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(0.045g，0.1mmol，制備例39)攪拌40分鐘，之后真空濃縮反應物。將THF(5mL)和0.5N LiOH(0.35mmol)中的粗物質攪拌1小時。用0.5N HCl調節至pH＝2，并濃縮反應物。使用陽離子交換色譜法(Dowex50X8-100；用10％吡啶/H2O洗脫)純化粗產物，得到19mg(53％)標題化合物。
1HNMR(300MHz，D2O)δ1.23(3H，d，J＝7.3Hz)，1.36(3H，d，J＝7.3Hz)，1.40-145(1H，m)，1.50(1H，dd，J＝5.5，15.4Hz)，1.90-1.96(1H，m)，2.20(1H，dd，J＝2.6，5.9Hz)，2.29(1H，d，J＝15.4Hz)，3.90(1H，q，J＝7.3 Hz)，4.15-4.22(2H，m)。
MS(ES)m/z 342.1[M-1]-。
C14H22N3O7的HRMS計算值，344.1458。實測值，344.1457。
實施例37(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2-氨基-乙酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸 將THF(5mL)和1 N LiOH(1.0mmol)中的(1 S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(0.12g，0.25mmol，制備例40)攪拌1小時。用1NHCl將混合物調節至pH＝2并濃縮。在0℃的含飽和HCl(g)乙酸乙酯溶液中攪拌粗品。用N2吹掃除去過量HCl(g)并濃縮反應物。使用陽離子交換色譜法(Dowex50X8-100；用10％吡啶/H2O洗脫)純化粗產物，得到0.06g(72.9％)標題化合物。23D＝-42.11(c＝0.57，H2O)。
1H NMR(300MHz，D2O)δ1.21(3H，d，J＝7.3Hz)，1.39(1H，m)，1.50(1H，dd，J＝5.7，15.8Hz)，1.91(1H，m)，2.15(1H，dd，J＝2.6，5.9Hz)，2.28(1H，d，J＝15.0Hz)，3.65(2H，s)，4.14(1H，app d，J＝5.9Hz)，4.20(1H，app q，J＝7.3Hz)。
C13H20N3O7的HRMS計算值，300.1301。實測值，330.1299。
實施例38(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2S-氨基-4-甲基-戊酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸
按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-叔丁氧基羰基氨基-4-甲基-戊酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例41)進行制備。得到0.21g(57％，0.50mmol)白色固體。23D＝-3.64(c＝0.55，MeOH)。
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ 0.89(3H，d，J＝4.4Hz)，0.91(3H，d，J＝4.0Hz)，1.29(3H，d，J＝7.0Hz)，1.52(1H，t，J＝3.3Hz)，1.55-1.67(4H，m)，1.97(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.38(1H，dd，J＝2.9，5.9Hz)，2.45(1H，d，J＝15.4Hz)，3.75-3.80(1H，m)，4.18g(1H，d，J＝5.9Hz)，4.33(1H，app.q，J＝7.0 Hz)，C17H27N3O7·1.0HCl·1.6H20的分析計算值C，45.30；H，6.98；N，9.32；Cl，7.87。
實測值C，44.95；H，6.54；N，9.12；Cl，7.53。
C17H28N3O7[M+H]+的HRMS(ES)計算值，386.1927。實測值，386.1911。
實施例39(1S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’S-(2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸
按照-般方法C，使用(1 S，2S，4S，5R，6R)-2-[2’-(2S-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基氨基]-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(制備例42)進行制備。得到0.15g(88％，0.37mmol)白色固體。23D＝-15.69°(c＝0.51，MeOH)。
1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ 0.92(3H，d，J＝7.0Hz)，0.95(3H，d，J＝7.0Hz)，1.28(3H，d，J＝7.0Hz)，1.52(1H，t，J＝2.9Hz)，1.60(1H，dd，J＝5.9，15.4Hz)，1.98(1H，dd，J＝3.3，5.9Hz)，2.03-2.15(1H，m)，2.39(1H，dd，J＝2.9，6.2 Hz)，2.45(1H，d，J＝15.4Hz)，3.56(1H，d，J＝5.5Hz)，4.18(1H，d，J＝5.9Hz)，4.33(1H，app.q，J＝7.0Hz)，8.82(1H，s)。
C16H25N3O7·1.0HCl·1.5H2O的分析計算值C，44.19；H，6.72；N，9.66；Cl，8.15.
