一種mdck細胞全懸浮培養的無血清培養基的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，所述MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基中，包含有氨基酸部分，維生素部分，無機鹽部分和其他添加物部分。本發明的有益效果為：本發明提供的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，該培養基培養細胞密度高，成分明確，不含動物血清，有利于下游產品的純化，提高產品品質，且配制和使用方便，適用于流感疫苗和禽流感疫苗的規模化生產。
【專利說明】—種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種無血清培養基，具體涉及一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基。
【背景技術】
[0002]MDCK 細胞(Madin-Darby canine kidney cells,MDCK)由 Madin 和 Darby 于 1958年從美國Cocker Spaniel母曲架犬的腎臟組織分離培養的。MDCK細胞目前廣泛運用于多種病毒的擴增和純化，如呼腸孤病毒、腺病毒、犬細小病毒、貓粒細胞缺少癥病毒及禽流感病毒等，由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易變異，MDCK細胞系被公認為是最適于甲、乙型流感病毒疫苗生產的3種細胞系之一。
[0003]我國目前流感疫苗(包括人用流感疫苗、動物流感疫苗)均采用雞胚法生產，該工藝存在周期長、操作繁瑣、工作量大以及很容易產品和環境污染等缺陷。隨著生物制品質量安全性標準的提高和動物細胞生物反應器高密度培養技術的推廣應用，研究和生產MDCK細胞培養的流感疫苗具有廣泛的應用前景。生物反應器高密度培養工藝中細胞全懸浮培養比細胞載體培養更具優勢，主要表現在全懸浮培養可用無血清培養基，降低了生產成本，提高了下游產品的生物安全性；第二全懸浮培養規模可線性放大，國際上細胞生物反應器全懸浮培養的規模可達20000L/罐，國內已生產和運用的細胞生物反應器全懸浮培養的規模可達3000L/罐，但是細胞生物反應器載體培養的規模國內外最大的也超不過200L。目前國內還沒有商品化的MDCK細胞無血清培養基。

【發明內容】

[0004]本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種低成本、成分明確的適用于MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基。
[0005]為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為:一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，所述MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基中，各原料物質的終濃度為:
氨基酸部分:
L-丙氨酸100-120 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽120-200 mg/L,
L-天冬酰胺5-10 mg/L,
L-天冬氨酸65-80 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 10-45 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽25-50 mg/L,
L-谷氨酸45-72 mg/L,
L-谷氨酰胺300-405 mg/L,
甘氨酸70-85 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽110-155 mg/L，L-異亮氨酸142-180 mg/L,
L-亮氨酸150-180 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽150-250 mg/L,
L-蛋氨酸45-80 mg/L,
L-苯丙氨酸130-155 mg/L,
L-脯氨酸30-72 mg/L,
L-絲氨酸55-80 mg/L,
L-蘇氨酸150-200 mg/L,
L-色氨酸190-250 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽50-90 mg/L,
L-纈氨酸150-200 mg/L`,
維生素部分:
生物素0.001-0.005 mg/L,(國藥試劑，67000260)，
氯化膽堿5-15 mg/L,
D-泛酸?丐2-5 mg/L,
葉酸2-5 mg/L,
煙酰胺2-5 mg/L,
鹽酸批B多醇2-5 mg/L,
核黃素0.1-0.5 mg/L,
鹽酸硫胺素0.1-0.5 mg/L,
肌醇5-20 mg/L,
B12 維生素0.5-1.0 mg/L,
無機鹽部分:
無水氯化1丐70-120 mg/L,
氯化鉀200-350 mg/L,
氯化鎂20-40 mg/L,
無水硫酸鎂30-50 mg/L,
氯化鈉5000-8000 mg/L,
磷酸二氫鈉50-76 mg/L,
磷酸氫二鈉50-76 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.1-0.5 mg/L,
