一種復合微生物菌劑及其應用
【技術領域】：
[0001] 本發明屬于農業微生物技術領域，設及一種用于防治植物病害的復合微生物菌 劑。
【背景技術】：
[0002] 植物病害是造成當前農業大幅減產、產品品質越來越差的最大惡因，極大影響了 我國農業可持續健康發展的要求，而植物病害的有效防控也是全國經濟作物農業生產中面 臨的最大難題。目前植物病害的防治還是過度依賴化學藥劑進行防控，不僅對環境產生惡 性影響，病原抗性越來越大，還影響著產品品質。
[0003] 針對化學藥劑治標不治本防控方法的不足之處，運些年的許多科研成果也表明， 提高植物的免疫力可W很好地防控病害的發生及發展，但目前市場的植物免疫制劑大多數 都是單打獨斗，不能全方位地與植物生長需求相結合，導致效果都不是很明顯。
[0004] 目前許多有益的微生物菌劑也越來越受到農業生產者的青睞，例如枯草芽抱桿 菌、黃髓色鏈霉菌等，不但可W抑制多種病原菌的生長，保護植物免受侵害，還可W為植物 提供一些生長營養素，提高植物的免疫力，但許多微生物菌劑的效果比較慢，而且微生物菌 劑的活菌數量也存在衰減的影響，進而導致微生物菌劑活性的降低。
[0005] 最近，農業生產對能全方位對植物病害進行有效防控的產品需求越來越高，運也 是未來農業生產所崇尚的愿景。

【發明內容】
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[0006] 本發明的目的，就是為了提供一種微生物復合菌劑，該復合菌劑包含微生物活菌 及其保護劑，本發明的微生物復合菌劑可W延長菌種活菌數量衰減的時間，不僅對植物病 害有較好的防效，而且還能提高植物的免疫能力。
[0007] 本發明中的枯草芽抱桿菌由臺灣百泰生物科技股份有限公司提供，農藥登記證號 為PD20121632;黃髓色鏈霉菌購于中國農業微生物菌種保藏管理中屯、，保藏號為： ACCC40021;海藻素購于荷蘭博特勒斯股份有限公司。且本發明中的枯草芽抱桿菌和黃髓色 鏈霉菌已經經過菌種括抗試驗研究，兩者沒有存在括抗現象。
[000引為了實現本發明的目的，本發明采用了 W下的技術方案：
[0009] -種微生物復合菌劑，由復合而成，海藻素、黃髓色鏈霉菌和枯草芽抱桿菌的比例 為:2~3:3~5:3~5,優選為:2:4:4。
[0010] 上述微生物復合菌劑的制備方法為，將斜面培養的黃髓色鏈霉菌制作菌懸液，接 種IOml于200ml高氏合成一號液體培養基中；將斜面培養的枯草芽抱桿菌制作菌懸液，接種 IOml于200ml營養肉汁液體培養基中；在28化/min、30°C下振蕩培養24h，至菌懸液OD值為 0.8-1.0，菌體濃度為1 X IO9~1.5 X IO9CfVml時，將海藻素、黃髓色鏈霉菌和枯草芽抱桿菌 按2~3:3~5:3~5比例進行復合。
[0011] 上述微生物復合菌劑的制備方法中，所述營養肉汁液體培養基的組分及配比為： 蛋白腺-5g、牛肉膏-3g、化CI-5g、蒸饋水-1000ml，培養基的抑為7.0;所述高氏合成一號液 體培養基的組分及配比為：腳03-1旨、&冊0廣0.5旨、胞(：1-0.5旨^6504.7出0-0.01旨、]\%504. 7出0-0.5g、可溶性淀粉-20g、蒸饋-1000 ml，培養基的pH為7.2~7.4。
[0012] 上述復合微生物菌劑應用于植物病害的防治及提高植物的免疫能力。
【具體實施方式】：
[0013] W下通過實施例對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但是并不用于限定 本發明的保護范圍。
[0014] 實施例1枯草芽抱桿菌與黃髓色鏈霉菌的括抗試驗
