一種以黃粉蟲蟲蛹為載體培養蟲草產品的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種W黃粉蟲蟲蛹為載體培養蟲草產品的方法。
【背景技術】
[0002] 冬蟲夏草[Cordyceps sinensis(Berk. )Sacc]是我國一種名貴的中草藥，因其具 有抗腫瘤、提高免疫力、降血脂、調節內分泌等多種功效，已被現代人們廣泛認可和追捧。但 由于冬蟲夏草的生長條件特殊，只能生長在西藏、青海、四川等高海拔地區，且生長周期較 長，產量逐年下降，因此野生冬蟲夏草十分稀有珍貴，目前市場價格已達到4萬元/千克左 -?" O
[0003] 蛹蟲草[Cordyceps militarisix. )Link.]又稱北冬蟲夏草，子囊菌綱肉座菌目麥 角菌科蟲草屬，為蛹蟲草真菌寄生在鱗翅目昆蟲蛹體上形成的子座與蛹體的結合，是蟲草 屬的模式種。因其主要活性成分與冬蟲夏草相近或高于冬蟲夏草，并且已有較成熟的培養 條件，現已成為冬蟲夏草的有效替代品。
[0004] 黃粉蟲[Tenebrio molitoHL.)]俗稱面包蟲，銷翅目擬步行蟲科，富含豐富的蛋 白質、脂肪、微量元素和維生素等營養物質，具有抗疲勞、調節血脂、抗組織缺氧等功效。并 且黃粉蟲能夠進行大規模人工飼養，為相關研究提供穩定的原料來源。
[000引近年來，將蟲草菌接種于黃粉蟲W培養出冬蟲夏草替代品成為研究的熱點。北華 大學潘麗梅等人將黃粉蟲幼蟲通過注射接種蟲草菌，60天左右培育出黃粉蟲蟲草，感染率 為30%。安徽農業大學李春如教授等人將黃粉蟲幼蟲穿刺接種臺灣蟲草菌，獲得了30%的 感染率。W上兩種方法均為黃粉蟲幼蟲活體接種，感染率均不高，無法到達規模化生產的要 求。
[0006] CN1793317A中公開了一種W黃粉蟲蟲蛹為寄主的蛹蟲草實體及其培育方法。所述 方法步驟為菌種制備、對黃粉蟲蟲蛹接種感染和出草。CN103688760A中公開了一種將篩選 后的野生冬蟲夏草菌株制成菌懸液并接種到黃粉蟲上培育蟲草子實體的方法。上述兩項發 明均W黃粉蟲為寄主，培養最終得到蛹蟲草子實體，與大米培養基培養子實體或蠶蛹為寄 主培養子實體并無太大差別，且都為黃粉蟲蟲蛹或黃粉蟲幼蟲活體接種，操作繁瑣，接種難 度大;培養周期均在50~60天，培養周期較長，無法達到規模化生產的要求。

【發明內容】

[0007] 本發明的目的是提供一種W黃粉蟲蟲蛹為載體培養蟲草產品的方法，W及由該方 法得到的蟲草活性成分含量較高的蟲草產品。
[0008] 本發明所述的一種W黃粉蟲蟲蛹為載體培養蟲草產品的方法，其特征在于包括W 下步驟：
[0009] (1)蛹蟲草母種菌株的篩選
[0010] 將蛹蟲草[〔0'(17(3邱3 1]1；[1；[1日1'13化.化；[證.]菌株接種于固體培養基上，待菌絲體 長滿平板，反復篩選直至獲得長勢較快、性狀穩定的蛹蟲草母種菌株。
[0011] (2)菌懸液的制備
[0012] 將篩選得到的蛹蟲草母種菌株接種于滅菌處理后的液體培養基中，常溫培養7天 后，在超凈工作臺內用雙層無菌紗布過濾，即得到菌懸液。
[0013] (3)黃粉蟲蟲蛹的準備
[0014] 將成熟的黃粉蟲蟲蛹置于玻璃瓶中，68~10化化，115~122°C條件下滅菌15~ 25min，放涼待用。
[001引 （4)接種
[0016] 在超凈工作臺內，將滅菌后的成熟黃粉蟲蟲蛹均勻放置在無菌的培養皿中，均勻 噴灑菌懸液至蟲體表面，培養皿用無菌封口膜封口。
[0017] (5)蟲草產品的培養
[0018] 將培養皿置于20~22°C黑暗條件下培養7~8天后可得到被蛹蟲草菌侵染的黃粉 蟲蟲蛹，然后將其置于20~22°C，自然光照條件下培養，3~4天后蟲體轉為澄色，即得到本 發明所述蟲草產品一一蟲草蟲。
[0019] 所述蟲草蟲，即本發明所述的W黃粉蟲蟲蛹為載體培養得到的蟲草產品，該蟲草 產品與現有技術中在黃粉蟲活體上接種冬蟲夏草菌得到的蟲草子實體不同，本方法得到被 蛹蟲草菌感染的顏色鮮亮、營養價值豐富的蟲體，可作為蛹蟲草、冬蟲夏草的替代品。
[0020] 進一步地，本發明所述步驟（1)中采用的蛹蟲草菌株選取產于吉林長白山國家自 然保護區的野生新鮮蛹蟲草[Cordyceps militarisiX. )Link.]菌株。
