專利名稱:用于全身性炎癥的預后和診斷的溶血磷脂酰膽堿檢測的制作方法
用于全身性炎癥的預后和診斷的溶血磷脂酰膽堿檢測
1、發明領域
本發明涉及用于，例如診斷或預后個體全身性炎癥的方法和組合物。全身性炎癥可能是例如全身性炎性反應綜合征、膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能障礙(MOD)或死亡。
2、發明背景
疾病病狀的早期檢測通常容許更有效的治療性處理和相應更有利的臨床結果。然而，在許多情況中，由于疾病的復雜性，疾病癥狀的早期檢測存在問題；因此，在可能被診斷之前，疾病可能已變為相對晚期。全身性炎癥代表了這樣的一類疾病。這些病癥，尤其是膿毒癥，通常(但不總是)由病原微生物和宿主防御系統之間的相互作用引起，該相互作用在宿主中引發過度且異常調節的炎性反應。全身性炎性反應期間宿主應答的復雜性使得了解疾病發病機理的努力錯綜復雜(Healy，2002，Annul.Pharmacother.36:648-54中綜述)。對疾病發病機理的不完全理解又使發現有用的診斷性生物標記變得困難。然而，由于膿毒癥會及其迅速地發展成威脅生命的病癥，所以迫切需要早期并且可靠的診斷。
個體中膿毒癥的進展遵循明確的進程，從全身性炎性反應綜合征(“SIRS”)-陰性進展為SIRS-陽性，然后再進展為膿毒癥，膿毒癥然后可能發展成嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能障礙(“M0D”)，最終死亡。
記載在臨床上對膿毒癥重要的病原微生物的存在已經被證明是困難的。通常通過培養個體的血液、痰、尿、傷口分泌物、內置線導管表面等來檢測致病微生物。然而，致病微生物可能僅存在于體內的某些微環境中，從而所培養的具體材料可能不含有污染性微生物。感染部位的微生物數目少可使檢測更加復雜。血液中病原體數目少給通過培養血液診斷膿毒癥帶來了特別的問題。例如，在一項研究中，僅在17%的具有膿毒癥臨床表現的個體中得到陽性培養結果(Rangel-Frausto等，1995，JAMA 273:117-123)。非病原微生物污染樣品可使診斷進一步復雜化 。例如，在對707名敗血病患者的研究中，僅有12.4%的檢出微生物具有臨床意義(Weinstein 等，1997, Clinical InfectiousDiseases, 24:584-602)。
膿毒癥早期診斷的困難通過與該疾病相關的高發病率和高死亡率反映出來。當前膿毒癥是美國位居第十位的死亡原因并且在非冠脈(noncoronary)重病監護室(I⑶)中的住院患者中特別普遍，在非冠脈ICU中膿毒癥是最常見的死亡原因。總死亡率高達35%，估計僅在美國每年就發生750，000例死亡。僅在美國治療膿毒癥的年花費就達數十億美元。
多數現存的膿毒癥評分系統或預測模型僅能預測已經確診的膿毒癥患者的晚期并發癥包括死亡的風險，且不能夠預測膿毒癥本身的發展。通常，膿毒癥的診斷基于使用經驗評分系統例如APACHE II (Knaus等，1985，Crit.CareMed.13 =818-829)的臨床懷疑，隨后進行血液培養。這可能花費48小時或更長的時間來確定全身感染。到那時候，再來挽救病人就往往太遲了。如果膿毒癥的診斷或預后能夠早一些進行，可以進行治療阻止或延緩膿毒癥發展成嚴重膿毒癥或膿毒性休克。
因此，需要利用具有令人滿意的特異性和靈敏性的技術來足夠早地診斷膿毒癥的方法，以允許有效的干預和預防。
發明內容
一方面，本發明部分基于一個發現，即來自患者的樣品中的總溶血磷脂酰膽堿的量可被用于快速、靈敏和精確地診斷或預后個體的全身性炎癥。本發明的各方面中，來自患者的樣品中的總溶血磷脂酰膽堿被用于評估全身性炎癥的存在或風險。如下文的例子所示，本發明的方法和組合物可被用于診斷或預后全身性炎癥。全身性炎癥可以是本領域技術人員公知的任何全身性炎癥，包括全身性炎性反應綜合征(“SIRS”)、膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能障礙(“MOD”)和死亡。
在某些實施方案中，通過評價個體樣品中的總溶血磷脂酰膽堿，來估計全身性炎癥的存在或風險。正如本文中敘述，已經發現來自患者樣品的總溶血磷脂酰膽堿量與全身性炎癥的發作有關聯，甚至能表明全身性炎癥發作前的情況。因此，在某些實施方案中，來自患者樣品的總溶血磷脂酰膽堿可以用作全身性炎癥的預后。該評價可根據本領域技術人員公知的評價總溶血磷脂酰膽堿的任何技術進行。示例的技術本文中已有敘述。然而，本發明提供了基于本領域技術人員來說是顯而易見的任何評價總溶血磷脂酰膽堿的技術的方法。