[0015] 將斜面培養的黃髓色鏈霉菌和枯草芽抱桿菌分別制作菌懸液，用無菌移液槍吸取 黃髓色鏈霉菌和枯草芽抱桿菌菌懸液各IOOul分別涂布于高氏合成一號和營養肉汁培養平 板上，靜置滲透片刻后，將直徑為5mm的無菌濾紙片貼在培養平板的相應位置，每個培養平 板貼3張濾紙片，再用無菌移液槍吸取黃髓色鏈霉菌和枯草芽抱桿菌菌懸液各IOul分別滴 加在相應的濾紙片上，吸取高氏合成一號和營養肉汁液體培養基各IOul分別滴加相應的濾 紙片上作為試驗對照組，靜置滲透片刻后將其倒置，于30°C恒溫培養2地再分別測量抑菌圈 的大小。
[0016] 抑菌圈大小測量方法為:抑菌圈直徑=透明圈直徑-濾紙片直徑(5mm)。
[0017] 表1黃髓色鏈霉菌與枯草芽抱桿菌括抗試驗結果(D:mm)
[0018] 從表1可得黃髓色鏈霉菌與枯草芽抱桿菌沒有存在括抗性，兩者能相互共生。
[0019] 實施例2海藻素延長菌種活菌數量衰減時間試驗
[0020] 將斜面培養的黃髓色鏈霉菌制作菌懸液，接種IOml于200ml高氏合成一號液體培 養基中；將斜面培養的枯草芽抱桿菌制作菌懸液，接種IOml于200ml營養肉汁液體培養基 中；在280r/min、30°C下振蕩培養2地，至菌懸液OD值為0.8-1.0，菌體濃度為1 X IO9-1.5 X IO9C化/ml時，分別按保護劑:菌種= 1:4的比例將海藻素分別加入黃髓色鏈霉菌和枯草芽 抱桿菌液體培養液中，將加入等比例的無菌水作為試驗對照組，混勻后測量活菌數量并分 別在6個月、12個月和24個月后測量活菌數量。試驗結果如下表：
[0021] 表2海藻素延長菌種活菌數量衰減時間試驗結果(單位:c化/ml)
[0022] 從表2可得海藻素能夠延長黃髓色鏈霉菌和枯草芽抱桿菌的活菌衰減時間，進而 延長復合微生物菌劑對植物病害的防治活性。
[0023] 實施例3復合微生物菌劑防治辣椒青枯病試驗
[0024] 將斜面培養的黃髓色鏈霉菌制作菌懸液，接種IOml于200ml高氏合成一號培養基 中；將斜面培養的枯草芽抱桿菌制作菌懸液，接種IOml于200ml營養肉汁液體培養基中；在 280r/min、30°C下振蕩培養2地，至菌懸液OD值為0.8-1.0，菌體濃度為1 X IO9-1.5 X IO9Cfu/ ml時，分別按海藻素:黃髓色鏈霉菌:枯草芽抱桿菌= 2:4:4的比例進行復合，得到本發明的 復合微生物菌劑。
[0025] 在辣椒移栽前將分別將上述的海藻素、黃髓色鏈霉菌培養液、枯草芽抱桿菌培養 液及復合菌劑稀釋500倍，每株150ml進行灌施并設立空白對照組;移栽3周后分別稀釋1000 倍再噴施一次，移栽6周后調查統計各試驗處理組辣椒青枯病的發病情況。
[0026] 表3復合微生物菌劑防治辣椒青枯病的試驗結果
[0027] 從表3可得復合微生物菌劑對辣椒青枯病的防效遠遠大于微生物單菌劑的防效。
[0028] 實施例4復合微生物菌劑防治辣椒巧倒病試驗
[0029] 將斜面培養的黃髓色鏈霉菌制作菌懸液，接種IOml于200ml高氏合成一號培養基 中；將斜面培養的枯草芽抱桿菌制作菌懸液，接種IOml于200ml營養肉汁液體培養基中；在 280r/min、30°C下振蕩培養2地，至菌懸液OD值為0.8-1.0，菌體濃度為1 X IO9-1.5 X IO9Cfu/ ml時，分別按海藻素:黃髓色鏈霉菌:枯草芽抱桿菌= 2:3:5的比例進行復合，得到本發明的 復合微生物菌劑。
[0030] 在辣椒育苗前分別將上述的海藻素、黃髓色鏈霉菌培養液、枯草芽抱桿菌培養液 及復合菌劑稀釋500倍，每株30ml進行灌施并設立空白對照組;7天后再灌施一次，21天后調 查統計各試驗處理組辣椒巧倒病的發病情況。
[0031] 表4復合微生物菌劑預防辣椒巧倒病的試驗數據
[0032] 從表4可得復合微生物菌劑對辣椒巧倒病的防效遠遠大于微生物單菌劑的防效。
[0033] 實施例5復合微生物菌劑防治黃瓜枯萎病試驗
