專利名稱：含酮洛芬的飲用制劑以及其在導致一群動物發燒、炎癥和疼痛狀況的同時治療中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及針對導致一群動物發燒、炎癥和/或疼痛的狀況的口服同時治療，該治療使用一種補充有酮洛芬的并且含有動物用飲用水或泌乳動物用人造奶，被一群動物同時攝取的飲用制劑。
背景技術：
酮洛芬[2-(3-苯甲酰苯基)丙酸]是一種具有止痛、抗炎和退熱性質的抑制環氧合酶的活性物質。
在獸醫應用中描述過酮洛芬(外消旋體)的應用，以及眾多獸醫產品含有酮洛芬為用于狗口服的片劑，或者為用于牛、豬和馬的注射液。所有這些制劑都用于嚴格的個體應用，無論是單獨飼養還是群體(牧場)飼養的，都必須一個一個地治療動物。
在當代集約型牧場經營中，非-奶場家畜，例如豬、肉牛等被飼養于大型的可以容納數以千計的動物的群體中。在這些牧場中，動物的數量密度很高，當一個傳染病灶出現時，其將很快傳染至整個群體(或者，至少整個牲畜圍欄)，尤其是在發生呼吸道感染的時候。在這些情況下，整個獸群必須同時進行治療。如果這些病況用現行市場上可得的酮洛芬產品進行治療，則每一單個動物都必須靜置不動并給予適宜量的藥物，且整個過程必須重復數天。這非常費時間，并且需要大量的人力，從而大大增加了治療的成本，而這些都加在了同時給予的抗生素治療的成本中，還會使動物產生嚴重惡化疾病過程的應激，使得此種治療在實踐中不可實施。
發明概述本發明涉及解決在開發用于同時治療一群動物的導致發熱、炎癥和/或疼痛的病況的系統的問題方案。
本發明提供的所述解決方法以本發明人的觀察為基礎，通過根據動物的體重以及動物存在的數量向動物群的飲用水或向泌乳動物的人造奶中加入適宜量的酮洛芬水性溶液，可以輕易地同時治療動物群體。
由于不必使單個動物保持靜止以對其進行給藥治療，避免延遲給藥，減少人工費用和對動物的應激，所以本發明提供的方法是有利的。
本發明的一項目的是提供一種飲用制劑，該制劑含有補充有酮洛芬的動物飲用水或泌乳動物用人造乳。
本發明的另一項附加目的是提供一種獲得所述含有酮洛芬的飲用制劑的方法。
本發明的另一項附加目的是提供酮洛芬水性溶液在用于獲得含有酮洛芬的用于同時對一群動物口服治療導致發熱、炎癥和/或疼痛的病況的飲用制劑中的應用。
附圖簡要說明

圖1顯示了說明3％酮洛芬水性溶液在牛(實施例2)和泌乳牛(實施例3)中補充牛呼吸系統疾病(BRD)抗生素治療的臨床效果的研究的試驗設計的示意圖。
圖2是顯示在治療期間每一組牛的臨床指標的進展圖。
圖3是顯示治療期間每一組牛的溫度曲線圖。
圖4是顯示治療期間每一組泌乳牛的臨床指標的變化圖。
圖5是顯示治療期間每一組泌乳牛的溫度曲線圖。
圖6是顯示治療期間每一組豬的直腸溫度曲線圖。
圖7是顯示治療期間每一組豬的臨床指標的變化圖。
發明詳述本發明涉及一種含有動物飲用水或泌乳動物用人造奶的并補充有酮洛芬的飲用制劑。
本發明提供的含有酮洛芬的該飲用制劑，下文中稱為本發明的飲用制劑，是可供動物飲用的制劑。
動物用飲用水和泌乳動物用人造奶都是公知的產品。對于本發明的實踐應用，可以使用任何動物飲用水或泌乳動物用人造奶。
酮洛芬是一種商業可得的用作止痛劑、抗炎劑和/或退熱劑的產品。此外，它還可以通過諸如美國專利US 3,641,127中所記載的方法制備得到。在本發明的飲用制劑中，溶解有酮洛芬。由于本發明飲用制劑是為治療群體動物而制備的，因此所述飲用制劑中所含的酮洛芬的量可以在很大的范圍內變化。通常，本發明飲用制劑含有酮洛芬的量足以向攝取此飲用制劑的動物提供治療有效量。如說明書中所使用的，術語“治療有效的量”指的是足以對動物具有治療效果的量，例如，每天1-5mg酮洛芬每公斤攝取該飲用制劑的活體動物體重(1-5mg/kg/day)。在一項特定的應用中，本發明飲用制劑含有足以向攝取此飲用制劑的動物提供3mg/kg/天量的酮洛芬。
本發明飲用制劑可用于同時為一群動物口服治療引起發熱、炎癥、和/或疼痛的病況。就此說明書而言，術語“引起發熱、炎癥、和/或疼痛的病況”可以對應于任一種源于感染或非源于感染的的變化或疾病，其中呈現所有或某些上述癥狀。同樣的，術語“動物群”指的是一組動物，諸如，例如在密集型養牛場中的動物組，術語“同時”指的是這樣的事實動物群在同時得到酮洛芬治療，而不顧是否所有的動物同時攝取本發明飲用制劑，因為將酮洛芬摻入在飲用水或泌乳動物用人造奶中。
實施例2和3證實了本發明飲用制劑作為抗生素治療的輔助治療在牛群或奶牛群的牛呼吸疾病(BRD)的治療中的臨床效果。實施例4顯示了本發明飲用制劑作為抗生素治療的輔助治療在治療飼養豬群的豬呼吸系統疾病綜合征(PRDC))中的臨床效果。