在另一方面，本發明部分基于一類溶血磷脂酰膽堿生物標記的發現，這類生物標記能夠用于快速、靈敏和精確地診斷或預后個體的全身性炎癥。在本發明的一些方面，對該個體中本發明的生物標記的評價被用于估計全身性炎癥的存在或風險。如下文例子所示，本發明的方法和組合物可以用于在很短的時間內(例如8小時或甚至6小時)診斷或預后全身性炎癥，準確率高達80%或更高。全身性炎癥是本領域技術人員公認的任何全身性炎癥，包括全身性炎性反應綜合征(“SIRS”)、膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克和多器官功能障礙(“MOD”)。
在某些實施方案中，生物標記是1-0-酰基-2-溶血-sn-甘油_3_磷酸膽堿。酰基是本領域技術人員已知的任何酰基。在某些實施方案中，酰基是C14-C22酰基，在進一步的實施方案中，酰基是C16-C18酰基。在特定的實施方案中，酰基是C16酰基。在優選的實施方案中，酰基是棕櫚酰。在進 一步 具體實施方案中，酰基是C18酰基。在優選實施方案中，酰基是硬脂酰。生物標記可以是來自個體的任何生物標記形式，例如本領域技術人員能夠鑒定的生物標記的任何鹽或溶劑化物。
在某些實施方案中，生物標記是式(I)的化合物，或其鹽或溶劑化物:
權利要求
1.一種組合物在制備用于診斷或預后全身性炎性反應綜合征-陽性患者膿毒癥的試劑盒中的用途，其中所述組合物能夠用于測量患者血液、血漿或血清中的總溶血磷脂酰膽堿的量，其中所述溶血磷脂酰膽堿是式(I)代表的化合物或其鹽或溶劑化物:
2.權利要求
1的用途，其中所述診斷或預后是在實驗室確認臨床上顯著的導致膿毒癥的感染前的0、12、24、36或48小時作出的。
3.權利要求
1的用途，其中所述組合物包含: 能夠使溶血磷脂酰膽堿反應生成甘油磷脂酰膽堿的酶或試劑， 能夠使甘油磷脂酰膽堿反應生成膽堿的酶或試劑，能夠使膽堿、水和氧反應生成過氧化物的酶或試劑，過氧化物酶和所述過氧化物酶的熒光底物。
4.權利要求
3的用途，其中所述能夠使溶血磷脂酰膽堿反應生成甘油磷脂酰膽堿的酶或試劑是溶血磷脂酶。
5.權利要求
3的用途，其中所述能夠使溶血磷脂酰膽堿轉換成甘油磷脂酰膽堿的酶或試劑是EC3.L 1.5。
6.權利要求
3的用途，其中所述能夠使甘油磷脂酰膽堿反應生成膽堿的酶或試劑是甘油磷酯酰膽堿二脂酶。
7.權利要求
3的用途，其中所述能夠使甘油磷脂酰膽堿反應生成膽堿的酶或試劑是EC3.1.4.2。
8.權利要求
3的用途，其中所述能夠使膽堿反應生成過氧化物的酶或試劑是膽堿氧化酶。
9.權利要求
3的用途，其中所述能夠使膽堿反應生成過氧化物的酶或試劑是ECl.1.3.17。
10.權利要求
3的用途，其中所述過氧化物酶是辣根過氧化物酶。
11.權利要求
3的用途，其中所述熒光底物是10-乙酰基-3，7-二羥基吩噁嗪，且所述熒光產物是7-羥基-3H-吩噁嗪-3-酮。
12.權利要求
3的用途，其中所述熒光產物通過熒光檢測測定。
13.權利要求
1的用途，其中所述組合物包含能夠選擇性結合式(I)的化合物的抗體。
14.權利要求
1的用途，其中所述組合物能夠測量一個或多個額外的生物標記，該一個或多個額外的生物標記用于全身性炎癥的預后或診斷。
15.權利要求
14的用途，其中所述生物標記選自:內毒素、細菌DNA、蛋白C、降鈣素原、LBP-LPS-結合蛋白、纖維蛋白降解產物、HLA-DR、CD-64、E-選擇素、皮質醇、ACTH、CD-14、sTNFR1、sTNF-RI1、TNF, IL-6、IL-8、IL-10、D- 二聚體、凝血酶原、活化的部分凝血活酶、纖溶酶原激活物抑制劑-1、可溶性血栓調節蛋白、凝血酶激活的纖溶抑制物、蛋白S和抗凝血酶。
16.如權利要求
15所述的用途， 其中所述生物標記選自抗凝血酶III和TNF-α。
專利摘要
本發明提供了用于診斷或預后全身性炎癥例如膿毒癥的方法和組合物。
文檔編號C12Q1/06GKCN101316512 B發布類型授權 專利申請號CN 200680044371
公開日2013年7月31日 申請日期2006年9月27日
發明者石松, 托馬斯·吉恩特, 理查德·摩爾 申請人:貝克頓迪金森公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (6), 非專利引用 (1),