一種烏芝子實體的培養方法
【技術領域】
[0001 ]本發明具體設及一種烏芝子實體的培養方法。
【背景技術】
[0002] 隨著人類社會的發展，人類"崇尚自然，回歸自然"的呼聲越來越高，人們對天然藥 物和天然保健品的社會需求日益增漲。食藥用真菌W其多方面的生物活性和安全無毒副作 用而備受青睞，挖掘新的食藥用菌資源并進行人工馴化栽培，已成為食藥用真菌行業研究 熱點。靈芝作為"藥用菌之王"，其保健、藥用功效早已得到世界的認可。"靈芝"其實是人們 對靈芝科不同靈芝種屬的一個統稱，廣義的靈芝包括靈芝科屬的很多種類。目前世界上已 有超過25種野生靈芝生長的記載，但是已商業化利用的不足10%，絕大部分的野生靈芝資源 仍未被開發利用。假芝屬是靈芝科的一個重要亞屬，在靈芝科家族中占有一席之地，目前報 道假芝屬有22個種，全部分布在熱帶、亞熱帶地區，其中鄒蓋假芝(Amauroderma rude)、烏 芝(Amauroderma rugosum)、黑假芝(Amauroderma nigr皿）已經明確具有藥用價值，在抗腫 瘤、抗癌、抗氧化、消炎和提高免疫機能等方面有奇特效果<XhunweiJiaoetal，2013;Pui-Mun Qian e1:al.，2013;林杰，1996)。
[0003] 烏芝，又稱假芝(Amauroderma rugosum)，為靈芝科假芝屬真菌，是一種熱帶亞熱 帶地區特有的珍稀藥用真菌(趙繼鼎，1992;畢志樹，1994)。最新的研究結果表明烏芝具有 消炎、抗氧化等作用(Pui-Mun化an etal. ,2013;吳興亮等，2013)，在馬來西亞作為一種傳 統的民間中草藥用于治療神經性癒痛等有奇特效果（Y. S. Chang etal. ,2004; M.A.Azliza etal. ,2012)，在我國華南地區也有采摘、銷售野生烏芝的傳統習慣(黃年來， 2010;戴玉成等，2008)，不僅價格高，且常常供不應求，極具開發利用價值。由于野生烏芝生 長速度十分緩慢，產量極低，僅靠自然供給遠遠不能滿足人們的需求，目前仍未有關于烏芝 子實體培養的有關文獻報道，為此開展烏芝子實體培養十分迫切。
[0004] 目前，世界范圍內對假芝屬真菌馴化栽培的研究報道較少，僅少數真菌分類學者 報道了其分類位置，采摘時間、地點等（上海農科院食用菌所，1991; Pelger ,1973; Australian Fungi - A Blog,2007)。國內一些學者對皺蓋假芝菌絲液體深層發酵條件（鄭 用林等，2007 ;馬海昇等，2007 ;夏險等，2012 ;王謙等，2005)及引種袋料栽培（張紅紅等， 2014)、富砸菌株篩選等做了一些報道(張曉等，2012);黃龍花等申請了 "一種皺蓋假芝的人 工栽培方法"專利（【申請號】CN201310737785.6)，通過修剪、通氣刺激等管理方式實現皺蓋 假芝的人工栽培。但是，目前沒有關于烏芝子實體培養的相關文獻報道。
[0005] 烏芝(也稱假芝)的子實體的生長特性與目前栽培的赤靈芝、紫靈芝等常規靈芝品 種不同，采用常規靈芝栽培管理方式不能很好的獲得烏芝子實體。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的在于提供一種烏芝子實體的培養方法。
[0007] 本發明所采取的技術方案是： 一種烏芝子實體的培養方法，包括下列步驟： 1) 挑取烏芝純菌絲體培養得到烏芝母種； 2) 挑取烏芝母種進行擴大搖瓶培養，得到烏芝搖瓶種； 3) 將烏芝搖瓶種進一步擴大至發酵罐中培養4-6d，得烏芝液體菌種； 4) 將烏芝液體菌種接種到烏芝培養基菌包，待菌絲長滿菌包，即獲得烏芝生產菌包； 5) 后熟7-15天后，將烏芝生產菌包轉移至出芝房進行層架式售栽出芝管理；出芝管理 所用的栽培售不低于菌包15cm，每個菌包間隔10-12畑1，栽培售頂部及高出菌包部分用膜包 裹封住進行烏芝培養;待子實體原基形成后，繼續培養，待烏芝成熟后進行采收，得到烏芝 子實體。
[000引優選的，步驟1)~步驟4)的培養條件為黑暗、24~27°C的溫度和60%-75%的空氣相 對濕度。
[0009] 優選的，步驟1)~步驟3)所用的培養基，包含下列重量百分比的組分:去皮馬鈴馨 16%-24%、葡萄糖 1.6%-2.4%、蛋白腺0.16%-0.24%、牛肉膏0%-0.2%、憐酸二氨鐘0.24%-0.36%、硫酸儀0.12%-0.18%，VBi 0.024%-0.0036%、pH7-8。
[0010] 優選的，步驟1)中的培養基中加入適量的瓊脂。
[0011] 優選的，步驟3)中的培養基中還需加入適量消泡劑。
[0012] 優選的，步驟3)中，接種量為發酵罐培養液體積的8%-12%，通氣量為體積比(0.8-1.2):(0.8-1.2)〇
[0013] 優選的，步驟4)中烏芝培養基菌包中的培養基，包含下列重量百分比的組分：20-25〇/〇棉巧殼、18-2?)雜木屑、18-22%玉米忍、8-12%花生殼、8-12%大豆桿、4-6%麥教、1.6-2.4〇/〇 玉米粉、4-6%咖啡渣、0.8-1.跳薦糖、0.8-1.2%碳酸巧、1.6-2.4%石灰、0.8-1.2%復合肥。