本發明飲用制劑可以通過涉及將酮洛芬水性溶液與動物飲用水或泌乳動物用人造奶混合的方法而得到。與飲用水或與人造奶混合的酮洛芬水性溶液的量可以在很大的范圍內變化。(i)酮洛芬水性溶液和(ii)飲用水或人造奶之間的比例由多個因素決定，包括酮洛芬在酮洛芬水性溶液中的濃度、動物飲用的飲用水或人造奶的量，以及向每一動物所給藥的酮洛芬的劑量。動物飲用的水或人造水的量是非常可變的因素，并且除其它因素以外決定于動物體重、氣候條件以及動物臨床狀況。作為示例，3％的酮洛芬水性溶液可以加入到動物用飲用水中，使每升飲用水中含有0.5-2毫升的酮洛芬水性溶液，或者每升泌乳動物用人造奶中含有1.5-7.0毫升的酮洛芬水性溶液。
水性溶液中的酮洛芬濃度可以變化的幅度很大。下限由根據所需用途實際可加入到該酮洛芬水性溶液制劑中的酮洛芬的最低量決定。除了其它因素以外，上限由在酮洛芬開始沉淀的特定pH時水性溶液中酮洛芬的濃度決定。作為示例，水性溶液中酮洛芬的濃度可以在1％-15％(w/v)之間，正常的在1％-5％(w/v)之間。在一個特定的具體實施方式
中，水性溶液中酮洛芬的濃度為3％(w/v)。
雖然酮洛芬在水中幾乎不溶，但是可以采取幾種方法制備其水性溶液。其中一種是使用一種共溶劑(co-solvent)，例如，聚乙二醇400、1-甲基-2-吡咯烷酮等等，另一種策略是將酮洛芬與堿性氨基酸，例如賴氨酸、精氨酸等就地成鹽，增加其溶解度。
在一特定的具體實施方式
中，制備酮洛芬水性溶液的共溶劑是1-甲基-2-吡咯烷酮。
在另一特定的具體實施方式
中，酮洛芬水性溶液中含有L-精氨酸，通過在其中就地形成相應的L-精氨酸鹽以增加酮洛芬在水中的溶解度。通過調整溶解酮洛芬所需該物質等分子的量，以及為優化適用不同品質的飲用水或不同類型的人造奶的酮洛芬水性溶液的使用方案的附加量確定L-精氨酸的濃度。根據酮洛芬的濃度，水性溶液中L-精氨酸的濃度可以在很大的幅度內變動。作為示例，水性溶液中L-精氨酸的濃度可以在2％-30％(w/v)之間，通常在2％-8％(w/v)之間。在一特定的具體實施方式
中，水性溶液中L-精氨酸的濃度為5.5％(w/v)。
酮洛芬水性溶液還可含有一種或多種獸醫學可接受的添加劑，諸如濕潤劑、pH調節劑、防腐劑等等。
作為濕潤劑，任一種可以促進酮洛芬溶于水性溶液中的化合物都可以使用，例如聚山梨酯；泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆407等等。
已知的是(默克索引，藥物解析特性(Analytical Profiles of DrugSubstances))，酮洛芬在乙腈/水(3/1)中的pKa為5.02-5.94，在甲醇/水(3/1)中平均值約為5.5；對于精氨酸而言，其pK1為2.18(羧基)、pK2為9.09(氨基)，其平均值約為5.6，并且當pH等于或高于5.5時，該兩種化合物都足以離子化(解離)從而可相互反應以使酮洛芬保持為溶液狀態。為此，當制備水性溶液時，需通過加入一種pH調節劑以將pH調節至5.5-7.0。已進行的實驗顯示當pH低于5.5時，酮洛芬發生沉淀。
因此，pH調節劑是一種酸性或堿性的化合物，可以為水性酮洛芬溶液提供這樣的pH值，例如5.5-7.0的pH，優選6.5，使得仍以離子化形式存在。在一特定的具體實施方式
中，水性酮洛芬溶液含有1-甲基-2-吡咯烷酮作為共溶劑，pH調節劑是一種無機堿，例如，所需量的氫氧化鈉(適量)以提供一種pH為6.5的水性溶液。在另一特定的具體實施方式
中，酮洛芬水性溶液含有一種堿性氨基酸，例如L-精氨酸，而pH調節劑是一種酸，諸如檸檬酸、馬來酸、鹽酸等等，以所需量(適量)存在以提供pH為5.5-7.0的酮洛芬水性溶液。
與溶液外觀有對照，酮洛芬水性溶液的穩定性研究的結果，作為pH值(此種應用的主要因素)微小的變化的結果，證明了可以完美的實現將酮洛芬維持為溶液狀態的目的。所得結果證實了該制劑的成功。
在用動物飲用水或泌乳動物用人造奶稀釋了酮洛芬水性溶液之后，為了獲得本發明的飲用制劑，通過稀釋該產品可幫助實現酮洛芬的溶解。因此，即使是在相對較酸的水(約pH5.0)中，本發明飲用制劑仍可觀察到保持其穩定，甚至冷藏48小時后才出現一些沉淀。還顯示，將酮洛芬水性溶液加入到本發明目的所需的飲用水中時，pH不會改變，以及直接使用沒有任何附加處理的樣本，正如穩定性測試中所得的結果所證實的，在72小時后，化學數據也保持不變。
有利的，水性酮洛芬溶液含有一種防腐劑以保證其在所建議的應用過程中防腐。作為一種防腐劑，任一種可以保證水性酮洛芬溶液或本發明飲用制劑防腐的試劑都可以使用，諸如苯甲醇(benzylicalcohol)、對羥基苯甲酸酯類(parabenes)等等。在一特定的具體實施方式
中，使用了苯甲醇，一種用于化妝品、食物、包括口服和非腸道的制劑的廣泛的藥物制劑的抑菌防腐劑，濃度為0.5％-3％，例如0.5％-2.5％。芐基醇是記載在《FDA惰性成分手冊(Handbook ofInactive Ingredients of the FDA)》(注射劑、膠囊、溶液劑、口服片劑、局部及陰道制劑)中的一種產品，同時也存在于英國出售的非腸道和非-非腸道產品中《藥物輔料手冊第3版第42頁(Handbook ofPharmaceutical Excipients，3rd edition，page 42)》。