實測值C，44.32；H，6.48；N，9.14；Cl，7.66。
C16H26N3O7[M+H]+的HRMS(ES)計算值，372.1771。實測值，372.1758。
實施例40(1R，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽一水合物
溫和回流下，向295mL丙酮中的(1R，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-2’-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基)氨基-4-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸(32.8g，87.5mmol，制備例52)霧濁溶液中滴加16mL水，之后滴加11.4mL(175mmol)甲磺酸，得到澄清、淡黃色溶液，其5分鐘后成為漿液。攪拌130分鐘，移去熱源，經30分鐘加入另外的295mL丙酮。將漿液冷卻至室溫，然后再攪拌2小時。過濾漿液，用丙酮(2×82mL)洗滌，45℃下真空干燥16小時，得到31.5g(93％)標題化合物，為白色固體。
該物質可進一步重結晶。將30.5g上述粗產物與152.5mL丙酮和35mL水混合。加熱至55℃，加水(3.66mL)促進完全溶解。用61mL丙酮稀釋溶液，并任選加入晶種。移去熱源，使混合物逐漸冷卻直至開始形成良好的晶核。經70分鐘向漿液中加入396mL丙酮，然后室溫下再攪拌3小時。過濾，用丙酮(3×91mL)洗滌，45℃下真空干燥幾小時(通常過夜)，得到27.7g(91％回收率)標題化合物，為白色固體。mp(DSC)200℃。25D+34°(c 1.0，CH3OH)。
400MHz1H NMR(DMSO-d6)δ12.76(br s，2H)，9.18(s1H)，8.07(brs，3H)，5.50-5.36(m，1H)，3.87(d，1H，J＝6.8Hz)，2.82(dd，1H，J＝14，8.0Hz)，2.38(s，3H)，2.25(m，2H)，1.96(t，1H，J＝3.0Hz)，1.39(m，1H)，1.37(d，3H，J＝6.8Hz)。
100 MHz13C NMR(DMSO-d6)δ 173.1，172.3，169.7，92.8(d，C-F裂分)，63.2(d，C-F裂分)，48.0，39.7，36.4(d，C-F裂分)，32.5(d，C-F裂分)，29.3(d，C-F裂分)，19.3(d，C-F裂分)，16.9。FTIR(KBr)3461(w)，3379(w)，3269(m)，2653(s)，2591(s)，2529(s)，1724(s)，1691(s)，1353(m)，1287(s)，1271(s)，1256(s)，1212(s)，1147(s)，1052(s)，1024(s)，787(m)cm-1。
C12H21FN2O9S計算值C，37.11；H，5.45；N，7.21.實測值C，37.12；H，5.45；N，7.16。
實施例41(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸一水合物
將(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸單鈉鹽(110.04g，225.3mmol，制備例55)在丙酮(110mL)和水(550mL)中的漿液加熱至55℃。向攪拌的漿液中滴加濃鹽酸(56mL，675.8mmol)，以使其逐漸溶解。滴加結束后，在55℃下攪拌2小時。移去熱源，使溶液冷卻至室溫。過濾溶液，用20mL水漂洗。向溶液中緩慢加入2N氫氧化鈉(165mL，330mmol)，使pH升至1.71，此時出現沉淀。攪拌10分鐘；形成稀漿液，pH降至0.98。向所得漿液中加入更多2N氫氧化鈉(62mL，124mmol)，使pH升至3.06，之后攪拌3小時，得最終pH3.24。過濾漿液，用水(2×165mL)洗滌，45℃下干燥15小時，得到73.27g(85％重量收率)標題化合物，為白色固體。
mp(DSC)203℃。25D+13.4(c1.19，1N HCl)。
500MHz1H NMR(D2O)δ3.99(t，1H，J＝6.0Hz)，3.93(d，1H，J＝15.0Hz)，3.50(dd，1H，J＝1.0，4.0Hz)，3.12(d，1H，J＝15.0Hz)，2.95(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.48(t，2H，J＝8.0Hz)，2.33(t，1H，J＝4.0)，2.09-1.98(m，5H)。
13C NMR(125 MHz，D2O)173.50，172.60，169.18，61.66，54.76，52.19，42.55，31.70，30.10，28.09，23.53，14.14。
