一種假絲酵母菌菌株及其應用，以及加工普洱茶的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物技術領域，具體而言，設及一種假絲酵母菌菌株及其應用，W及加 工普巧茶的方法。
【背景技術】
[0002] 隨著現代生物技術的發展，酵母菌已經廣泛地應用于人民生活當中的很多方面， 如釀酒、發酵果汁、發酵面包、制作乳制品、制造美味等。酵母有著天然豐富的營養體系，是 一種純天然、無污染、生物態的健康營養源。酵母被營養界譽為最有魅力的營養品。據報道， 酵母中含有50多種營養成分，人體健康所必須的蛋白質、維生素 B群、礦物質、核酸等都可 W從酵母中獲得。
[0003] 在傳統的普巧茶渥堆發酵中，微生物、濕熱作用、氧化及酶促反應等綜合作用使普 巧茶內含物質發生一系列轉化，在6-8周的時間內形成普巧茶所獨有的品質特征，運其中 微生物發揮著重要的作用。
[0004] 微生物資源豐富、代謝活躍，普巧茶發酵工藝革新的技術突破需要對微生物資源 進行挖掘和開發利用。目前還沒有將假絲酵母菌（Candida blankii)用于普巧茶的發酵加 工中的報道。

【發明內容】

[0005] 本發明提供了一種假絲酵母菌菌株及其應用，W及加工普巧茶的方法。
[0006] 具體而言，本發明提供了：
[0007] 一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏編號為CGMCC No. 8682,已于 2014年1月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、（CGMCC)。
[0008] 本發明還提供了一種加工普巧茶的方法，包括將分離純化的假絲酵母菌 (Candida blankii)接種于大葉種曬青毛茶中，進行發酵培養。
[0009] 優選地，所述大葉種曬青毛茶為已潮水的大葉種曬青毛茶。
[0010] 優選地，所述已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量為基于潮水之前的曬青毛茶的總 重量計為20-40% (m/m)。
[0011] 優選地，將處于生長指數期的所述假絲酵母菌接種于所述的曬青毛茶中。
[0012] 優選地，所述假絲酵母菌的接種量為每克所述的曬青毛茶接種5. ΟΧΙΟ4至 1. ΟΧ1〇6個。
[0013] 優選地，在所述接種之前，對所述的曬青毛茶進行滅菌處理。
[0014] 優選地，所述發酵培養在20-50°C的條件下發酵2-6周。
[0015] 優選地，所述發酵培養在25-45Γ的條件下發酵2-4周。
[0016] 優選地，在所述發酵培養時，對培養物進行補水。
[0017] 優選地，在所述發酵培養時，對培養物進行翻堆。
[0018] 優選地，所述假絲酵母菌為保藏編號為CGMCC No. 8682的假絲酵母菌菌株。
[0019] 本發明還提供了假絲酵母菌（Candida blankii)在普巧茶加工中的應用。
[0020] 優選地，所述假絲酵母菌為保藏編號為CGMCC No. 8682的假絲酵母菌菌株。
[0021] 本發明與現有技術相比具有W下優點和積極效果：
[0022] 1.本發明從渥堆普巧茶發酵樣品中分離得到假絲酵母菌（Candida blankii)， 并且首次將假絲酵母菌應用于普巧茶的發酵加工中。本發明發現，將該假絲酵母菌接種 到大葉種曬青毛茶中，經過一段時間的發酵后，可W得到湯色深紅略渾、甜感明顯、具有槐 花香高揚持久特點的普巧熟茶。在20-50°C條件下發酵2-4周，普巧茶中的茶氨酸含量為 1. 5-2. 1 % (m/m)，茶褐素含量為7. 4-12. 4% (m/m)，可溶性糖含量為1. 2-2. 9% (m/m)，水浸 出物含量為26. 3-38. 8% (m/m)。將假絲酵母菌（Candida blankii)用于普巧茶的加工不 僅能保持普巧茶原有的品質，而且能增加普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，而且縮短 了發酵的周期。此外，本發明通過進一步摸索和優化該假絲酵母菌應用于普巧茶加工時的 發酵條件，進一步改善了上述有益效果。運為普巧茶滋味的豐富和新產品的開發提供了重 要的應用基礎，對普巧茶產業的發展發揮了積極的作用。
[0023] 2.本發明提供了一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏編號為CGMCC No. 8682。該菌株在普巧茶的發酵加工中尤其能夠提供上述有益效果。
[0024] 生物材料保藏信息
[00巧]本發明提供的假絲酵母菌（Candida blankii)TMCC 70011菌株已于2014年1月 6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、（CGMCC)，保藏地址：北京市朝 陽區北辰西路1號院3號，郵編：100101,保藏編號為：CGMCC No. 8682。
