認知功能障礙疾病的生物標記物及使用該生物標記物的認知功能障礙疾病的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種生物標記物W及使用該生物標記物的認知功能障礙疾病的檢測 方法，所述生物標記物是能夠用于檢測包括輕度認知障礙W及阿爾茨海默病的認知功能障 礙疾病的新型蛋白質W及膚。
【背景技術】
[0002] 作為使用生物體呈現正常和非正常狀態的試樣對其差異進行判別的手段，一般來 說，采用體外診斷藥的技術是主要的現有技術。
[0003] 體外診斷藥中最多的是W血液中的成分為生物標記物進行分析來實施診斷檢查。
[0004] 本領域的現有技術中，測定血液中的單獨的特定蛋白質或分子量1萬W下的所謂 低聚膚的存在量，或在酶蛋白質的情況下進行活性測定，W正常(健康人)試樣和疾病試樣 的顯著差異來幫助診斷。
[0005] 目P，預先對來自一定數量的健康人和疾病患者的生物體試樣中的單獨或多個特定 蛋白質或特定低聚膚的量或它們的活性量進行計測，確定異常值和正常值的范圍。接下來， 通過同樣的方法測定要評價的生物體試樣，根據測定結果屬于該確定的異常值和正常值中 的哪一個范圍來進行檢查評價。
[0006] 作為具體的計測方法，有將試樣直接使用或預先稀釋，使用被與基質反應而顯色 的酶標記的特異性一次抗體或二次抗體，W試樣的顯色量來計測單獨或多個特定蛋白質或 膚的量的酶聯免疫吸附試驗巧LISA;Enzyme Linked Immmunosorbent Assay)、化學發光測 定法（化ΙΑ;化emiLuminescent Immunoassay)等。另外，還有：使用結合在一次抗體或二次 抗體上的放射性同位素，計測該特定的蛋白質或膚的量的放射性免疫測定法（RIA; Radioimmunoassay),在蛋白質為酶的情況下直接給予基質通過顯色等計測產物的酶活性 測定法等。
[0007] 另外，還有通過高效液相色譜化PLC)分析酶的基質分解產物的方法。另外，還有組 合HPLC和質譜裝置的LC-MS/MS法W及使用它的選擇反應監測（selected reaction monitoring，SRM)/多反應監測(multiple reaction monitoring，MRM)法。
[000引另外，還有如下方法:在對試樣實施適當的前處理后，進行二維聚丙締酷胺凝膠電 泳(2D-PAGE)，分離蛋白質或膚后，對目標蛋白質或膚進行銀染色、考馬斯藍染色、或者使用 對應的抗體的免疫染色(Wes tern印跡法），測定試樣中的濃度。
[0009] 另外，有如下方法:通過柱色譜法將生物體試樣分饋，通過質譜分析對該饋分中包 含的蛋白質和膚進行分析。
[0010] 另外，還有不采用柱色譜法，作為前處理使用蛋白質忍片進行質譜分析的方法、作 為前處理使用磁珠實施質譜分析的方法。
[0011] 進而，本發明人開發出immunoMS法，即，使針對作為對象的蛋白質或膚的抗體結合 在珠(包括磁珠)上，由此捕捉想要測定的蛋白質或膚，然后，從珠上溶出，通過質譜分析進 行測定。
[0012] 另外，還報告有如下方法:為了解析完整蛋白質，用膜蛋白酶等進行分解后，通過 上述方法進行至質譜分析(參見專利文獻1)。
[0013] 但是，均利用完整蛋白質的性質，直接進行分饋，或篩選特異性吸附的蛋白質分 子，通過質譜分析來解析。
[0014] 在日本，隨著近年的老齡化，W阿爾茨海默病為主的認知功能障礙疾病也在激增。 1995年有大約130萬人，2010年達到大約280萬人，預計2020年將達到大約410萬人。據稱阿 爾茨海默病占認知功能障礙疾病的60~90 %。本疾病不僅使患者喪失記憶，而且人格也發 生蟻變，導致患者喪失社會生活能力，所W正在成為社會問題。