九水硝酸鐵0.01-0.1 mg/L,
七水硫酸鋅0.1-0.5 mg/L,
硅酸鈉0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖1000-5000 mg/L,
丙酮酸鈉100-150 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸鹽1-5 mg/L,
亞油酸0.01-0.1 mg/L,鞘磷脂0.5-1.2 mg/L,
大豆卵磷脂5-10 mg/L,
膽固醇2-5 mg/L,
硫辛酸0.1-0.5 mg/L,
1-甲基組氨酸1-5 mg/L,
3-甲基組氨酸1-5 mg/L,
牛磺酸50-70 mg/L,
胸苷0.1-0.5 mg/L,
腺嘌呤1-5 mg/L,
胸腺嘧啶0.01-0.1 mg/L,
腐胺0.01-0.1 mg/L,
重組胰島素5-20 mg/L，(通化東寶，Lot:LN09040`024)，
轉鐵蛋白5-20 mg/L, (SIGMA, T-3309)，
植物蛋白1000-5000 mg/L, (KERRY, 5X99023),
酵母粉200-2000 mg/L,` EGF 上皮生長因子0.1-0.5 mg/L, (PEPROTECH, AF-100-15)，
碘甲狀腺原氨酸0.001-0.005 mg/L, (SIGMA, T-6397)，
PF-68 抗剪切劑100-400 mg/L, (GIBCO, 9-5080IP),
Ant1-Clumping 細胞分散因子 100-400 mg/L, (Invitrigen Corporation, 725230),將所有物質以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氫鈉，再用IN氫氧化鈉或IN鹽酸調pH值至7.1-7.3。
[0006]進一步的，上述的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，所述MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基中，各原料物質的終濃度為:
氨基酸部分:
L-丙氨酸115.5 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽147.5 mg/L,
L-天冬酰胺7.5 mg/L,
L-天冬氨酸75.65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 17.56 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽31.29 mg/L,
L-谷氨酸50.35 mg/L,
L-谷氨酰胺365 mg/L,
甘氨酸78.75 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽131.48mg/L，
L-異亮氨酸154.47 mg/L,
L-亮氨酸159.05 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽191.25 mg/L,
L-蛋氨酸67.24 mg/L,
L-苯丙氨酸135.48 mg/L,L-脯氨酸47.25 mg/L,
L-絲氨酸76.25 mg/L,
L-蘇氨酸153.45 mg/L,
L-色氨酸209.02 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽55.79 mg/L,
L-繳氨酸152.85 mg/L,
維生素部分:
生物素0.0035 mg/L，(國藥試劑，67000260)，
氯化膽堿8.98 mg/L,
D-泛酸|丐2.24 mg/L,
葉酸2.65 mg/L,
煙酰胺2.02 mg/L,
鹽酸吡哆醇2.03 mg/L,
核黃素0.22 mg/L,
鹽酸硫胺素0.2 mg/L,
肌醇12.6 mg/L,
B12 維生素0.68 mg/L,
無機鹽部分:
無水氯化1丐116.69 mg/L,
氯化鉀311.8 mg/L,
氯化鎂28.64 mg/L,
無水硫酸鎂48.84 mg/L,
氯化鈉6995.5 mg/L,
磷酸二氫鈉62.5 mg/L,
磷酸氫二鈉71.02 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.42 mg/L,
九水硝酸鐵0.05 mg/L,
七水硫酸鋅0.432 mg/L,
娃酸鈉0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖4500 mg/L,
丙酮酸鈉110 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸鹽2.67 mg/L,
亞油酸0.084 mg/L,
鞘磷脂I mg/L，
大豆卵磷脂6 mg/L,
膽固醇2.9 mg/L,
硫辛酸0.1 mg/L,
1-甲基組氨酸I mg/L，3-甲基組氨酸I mg/L,
牛磺酸50 mg/L,
胸苷0.365 mg/L,
腺嘌呤4 mg/L,
胸腺嘧啶0.04 mg/L,
腐胺0.081 mg/L,
重組胰島素10 mg/L,
轉鐵蛋白10 mg/L,
植物蛋白3000 mg/L,
酵母粉1000 mg/L,
EGF上皮生長因子0.2 mg/L,
碘甲狀腺原氨酸0.0034 mg/L，
