專利名稱：治療肝炎的梔子總甙組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及中藥梔子中治療肝炎的有效部位梔子總甙組合物及其制備方法，以及以梔子總甙組合物為活性成分的藥物組合物。
背景技術：
我國各型肝炎患者正在呈現上升趨勢，每年有近40萬人死于肝臟疾病，慢性乙肝和丙肝正成為國人健康的殺手。肝炎大致可分為病毒性肝炎、藥物性肝炎、酒精中毒性肝炎。針對肝炎的藥物治療，迄今為止，還未有治療肝炎的特效藥物，中西醫結合治療肝炎是我國獨特的治療方法。中西醫結合治療肝炎的優點是可相互減輕副作用，增加療效。例如西醫的抗病毒藥物干擾素可引起發熱、白細胞減低等癥狀，中藥可減輕其副作用，改善臨床癥狀，促進肝細胞恢復，使干擾素療效更佳。還有許多降酶藥物、退黃藥物都是從中藥中提煉出來的。
梔子，別名黃梔子、梔子、山枝子、大紅梔，來源為茜草科植物梔子(Gardeniajasminoides Ellis)的果實。全國大部分地區有栽培。南方各地有野生，主要分布于江西、湖南、浙江、福建、四川。早在《神農本草經》中就有記載，此后在歷代本草、醫方中均有論述和補充，如《名醫別錄》、陶弘景的《本草經集注》等。
梔子性寒，味苦，歸心、肝、肺、胃、三焦經。常用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍、扭傷等。梔子在臨床上的應用很廣泛，中國藥典及部頒標準中收載的含梔子的制劑就有十幾種，如梔子金花丸、黃連上清丸、清火梔麥丸等，地方標準中收載的梔子單方及復方制劑就更多，如退黃口服液等。
近年來，隨著對梔子及其制劑中有效成分的研究深入，其中的很多化學成分被分離、鑒定出來。研究表明，梔子的主要化學成分有梔子甙(geniposide)、羥異梔子甙(gardenoside)、山梔甙(shanzhiside)、梔子新甙(gardoside)、梔子甙酸(geniposidic acid)、梔子黃素(gardenin)、番紅花甙-1(crocin-1)、番紅花酸(crocetin)、雞矢藤甙甲酯(scandoside methyl ester)等。現代研究表明，梔子提取物及梔子甙對肝臟具有明顯的保護作用，實驗表明，大鼠提前24或48小時給予梔子提取物，可防止因半乳糖胺引起的暴發性肝炎。
目前，還沒有梔子總甙及其制劑的制備工藝文獻報道，對梔子的提取工藝，一般還停留在水提及水提醇沉的水平上，提取物中的梔子總甙含量較低。

發明內容
本發明的目的是提供一種梔子總甙組合物為活性成分的藥物組合物。
本發明的另一目的是提供一種治療肝炎的梔子總甙藥物的制備方法，該方法能夠提高梔子總甙活性成分含量，去除大量雜質，同時重復性、穩定性好，并且原料的得率高，成本低，適合工業化生產。
本發明的目的可以通過以下措施來達到一種治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于以梔子總甙組合物為活性成分的藥物組合物。
一種治療肝炎的梔子總甙組合物的制備方法，其特征在于取梔子總甙藥材，水提取，合并提取液，過濾，加入濃鹽酸稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫雜質，再用乙醇洗脫，收集洗脫液，過中性氧化鋁柱，加乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥。
本發明的目的還可以通過以下措施來達到將藥材粉碎后，分別加5～8倍量的水提取1～3次，合并提取液，過濾，加入藥材量0.1～2％(M/V)的濃鹽酸，稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過已處理好的大孔吸附樹脂柱，上柱完畢后，用水充分洗脫至流出液澄清且色淡后，加50～95％乙醇洗脫，收集洗脫液，過相當于藥材0.2～0.5倍量的中性氧化鋁柱，50～100％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，即得淺黃色至類白色梔子總甙原料。
本發明采用水提后，上大孔吸附樹脂柱和中性氧化鋁柱，取得良好效果，梔子總甙的含量大大提高。此方法操作簡便，非常適合工業化生產。大量研究表明，HPD-100、HPD-400、D101、D-3520或AB-8型大孔樹脂對梔子總甙的吸附分離效果最好。
所述梔子總甙組合物，可以與藥學上可接受的載體和/或賦形劑混合，制成含有上述梔子總甙組合物為主要活性成分的口服制劑，如片劑、膠囊、滴丸、軟膠囊等，以及胃腸道外途徑給藥的制劑，如粉針、注射液等。