FTIR(ATR)3558.54(s)，3024.05(s)，2959.87(s)，1748.83(s)，1692.89(s)，1681.99(s)，1617.50(s)，1567.63(s)，1497.65(s)，1314.11(s)，1282.22(s)，1263.26(s)，1239.01(s)，1101.46(s)，884.62(s)，809.95(s)，773.46(s)cm-1。
C12H18N2O7S2·H20的分析計算值C，37.49；H，5.24；N，7.29。實測值C，37.34；H，5.04；N，7.15。
實施例42(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸甲苯磺酸鹽 將甲苯(1180mL)中的(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(118.09g校正值，253mmol，制備例56)和對甲苯磺酸一水合物(54g，278mmol)混合物加熱至75℃，得到濃漿液。回流下攪拌漿液165分鐘。移去熱源，使漿液冷卻至室溫，之后攪拌過夜。過濾漿液，用甲苯(3×240mL)洗滌，45℃下真空干燥22小時，得到134.92g(98％收率)標題化合物。
mp(DSC)255℃。25D+8.3(c 1.2，CH3OH)。
500MHz1H NMR(CD3OD)δ 7.71(d，2H，J＝8.0Hz)，7.24(d，2H，J＝8.0Hz)，4.14(d，1H，J＝15Hz)，4.00(t，1H，J＝6.0Hz)，3.54(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，3.13(d，1H，J＝15Hz)，3.01(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.60(t，2H，J＝8.0Hz)，2.49(t，1H，J＝4.0Hz)，2.37(s，3H)，2.19-2.12(m，5H)。
13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ 170.49，169.69，168.99，142.18，140.67，182.73，125.79，60.26，54.76，52.21，42.44，30.90，30.77，27.20，22.33，20.17，13.96。
FTIR(ATR)3091.19(w)，1730.91(s)，1668.22(s)，1563.97(s)，1518.49(s)，1312.69(m)，1247.46(s)，1212.05(s)，1156.33(s)，1123.09(s)，1035.95(s)，1011.36(s)，892.41(s)，814.02(s)，683.69(s)cm-1。
實施例43(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸甲磺酸鹽
將13mL丙腈中的(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-(叔丁氧基羰基)氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸(1.08g，2.31mmol，制備例56)漿液加熱至85℃。向漿液中加入水(540μL)，然后滴加甲磺酸(225μL，3.47mmol)。攪拌漿液90分鐘。移去熱源并加入丙腈(30mL)。將漿液冷卻至室溫并攪拌90分鐘。過濾，用丙腈(3×2.7mL)洗滌，45℃下干燥過夜，得到1.04g(97％)標題化合物。mp(DSC)244℃。25D+10.2(c 1.16，CH3OH)。
500MHz1H NMR(CD3OD)δ 4.16(d，1H，J＝15Hz)，4.00(t，1H，J＝6.0Hz)，3.54(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，3.15(d，1H，J＝15Hz)，3.01(dd，1H，J＝4.0，7.0Hz)，2.71(s，3H)，2.61(t，2H，J＝8.0)，2.51(t，1H，J＝4.0)，2.20-2.14(m，5H)。
13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ170.50，169.71，169.00，60.27，54.78，52.18，42.43，38.35，30.90，30.78，28.20，22.35，13.96。FTIR(ATR)3055.57(m)，1725.90(s)，1693.60(s)，1527.33(s)，1528.96(s)，1320.89(s)，1176.86(s)，1152.70(s)，1118.55(s)，1051.42(s)，816.49(s)，786.63(s)cm-1。
C12H18N2O7S2·CH4O3S的分析計算值C，33.76；H，4.79；N，6.06。實測值C，33.98；H，4.82；N，5.98.