PF-68 抗剪切劑300 mg/L,
Ant1-Clumping 細胞分散因子 200 mg/L,
將所有物質以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氫鈉，再用IN氫氧化鈉或IN鹽酸調PH值至7.1-7.3
進一步的，上述的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，將所述原料物質根據其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于10°C -30°C混合，使各原料物質終濃度如上所述，調節所得混合液的PH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基。
[0007]進一步的，上述的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，將所述原料物質混合后磨成細粉，然后將所得細粉于10°c -30°c蒸餾水中溶解，使各原料物質終濃度如上所述，調節所得混合液的PH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基。
[0008]本發明的有益效果為:本發明提供的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，該培養基培養細胞密度高，成分明確，不含動物血清，有利于下游產品的純化，提高產品品質，且配制和使用方便，適用于流感疫苗和禽流感疫苗的規模化生產。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1為本發明提供的MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基與現有市售產品針對細胞密度和細胞活力的對比效果示意圖。
【具體實施方式】
[0010]實施例1:
一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，原料物質根據其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于25.9°C混合，使各原料物質終濃度如上所述，調節所得混合液的pH值至7.22，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其中，各原料物質的終濃度為:氨基酸部分:
L-丙氨酸100 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽120 mg/L,
L-天冬酰胺5 mg/L,L-天冬氨酸65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 10 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽25 mg/L,
L-谷氨酸45 mg/L,
L-谷氨酰胺300 mg/L,
甘氨酸70 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽110 mg/L，
L-異亮氨酸142 mg/L,
L-亮氨酸150 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽150 mg/L,
L-蛋氨酸45 mg/L,
L-苯丙氨酸130 mg/L,
L-脯氨酸30 mg/L,
L-絲氨酸55 mg/L,
L-蘇氨酸150 mg/L,
L-色氨酸190 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽50 mg/L,
L-繳氨酸150 mg/L,
維生素部分:
生物素0.001 mg/L，(國藥試劑，67000260)，
氯化膽堿5 mg/L,
D-泛酸|丐2 mg/L,
葉酸2 mg/L,
煙酰胺2 mg/L,
鹽酸吡哆醇2 mg/L,
核黃素0.1 mg/L,
鹽酸硫胺素0.1 mg/L,
肌醇5 mg/L,
B12 維生素0.5 mg/L,
無機鹽部分:
無水氯化70 mg/L,
氯化鉀200 mg/L,
氯化鎂20 mg/L,
無水硫酸鎂30 mg/L,
氯化鈉5000 mg/L,
磷酸二氫鈉50 mg/L,
磷酸氫二鈉50 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.1 mg/L,
九水硝酸鐵0.01 mg/L,七水硫酸鋅0.1 mg/L,
娃酸鈉0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖1000 mg/L,
丙酮酸鈉100 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸鹽1 mg/L，
亞油酸0.01 mg/L,
鞘磷脂0.5 mg/L,
大豆卵磷脂5 mg/L,
膽固醇2 mg/L,
硫辛酸0.1 mg/L,
1-甲基組氨酸1 mg/L，
3-甲基組氨酸1 mg/L,
牛磺酸50 mg/L,
胸苷0.1 mg/L,
腺嘌呤1mg/L，
胸腺嘧啶0.01 mg/L,
腐胺0.01 mg/L,
重組胰島素5 mg/L,(通化東寶，Lot:LN09040024)，
轉鐵蛋白5 mg/L，(SIGMA, T-3309)，
植物蛋白1000 mg/L, (KERRY, 5X99023)，