[0015] 日本在1999年末批準了乙酷基膽堿醋酶抑制劑鹽酸多奈贓齊(donepezil)，如果 早期用藥，能夠有很高的概率"延緩"認知功能的衰退。阿爾茨海默病中，為了提高現有治療 方法、未來開發出的治療藥的效果，早期診斷成為最重要課題。
[0016] 美國精神醫學會對阿爾茨海默病的主要診斷基準(DSM IV)如下所述。
[0017] A.發生多方面認知缺陷，表現為下述兩者：
[0018] (1)記憶受損(學習新信息的能力受損或不能回憶W前所學到的信息）；
[0019] (2)下列1項或更多的認知障礙
[0020] a)失語(語言障礙）
[0021] b)失用(雖然運動功能沒有問題，但不能執行動作）
[0022] C)失認(雖然感覺功能沒有問題，但不能認識或識別對象）
[0023] d)執行功能（即計劃、組織、排序、抽象能力）的障礙
[0024] B.基準A(l)與A(2)中所述的認知缺陷導致社交或職業功能顯著受損，并表現為運 些功能比W前明顯減弱(非專利文獻1)。
[0025] 阿爾茨海默病(Alzheimer disease) (AD)存在各種關聯疾病。因為AD等癡呆癥緩 慢出現認知功能下降，所W存在應稱為癡呆癥前驅狀態的狀態。將運種狀態稱為輕度認知 障礙(mild CO即itive impairment)(MCI)。根據美國的數據，健忘口診接診的MCI中，1年有 10~15%轉變為AD，4年中約50%轉變為ADdAD的前驅狀態中的絕大部分包括在健忘型MCI 中。
[0026] 根據目前的定義，MCI是雖然自稱認知功能下降，但不影響基本日常生活的狀態。 額顛葉癡呆癥(FTD)具有認知功能降低，并且不顧及他人感受的我行我素的行為特征，與想 要與周圍互動的AD形成對照。FTD中包括大腦皮質組織學上存在Pick細胞的Pick病。
[0027] Lewy小體型癡呆癥(DLB)的特征在于記憶障礙是進行性的，并且有幻視等視覺認 知障礙。根據臨床病情進行診斷時，癡呆癥的10~30%為DLB，老年期的變性性癡呆癥疾病 僅次于阿爾茨海默型癡呆癥(AD)，位居第二位。組織學特征是大腦中存在Lewy小體。FTD及 DLB被認為是癡呆癥，因為是癡呆型，所W也被稱為癡呆型神經疾病(非專利文獻1)。
[00%]廣泛用于癡呆癥診斷的檢查是通過修訂的長谷川式智力評級化DS-R)和MMSE(簡 易精神狀態檢查(Mini-Mental S化te Examination))，對受試者進行問診，根據其結果，進 行判斷。皿S在1991年修訂后被稱為皿S-R。
[0029]包括9項提問，對方向感、銘記力、計算能力、記憶?回憶W及常識進行測試。30分 滿分，23分W下疑似癡呆癥。另外，MMSE是美國設計的用于癡呆診斷的方法，涵蓋方向感、記 憶力、計算力、語言能力、圖形能力等。30分滿分，包括11項提問，與HDS-R同樣，23分W下疑 似癡呆癥。兩測試的結果相當一致。運些問診法終歸是為了篩選而使用的，并未到達確診的 程度，皿S-R、MMSE均無法用于重癥度分類(非專利文獻1)。
[0030] 作為影像診斷法，有可觀察到腦萎縮.腦溝腦室擴大等腦形態異常的CT · MRI和 可觀察到腦血流量的腦血流閃爍掃描法(SPECT)W及可觀察到氧消耗量?葡萄糖消耗量的 正電子發射型斷層法(PET)dSPECTW及PET是核醫學方法，能夠在發生形態異常前檢測出異 常(非專利文獻1)。但是，因為運些影像診斷需要特殊的設備，所W有無法在所有醫療機構 中進行實施的缺點。另外，判斷因觀察影像的醫生而不同，缺乏客觀性。