[0034] 將斜面培養的黃髓色鏈霉菌制作菌懸液，接種IOml于200ml高氏合成一號培養基 中；將斜面培養的枯草芽抱桿菌制作菌懸液，接種IOml于200ml營養肉汁液體培養基中；在 280r/min、30°C下振蕩培養2地，至菌懸液OD值為0.8-1.0，菌體濃度為1 X IO9-1.5 X IO9Cfu/ ml時，分別按海藻素:黃髓色鏈霉菌:枯草芽抱桿菌= 2:5:3的比例進行復合，得到本發明的 復合微生物菌劑。
[0035] 在黃瓜移栽前將分別將上述的海藻素、黃髓色鏈霉菌培養液、枯草芽抱桿菌培養 液及復合微生物菌劑稀釋500倍，每株300ml進行灌施并設立空白對照組;移栽2周后再灌施 一次，移栽4周后分別稀釋1000倍再噴施一次，移栽6周后調查統計各試驗處理組黃瓜枯萎 病的發病情況。
[0036] 表5復合微生物菌劑防治黃瓜枯萎病的試驗數據
[0037] 從表5可得復合微生物菌劑對黃瓜枯萎病的防效遠遠大于微生物單菌劑的防效。
[0038] 從W上的實施例可W確定本發明的復合微生物菌劑不僅可W延長微生物活菌數 量的衰減時間，還可W大大提高對植物病害的防治效果。
【主權項】
1. 一種復合微生物菌劑，其特征在于該復合微生物菌劑由海藻素、黃赭色鏈霉菌發酵 培養液和枯草芽孢桿菌發酵培養液復合而成，兩種發酵培養液的有效活菌數分別都在IX 109cfu/ml 以上。2. 根據權利要求1所述的復合微生物菌劑，其特征在于所述的海藻素、黃赭色鏈霉菌發 酵培養液和枯草芽孢桿菌發酵培養液的配比為:2~3:3~5:3~5，優選為:2:4: 4。3. 根據權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于將斜面培養的黃赭 色鏈霉菌制作菌懸液，接種l〇ml于200ml高氏合成一號液體培養基中；將斜面培養的枯草芽 孢桿菌制作菌懸液，接種l〇ml于200ml營養肉汁液體培養基中；在280r/min、30°C下振蕩培 養24h，至菌懸液OD值為0.8-1.0，菌體濃度為1 X 109~1.5 X 109cfu/ml時，將海藻素、黃赭色 鏈霉菌和枯草芽孢桿菌按2~3:3~5:3~5比例進行復合。4. 根據權利要求3所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于所述營養肉汁液體 培養基的組分及配比為：蛋白胨_5g、牛肉膏-3g、NaCI-5g、蒸餾水-1000ml，培養基的pH為 7.0 ;所述高氏合成一號液體培養基的組分及配比為：KN03-lg、K2HP〇4_0.5g、NaCI-0.5g、 FeS〇4 · 7H2〇-〇.01g、MgS〇4 · 7H2〇-〇.5g、可溶性淀粉-20g、蒸餾-1000ml，培養基的pH為7.2 ~7·4〇5. 根據權利要求1所述的復合微生物菌劑，主要應用于植物病害的防治，特別是辣椒青 枯病、辣椒猝倒病、黃瓜枯萎病等常見病害的防治。
【專利摘要】本發明屬于農業微生物技術領域，公開了一種復合微生物菌劑及其應用，該復合微生物菌劑由海藻素、黃赭色鏈霉菌發酵培養液和枯草芽孢桿菌發酵培養液復合而成，其中海藻素、黃赭色鏈霉菌發酵培養液和枯草芽孢桿菌發酵培養液的配比為：2～3：3～5：3～5，優選為：2:4:4。本發明提供的復合微生物菌劑不僅可以延長微生物活菌數量的衰減時間，還可以大大提高對植物病害的防治效果，對多種病害的防效都達到90％以上。
【IPC分類】A01N25/22, A01N63/00, A01P3/00, A01P21/00, A01P1/00
【公開號】CN105494443
【申請號】CN201610038245
【發明人】吳景霄, 任承才, 杜榮鍇
【申請人】唐睿
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月21日