實施例44(1R，2S，5R，6R)-2-(2’R-氨基丙酰基)氨基-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
向0.20g(0.47mmol)制備例60的異構體A在THF(1.2mL)中的溶液中加入1.13mL(2.8mmol)2.5N LiOH，并在室溫下攪拌混合物過夜。用乙醚洗滌，0℃下用1N HCl中和，并用EtOAc(3×3mL)提取。用無水MgSO4干燥合并的有機層并減壓濃縮。將粗品溶解在3.76ml含1NHCl的EtOAc中并攪拌過夜。傾去溶劑，用乙醚洗滌，在Ar氣流下干燥產物，得到標題化合物(83mg，57％收率)，為白色固體。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.28(d，3H，J＝7.1Hz)，1.64-1.69(m，1H)，1.86-2.02(m，1H)，2.11-2.21(m，3H)，2.54(d，1H，J＝7.1Hz)，3.84(q，1H，J＝7.1Hz)。
實施例45(1S，2R，5S，6S)-2-(2’R-氨基丙酰基)氨基-6-氟-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽 以制備例60的異構體B的溶液為起始物質，基本按照實施例44制得標題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.30(d，3H，J＝7.1Hz)，1.59-1.65(m，1H)，1.85-2.03(m，1H)，2.05-2.25(m，3H)，2.53(d，1H，J＝6.6Hz)，3.85(q，1H，J＝7.1Hz)。
實施例46(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-氨基丙酰基)氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽
按照一般方法C，使用(1S，2S，4S，5R，6R)-2-(2’S-叔丁氧基羰基氨基-丙酰基氨基)-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸二乙酯(0.47g，1.1mmol，制備例37)進行制備，得到0.23g(67.7％)標題化合物。23D＝-4.1(c＝0.49，MeOH)。
1HNMR(CD3OD)δ 1.51(3H，d，J＝7.0Hz)，1.56(1H，t，J＝2.9Hz)，1.77(1H，dd，J＝5.8，15.8Hz)，2.1-2.13(1H，m)，2.52(1H，d，J＝16.1Hz)，2.57(1H，dd，J＝2.9，5.9 Hz)，3.88(1H，dd，J＝7.0，14.3Hz)，4.32(1H，d，J＝5.5Hz)。
C11H17N2O6·1.1HCl·0.9H2O分析計算值C，40.12；H，5.80；N，8.53。實測值C，39.85；H，5.41；N，8.36。
C11H16N2O6Na的HRMS計算值，295.0906。實測值，295.0883。
本發明的前藥化合物可對應于相應的母體化合物，通過各種細胞吸收試驗進行評價。這些試驗可提供比較數據，從而使本領域普通技術人員能夠鑒別易于被細胞吸收從而帶來更優越的暴露性質的化合物。下面描述了兩個這種試樣，包括Gly-Sar吸收試驗和Caco-2試驗。
Gly-Sar吸收試驗人們已認識到，一些口服給藥的擬肽類藥物通過腸內的肽運輸系統進行吸收。Yang等，Pharm.Res.16(9)(1999)。尤其，人們對腸內肽運輸體hPepT1對肽基吸收的抑制方式及其細胞內的相應識別水平進行了研究。Meredith等，Eur.J.Biochem.，267，3723-3728(2000)。而且，作為鑒別改進的口服藥物吸收的有效策略，人們已著手表征hPepT1運輸體內的氨基酸的腸內吸收機理。Han等，Polym.Prepr.(Am.Chem.Soc.，Div.Polym.Chem)40(1)259-260(1999)；Sawada等，J.Pharmacol.Exp.Ther.，291(2)705-709(1999)。
美國專利No.5,849,525中描述了可用于測定本發明化合物與hPepT1運輸體親合水平的方法。