酵母粉200 mg/L,
EGF 上皮生長因子0.1 mg/L, (PEPROTECH, AF-100-15),
碘甲狀腺原氨酸0.001 mg/L, (SIGMA, T-6397),
PF-68 抗剪切劑100 mg/L, (GIBCO, 89-5080IP),
Ant1-Clumping 細胞分散因子 100 mg/L, (Invitrigen Corporation, 725230)。
[0011]實施例2:
一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，原料物質根據其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于25.1°C混合，使各原料物質終濃度如上所述，調節所得混合液的pH值至7.12，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其中，各原料物質的終濃度為:氨基酸部分:
L-丙氨酸120 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽200 mg/L,
L-天冬酰胺10 mg/L,
L-天冬氨酸80 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 45 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽50 mg/L,
L-谷氨酸72 mg/L,
L-谷氨酰胺405 mg/L,甘氨酸85 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽155 mg/L,
L-異亮氨酸180 mg/L,
L-亮氨酸180 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽250 mg/L,
L-蛋氨酸80 mg/L,
L-苯丙氨酸155 mg/L,
L-脯氨酸72 mg/L,
L-絲氨酸80 mg/L,
L-蘇氨酸200 mg/L,
L-色氨酸250 mg/L, L-酪氨酸二鈉鹽90 mg/L,
L-繳氨酸200 mg/L,
維生素部分:
生物素0.003 mg/L,(國藥試劑，67000260),
氯化膽堿15 mg/L,
D-泛酸|丐5 mg/L,
葉酸5 mg/L,
煙酰胺5 mg/L,
鹽酸批B多醇5 mg/L,
核黃素0.5 mg/L,
鹽酸硫胺素0.5 mg/L,
肌醇20 mg/L,
B12 維生素1.0 mg/L,
無機鹽部分:
無水氯化120 mg/L,
氯化鉀350 mg/L,
氯化鎂40 mg/L,
無水硫酸鎂50 mg/L,
氯化鈉8000 mg/L,
磷酸二氫鈉76 mg/L,
磷酸氫二鈉76 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.5 mg/L,
九水硝酸鐵0.1 mg/L,
七水硫酸鋅0.5 mg/L,
娃酸鈉0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖5000 mg/L,
丙酮酸鈉150 mg/L,磷酸烯醇丙酮酸鹽5 mg/L,
亞油酸0.1 mg/L,
鞘磷脂1.2 mg/L,
大豆卵磷脂10 mg/L,
膽固醇5 mg/L,
硫辛酸0.5 mg/L,
1-甲基組氨酸5 mg/L,
3-甲基組氨酸5 mg/L,
牛磺酸70 mg/L,
胸苷0.5 mg/L,
腺嘌呤5 mg/L,
胸腺嘧啶0.1 mg/L,
腐胺0.1 mg/L,
重組胰島素20 mg/L，(通化東寶Lot:LN09040024)，
轉鐵蛋白20 mg/L，(SIGMA, T-3309)，
植物蛋白5000 mg/L，(KERRY, 5X99023)，
酵母粉2000 mg/L,
EGF 上皮生長因子0.5 mg/L, (PEPROTECH, AF-100-15),
碘甲狀腺原氨酸0.005 mg/L, (SIGMA, T-6397)
PF-68 抗剪切劑400 mg/L, (GIBCO, 89-5080IP),
Ant1-Clumping 細胞分散因子 400 m g/L, (Invitrigen Corporation, 725230)。
[0012]實施例3:
一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，將原料物質混合后磨成細粉，然后將所得細粉于28.6°C蒸餾水中溶解，使各原料物質終濃度如上所述，調節所得混合液的pH值至
7.13，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其中，各原料物質的終濃度為: 氨基酸部分:
L-丙氨酸115.5 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽147.5 mg/L,
L-天冬酰胺7.5 mg/L,
L-天冬氨酸75.65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 17.56 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽31.29 mg/L,
L-谷氨酸50.35 mg/L,
L-谷氨酰胺365 mg/L,
甘氨酸78.75 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽131.48mg/L，
