專利名稱：一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基及其培養方法
技術領域：
本發明涉及生物工程技術領域，特別是涉及提高酶活單位的一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基及其培養方法。
背景技術：
右旋糖酐酶是新的酶種，可以把右旋的糖酐催化分解為葡萄糖或寡糖的酶，是一種蛋白質。右旋糖酐酶在醫藥工業、食品工業都有重要的用途。右旋糖酐酶的研究對于齲齒的防治進而開發齲齒疫苗具有重要意義；右旋糖酐酶可以用于藥用右旋糖酐的生產，并且可以用于制備葡聚糖凝膠藥物緩釋體系；在制糖工業中，可改善糖產品的濾過性，增加糖的回收率，降低黏度，因此該產品市場前景廣闊。現有右旋糖酐酶產生菌發酵培養基的發酵水平和發酵酶活單位都較低，酶活單位< 500u/ml。

發明內容
本發明的目的在于提供一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基及其培養方法，顯著提高右旋糖酐酶的酶活單位，酶活單位的最高增幅達45%。本發明的目的是通過以下技術方案予以實現的
一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基，按重量比計，包含蛋白胨O. 2-0. 5%，K2HPO4
O.3-0. 5%,，KCl O. 01-0. 02%, FeSO4 O. 001-0. 002%,花生餅粉 O. 1-0. 5%,右旋糖酐
2.5-3. 0%，余量為井水。所述發酵培養基的優選配方為按重量比計，包含蛋白胨O. 3%，K2HPO4 O. 4%，，KCl O. 015%, FeSO4 O. 0015%,花生餅粉O. 2%，右旋糖酐2. 8%，余量為井水。所述的右旋糖酐酶產生菌為棘孢青霉菌。一種右旋糖酐酶產生菌的培養方法，包括以下步驟
(I)將沙土孢子接種于斜面培養基，溫度28°C、濕度40-60%、培養5— 6天；
(2 )將成熟的斜面孢子接入搖瓶種子培養基，溫度28 °C、濕度40-60%、轉速220—240RPM培養40— 60小時；
(3)將搖瓶種子按1%的接種量接種于種子罐培養，28°C培養40—60小時小時；
(4)按1%的接種量將步驟(3)的種子液接種于上述右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基中，28°C培養120-150小時結束發酵。發明人在研究提高右旋糖酐酶酶活單位的過程中發現，向右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基加入適量的花生餅粉，可明顯提高右旋糖酐酶的酶活單位。經過大量實驗證實，添加重量比O. 2%的花生餅粉，酶活單位增幅最為明顯，本發明以花生餅粉為遲效氮源，以右旋糖酐為產酶誘導劑，顯著提高右旋糖酐酶的發酵水平，酶活單位最高增幅達45%。具有操作性強，投入低產出高的優點。
具體實施方式
、
以下結合具體實施例，進一步說明不同濃度花生餅粉對右旋糖酐酶生物合成的影響，使用的右旋糖酐酶產生菌為棘孢青霉菌，所使用的比例均為重量百分比，右旋糖酐酶的酶活單位采用DNS法進行檢測。在本發明的實施例中，發酵培養基的配方范圍蛋白胨O. 2-0. 5%，K2HPO4O. 3-0. 5%,，KCl O. 01-0. 02%, FeSO4 O. 001-0. 002%,花生餅粉 O. 1-0. 5%,右旋糖酐2. 5-3. 0%，余量為井水。實施例I
添加花生餅粉的發酵培養基配方I :蛋白胨O. 5%，K2HPO4 O. 5%，，KCl O. 02%, FeSO4O. 002%，花生餅粉O. 1%，右旋糖酐3. 0%，余量為井水。不含花生餅粉發酵培養基對照組I :蛋白胨O. 5%，K2HPO4 O. 5%，，KCl O. 02%, FeSO4 O. 002%，右旋糖酐3. 0%，余量為井水。以50L發酵罐進行兩組小試實驗，將沙土孢子接種于斜面培養基，溫度28°C、濕度40-60%、培養5— 6天；將成熟的斜面孢子接入搖瓶種子培養基，溫度28°C、濕度40_60%、轉速220— 240RPM培養40— 60小時；將搖瓶種子按1%的接種量接種于種子罐培養，28°C培養40— 60小時；按1%的接種量接種于發酵培養基中，28°C培養120-150小時結束發酵。采用DNS法檢測酶活單位，不含花生餅粉發酵培養基對照組I的酶活單位為472u/ml，添加花生餅粉發酵培養基配方I的酶活單位為571 u/ml，酶活單位增幅為21%。實施例2
添加花生餅粉的發酵培養基配方2 :蛋白胨O. 3%，K2HPO4 O. 4%，，KCl O. 015%, FeSO4O. 0015%，花生餅粉O. 2%，右旋糖酐2. 8%，余量為井水。不含花生餅粉發酵培養基對照組2 :蛋白胨O. 3%, K2HPO4 O. 4%，，KC1 O. 015%, FeSO4O. 0015%，右旋糖酐2. 8%，余量為井水。以50L發酵罐進行兩組小試實驗，將沙土孢子接種于斜面培養基，溫度28°C、濕度40-60%、培養5— 6天；將成熟的斜面孢子接入搖瓶種子培養基，溫度28°C、濕度40_60%、轉速220— 240RPM培養40— 60小時；將搖瓶種子按1%的接種量接種于種子罐培養，28°C培養40— 60小時；按1%的接種量接種于發酵培養基中，28°C培養120-150小時結束發酵。采用DNS法檢測酶活單位，不含花生餅粉發酵培養基對照組2的酶活單位為455u/ml，添加花生餅粉發酵培養基配方2的酶活單位為660 u/ml，酶活單位增幅為45%。實施例3