[0031] 現狀是像運樣地包括AD的癡呆癥的診斷依賴于欠缺客觀性、并且W使用昂貴的裝 置為前提的方法，無法進行用于發現疾病的篩選。在此，如果能夠發現使用血液(包括血清、 血漿)運樣容易得到的患者的試樣就能夠進行客觀診斷的生物標記物，則通過進行篩選，即 可早期發現成為目前最重要課題的認知功能障礙疾病。
[0032] 專利文獻1中公開了一種對上述癌癥哺乳動物血清中的載脂蛋白A-II量的變化進 行檢測的方法，其特征在于，將來源于同一癌癥哺乳動物的多個血清樣品中包含的載脂蛋 白A-II的定量值在上述樣品間進行相互比較。
[0033] 專利文獻2中公開了一種用于肝癌檢測的肝癌生物標記物，是由選自包含該文獻2 中記載的序列號1所表示的氨基酸序列的纖維蛋白原α鏈等的至少1個蛋白質或膚形成的。
[0034] 專利文獻3~5中公開了用于診斷認知功能障礙疾病的生物標記物。專利文獻5中， 公開了一種用于檢測認知功能障礙疾病的生物標記物，是由從含有該文獻5中記載的序列 號1所表示的氨基酸序列的補體C3、含有該文獻5中記載的序列號15所表示的氨基酸序列的 甲狀腺素運載蛋白等中選擇的至少1個蛋白質或膚、或由該蛋白質或膚產生的5個W上氨基 酸殘基的膚片斷形成的。
[0035] 現有技術文獻
[0036] 專利文獻
[0037] 專利文獻1:日本特開號公報
[0038] 專利文獻2:日本特開號公報
[0039] 專利文獻3:日本特開號公報
[0040] 專利文獻4:日本特開號公報 [0041 ] 專利文獻5:日本特開號公報
[0042] 非專利文獻
[0043] 非專利文獻1:中野今治、水澤英洋編輯:詳解阿爾茨海默病、2004、永井書店
[0044] 非專利文獻2:Ν.Be址irane等、J.Biol. Chem. Vol. 268，26279-26285，1993.
[0045] 非專利文獻3 :Czepiel, SA,http: //czep .net/stat/mlelr. pdf, 2010 'Maximum likelihood estimation of logistic regression models：theory and implementation.
[0046] 非專利文獻 4:Bowling, SR, et al.JIEM，2009,2:114-127, A logistic approximation to the cumulative normal distribution.

【發明內容】

[0047] 本發明的目的在于提供一種生物標記物及使用該生物標記物的認知功能障礙疾 病的檢測方法。
[0048] 本發明人探索非認知功能障礙受試者及認知功能障礙疾病患者中的、存在與否及 存在量不同的蛋白質及其部分膚。
[0049] 本發明人進行了深入研究，結果發現能夠檢測出認知功能障礙疾病的巧中多膚。該 巧中多膚是(a)由序列號1所表示的氨基酸序列形成的來自載脂蛋白A1的膚、（b)由序列號2 所表示的氨基酸序列形成的來自甲狀腺素運載蛋白的膚及(C)由序列號3所表示的氨基酸 序列形成的來自補體C3的膚。
[0050] 進而，本發明人通過邏輯回歸分析對檢測認知功能障礙疾病時準確率高的生物標 記物的組合進行了解析。結果發現通過將其中的上述(C)來自補體C3的膚和上述(b)來自甲 狀腺素運載蛋白的膚或上述(a)來自載脂蛋白A1的膚運巧中膚組合使用，能夠提高