例如，過量表達hPepT1運輸體的穩定轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞可用于測試本發明化合物。CHO細胞用于監測Gly-Sar的吸收，當本發明的前藥化合物存在時，對細胞的吸收大于不存在本發明的前藥化合物時的吸收，據此可證明其激動劑活性；若對本發明的前藥化合物的吸收小于不存在本發明前藥化合物時的吸收，則可證明其抑制活性。本發明化合物的EC50值通常小于5mM。
Caco-2試驗另一個測定本發明化合物細胞吸收的特別方法是研究人的腸內細胞系Caco-2的肽運輸載體。將人的腺癌細胞(Memorial sloan-KetteringCancer Center，Rye，NY，和/或ATCCP，Rockville，MD)在含10％胎牛血清和1％最少量必需介質的非必需氨基酸溶液的Dulbecco的改進依格爾(Modified Eagle)介質中傳代，不加丙酮酸鈉或抗菌素。這些細胞不合支原體，并于傳代數為28～40代之間使用。對于流出物測定，5-10×104個細胞在13-18天時間內在涂敷了膠原蛋白的多孔皿中生長出來，介質每2-3天更換一次。
37℃下，使用測試化合物，按照群盤(cluster-tray)(參見Gazzola等，Anal.Biochem.115，368-74(1981))技術測定藥物吸收。流出物緩沖液為不含碳酸氫鹽、含有用KOH滴定至pH為6.0的25mM Mes的Earle’s平衡鹽，并用膽堿鹽酸鹽代替氯化鈉。用膽堿鹽酸鹽將流出物緩沖液的摩爾滲透壓濃度調節至300±5mosmol/kg。將[3H]菊糖作為洗滌過程中附著于細胞上的胞外液的標記，以測定確定吸收速率的起始時間。試驗化合物和二肽的新鮮溶液要每天制備。在實驗最后，將細胞溶解在水中，使用LC/MS/MS可檢測到細胞溶解產物內的試驗化合物。用Smith等，Anal.Biochem.150，76-85(1985)中描述的方法測定蛋白質。
經40分鐘測定吸收。在衰減時間過程的線性區域內計算初始吸收速率，使用線性回歸估算上述起始時間。基于不存在二肽情況下測定的對比吸收速率計算百分抑制率。例如此Caco-2試驗，參見Dantzig&Bergin，Biochim.Biophys.Acta1027，211-17(1990)。
由大鼠血漿濃度測定的體內暴露情況為了研究式II化合物的體內暴露情況，之后研究式I化合物與式II化合物的口服劑量對比，進行了測定各式II化合物在大鼠內的血漿濃度的研究。成年Fischer344雄性大鼠(190-270克)由HarlanSprague-Dawley，Cumberland，IN，USA獲得，并在實驗室養殖3天使其適應。第4天，將試驗化合物溶解在緩沖水(1mg/ml＝試驗化合物/20mM磷酸二氫鉀，pH＝2)中，并以單次5mg/kg的劑量口服給藥。在0.5和1小時，或在1和3小時處，經眼眶瘺管或心臟刺穿(最后的時間點)收集血液試樣。血漿樣品在分析之前，先于-20℃和苯甲磺酰氟(一種蛋白酶抑制劑)存在下儲存。用固相提取法(SAX載體，甲醇/水/稀醋酸)預處理血漿樣品和內標化合物。
如下表1A和1B所示，用LC/MS/MS確定每次試驗的各式II化合物的血漿濃度(ng/ml)，并作為0.5和1小時或，1和3小時試樣時間點的總濃度給出。
如上表1A和1B所示，對大鼠口服用藥時，本發明化合物的血漿濃度與母體化合物的是可比的。這說明本發明的化合物在體內轉變為母體化合物，式II化合物。
本發明的化合物優選在給藥前先制劑。因此，本發明另一方面為包括式I化合物或其可藥用的鹽、可藥用的載體、稀釋劑或賦型劑的藥物制劑。可根據本領域普通技術人員公知的方法制備該藥物制劑。制備本發明的組合物時，通常將活性組分與載體混和，或用載體稀釋或用載體封閉，且可置于膠囊、小袋、紙張或其它容體形式內。當載體用作稀釋劑時，其可為固體、半固體或液體物質，其為活性組分的載體、賦型劑或介質。組合物可為片劑、丸劑、粉末、錠劑、小袋、藥包、酏劑、懸浮液、乳液、溶液、糖漿、氣溶膠、含有例如至多10％重的活性化合物的軟膏、軟的和硬的明膠膠囊、栓劑、無菌注射液和無菌包裝粉末。