酮洛芬水性溶液可以通過混合其適宜量的成分而獲得。在一特定的具體實施方式
中，酮洛芬水性溶液具有以下的組成成分酮洛芬1-15％(w/v)L-精氨酸 2-30％(w/v)苯甲醇0.5-3％無水檸檬酸(適量) pH在5.5-7.0之間純凈水適量100％在另一特定的具體實施方式
中，此酮洛芬水性溶液具有以下的組成成分酮洛芬1-5％(w/v)
L-精氨酸 2-8％(w/v)苯甲醇 0.5-2.5％無水檸檬酸適量 pH在6.0-7.0之間純凈水適量 100％以下實施例用于闡述本發明但決不能認為是用于限制本申請范圍。
實施例1酮洛芬水溶液的制備由于酮洛芬在水中幾乎不可溶，為此進行了幾項試驗以試圖解決該問題。
因此，首先進行預試驗以確定在水性介質中溶解1g酮洛芬所需的共溶劑或堿性氨基酸的比例，然后將樣本經歷5℃和-20℃的強化條件。作為共溶劑，對聚乙二醇400和1-甲基-2-吡咯烷酮進行測試，而作為堿性氨基酸，測試的是L-精氨酸和L-賴氨酸。從這些預試驗中，1-甲基-2-吡咯烷酮被選作共溶劑，因為酮洛芬在此共溶劑中比在聚乙二醇400中更易溶解；選用L-精氨酸作為氨基酸。
然后，使用所選的共溶劑和堿性氨基酸進行進一步的試驗，并且考慮加入濕潤劑(泊洛沙姆407)的可能性以促進酮洛芬的溶解。因此，預配設計步驟從制備表1所記載的百分比組合物開始。
表1測試組合物
將pH調節至6.5后證實，基于就地形成鹽的上述組合物是和pH有關的，對于加入稀鹽酸而獲得的pH值低于5.5的情況，酮洛芬將發生沉淀。
在測試的組合物中，標記為2號的組合物溶解性不好，而含有泊洛沙姆407那些(第4、5和6號組合物)有產生泡沫的傾向，因為該化合物是一種非離子型表面活性劑。由于1號組合物中共溶劑含量太高(60％)，因此選用3號組合物進行以下的試驗。
在另一組試驗中，決定調節溶解酮洛芬所需的L-精氨酸的量，以測試不同的防腐劑，最終，通過加入L-精氨酸來進行適當的修飾，因為此種溶液與被處理的不同的水質都具有很高的相容性。所選的防腐劑是苯甲醇(benzylic alcohol)。考慮到所有上述因素，得到了下述組合物，在下文中指“EV溶液”，將在實施例2、3和4中描述的試驗中使用。
3％酮洛芬水溶液的組成(EV溶液)成分酮洛芬 3.000gL-精氨酸5.500g苯甲醇 2.000g無水檸檬酸適量 pH6.5純凈水適量 100ml之后，用EV溶液制備一中試批次(pilot batch)，并利用該批次驗證了0.1％(v/v)在動物用飲用水(自來水和純凈水)及泌乳動物用人造奶中的穩定性，從而可以推薦最長使用期。所得結果給出的使用期是含有0.1％酮洛芬水性溶液的飲用水為72小時；含有0.1％酮洛芬水性溶液的泌乳動物用人造奶為24小時。
實施例2作為抗生素治療小牛呼吸系統疾病的補充的口服給予飲用水中的酮洛芬水性溶液的臨床效果的研究。
牛疾病已知多數感染過程可引起嚴重的通常伴隨有疼痛的軟組織炎癥。該炎癥也通常與內毒素的釋放有關，除了其它現象以外，后者會引起發熱狀況。這些現象共同使動物的臨床條件惡化并且延長疾病的時程[Laval，A.(1992).Utilisation des anti-inflammatoires chez le porc.Rec.Méd.Vét.168(8/9)733-744]。鑒于此，作為抗生素療法的補充，通過給予非甾體抗炎藥(NSAIDs)消除以上癥狀被記載為是一種在獸藥領域中非常有利的方法[Kopcha，M.等.(1989).氟尼辛葡胺和寶泰松在制造食品的動物上的試驗性使用(Experimental uses of flunixinmeglumine and phenylbutazone in food-producing animals.)JAVMA194(1)45-49]。
此治療方法的一項應用是治療牛呼吸疾病(BRD)，一種病理綜合征，在其發病機制中已顯示有不同的病原學因子，特別是出血敗血性巴斯德(氏)菌(Pasleurella multocida)以及支原體spp.(Mycoplasmaspp.)[默克獸藥手冊第8版第2188頁，默克公司，美國新澤西州懷特荷斯，Merck Veterinary Manual(1998)，8thed.Merck & Co.，Inc.，Whitehouse Station，NJ，USA，p.2188]不同的病理性綜合征。更具體地，已經證實，使用所選的NSAIDs，包括酮洛芬，作為此疾病的抗生素療法的補充，可以提高動物的治愈率并且增加治療末期臨床改善的百分比[Deleforge，J.等(1994).托芬那酸和土霉素在治療牛呼吸系統疾病中的效果的現場評價J.Vet.Pharmacol.Therap.1743-47；Balmer，T.V.