由于梔子總甙組合物水溶性好，為便于肝炎病人急救用，適合將梔子總甙組合物制成注射液。注射液中梔子總甙組合物濃度為1～20mg/ml，優選濃度為10mg/ml。通常成人用量為每天50～500mg梔子總甙組合物，優選100～200mg梔子總甙組合物，一天給藥一次。
梔子總甙組合物，也可制成每粒(片)含有梔子總甙50～200mg的膠囊和片劑。優選每粒(片)含有上述梔子總甙100mg的梔子總甙的膠囊和片劑。通常成人用量為每天100～600mg梔子總甙組合物，優選200～400mg梔子總甙組合物。
采用本發明制得的梔子總甙組合物中，梔子總甙的含量至少為50％，甚至可達50～95％，其主要活性成分為梔子甙，通過高效液相法測定，梔子甙的含量可占梔子總甙組合物的40～85％。藥效學試驗證明本發明的梔子總甙以及含梔子甙的藥物組合物總體上有很好的治療肝炎的功效，與傳統的制劑相比，本發明治療肝炎的有效劑量小，毒副作用小。
本發明制得的梔子總甙組合物，由于采用了中藥現代化技術中的大孔吸附樹脂技術，不但使其中的活性成分的含量提高，從而提高了藥效，而且去除了大量雜質，既解決了中成藥常有的吸潮性大的問題，又減小了毒副作用。
下面采用動物模型對梔子總甙組合物藥效的研究，來進一步說明本發明的實用性。研究的方法和結果如下一、材料1、梔子總甙注射液規格50mg/ml；梔子總甙粉末，微黃，易溶于水；2、陽性對照藥苦黃注射液，規格10ml/支，批號0206051，由常熟雷允上制藥有限公司生產；3、實驗動物SD大鼠，雄性，體重200±30g，由蘇州大學實驗動物中心提供。二、方法和結果1、靜注給藥對血清總膽紅素(TB)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)和肝重系數的影響選取健康雄性大鼠，隨機分成5組，即正常對照組，異硫氰酸萘酯(APIT)模型組，梔子總甙注射液二個劑量組(50、100mg/kg)、苦黃注射液組5ml/kg，每組大鼠5～8只。正常對照組與APIT模型組每天iv生理鹽水，其它各組iv給藥，每天1次，連續8天。給藥后第6天除正常對照組外，其他各組動物均灌胃APIT80mg/kg(植物油配制)，灌胃APIT48小時后，大鼠用20％烏拉坦麻醉，腹主動脈取血，分離血清，測定血清中的TB、ALT和AST。取血后立即取出大鼠肝臟，稱重后用10％甲醛溶液固定，部分樣本進行鏡檢。
結果見表1，靜注梔子總甙注射液除可降低血清ALT外，對其它指標未見有明顯的影響。陽性藥物苦黃注射對血清TB未見有明顯降低作，經我們的另有實驗證實，與其本身的顏色有關。
表1靜脈注射梔子總甙注射液對大鼠口服APIT后TB、ALT、AST和肝重系數的影響(n＝5～8，X±S)劑量 肝重系數組別 (mg/kg) TB(μmol/L)ALT(nmol·s-1/L) AST(nmol·s-1/L) (g/100g體重)正常對照組 2.48±0.56 257.48±74.68 1045.54±75.45 3.72±0.21模型組 118.32±34.25ΔΔ2619.94±60.90ΔΔ2295.96±136.59ΔΔ5.01±0.39ΔΔ梔子總甙(小劑量)50 114.6±35.27 2358.69±190.42**2455.32±211.764.80±0.39梔子總甙(大劑量)100135.78±21.18 2490.96±72.95**2518.00±168.854.83±0.31苦黃 5ml/kg 169.20±19.59 2515.97±69.70**2322.80±195.464.69±0.21ΔΔP＜0.01與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與模型組比較2、口服給藥對血清TB、ALT、AST和肝重系數的影響選取健康雄性大鼠，隨機分成5組正常對照組，APIT模型組，梔子總甙注射液二個劑量組(160、240mg/kg)、苦黃注射液組(5ml/kg)，每組5-8只。正常對照組與APIT模型組每天灌服等體積蒸餾水，其他各組灌胃給藥，給藥容積10ml/kg，每天一次，連續7天。給藥后第五天，除正常對照組外，各組動物均灌胃APIT 80mg/kg(植物油配制)，灌服APIT 48小時后，大鼠用20％烏拉坦麻醉，由腹主動脈取血，分離血清，測定血清中的ALT、AST、TB。取出大鼠肝臟，稱量后用10％甲醛溶液固定，部分樣本送進行鏡檢。