[0014] 優選的，步驟4)中烏芝培養基菌包的制作方法如下:將培養基各組分按重量稱好， 加水混合均勻，薦糖溶于水中一同加入，調整基質含水量為58%-62%，pH值7-8,壓制成型。
[0015] 優選的，步驟4)接種量為3%-5%，按質量百分比計。
[0016] 優選的，步驟5)中的培養條件為空氣相對濕度80%-90%，提供充足氧氣W及散射 光，避免陽光直射，溫度控制在25-30°C。
[0017] 優選的，步驟5)中的層架式售栽出芝管理中，栽培售頂部及高出菌包部分用一層 保鮮膜包裹。
[0018] 優選的，步驟5)中的層架式售栽出芝管理中，將封好膜的栽培售整齊擺放在栽培 架上，層距高于栽培售不少于IOcm,層架數視房間高度而定，最高一層架子距離屋頂不少于 lm〇
[0019] 優選的，步驟5)中烏芝成熟的判斷標準為：當子實體邊緣沒有白色邊，菌蓋完全變 灰褐色，用力觸碰、劃割子實體均不再出現紅色液體，再經7-10天時間讓菌蓋增厚，即可進 行采收。
[0020] 本發明的有益效果： 本發明根據烏芝子實體生長發育特性和研究試驗，探索出人工培養烏芝子實體的方 案。本發明為人工栽培的食用菌種類增加了新的品種，為烏芝研究和商業開發奠定堅實的 基礎。
[0021] 本發明采用烏芝液體菌種做生產用種，大大縮短了制種時間，液體菌種從母種到 液體菌種培養僅需20-27天，比固體制種時間縮短60%-70%。栽培菌包接種液體生產種后萌 發快，長勢好，經30-40天即可長滿菌包，層架式售栽出芝管理方式能很好地獲得烏芝子實 體，且節省制種、栽培房間面積，高效、簡單、快捷。烏芝子實體經培養50-60天左右即可采 收。利用本發明培育的烏芝子實體商品性好，生物轉化率高，子實體粗多糖含量高，品質好。 本發明具有簡單、高效、易于工廠化、規模化操作的特點。
[0022] 本發明提供了一種適宜于烏芝生長的菌包培養基，其中包括W下成分:棉巧殼、雜 木屑、玉米忍、花生殼、大豆桿、麥教、玉米粉、咖啡渣、薦糖、碳酸巧、石灰、復合肥。所述培養 基，專口針對烏芝生長優選設計，富含氮源、碳源、礦物質、維生素等，并充分利用農林及加 工業的下腳料，特別是咖啡渣等世界性頭號消費廢棄物，變廢為寶，減輕對環境的壓力的同 時，拓寬食用菌生產原材料來源。利用此培養基，烏芝在生長中可W獲得充分的養分，生產 出的烏芝子實體商品性好，生物轉化率為10%-20%，子實體粗多糖含量高(3.22%)，品質好。 相較于一般靈芝，中華寺靈芝的粗多糖僅為0.76%，南韓赤為0.75%(李蠢龍，趙蠢，吳杰， 等.中華寺靈芝引種馴化栽培及主要營養成分評價[J].時珍國醫國藥，2009, 20(9): 2267-2269.)O
[0023] 本發明采取層架式售式栽培技術，是馴化栽培成功因素之一。栽培售要求高于菌 包15cmW上，且在栽培售頂部及高出菌包部分用一層保鮮膜封住，層架式售式栽培技術為 烏芝子實體生長發育提供一個適合的小環境，此外，保鮮膜具有良好的透氣性，不影響栽培 框內外氧氣的交流，使子實體更健康的生長，獲得商品性好、產量高的烏芝子實體。
[0024] 本發明首次公開了烏芝采收的判斷標準為：當子實體邊緣沒有白色邊，菌蓋完全 變灰褐色，用力觸碰、劃割子實體均不再出現紅色液體，再經7-10天時間讓菌蓋增厚，即可 進行采收。一般情況下，烏芝子實體生長50-60天即可發育成熟，傳統的判斷方法是：當子實 體邊緣沒有白邊，菌蓋完全變灰褐色時，進行采摘。但是本研究發現，雖然菌蓋不再橫向分 化，但是用力觸碰、劃割子實體仍會出現紅色液體，此時采摘得到的烏芝子實體產量和品質 均未達到最佳水平。如果等待菌蓋繼續縱向生長，此過程中如果沒有精準的時間控制和判 斷方法，往往導致烏芝生長進入衰老期，獲得的子實體品質反而會下降，如粗多糖的含量反 而下降，此外，商品性也會受影響，甚至會導致病蟲害的發生。所W本發明經過反復實驗總 結出上述標準。此時獲得的子實體更加厚實，多糖等有效成分積累更多，能獲得最高產量和 最佳品質。
【附圖說明】
[0025] 圖1為烏芝采收標準效果圖； 圖2為對比例1所獲烏芝與本發明的對比效果圖。
【具體實施方式】
[0026] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0027] 烏芝采集來源:①從野外采集到新鮮的烏芝子實體，通過組織分離，獲得烏芝一級 試管母種;②從正規的科研單位購買、引進烏芝一級試管母種。
[0028] 實施例1 一種烏芝的培養方法，該方法步驟如下： (1)、挑取部分烏芝純菌絲體(0.5cm2)接種到新的試管培養基中（培養基配方為:去皮 馬鈴馨20%、葡萄糖2%、蛋白腺0.2%、憐酸二氨鐘0.3%、瓊脂2%、硫酸儀0.15%，VBi 0.003%、 PH7-8)，在一定條件下（黑暗、環境溫度25± TC、空氣相對濕度6