一種短小芽孢桿菌可濕性粉劑的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及生物農藥與微生物肥料領域，具體設及一種含有短小芽抱萌發劑的短 小芽抱桿菌可濕性粉劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 我國每年使用大量的化學農藥制劑與化肥，極易造成農藥殘留超標，生物富集，不 僅污染生態環境，還影響人類的健康。而生物農藥副作用小，對人無害，是一種具有廣闊前 景的綠色農藥，日益成為全球農藥發展的一種趨勢。
[0003] 芽抱桿菌是目前生物農藥與生物肥料中研究最多的一種微生物，它具有廣譜抗菌 活性和極強的抗逆能力，其營養細胞能在真菌性病原菌絲體表面繁衍定殖，有效抑制病菌 生長，因此，在控制病害發生、促進植株生長，提高作物產量等方面顯示出了廣闊的應用前 景。
[0004] 短小芽抱桿菌是一種易在±壤中分離得到的微生物，通過研究發現，不僅能促進 小麥、甜菜、黃瓜，水稻，蕃茄等作物的生長，還能防治水稻稻攝病，黃瓜菌核病，蘋果腐爛 病，茄子枯萎病，小麥赤霉病，白菜黑斑病和番茄灰霉病等。
[0005] 目前，國內外關于短小芽抱桿菌的研究主要集中在對其生防作用W及產生的木聚 糖酶的研究。肖愛萍等發現短小芽抱桿菌對稻攝病具有很好的防治效果，且其有效作用成 分為多膚類物質（肖愛萍等，2003)。崔云龍等發現短小芽抱桿菌D82對小麥根腐病有強抗生 作用，且發酵液稀釋濃度100倍W下的平板抑菌效果為100%(崔云龍等，1995)。此外，徐長倫 等還發現一株短小芽抱桿菌的優化菌株PlO能對甜菜具有增產增糖的作用（徐長倫等， 1994);朱桂梅等分離得到一株短小芽抱桿菌TW-2對水稻稻攝病菌具有強烈的抑制作用，對 水稻稻攝病具有較高的防治效果。短小芽抱桿菌(BaciIlus pumiIus)近年來被陸續確定具 有括抗灰葡萄抱菌、腐霉菌等病原真菌的能力(Mari M，et al，1996;Walker R，et al， 1998)"A化tar M. S.報道(2008)將短小芽抱桿菌作為生物菌肥用于鷹嘴豆根腐病獲得了 很好的防治效果。崔云龍等（1995)報道了短小芽抱桿菌D82對小麥根腐病菌有極強的括抗 作用。游春平等(2001)分離的短小芽抱桿菌對稻攝病菌有顯著的抑制作用。王靜等分離到 一株短小芽抱桿菌AR03,其菌體和發酵液對煙草黑腔病菌具有很強的括抗活性，在田間試 驗結果顯示具有較好的防治煙草黑腔病的能力。
[0006] 目前，國內已有關生產短小芽抱桿菌類產品的相關技術，如:潘W樓等在專利號： 201 21027 13964中公開了一種短短小芽抱桿菌水分散粒劑的制備方法，在專利號 2007100215091中公開了一種用于防治稻攝病的短短小芽抱桿菌TW菌株的制劑，該制劑對 水稻稻攝病的防治效果在60%-80%間。陸燕君等分離到一株短小芽抱桿菌A3對泡桐黑腐皮 殼的菌絲及分生抱子均有較強的括抗作用，A3的發酵液對泡桐黑腐皮殼病防治效果可達到 97.8%。李聯泰等在專利號20中公開了一種短小芽抱桿菌E4及基培養方法與在 抑制弧菌上的應用。連玲麗等分離得到一株短小芽抱桿菌EN16,其可誘導番茄對細菌性青 枯病的抗性。黃海東等在專利號20中公開了一株短小芽抱桿菌LD-bl的發酵工 藝及其在防治黃瓜褐斑病，黃瓜灰霉病，黃瓜菌核病，蘋果腐爛病，茄子枯萎病，小麥赤霉 病，白菜黑斑病和番茄灰霉病上的應用。曲發斌等考察了短小芽抱桿菌發酵液對番茄種子 萌發及幼苗生長的影響，結果表明：短小芽抱桿菌發酵液對番茄種子萌發，根芽生長及幼苗 的株高和株重具有明顯的促進作用，其中W50倍稀釋液的效果最為顯著，而在幼苗施用方 式上葉面噴施的效果明顯優于灌根和浸種。但還未有具體的有關短小芽抱桿菌的可濕性粉 劑的制備方法公開。
[0007] 雖然W芽抱桿菌為主制備的微生物農藥產品不少，其劑型有水劑，粉劑，可濕性粉 劑，水分散粒劑，但目前芽抱桿菌的劑型W可濕性粉劑為主，運種劑型雖然便于儲存和運 輸，但在生產應用中存在很多制約因子。如施用的可濕性粉劑中大部份W芽抱作為衡量產 品中有效成分的惟一標準，若芽抱不能及時萌發，施用效果則不佳，如王倩利用枯草芽抱桿 菌TR21防治己西蕉枯萎病時，前期試驗利用TR21菌株NB發酵液灌根和葉蔽接種都能有效防 治枯萎病，但是利用芽抱制備可濕性粉劑的灌根與葉蔽效果卻不理想，證明了去掉發酵液 后的純芽抱可能因為萌發困難而使防效下降。