表2口服梔子總甙注射液對大鼠口服APIT后TB、ALT、AST和肝重系數的影響(n＝5～8，X±S)劑量 肝重系數組別 (mg/kg)TB(μmol/L)ALT(nmol·s-1/L)AST(nmol·s-1/L) (g/100g體重)正常對照組 1.20±0.51 204.81±4.48 1399.95±287.893.44±0.29模型組 148.32±28.71ΔΔ2697.04±199.04ΔΔ3852.94±226.05ΔΔ4.75±0.36ΔΔ梔子總甙(小劑量)160 91.79±33.51**2454.82±270.05 3180.47±335.57**5.17±0.52梔子總甙(大劑量)240 110.28±40.76*1952.56±394.08**2791.72±339.90**5.13±0.46TQ07大劑量 5ml/kg104.94±29.83**2684.54±217.54 3503.70±194.87**4.37±0.24ΔΔp＜0.01與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與模型組比較由表2可知，服用梔子總甙的大鼠血清TB、ALT和AST均有一定的降低作用，160mg/kg時就可使血清TB明顯下降，240mg/kg時，同時可使血清ALT和AST降低，提示口服較大劑量的梔子總甙有明顯的退黃和保肝作用。
3、梔子總甙對肝組織形態學改變的影響我們選擇了正常對照組、APIT模型組、靜脈注射梔子總甙50mg/kg和口服梔子總甙160mg/kg組大鼠肝臟進行病理學檢驗，結果表明，模型組大鼠肝細胞明顯腫脹，有灶性壞死，肝竇變小，匯管區血管擴張，炎癥反應顯著和小膽管損害，而靜注梔子總甙50mg/kg組和口服梔子總甙160mg/kg組得到了部分好轉。
本研究結果表明，梔子總甙靜脈和口服給藥均有保肝和退黃作用。
具體實施例方式
實施例中，梔子藥材分別購自西安、河南，均符合《中國藥典》2000年版一部中“梔子”項下的規定。
梔子總甙測定方法照紫外分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄VA)在230nm波長處測定。
原料中梔子甙測定方法照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VID)測定。
色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；乙腈-水(15∶85)為流動相，檢測波長為238nm，理論塔板數以梔子總甙計應不低于1500。
下列實施例旨在進一步舉例描述本發明，而不是以任何方式限制本發明。
實施例一取梔子藥材120kg，分別加8倍量、5倍量、5倍量的水提取3次，每次待水沸騰后靜置2小時，合并提取液(共約12倍量)過濾，加入藥材量0.5％(M/V)的濃鹽酸，稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過已處理好的HPD-400大孔吸附樹脂柱，上柱完畢后，用水充分洗脫至流出液澄清且色淡后，加95％乙醇洗脫，收集洗脫液，過相當于藥材0.3倍量的中性氧化鋁柱，75％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，即得淺黃色至類白色梔子總甙原料。
經測定上述實驗所得梔子總甙組合物中總甙含量為86％，梔子總甙組合物中主要成分梔子甙含量為78％。
實施例二取梔子藥材100kg，分別加8倍量、6倍量、6倍量的水提取3次，每次待水沸騰后靜置2小時，合并提取液(共約14倍量)過濾，加入藥材量1％(M/V)的濃鹽酸，稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過已處理好的D-3520大孔吸附樹脂柱，上柱完畢后，用水充分洗脫至流出液澄清且色淡后，加95％乙醇洗脫，收集洗脫液，過相當于藥材0.2倍量的中性氧化鋁柱，95％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，即得淺黃色至類白色梔子總甙原料。
經測定上述實驗所得梔子總甙組合物中總甙含量為93％，梔子總甙組合物中主要成分梔子甙含量為85％。