等(1997).卡布洛芬和氟尼辛葡胺作為牛呼吸系統疾病的輔助治療的比較，The Veterinary Journal 154233-241；Lockwood，P.等.(1998).Eficacia clinica comparada de tres antiinflamatorios noesteroideos(NSAID)，flunixin meglumine，carprofeno yketoprofenocomo complemento del tratamiento antibacteriano de la enfermedadrespiratoria bovina.Albeitar 1615]。然而，在多數已公開的記載了該治療實踐的研究中，NSAID都是以非腸道(肌內或靜脈)給藥的，幾乎沒有研究使用口服途徑以實現此目的。
為了評估EV溶液的臨床效果，在肉牛群的應用水中口服給予3％酮洛芬水性溶液(實施例1)，作為牛呼吸疾病(BRD)抗生素治療的輔助治療，并且遵循良好臨床試驗GCP原則進行臨床試驗。
為此，此臨床研究被設計成對照的多中心臨床試驗[研究中所包括的動物被分成兩組，其中一組接受以抗生素+EV溶液為基礎的治療，另一組接受以抗生素+安慰劑(EV溶液的輔料)的作用，因此，作為一種陰性對照]，并按照此設計進行。此試驗是隨機且盲的。
1.材料與方法
1.1動物根據所需樣本量，使用總計350頭處于養肥階段的年輕放牧肉牛(每個治療組中175頭)。在選入時，所有的牛呈現中度或重度的BRD的臨床現象。在研究期間，動物圈養在附屬建筑物中，并分配在兩個牲畜圍欄中的一個中(一個治療組占用一個圍欄)。所有的動物都接受不含有藥物添加劑的商業標準飼料，并從自動飲水裝置中可隨意接受飲用水。
1.2試驗設計試驗時程總共持續10天。在試驗時程的第一天(D1天)完成動物選擇。當在飼養肉牛小牛的農場中檢測到BRD的暴發后，選擇滿足以下選擇標準的動物1°.臨床癥狀學與BRD相符合，嚴重度高于特別為所述研究而創制的臨床記分標準1.1(＞1.1中度或重度疾病)；并且2°.在選擇前7天內這些動物未接受過抗菌劑或抗炎劑。
選擇一批后，將動物分成兩個均勻等量的組。之后，每一組置于不同的牲畜圍欄中，并且，通過一簡單的隨機方法，確定其中一組進行A治療(抗生素+EV溶液)，另一組進行B治療(抗生素+安慰劑)。
所有的動物治療時程持續總共3天(第1-3天)，該治療包括向每組給予兩種產品；在第1天和第3天給予一種抗生素，兩組都一樣，在第1、2、3天給予EV溶液(組A)或其輔料(組B)(見圖1)。
圖1顯示了用于小牛BRD治療的抗菌劑治療的補充的3％酮洛芬水性溶液的臨床效果研究的試驗設計的圖表說明。
從第1天至治療的最后一天(第4天)，對動物的臨床狀態進行監控(圖1)。在這期間，進行以下的操作疾病嚴重度或臨床指數的測量第1天-第4天體溫測量第1天-第4天體重測量第1、4和10天對有可能的復發的監控第4天-第10天疾病嚴重度或臨床指數的測量給每頭動物分別計算該指數，從第1天至第4天，一天一次，使用一種以其它作者之前使用的記分標準[Raynaud，J.P.，等，(1986).Examen cinique standarisédǎns les broncho-pneumonies infectieusesenzootiques des bovins et essais de medicaments-methodologie etinterprétation statistique.Proceedings of XIVth World Congress onCattle Diseases.Dublin 26-29August pp435-439；Deleforge(1992)supra]為基礎的記分方法。
根據以前提到的作者們所描述的記分系統，臨床指數(Cl)高于1.1等同于中度或重度疾病情況。另一方面，Cl等于或低于1.1等同于沒有疾病或難以察覺的疾病情況Cl≤1.1 }沒有或難以察覺的疾病1.1＜Cl＜2 }中度疾病情況Cl≥2}重度疾病情況此參數用于研究此研究的主要變量，治療末期(第4天)的“臨床效果”，按以下分類的兩種標準陽性評估＝治療成功(Cl≤1.1)，和陰性評估＝治療失敗(Cl＞1.1)。
體溫測量在第1-4天早晨對每頭動物每天測量該參數。該參數對應于本研究的二級變量之一。
動物體重的測量在第1天(基線)、第4天、第10天記錄每頭動物的體重，使用特別為大體重動物設計的稱(EziWeight-1/TRU-TEST)。
對有可能的復發的監控最后，在治療時程結束后7天內(第4-10天)，控制有可能發生的復發(圖1)。
1.3治療1.3.1產品特性1.3.1.1抗生素NUFLOR藥物形式 注射液組成100ml 氟苯尼考30g輔料適量制造商 Schering-Plough，S.A.