適合的載體、賦型劑和稀釋劑的一些例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、樹膠、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃芪膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。制劑還可另外包括潤滑劑、潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、增甜劑或調味劑。本發明的組合物可制成制劑，這樣按照本領域公知的方法向病人給藥后，帶來活性組分的快速、持久或延遲釋放。
組合物優選按計量單位形式制劑，每劑量含有約5mg-約500mg活性組分，優選約25mg-約300mg活性組分。此處使用的術語“活性組分”指包括在式I化合物范圍內的化合物。
術語“單位劑量形式”指適于作為人體和其它哺乳動物的單一劑量的生理離散單元，每單元含有預定量的活性物質(其已計算出來可產生希望的治療效果)和適當的藥物載體、稀釋劑或賦型劑。
權利要求
1.一種式I的化合物或其可藥用的鹽， 其中，A為H-(Q)p-；Q每次出現時獨立選自氨酰基；P為1-10的整數；X為O、S、SO、SO2或CR3R4；R3為氟、X’OR5、SO3H、四唑-5-基、CN、PO3R62、羥基、NO2、N3、(CH2)mCOOR5a、(CH2)mPO3R6a2、NHCONHR5b或NHSO2R5c，且R4為氫；或R3和R4各自代表氟；或R3和R4一起代表＝O、＝NOR7、＝CR8R9、＝CHCOOR5b、＝CHPO3R6a2或＝CHCN；或R3或R4中的一個代表氨基而另一個代表羧基；X’代表鍵、CH2或CO；m為1-3的整數；R5、R5a、R5b、R5c、R7、R8和R9獨立為氫原子；任選取代的(1-6C)烷基；任選取代的(2-6C)烯基；任選取代的(2-6C)炔基；任選取代的芳基；任選取代的雜芳基；非芳碳環基團；非芳雜環基團；與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環碳環基團；或與一個或兩個單環芳基或雜芳基稠合的非芳單環雜環基團；R6和R6a獨立代表氫或(1-6C)烷基；R10為氫或氟；和R11為氫、氟或羥基。
2.根據權利要求1的化合物或鹽，條件是該化合物或鹽不為其中X為CR3R4，其中R3為氟，且R4為氫，p為1，且Q為L-丙氨酰的化合物；或其可藥用的鹽。
3.根據權利要求1或2的化合物或鹽，其中A為H-(Q)p-；Q每次出現時獨立選自氨酰基；P為1-3的整數；X為O、S、SO、SO2或CR3R4；R3為氟或羥基，且R4為氫；或R3和R4一起代表＝O；R10為氫或氟；且R11為氫、氟或羥基。
4.根據權利要求1-3中任一項的化合物或鹽，其中Q為衍生自天然氨基酸的氨酰基。
5.根據權利要求1-4中任一項的化合物或鹽，其中X為SO2。
6.根據權利要求1-4中任一項的化合物或鹽，其中X為CR3R4，R3為氟，且R4為氫。
7.根據權利要求1-4中任一項的化合物或鹽，其中X為CR3R4，R3為羥基，且R4為氫。
8.根據權利要求1的可藥用的鹽，其為酸制得的酸加合鹽，該酸提供可藥用的陰離子；堿制得的堿加合鹽，該堿為含有酸部分的化合物提供可藥用的陰離子；或含有相反帶電基團的兩性離子化合物。
9.根據權利要求1的化合物，其中A為H-(Q)p-；Q為L-丙氨酰；p為1；X為SO2或CR3R4；R3為氟且R4為氫；R10為氫；且R11為氫；或其鹽酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽或單鈉鹽。
10.根據權利要求9的可藥用的鹽，其為(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-氨基丙酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸鹽酸鹽或(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸甲苯磺酸鹽。
11.根據權利要求1的化合物，其為(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸或其可藥用的鹽。
12.根據權利要求11的化合物，其為(1R，4S，5S，6S)-4-(2’S-4’-甲硫基-2’-氨基丁酰基)氨基-2，2-二氧代-2λ6-硫雜-雙環[3.1.0]己烷-4，6-二羧酸一水合物。