【具體實施方式】
[00%] W下通過【具體實施方式】的描述對本發明作進一步說明，但運并非是對本發明的限 審IJ，本領域技術人員根據本發明的基本思想，可W做出各種修改或改進，但是只要不脫離本 發明的基本思想，均在本發明的范圍之內。
[0027] 本發明一個方面提供了一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株（即，TMCC 70011菌株）。該菌株已于2014年1月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中屯、（CGMCC，北京市朝陽區北辰西路1號院3號），保藏編號為CGMCC No. 8682。
[0028] 本發明所述的假絲酵母菌（Candida blankii)是一種布朗克假絲酵母菌。下文將 該假絲酵母菌（Candida blankii)統稱為"布朗克假絲酵母菌"。
[0029] 本發明的發明人通過大量的實驗研究，應用羅氏高通量454測序技術和Miseq測 序技術對普巧茶不同時期的渥堆發酵樣品進行了分析，發現了布朗克假絲酵母菌的存在， 之后通過純培養技術得到了所述TMCC 70011菌株。
[0030] 所述TMCC 70011菌株在普巧茶的渥堆發酵過程中，利用傳統渥堆普巧茶發酵樣 品，經平板稀釋涂布、初篩、復篩、純化培養等工序而獲得。TMCC 70011菌株可使用常規的 PDA培養基（葡萄糖20g，±豆200g，瓊脂糖2g，蒸饋水1000血，pH自然化8-7. 3))、ISP2號 培養基（蛋白腺4g，葡萄糖4g，酵母浸膏5g，瓊脂糖2g，蒸饋水lOOOmL，抑自然化.8-7. 3)) 等多種培養基進行復蘇活化。
[0031] 所述TMCC 70011菌株的形態學特征為：在ISP 2號培養基上培養48小時后觀察， 菌落整齊呈奶油色，表面濕潤有光澤，邊緣無權皺，直徑約0. 5mm左右。顯微鏡下觀察，細胞 呈長楠圓形，有假絲菌。在無氧條件下也能緩慢生長，為兼性厭氧菌，生長溫度在20-5(TC之 間。
[0032] 所述TMCC 70011菌株的理化特征為：
[0033] (1)對TMCC 70011菌株進行唯一碳源或唯一氮源利用實驗呈陽性的物質如下：
[0034]
[0035] (2)TMCC 70011菌株的酶活性實驗陽性結果如下：
[0036]
[0037] 通過測序，所述TMCC 70011菌株的18S rRNA基因序列如序列表中的序列1所示， ITS序列如序列表中的序列2所示。
[0038] 本發明的TMCC 70011菌株在普巧茶的發酵加工中具有特別良好的效果，其不僅 能保持普巧茶原有的品質，而且能增加普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，得到湯色深 紅略渾、甜感明顯、具有槐花香高揚持久特點的普巧熟茶。此外還能縮短發酵的周期。運為 普巧茶滋味的豐富和新產品的開發提供了重要的應用基礎，對普巧茶產業的發展發揮了積 極的作用。
[0039] 然而，傳統的普巧茶發酵需要大概6-8周的時間，且剛出堆的熟茶堆味較重，湯色 紅褐略混，需要經過一段時間的純化才能達到較好的品質。
[0040] 本發明另一個方面提供了一種加工普巧茶的方法，包括將分離純化的假絲酵母 菌（Candida blankii)接種于大葉種曬青毛茶中，進行發酵培養。
[0041] 本發明的發明人發現當將布朗克假絲酵母菌接種到已潮水的普巧曬青毛茶中，經 過一段時間的發酵后，可W得到湯色深紅略渾、甜感明顯、具有槐花香高揚持久特點的普巧 熟茶。將布朗克假絲酵母菌用于普巧茶的加工不僅能保持普巧茶原有的品質，而且能增加 普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，而且縮短了發酵的周期。因此，本發明首次將純化的 布朗克假絲酵母菌應用到了普巧茶的發酵加工中。
[0042] 本發明的布朗克假絲酵母菌是普巧茶發酵中的優勢菌群之一，其發達的酶系對普 巧茶內含物質的轉化發揮著重要的作用，同時酵母還有著豐富的營養物質，如蛋白質、維生 素等，運對普巧茶品質的形成有著重要的意義。
[0043] 優選地，在本發明的方法中，所述大葉種曬青毛茶為已潮水的大葉種曬青毛茶。 所述已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量優選為基于潮水之前的曬青毛茶的總重量計為 20-40% (m/m)。
[0044] 本文所用的術語"潮水"是指在渥堆前對曬青普巧毛茶人為加水至一定含水量。如 本領域已知的，大葉種曬青毛茶是由大葉種茶樹鮮葉經攤驚、殺青、揉搶、渥黃、干燥等工序 制作而成。
[0045] 在提及已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量時，其含水量按照W下公式計算：
[0046] 含水量=所加水的質量/加水之前曬青毛茶的總質量