1.3.1.2研究的產品EV溶液藥物形式 口服液組成100ml 酮洛芬3g(實施例1)輔料適量制造商 Laboratorios Dr.Esteve，S.A.
安慰劑藥物形式 口服液組成100ml 輔料適量(實施例1)制造商 Laboratorios Dr.Esteve，S.A.
1.3.2劑量、治療方案以及給藥途徑1.3.2.1抗生素通過向頸部肌肉的肌內注射，向兩組(A和B)都給予制造商推薦劑量的抗生素制品。治療由2個劑量組成，以48小時的間隔(第1天和第3天)給予。
1.3.2.2研究的產品組A動物接受平均劑量為1ml的溶液EV/10kg活體重(相當于3mg酮洛芬/kg/天)。組B動物接受平均劑量為1ml安慰劑/10kg/天。所有產品都溶入飲用水中口服給藥，連續3天每日給藥(第1、2和3天)。
1.4統計方法將兩組中臨床指數的平均值以及圖譜、溫度和體重用Student′s t-檢驗進行比較，當不能達到常態標準時，使用Mann-Whitney檢驗。
使用Pearson′s Chi-squared統計學檢驗，通過比較每治療組中被評估為陽性(成功)的治療以及被評估為陰性(失敗)的那些治療的百分比，來研究主要研究變量“治療效果”。
2.結果與討論盡管兩組的臨床指數的平均基線值都十分相似，在治療的第二天(D2)進行的對照期間，組A(EV溶液治療組)的該值比組B(安慰劑治療組)要顯著低得多，并保持到治療結束(表2)。另一方面，在治療的第二天(D2)前，組A的平均臨床指數低于或等于1.1(等同于低或難以發現的疾病狀態)，組B中該指數仍然保持高于該值直至第3天(表2，圖2)。
表2治療期間每一組臨床指數的平均值±標準偏差
NS＝兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)。
以上結果表明，疾病癥狀在組A動物中消失得比組B動物要早，根據第4天的臨床指數的平均值來看，B組動物在第4天此時并沒有完全治愈(圖2)。
根據該擬案，使用第4天對照組中每一動物所呈現的臨床指數，臨床研究者評估了每一種治療的效果(主要變量)，只認為那些臨床指數降低到低于或等于1.1(低或難以察覺的疾病情況)的動物是被成功治療的。該評估的結果詳細記錄于表3中。
表3兩組動物中每一組治療被評估為成功或失敗的動物的百分比
*Chi-squared檢驗＝17.699，自由度為1。統計效力＝99.4％如表3中所示，用EV溶液治療的組中治療成功的動物百分比顯著高于用安慰劑治療的組。這些百分比之間的差距為12％，顯著的臨床關聯性的圖顯示，安慰劑組預言的成功百分比約為85％，正如實際發生的。
根據此結果，與單獨使用抗生素進行該疾病治療相比，在飲用水中給予EV溶液作為BRD抗生素治療的輔助治療具有有利的治療性效果。
如表4與圖3中可以觀察到的，盡管兩組的平均基線體溫十分相似，在治療的第二天，組A該值比組B要顯著低得多，并保持較低的值直至治療結束。
表4治療期間每組的直腸溫度的平均值±標準偏差
NS＝兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)。
如圖3所觀察到的，組A中體溫的下降是很顯著的且主要發生在治療的第一天。相反，在組B中，溫度下降沒有組A顯著，且逐漸發生在治療的3天。
盡管這些動物接受安慰劑組B所經歷的溫度的逐漸下降可以解釋為抗菌劑的治療效果，通過減少細菌負荷，也減少作為對感染的一種應由生物體觸發的發熱反應。
在治療結束10天之內，被研究者評估為治療成功的多個治療組中任一動物沒有再出現BRD的臨床癥狀。
3.結論從此研究中得到的結果，可以得出如下結論連續3天在飲用水中口服給予EV溶液，劑量為1ml/10kg活體重(等價于3mg/kg活性成分，酮洛芬)，用于牛呼吸疾病(BRD)抗生素治療的補充，能快速減輕臨床癥狀，并且在治療結束時治愈的動物百分比顯著高于只接受抗菌劑的動物。
實施例3口服給予在泌乳動物用人造奶中作為泌乳小牛呼吸疾病的抗菌劑治療的補充的酮洛芬水性溶液的臨床效果的研究進行該臨床研究以評估EV溶液，3％酮洛芬水性溶液(實施例1)的臨床效果，在其在泌乳動物用人造奶(牛奶替代品)中口服給予之后，作為泌乳小牛群的抗菌劑治療牛呼吸疾病(BRD)的輔助治療。
為此，使用一種對照多中心研究[此項研究中包括的動物被分成兩組，一組接受以抗生素+EV溶液為基礎的治療，另一組接受以抗生素+安慰劑(EV溶液的輔料)為基礎的治療，因此，作為一種陰性對照]，它是隨機且盲的，遵循良好臨床試驗GCP原則。
1.材料和方法1.1動物在研究中總共188頭不同品種和性別的泌乳牛。根據選擇標準，在選入時所有的牛都呈現與中度或重度BRD相符合的臨床特征。