實施例三取梔子藥材100kg，分別加7倍量、5倍量、5倍量的水提取3次，每次待水沸騰后靜置2小時，合并提取液(共約11倍量)過濾，加入藥材量0.2％(M/V)的濃鹽酸，稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過已處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，上柱完畢后，用水充分洗脫至流出液澄清且色淡后，加75％乙醇洗脫，收集洗脫液，過相當于藥材0.3倍量的中性氧化鋁柱，70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，即得淺黃色至類白色梔子總甙原料。
經測定上述實驗所得梔子總甙組合物中總甙含量為82％，梔子總甙組合物中主要成分梔子甙含量為75％。
實施例四梔子總甙注射液的制備取上述梔子總甙組合物10g，加適量注射用水溶解后，再加入活性碳0.02g，加熱煮沸20分鐘，濾過，加水至900ml，用1％的NaOH調pH至6.5，靜置2h，濾過，濾液加注射用水至1000ml，灌封(10ml/支，10mg/ml)，滅菌，即得。用法用量為每日1次，每次100～200mg靜脈注射或加入生理鹽水或5～10％的葡萄糖溶液中靜脈滴注。
實施例五梔子總甙膠囊的制備取上述梔子總甙組合物100g，淀粉50g，β-環糊精100g混勻，制粒，過篩，干燥后裝成1000粒膠囊(100mg/粒)，即得。用法用量為口服，每次1～2粒，每日3次。
實施例六梔子總甙片的制備取上述梔子總甙原料100g，淀粉50g，β-環糊精100g混勻，制粒，過篩，干燥后壓成1000片(100mg/片)，即得。用法用量為口服，每次1～2片，每日3次。
權利要求
1.一種治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于以梔子總甙組合物為活性成分的藥物組合物。
2.根據權利要求1所述的治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于梔子總甙組合物中，梔子總甙含量至少為50％。
3.根據權利要求1或2所述的治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于所述梔子總甙組合物，可以與藥學上可接受的載體和/或賦形劑混合。
4.根據權利要求3所述的治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于藥學上可接受的載體和/或賦形劑可是口服制劑輔料或胃腸外途徑給藥的輔料。
5.根據權利要求4所述的治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于含有梔子總甙組合物1～20mg/ml的梔子總甙注射劑。
6.根據權利要求4所述的治療肝炎的梔子總甙組合物，其特征在于每粒或片含有梔子總甙組合物50～200mg的梔子總甙膠囊、片劑。
7.一種治療肝炎的梔子總甙組合物的制備方法，其特征在于取梔子總甙藥材，水提取，合并提取液，過濾，加入濃鹽酸稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫雜質，再用乙醇洗脫，收集洗脫液，過中性氧化鋁柱，加乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥。
8.根據權利要求7所述的治療肝炎的梔子總甙組合物的制備方法，其特征在于藥材粉碎后，分別加5～8倍量的水提取1～3次，合并提取液，過濾，加入藥材量0.1～2％(M/V)的濃鹽酸，稍攪拌，靜置，待析出膠狀沉淀后，離心分出上清液，過已處理好的大孔吸附樹脂柱，上柱完畢后，用水充分洗脫至流出液澄清且色淡后，加50～95％乙醇洗脫，收集洗脫液，過相當于藥材0.2～0.5倍量的中性氧化鋁柱，50～100％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，即得淺黃色至類白色梔子總甙原料。
9.根據權利要求7或8所述的治療肝炎的梔子總甙組合物的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂柱型號為HPD-100、HPD-400、D101、D-3520或AB-8型。
全文摘要
本發明提供了一種治療肝炎的梔子總甙組合物及其制備方法，特別是涉及以梔子總甙組合物為活性成分的藥物組合物，如含有梔子總甙組合物的梔子總甙注射劑以及含梔子總甙組合物的梔子總甙膠囊、片劑等，用于治療肝炎，本發明的制備工藝重現性好，適合工業化生產。
文檔編號A61K9/48GK1476839SQ0313214
公開日2004年2月25日 申請日期2003年7月1日 優先權日2003年7月1日
發明者楊永安, 賀彥宇, 陳智林 申請人:江蘇正大天晴藥業股份有限公司