L-異亮氨酸154.47 mg/L,
L-亮氨酸159.05 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽191.25 mg/L,L-蛋氨酸67.24 mg/L,
L-苯丙氨酸135.48 mg/L,
L-脯氨酸47.25 mg/L,
L-絲氨酸76.25 mg/L,
L-蘇氨酸153.45 mg/L,
L-色氨酸209.02 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽55.79 mg/L,
L-繳氨酸152.85 mg/L,
維生素部分:
生物素0.0035 mg/L，(國藥試劑，67000260)，
氯化膽堿8.98 mg/L,
D-泛酸|丐2.24 mg/L,
葉酸2.65 mg/L,
`煙酰胺2.02 mg/L,
鹽酸吡哆醇2.03 mg/L,
核黃素0.22 mg/L,
鹽酸硫胺素0.2 mg/L,
肌醇12.6 mg/L,
B12 維生素0.68 mg/L,
無機鹽部分:
無水氯化1丐116.69 mg/L,
氯化鉀311.8 mg/L,
氯化鎂28.64 mg/L,
無水硫酸鎂48.84 mg/L,
氯化鈉6995.5 mg/L,
磷酸二氫鈉62.5 mg/L,
磷酸氫二鈉71.02 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.42 mg/L,
九水硝酸鐵0.05 mg/L,
七水硫酸鋅0.432 mg/L,
娃酸鈉0.061 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖4500 mg/L,
丙酮酸鈉110 mg/L,
磷酸烯醇丙酮酸鹽2.67 mg/L,
亞油酸0.084 mg/L,
鞘磷脂I mg/L，
大豆卵磷脂6 mg/L,
膽固醇2.9 mg/L,硫辛酸0.1 mg/L,
1-甲基組氨酸I mg/L，
3-甲基組氨酸I mg/L,
牛磺酸50 mg/L,
胸苷0.365 mg/L,
腺嘌呤4 mg/L,
胸腺嘧啶0.04 mg/L,
腐胺0.081 mg/L,
重組胰島素10 mg/L,
轉鐵蛋白10 mg/L,
植物蛋白3000 mg/L,
酵母粉1000 mg/L,
EGF上皮生長因子0.2 mg/L,
碘甲狀腺原氨酸0.0034 mg/L，
PF-68 抗剪切劑300 mg/L, (GIBCO, 89-5080IP),
Ant1-Clumping 細胞分散因子 200 mg/L, (Invitrigen Corporation, 725230)。
[0013]培養驗證過程:
1、儀器設備:
生物反應器，型號:B10STATE0R B plus (德國Sartorius)，培養罐體積5L。
[0014]2、細胞:
全懸浮型MDCK細胞，由甘肅省動物細胞工程技術研究中心提供。
[0015]3、培養方法:
將全懸浮培養型MDCK細胞以5.0X105/ml接種到生物反應器中，反應器參數設置為:溫度37°C，轉速110rpm/min，溶氧60%，pH7.2。接通空氣、氧氣、氮氣和二氧化碳四路氣體以及IN氫氧化鈉，每24h取樣計數和檢查細胞活力。
[0016]4、培養結果如表1所不。
[0017]表1
【權利要求】
1.一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其特征在于，所述MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基中，各原料物質的終濃度為: 氨基酸部分: L-丙氨酸100-120 mg/L, L-精氨酸鹽酸鹽120-200 mg/L, L-天冬酰胺5-10 mg/L, L-天冬氨酸65-80 mg/L, L-半胱氨酸一水合物 10-45 mg/L, L-胱氨酸鹽酸鹽25-50 mg/L, L-谷氨酸45-72 mg/L, L-谷氨酰胺300-405 mg/L, 甘氨酸70-85 mg/L, L-組氨酸鹽酸鹽110-155 mg/L， L-異亮氨酸142-180 mg/L,` L-亮氨酸150-180 mg/L, L-賴氨酸鹽酸鹽150-250 mg/L, L-蛋氨酸45-80 mg/L, L-苯丙氨酸130-155 mg/L, L-脯氨酸30-72 mg/L, L-絲氨酸55-80 mg/L, L-蘇氨酸150-200 mg/L, L-色氨酸190-250 mg/L, L-酪氨酸二鈉鹽50-90 mg/L, L-纈氨酸150-200 mg/L, 維生素部分: 生物素0.001-0.005 mg/L, 氯化膽堿5-15 mg/L, D-泛酸?