1.2試驗設計此試驗的試驗設計與實施例2第1.2節中所描述的相同。
1.3治療1.3.1產品特性抗生素，NUFLOR(Florfenicol)和研究產品(EV溶液與安慰劑)都是與實施例2中所描述的研究中使用的那些相同，其特性描述于實施例2的第1.3.1節中。制備EV溶液和安慰劑使其具有相同的外觀以保證研究的盲性。
1.3.2劑量、治療方案及給藥途徑1.3.2.1抗生素根據已建立的擬案，按照制造商推薦的劑量，將抗生素制劑通過頸部肌肉的肌內注射給予所有的動物(組A和組B)。治療由2個劑量組成，以48小時的間隔(第1和第3天)給予。
1.3.2.2研究產品除了抗生素，組A中的動物還接受平均劑量1ml EV溶液/10kg活體重(等價于3mg酮洛芬/kg/天)，組B中的動物接受平均劑量1ml安慰劑/10kg/天。所有產品都混合在牛奶替代品中通過口服給予，每日給藥，持續3天(第1、2和3天)。
1.4統計分析如實施例2的1.4節中所描述的那樣，進行同樣的統計學分析。
2.結果和討論盡管兩組的由以前描述的參數計算的臨床指數的平均基線值幾乎一致，在第2個治療日進行的對照中，組A(EV溶液治療組)的該值比組B(安慰劑治療組)要顯著低得多，并保持這種狀態到治療結束(表5)。
表5治療期間每一組的臨床指數的平均值±標準偏差
NS＝在兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)另一方面，在治療的第三天(D3)，組A的平均臨床指數低于1.1(等同于低或難以發現的疾病狀態)，組B中該指數在第4天前仍然高于該值直至第3天(表5，圖4)。
以上結果顯示，所述疾病癥狀在組A動物消失早于組B。然而，在治療結束時(第4天)，幾乎所有在兩組中的動物都治愈(圖4)。
如表6和圖5中所觀察到的，盡管兩組的平均基礎體溫非常相似，在治療的第二天，組A的體溫顯著的低于組B，此現象保持到治療結束。
表6治療期間每組中直腸溫度的平均值±標準偏差
NS＝在兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)正如圖5中所觀察的，組A的溫度有顯著降低，主要是在治療第一天。
盡管接受了安慰劑，組B溫度的逐漸下降可解釋為抗菌劑的治療作用，其減少了細菌負荷，從而減輕了作為對感染的反應由生物體觸發的發熱反應。
從表7中可以觀察到，在第4天兩個動物組的平均體重沒有顯著的差別。然而，在第10天，組A動物的平均重量顯著高于組B動物的平均體重，這顯示，在用EV溶液治療的動物中臨床狀態有了很大的改善。另一方面，組A體重平均值增加(8.55±1.18kg)(由第10天和第1天之間的體重差別計算得到)也同樣顯著高于組B(其值為7.50±1.40kg)(p＜0.001)。
表7第1、4和10天的動物體重的平均值±標準偏差
NS＝在兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)在治療后10天內，在被研究人員認為是治療成功的每個治療組中的任一動物身上不再出現BRD臨床癥狀。
3.結論本試驗中得到的結果顯示，口服給予混合于牛奶替代品中的EV溶液，劑量為1ml/10kg活體重(等價于3mg/kg活性成分，酮洛芬)持續3天，作為泌乳牛BRD抗菌劑治療的輔助，可以顯著地幫助減輕癥狀并能加速動物康復。
因此，可以得出結論，作為泌乳牛的呼吸疾病的抗菌劑治療的輔助治療，EV溶液可呈現良好的臨床效果。
實施例4溶于飲用水中進行口服給藥以輔助豬呼吸系統疾病綜合征的抗菌劑治療的酮洛芬的水性溶液的臨床效果的研究進行臨床研究意在評估3％酮洛芬的EV溶液(實施例1)的臨床效果，在其在飲用水中口服給藥作為正在養肥的豬群的豬呼吸系統疾病綜合征(PRDC)抗生素治療的輔助治療。
1.材料和方法1.1動物在選擇豬圍欄之前，需確認其中暴發了PRDC。此項診斷通過對圍欄中發現死亡的豬取其肺、淋巴節和胸腺的樣本進行尸檢而得以完成。如果在研究起初沒有動物死亡，需處死臨床情況最差的動物。在選擇一個豬圈圍欄后，選擇符合以下標準的動物；-處于養肥階段的并被診斷患PRDC發作，直腸溫度超過39.5℃的豬；-在選擇前7天內沒有接受過抗菌劑或抗炎劑藥物的動物。
在研究開始，標記動物被分成兩組組A和組B，每組具有相近數量的動物。
在研究期間，所有的動物接受標準的養肥階段的豬飼料，和自動飲用裝置中的飲用水，該裝置通過計量儀連接在特殊的藥物制劑水箱上。
1.2治療1.2.1產品的特性1.2.1.1抗生素ALSIR5％藥物形式注射液組成每ml恩氟沙星50mg輔料適量制造商 ESTEVE VETERINARIA Lab.