添加花生餅粉的發酵培養基配方3 :蛋白胨O. 2%，K2HPO4 O. 3%，，KCl O. 01%, FeSO4O. 001%，花生餅粉O. 5%，右旋糖酐2. 5%，余量為井水。不含花生餅粉發酵培養基對照組3 :蛋白胨O. 2%，K2HPO4 O. 3%，，KCl O. 01%, FeSO4O. 001%，右旋糖酐2. 5%，余量為井水。以50L發酵罐進行兩組小試實驗，將沙土孢子接種于斜面培養基，溫度28°C、濕度40-60%、培養5— 6天；將成熟的斜面孢子接入搖瓶種子培養基，溫度28°C、濕度40_60%、轉速220— 240RPM培養40— 60小時；將搖瓶種子按1%的接種量接種于種子罐培養，28°C培養40— 60小時；按1%的接種量接種于發酵培養基中，28°C培養120-150小時結束發酵。采用DNS法檢測酶活單位，不含花生餅粉發酵培養基對照組3的酶活單位為436u/ml，添加花生餅粉發酵培養基配方3的酶活單位為588 u/ml，酶活單位增幅為35%。
結果顯示，在發酵培養基中添加O. 1-0. 5%的花生餅粉，右旋糖酐酶的酶活單位增幅21—45%，隨著花生餅粉加入量的逐步提高，右旋糖酐酶的酶活單位開始下降，酶活單位的最高增幅達45%，對應的花生餅粉添加量為O. 2%。以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非對本發明作任何形式上的限制；任何熟悉本領域的技術人員，在不脫離本發明技術方案范圍情況下，都可利用上述揭示的方 法和技術內容對本發明技術方案做出許多可能的變動和修飾，或修改為等同變化的等效實施例。因此，凡是未脫離本發明技術方案的內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所做的任何簡單修改、等同替換、等效變化及修飾，均仍屬于本發明技術方案保護的范圍內。
權利要求
1.一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基，其特征在于，按重量比計，包含蛋白胨O. 2-0. 5%, K2HPO4 O. 3-0. 5%,, KCl O. 01-0. 02%, FeSO4 O. 001-0. 002%，花生餅粉 O. 2-0. 5%，右旋糖酐2. 5-3. 0%，余量為井水。
2.根據權利要求I所述的一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基，其特征在于，按重量比計，包含蛋白胨 O. 3%, K2HPO4 O. 4%,，KCl O. 015%, FeSO4 O. 0015%,花生餅粉 O. 2%,右旋糖酐2. 8%，余量為井水。
3.根據權利要求I或2所述一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基，其特征在于，所述的右旋糖酐酶產生菌為棘孢青霉菌。
4.一種右旋糖酐酶產生菌的培養方法，其特征在于，包括以下步驟 (I)將沙土孢子接種于斜面培養基，溫度28°C、濕度40-60%、培養5— 6天； (2 )將成熟的斜面孢子接入搖瓶種子培養基，溫度28 °C、濕度40-60%、轉速220—.240RPM培養40— 60小時； (3)將搖瓶種子按1%的接種量接種于種子罐培養，28°C培養40—60小時； (4)按1%的接種量將步驟(3)的種子液接種于權利要求I所述右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基中，28°C培養120-150小時結束發酵。
全文摘要
本發明公開一種右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基及其培養方法，所述發酵培養基含有下列重量組分蛋白胨0.2-0.5%，K2HPO40.3-0.5%，KCl0.01-0.02%，FeSO40.001-0.002%，花生餅粉0.1-0.5%，右旋糖酐2.5-3.0%，余量為井水；本發明通過向右旋糖酐酶產生菌的發酵培養基加入適量的花生餅粉，以花生餅粉為遲效氮源生長菌體，以右旋糖酐為產酶誘導劑，顯著提高右旋糖酐酶的發酵水平，酶活單位最高增幅達45%，具有操作性強，投入低產出高的優點。
文檔編號C12N1/14GK102690802SQ20121019808
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月15日 優先權日2012年6月15日
發明者劉瑞華, 曹新年, 李為全, 楊春麗, 蔡惠麗 申請人:安徽省皖北藥業股份有限公司