13.根據權利要求1的可藥用的鹽，其為1S，2S，4S，5R，6R-2-(2’S-氨基丙酰基)氨基-4-羥基-雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽。
14.根據權利要求1的化合物，其中A為H-(Q)p-；Q為L-丙氨酰；p為1；X為CR3R4；R3為氟且R4為氫；R10為氫；且R11為氫；或其可藥用的鹽。
15.根據權利要求14的化合物或鹽，其選自a)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸鹽酸鹽；b)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽；c)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸乙磺酸鹽；d)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸苯磺酸鹽；e)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲苯磺酸鹽；f)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸；和g)1R，2S，4R，5R，6R-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸單鈉鹽。
16.根據權利要求15的可藥用的鹽，其為(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽。
17.根據權利要求16的可藥用的鹽，其為(1R，2S，4R，5R，6R)-2-(2’S-2’-氨基丙酰基)氨基-4-氟雙環[3.1.0]己烷-2，6-二羧酸甲磺酸鹽一水合物。
18.一種制備如權利要求1中所述的式I化合物或其可藥用的鹽的方法，包括酰化式(ii)的化合物 用相應的式III的氨酰基進行酰化PgN-A-(III)其中PgN為氮保護基團；然后，對于上述任意一個步驟，當使用保護基團對官能團進行保護時，除去保護基團；然后，對于上述任意一個步驟當需要式I化合物的可藥用的鹽時，使堿形式的這種式I化合物與提供可藥用的平衡離子的酸進行反應；或對于含有酸部分的式I化合物，使酸形式的這種化合物與提供可藥用的陽離子的堿反應；或對于式I的兩性離子化合物，中和酸加合鹽形式或堿加合鹽形式的式I化合物；或采用任何其它傳統方法。
19.一種影響病人體內cAMP連接的代謝型谷氨酸受體的方法，其包括將藥物有效量的權利要求1的化合物給藥于需要調節興奮性氨基酸神經傳遞的病人。
20.一種給藥有效量的式II化合物的方法， 其中，X和R10如權利要求1中的定義，其包括將藥物有效量的權利要求1的化合物給藥于需要調節興奮性氨基酸神經傳遞的病人。
21.一種治療病人的神經系統疾病的方法，其包括將藥物有效量的權利要求1的化合物給藥于需要該治療的病人。
22.權利要求21的方法，其中所述神經系統疾病為心臟旁路手術和移植導致的腦缺陷；腦缺血；脊髓創傷；頭部創傷；早老性癡呆；亨廷頓舞蹈病；肌萎縮性側索硬化；艾滋病誘發的癡呆；產期缺氧；低血糖神經損傷；眼睛創傷和視網膜病；認知疾病；先天性和藥物誘發的帕金森氏病；肌肉痙攣；偏頭痛；尿失禁；藥物耐受性；戒除；停藥和藥物渴望；戒煙；嘔吐；腦水腫；慢性疼痛；失眠；驚厥；Tourette綜合癥；注意力不集中癥和遲發性運動障礙。
23.權利要求22的方法，其中所述神經系統疾病為藥物耐受性、戒除、停藥和藥物渴望；或戒煙。
24.一種治療病人的精神疾病的方法，其包括將藥物有效量的權利要求1的化合物給藥于需要該治療的病人。
25.權利要求24的方法，其中所述精神疾病為精神分裂癥、焦慮和相關疾病、抑郁、兩極性異常、精神異常和強迫性疾病。
26.權利要求25的方法，其中精神疾病為焦慮和相關疾病。
27.一種藥物制劑，包括與可藥用的載體、稀釋劑或賦型劑結合的式I化合物或其可藥用的鹽。
全文摘要
本發明涉及合成的興奮性氨基酸前藥及其制備方法。本發明進一步涉及其使用方法，及包括治療神經系統疾病和精神疾病的化合物的藥物組合物。
文檔編號A61K38/05GK101084236SQ03813511
公開日2007年12月5日 申請日期2003年6月6日 優先權日2002年6月11日
發明者E·D·莫赫, J·A·蒙恩, C·佩德雷加-特塞羅, J·G·布蘭科-厄格拉蒂, I·科拉多卡農 申請人:伊萊利利公司