Dr.ESTEVE.S.A.
1.2.1.2評價的產品(A和B)安慰劑(產品A)藥物形式 口服液組成100ml輔料適量(實施例1)制造商 Laboratorios Dr.ESTEVE.S.A.
EV溶液(產品B)藥物形式 口服液組成100ml酮洛芬3g(實施例1)輔料適量制造商 Laboratorios Dr.ESTEVE.S.A.
1.2.2劑量、治療方案和給藥途徑1.2.2.1抗生素按照制造商推薦的劑量和治療方案通過肌內途徑給予抗生素產品。治療時程為3天(第1、2和3天)。
1.2.2.2評價的產品(A和B)兩種產品按照以下的劑量和給藥方案在飲用水中口服給藥1ml的產品A或B/10kg活體重(在治療組中等價于3mg酮洛芬/kg活體重/天。治療時程為3天(第1、2和3天)。
1.3試驗設計在選擇了豬圈圍欄后，所有的標記動物通過肌內途徑接受恩氟沙星抗生素治療。被分到治療組之一的來自圍欄的動物還接受加在飲用水中的EV溶液的口服治療，被分在另一組的那些通過相同途徑給予安慰劑(溶液輔料)。
總的研究時程為4天。在開始的3天(第1、2和3天)給予治療。動物的臨床監控從治療開始(第一天)至結束(第四天)。在研究期間，在每天早晨進行四項臨床對照對照第1、2和3天用抗生素+產品A或B的治療期間(在治療開始之前進行對照D1，并可作為基準對照)。
對照第4天在治療結束在每一對照中測量幾個個體和組參數。
1.3.1個體參數臨床指數此參數在對照第1、2、3和第4天中測量。此參數通過以先前描述的記分標準為基礎的標準計算[Raynaud(1986)，Deleforge(1992)，cited supra].此參數用于測量主要變量(第3.3.1節)。
體溫此參數(℃)在對照第1、2、3和4天期間測量。
重量此參數(kg)在對照第1和4天測量。
1.3.2集體參數圍欄的一般狀態根據以下標度以序數計分，在第1至4天對照中每天測量該參數，并一起評估動物組。
攝入飼料此參數與每組動物消耗的飼料總量相對應。
死亡率此參數與試驗期間每組估計的死亡數量相當。
1.3.3研究變量的測量1.3.3.1主要變量主要的研究變量可以定義為“臨床指數的降低”(RCI)。
1.3.3.2次要變量直腸溫度此變量與每一對照中測量并記錄的溫度參數值一致。
增加體重(W1)此變量通過應用以下公式估計W1平均值(標記動物)(重量D4-重量D1)1.4統計分析主要的研究變量“臨床指數”通過Student′s T檢驗進行分析，該檢驗認為顯著水平為a＝0.05，強度為80％。
次要變量“溫度”和“重量”通過反復測量的ANOVA檢驗分析，該顯著水平為a＝0.05，強度為80％。
在研究期間所測量的其它參數則通過描述性的統計技術進行分析。
2.結果和討論與直腸溫度參數相對應的結果示于表8和圖6中表8直腸溫度參數
NS＝在兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)如表8和圖6中所觀察的，盡管兩組的體溫的平均基礎值很相似，然而在治療第2天，組B(EV溶液)中的溫度要顯著低于組A(安慰劑)的值。相似的，從圖6中可以看出，組B中體溫的降低很顯著且主要發生在治療的第一天。相反組A的此種下降，除了沒有組B明顯之外，在治療期間逐漸下降。
關于臨床指數的進展所得的結果編輯在表9和圖7中表9臨床指數的進展
NS＝在兩組之間沒有統計學顯著差別(p＞0.05)從表9和圖7中可見，用EV溶液治療的組中的治療成功的動物百分比顯著高于用安慰劑治療的組。
3.結論根據上述結果，EV溶液放在飲用水中作為一種PRDC抗菌劑治療的輔助治療，與單獨使用抗生素治療此疾病相比，顯示了有利的治療效果。
可以說，在此研究結果的基礎上，EV溶液作為正在養肥的豬的豬呼吸系統疾病綜合征的抗菌劑治療的輔助治療有良好的臨床效果。
在本研究所得的結果中可以推斷出，EV溶液在飲用水中口服給藥，以1ml/10kg活體重(等價于3mg/kg活性成分，酮洛芬)的劑量連續給予3天，作為正在養肥的豬的豬呼吸系統疾病綜合征的抗菌劑治療(PRDC)的輔助治療，導致臨床癥狀的恢復速度加快，且作為正在養肥的豬的PRDC抗菌劑治療的輔助治療此EV溶液顯示了良好的臨床效果。