[0008] 芽抱桿菌在自然界中分布廣泛，當外部條件適合生長時，芽胞會由休眠狀態經過 一系列復雜生理生化反應成長為營養體并恢復新陳代謝作用，運個過程稱為萌發 (germination)。自然界中芽抱萌發受外源營養物質的影響，運類營養物質被稱之為"萌發 劑"，通常營養誘導芽抱萌發包括氨基酸、糖類和嚷吟核巧的單一作用，也包括它們的協同 作用（例如:AGFK;A:L-天冬獻胺;G:葡萄糖;F:果糖;K:鐘離子）。當營養物質接觸到芽抱 時，芽抱內部會發生一系列變化，（1 )、芽抱核內部H+和Zn2+釋放出來，致使芽抱核內部抑由 弱酸性上升至弱堿性；（2)、芽抱核內部化h--DPA的大量釋放；（3)、芽抱核水合，內部化 2+- DPA被水所替代，芽抱的耐熱性下降；（4)、芽抱皮層的芽抱膚聚糖層水解，芽抱核膨脹；（5)、 芽抱核進一步水合，芽抱核內部蛋白質流動性增強，酶活性加強，合成ATP; (6)、降解SASP蛋 白，W釋放芽抱DNA，進而引導芽抱生長過程中RNA、蛋白質、DNA的合成。
[0009] 芽抱和促進萌發的芽抱萌發劑混合后數秒鐘之內，萌發劑快速跨過芽抱衣和皮層 到達芽抱內膜的表面，與位于芽抱內膜上的受體蛋白相互作用，激發芽抱進入萌發狀態，接 著啟動一連串萌發事件，之后的萌發過程不會因移走萌發劑而停止。
[0010] 在芽胞桿菌屬中，枯草芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭痘芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌 因與人類的生產生活息息相關而備受關注。研究表明，枯草芽胞桿菌的基因組包含一系列 與 抗生素及重要工業用酶相關的基因簇，炭痘芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌對人畜均有很強 的致病性，由于前者用于制造生物武器，而后者產生致人嘔吐和腹瀉的毒素，因此兩者時刻 威脅著人類的健康和生命安全，當處于芽胞狀態時它們均不具備感染能力，但當進入萌發 狀態后開始具有感染人畜的能力，并最終產生致病甚至致人死亡的毒素;而昆蟲的病原細 菌蘇云金芽胞 桿菌對昆蟲具有特異的毒殺作用，在寄主體內的芽胞萌發后能夠引起敗血癥，并且它 們的芽胞能夠有效提高殺蟲晶體蛋白的毒力，芽胞的萌發在增效作用中可能是必要的。因 此，對芽胞桿菌萌發過程的研究為抑制其致病性，維護人類健康及生命安全具有至關重要 的理論意義與實際應用價值，因此運四種芽抱對其萌發機理與相關的萌發劑研究得比較 多，但有關短小芽抱桿菌的芽抱萌發劑還未見公開。也未有在短小芽抱桿菌可濕性粉劑中 加入芽抱萌發劑的研究的報道。
[0011] 另外，由于不同的芽抱桿菌與濕潤劑，分散劑等助劑的相容性，載體對各類芽抱桿 菌吸附性各不相同，將現有的芽抱桿菌可濕性粉劑的配方或制備工藝無法用于制備含芽抱 萌發劑的短小芽抱桿菌可濕性粉劑;可濕性粉劑中有效菌的吸附量，存活率，對有害菌的防 治效果及可濕性粉劑量的穩定性差異較大，其整個可濕性粉劑的制備方法必須全盤考慮各 載體吸附能力，對短小芽抱桿菌的干燥過程中保護作用，濕潤劑，分散劑對可濕性粉劑的懸 浮率，濕潤時間的影響，并且對芽抱萌發劑進行全面的篩選才能夠得到濕潤時間短，懸浮率 高，芽抱保存時間久，使用后芽抱能快速萌發的，防效好的短小芽抱桿菌可濕性粉劑。

【發明內容】

[0012] 本發明所要解決的技術問題是:針對上述現有技術的不足，本發明提供一種含有 芽抱萌發劑的短小芽抱桿菌可濕性粉劑及其制備方法，芽抱萌發劑能使短小芽抱桿菌可濕 性粉劑融入水后，短小芽抱能快速萌發，大大提高短小芽抱的萌發率，其制備的短小芽抱桿 菌可濕性粉劑芽抱含量為不低于200億CFU/克，懸浮率不低于75%，潤濕時間不高于85S，細 度粉碎過400目篩，水分含量不高于5%，制備方法穩定，短