[0021] 進一步地，本發明所述步驟(2)中，得到的菌懸液其抱子濃度為IO6~IO7個/mL(用 血球計數板計數）。
[0022] 進一步地，本發明所述步驟（3)中，在100~10化化，120~122°C條件下滅菌15~ 20min〇
[0023] 進一步地，本發明所述步驟(5)中，培養的溫度為22°C。
[0024] 更進一步地，本發明所述步驟(3)中，在look化，121°C條件下滅菌15min。
[0025] 本發明還提供了一種W黃粉蟲蟲蛹為載體培養得到的蟲草產品，其特征在于采用 本發明上述培養方法培養得到。
[0026] 本發明所述蟲草產品，其特征還在于其有效成分蟲草酸含量達11% W上，蟲草多 糖含量達15% W上，蟲草素含量達13% W上，蛋白質含量達30% W上。
[0027] 現有技術中采用的黃粉蟲活體接種冬蟲夏草菌存在諸多問題，例如因黃粉蟲為活 體，會將一部分注射(或穿刺）的菌懸液排出體外，活的黃粉蟲體對蛹蟲草菌也有一定的抗 性，在注射(或穿刺)量不夠或未成功注射(或穿刺)進蟲體內時無法成功感染黃粉蟲。另外， 活體接種難度較大，操作繁瑣且耗時，注射過程中若操作不當將導致黃粉蟲死亡，并且由于 運些方法只對蟲體進行表面滅菌，所W-旦在接種過程中導致黃粉蟲死亡，蟲體就會腐爛 發臭，不能繼續使用，因此不能達到較高的感染率。本發明所述方法是將黃粉蟲蟲蛹68~ 10化化，115~122°C滅菌15~25min，運樣處理后有W下優點：1.在處死黃粉蟲蟲蛹的同時 有效滅菌;2.最大程度的保持了黃粉蟲的可利用養分;3.在滅菌后僵死的蛹體上噴施蛹蟲 草菌懸液，避免了現有技術中活體接種存在的問題，依本發明所述方法，并經多次反復驗 證，黃粉蟲接種蛹蟲草菌成功率均可達到100%，接種后10~12天即可達到收獲條件，大大 縮短了培養時間，且操作簡單易行，提高了生產效率，能夠達到工廠規模化生產的需求。
[0028]本發明所述方法得到的澄黃色蟲草蟲中有效成分蟲草多糖、蟲草素、蛋白質、蟲草 酸含量豐富，可W作為蟲草子實體的替代品或作為大量提取蟲草活性成分的原料。
【附圖說明】
[0029 ]圖1為蟲草酸測定標準曲線。
[0030] 圖2為蟲草素測定標準曲線。
[0031] 圖3為蟲草多糖測定標準曲線。
[0032] 圖4為蟲草蛋白質測定標準曲線。
【具體實施方式】
[0033] 下面結合具體實施例對本發明作進一步說明：
[0034] 本發明中的黃粉蟲蟲蛹為本實驗室培養。
[003引實施例1
[0036] 1、菌種篩選
[0037] 選取高產、優質、早熟、產于吉林長白山國家自然保護區的野生新鮮蛹蟲草 [Cordyceps miIitaris化.）Link.]菌株，去除表面雜物后置于超凈工作臺內，分別用75% 乙醇表面消毒1分鐘、0.1 %升隸表面消毒30秒，無菌去離子水清洗5~6次，用無菌組織刀切 成Imm2組織塊放在斜面培養基上培養。待菌絲布滿斜面后再純化，經反復純化后獲得蛹蟲 草母種數株。
[0038] 將母種擴大培養后，無菌接種于W大米為主要營養物質的有機培養基上，于20°C ~22°C下培養30天左右，觀察生長情況，若有雜菌污染，則需對母種進一步純化;若無雜菌 污染，則繼續培養30~40天后即長出澄色子實體，證明母種可靠。經培養，得到澄色蛹蟲草 子實體，證明已篩選得到優質的蛹蟲草菌株用于本發明的開展。
[0039] 2、菌懸液的制備
[0040] 將液體培養基分裝于250mlS角瓶中，121°C滅菌20分鐘，放入超凈工作臺冷卻至 室溫備用。在無菌條件下，將母種用接種環接種到S角瓶中，置于搖床中，120r/min，22°C培 養7天，待形成均勻菌球后用雙層無菌紗布過濾，即得到菌懸液，用血球計數板計數菌懸液 抱子濃度為IO 6個/mL。
[0041] 3、黃粉蟲蟲蛹的準備
[0042] 將成熟的黃粉蟲蟲蛹置于玻璃瓶中，1004口曰，121^：滅菌15111111，置于超凈工作臺內 放涼待用。
[0043] 4、接種
[0044] 在超凈工作臺內，將滅菌后的成熟黃粉蟲蟲蛹均勻放置在無菌的培養皿中，均勻 噴灑菌懸液至蟲體表面，培養皿用無菌封口膜封口。
[004引 5、蟲草蟲的培養
[0046] 將培養皿置于培養箱內，22°C黑暗條件下培養7天，得到被蛹蟲草菌侵染的黃粉蟲 蟲蛹，接種成功率達100%，然后將其置于22°C自然光照條件下培養3天，使蟲體轉色為澄 色，即為W黃粉