權利要求
1.補充了酮洛芬的含有動物用飲用水或泌乳動物用人造奶的飲用制劑。
2.權利要求1的飲用制劑，包含足以向攝取此制劑的動物提供治療有效量的量的酮洛芬。
3.權利要求2的飲用制劑，包含足以向攝取此制劑的動物提供1-5mg酮洛芬/kg動物活體重/天的量的酮洛芬(1-5mg/kg/天的酮洛芬)。
4.獲得權利要求1-3任一項的補充了酮洛芬的飲用制劑的方法，包括將酮洛芬水性溶液與動物用飲用水或泌乳動物用人造奶混合。
5.權利要求4的方法，其中，酮洛芬在所述酮洛芬水性溶液中的濃度為1％-15％(w/v)。
6.權利要求4的方法，其中，所述水性溶液包含共溶劑。
7.權利要求6的方法，其中，所述共溶劑選自聚乙二醇400和1-甲基-2-吡咯烷酮。
8.權利要求4的方法，其中，所述水性溶液包含能與酮洛芬就地成鹽并增加酮洛芬溶解度的堿性氨基酸。
9.權利要求8的方法，其中，所述堿性氨基酸選自L-賴氨酸和L-精氨酸。
10.權利要求4的方法，其中，所述水性溶液包含一種或多種獸醫學可接受的添加劑，該添加劑選自濕潤劑、pH調節劑、防腐劑以及它們的組合。
11.權利要求10的方法，其中，所述濕潤劑是聚山梨酯或泊洛沙姆。
12.權利要求10的方法，其中，所述pH調節劑是一種酸性或堿性的化合物，它為酮洛芬水性溶液提供5.5與7.0之間的pH。
13.權利要求10的方法，其中，所述防腐劑是苯甲醇或對羥基苯甲酸酯。
14.權利要求4的方法，其中，所述酮洛芬水性溶液具有以下的組成成分酮洛芬 1-15％(W/V)L-精氨酸 2-30％(W/V)苯甲醇 0.5-3％無水檸檬酸適量 pH5.5-7.0純凈水適量 100％
15.權利要求4的方法，其中，所述酮洛芬水性溶液具有以下的組成成分酮洛芬 1-5％(W/V)L-精氨酸 2-8％(W/V)苯甲醇 0.5-2.5％無水檸檬酸適量 pH6-7純凈水適量 100％
16.酮洛芬水性溶液在獲得用于口服同時治療一群動物的引起發熱、炎癥和/或疼痛狀況的如權利要求1-3任一項的飲用制劑中的應用。
17.權利要求16的應用，其中，酮洛芬在該酮洛芬水性溶液中的濃度為1-15％(w/v)。
18.權利要求16的應用，其中，所述水性溶液包含共溶劑。
19.權利要求18的應用，其中，所述共溶劑選自聚乙二醇400和1-甲基-2-吡咯烷酮。
20.權利要求16的應用，其中，所述水性溶液包括能與酮洛芬就地成鹽并可增加酮洛芬溶解度的堿性氨基酸。
21.權利要求20的應用，其中，所述堿性氨基酸選自L-賴氨酸和L-精氨酸。
22.權利要求16的應用，其中，所述水性溶液中含有一種或多種獸醫學可接受的添加劑，該添加劑選自濕潤劑、pH調節劑、防腐劑以及它們的組合。
23.權利要求22的應用，其中，所述濕潤劑是聚山梨酯或泊洛沙姆。
24.權利要求22的應用，其中，所述pH調節劑是一種酸性或堿性的，為酮洛芬水性溶液提供5.5與7.0之間的pH的化合物。
25.權利要求22的應用，其中，所述防腐劑是苯甲醇或對羥基苯甲酸酯。
26.權利要求16的應用，其中，所述酮洛芬水性溶液具有以下組成成分酮洛芬1-15％(W/V)L-精氨酸 2-30％(W/V)苯甲醇0.5-3％無水檸檬酸適量pH5.5-7.0純凈水適量100％
27.權利要求16的應用，其中，所述酮洛芬水性溶液具有以下組成成分酮洛芬1-5％(W/V)L-精氨酸 2-8％(W/V)苯甲醇0.5-2.5％無水檸檬酸適量pH6-7純凈水適量100％
全文摘要
補充有酮洛芬的并含有動物用飲用水或泌乳動物用人造奶的飲用制劑，該飲用制劑可用于口服并同時治療一群動物引起發熱、炎癥和或疼痛的狀況。
文檔編號A61P29/00GK1738612SQ02827333
公開日2006年2月22日 申請日期2002年12月11日 優先權日2001年12月11日
發明者J·胡邁德斯貝蓋, P·J·索拉納斯伊巴拉, A·洛佩斯卡夫雷拉, J·利斯卡諾加西亞 申請人:埃斯蒂文博士實驗室股份有限公司