丐2-5 mg/L, 葉酸2-5 mg/L, 煙酰胺2-5 mg/L, 鹽酸批B多醇2-5 mg/L, 核黃素0.1-0.5 mg/L, 鹽酸硫胺素0.1-0.5 mg/L, 肌醇5-20 mg/L, B12 維生素0.5-1.0 mg/L, 無機鹽部分: 無水氯化鈣70-120 mg/L, 氯化鉀200-350 mg/L, 氯化鎂20-40 mg/L,無水硫酸鎂30-50 mg/L, 氯化鈉5000-8000 mg/L, 磷酸二氫鈉50-76 mg/L, 磷酸氫二鈉50-76 mg/L, 七水硫酸亞鐵0.1-0.5 mg/L, 九水硝酸鐵0.01-0.1 mg/L, 七水硫酸鋅0.1-0.5 mg/L, 娃酸鈉0.061 mg/L, 其余添加物部分: D-葡萄糖1000-5000 mg/L, 丙酮酸鈉100-150 mg/L, 磷酸烯醇丙酮酸鹽1-5 mg/L, 亞油酸0.01-0.1 mg/L, 鞘磷脂0.5-1.2 mg/L, 大豆卵磷脂5-10 mg/L, 膽固醇2-5 mg/L, 硫辛酸0.1-0.5 mg/L, 1-甲基組氨酸1-5 mg/L, 3-甲基組氨酸1-5 mg/L, 牛磺酸50-70 mg/L, 胸苷0.1-0.5 mg/L, 腺嘌呤1-5 mg/L, 胸腺嘧啶0.01-0.1 mg/L, 腐胺0.01-0.1 mg/L, 重組胰島素5-20 mg/L, 轉鐵蛋白5-20 mg/L, 植物蛋 白1000-5000 mg/L, 酵母粉200-2000 mg/L, EGF上皮生長因子0.1-0.5 mg/L, 碘甲狀腺原氨酸0.001-0.005 mg/L， PF-68 抗剪切劑100-400 mg/L, Ant1-Clumping 細胞分散因子 100-400 mg/L, 將所用物質均以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氫鈉，并用IN氫氧化鈉或IN鹽酸調pH值至7.1-7.3。
2.根據權利要求1所述的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其特征在于，所述MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基中，各原料物質的終濃度為: 氨基酸部分: L-丙氨酸115.5 mg/L, L-精氨酸鹽酸鹽147.5 mg/L,L-天冬酰胺7.5 mg/L,L-天冬氨酸75.65 mg/L,L-半胱氨酸一水合物 17.56 mg/L,L-胱氨酸鹽酸鹽31.29 mg/L,L-谷氨酸50.35 mg/L,L-谷氨酰胺365 mg/L,甘氨酸78.75 mg/L,L-組氨酸鹽酸鹽131.48mg/L，L-異亮氨酸154.47 mg/L,L-亮氨酸159.05 mg/L,L-賴氨酸鹽酸鹽191.25 mg/L,L-蛋氨酸67.24 mg/L,L-苯丙氨酸135.48 mg/L,L-脯氨酸47.25 mg/L,L-絲氨酸76.25 mg/L,L-蘇氨酸153.45 mg/L,L-色氨酸209.02 mg/L,L-酪氨酸二鈉鹽55.79 mg/L,L-繳氨酸152.85 mg/L,維生素部分:生物素0.0035 mg/L,氯化膽堿8.98 mg/L,D-泛酸|丐2.24 mg/L,葉酸2.65 mg/L,煙酰胺2.02 mg/L,鹽酸吡哆醇2.03 mg/L,核黃素0.22 mg/L,鹽酸硫胺素0.2 mg/L,肌醇12.6 mg/L,B12 維生素0.68 mg/L,無機鹽部分:無水氯化1丐116.69 mg/L,氯化鉀311.8 mg/L,氯化鎂28.64 mg/L,無水硫酸鎂48.84 mg/L,氯化鈉 6995.5 mg/L,磷酸二氫鈉62.5 mg/L,磷酸氫二鈉71.02 mg/L,七水硫酸亞鐵0.42 mg/L,九水硝酸鐵0.05 mg/L, 七水硫酸鋅0.432 mg/L, 娃酸鈉0.061 mg/L, 其余添加物部分: D-葡萄糖4500 mg/L, 丙酮酸鈉110 mg/L, 磷酸烯醇丙酮酸鹽 2.67 mg/L, 亞油酸0.084 mg/L, 鞘磷脂I mg/L， 大豆卵磷脂6 mg/L, 膽固醇2.9 mg/L, 硫辛酸0.1 mg/L, 1-甲基組氨酸I mg/L， 3-甲基組氨酸I mg/L, 牛磺酸50 mg/L, 胸苷0.365 mg/L, 腺嘌呤4 mg/L, 胸腺嘧啶0.04 mg/L, 腐胺0.081 mg/L, 重組胰島素10 mg/L, 轉鐵蛋白10 mg/L, 植物蛋白3000 mg/L, 酵母粉1000 mg/L, EGF上皮生長因子0.2 mg/L, 碘甲狀腺原氨酸0.0034 mg/L， PF-68 抗剪切劑300 mg/L, Ant1-Clumping 細胞分散因子 200 mg/L, 將所有物質以注射用水充分溶解后加入2000mg/L碳酸氫鈉，再用IN氫氧化鈉或IN鹽酸調pH值至7.1-7.3。
3.根據權利要求1或2所述的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其特征在于，將所述原料物質根據其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于10°c -30°c混合，使各原料物質終濃度如權利要求1或2所述，調節所得混合液的pH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基。
4.根據權利要求1或2所述的一種MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基，其特征在于，將所述原料物質混合后磨成細粉，然后將所得細粉于10°C -30°C蒸餾水中溶解，使各原料物質終濃度如權利要求1或2所述，調節所得混合液的pH值至7.1-7.3，定容后即得MDCK細胞全懸浮培養的無血清培養基。
【文檔編號】C12N5/071GK103555659SQ201310553738
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月11日 優先權日:2013年11月11日
【發明者】喬自林, 馬忠仁, 令世鑫, 馮玉萍, 馮若飛, 李明生, 馬祺 申請人:喬自林, 馬忠仁, 令世鑫, 馮玉萍, 馮若飛, 李明生, 馬祺