一種免疫熒光層析檢測用樣本稀釋液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種樣本稀釋液，具體涉及一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液。
【背景技術】
[0002] 免疫層析檢測方法雖然簡便、快速，但其可供檢測的樣本類型非常多，例如血清、 血漿、全血、尿液等，不同類型的樣本在檢測時存在不同的檢測環境，且樣本中復雜的蛋白 成分會與包被在試紙條上的抗體、熒光標記物不同程度結合，可干擾檢測結果，導致檢測線 出現非特異的、非常嚴重的假信號，即假陽性。
[0003] 現有技術在熒光微球抗體制備的過程中，采用含特殊成分的封閉液降低生物樣本 檢測的假陽性，但其制備工藝復雜，成本較高。

【發明內容】

[0004] 本發明所要解決的技術問題是:現有熒光微球抗體制備時需要采用含特殊成分的 封閉液降低假陽性，工藝復雜、成本高，提供解決上述問題的一種熒光免疫層析檢測用樣本 稀釋液。
[0005] 本發明通過下述技術方案實現： 一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，包括緩沖物質、封閉劑、親水性大分子物質、表 面活性劑和氯化鈉。
[0006] 本發明中的親水性大分子物質和表面活性劑可對試紙條上干燥的熒光標記物進 行很好的重新溶解，并提供良好的親水環境，為抗原抗體免疫反應提供有利條件。但封閉試 劑和表面活性劑僅僅能夠達到將釋放墊上干燥的標記物洗脫下來，對于非特異性吸附的消 除作用并不完全。本發明中加入氯化鈉作為關鍵組分，可以彌補封閉試劑和表面活性劑對 假陽性消除效果的不足，且非常明顯改善樣本的離子環境或保持血細胞的滲透壓，防止檢 測時血細胞破裂而干擾反應，同時有效降低樣本中非特異性蛋白在包被膜上的非特異性吸 附，明顯地改善了假陽性問題。
[0007] 即，本發明通過上述組成成分的組合，可僅通過樣本稀釋即能有效消除免疫層析 檢測中使用的多種樣本(如:血清、血漿、全血)的假陽性，克服基質效應帶來的影響，實現熒 光免疫層析定量檢測結果的準確性。
[0008] 優選地，本發明中所述緩沖物質的濃度為5~500mmol/L，封閉劑的濃度為1~50g/ L，親水性大分子物質的濃度為0.001g/L~100g/L，表面活性劑的濃度為0.001g/L~50g/L， 氯化鈉的濃度為150~1000mmol/L。
[0009] 在上述濃度范圍下，能夠有效使檢測準確度得到最大化地提高，通過該氯化鈉濃 度范圍的選擇，對于非特異性的改善和血細胞的滲透壓調節具有雙重效果。且通過實施例 和對照試驗檢測出的熒光信號值的對比結果可知:本發明中各組分的過量或不足將導致熒 光標記物無法充分復溶，不僅達不到高的檢測靈敏度，甚至會帶來更多的假陽性問題。 [00 10]優選地，所述緩沖物質為1.21~121.65g//L的N-三(羥甲基）甲基-3-氨基丙磺酸， 或1.04~104.65g/L的3-嗎啉丙磺酸。所述封閉劑為酪蛋白。所述親水性大分子物質為聚乙 稀醇或聚乙稀吡略燒酮。所述表面活性劑為Pluronic F-68或Brij35〇
[0011] 本發明中的各組成成分的價格非常低廉，且通過本發明的直接對樣品稀釋后，無 需對免疫熒光層析試紙條的其他組分進行封閉處理，節約了處理時間和物質成本，操作十 分簡便。并且本發明能夠用于血清、血漿、全血多種基質樣本的假陽性消除，應用范圍廣泛。
[0012] 本發明與現有技術相比，具有如下的優點和有益效果： 1、 本發明通過上述組成成分的組合，可僅通過樣本稀釋即能有效消除免疫層析檢測中 使用的多種樣本(如:血清、血漿、全血)的假陽性，克服基質效應帶來的影響，實現熒光免疫 層析定量檢測結果的準確性； 2、 本發明有效使檢測準確度得到最大化地提高，通過該氯化鈉濃度范圍的選擇，對于 非特異性的改善和血細胞的滲透壓調節具有雙重效果； 3、 本發明能夠用于血清、血漿、全血多種基質樣本的假陽性消除，應用范圍廣泛。
【具體實施方式】
[0013] 為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，下面結合實施例，對本發明作 進一步的詳細說明，本發明的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本發明，并不作為對本 發明的限定。 實施例
[0014] -種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，包括緩沖物質、封閉劑、親水性大分子物 質、表面活性劑和氯化鈉。
[0015] 其中，所述緩沖物質為TAPS或MOPS，該TAPS為N-三(羥甲基）甲基-3-氨基丙磺酸的 簡寫，MOPS為3-嗎啉丙磺酸的簡寫。所述封閉劑為酪蛋白。所述親水性大分子物質為PVA或 PVP-K30，該PVA為聚乙烯醇的簡寫，該PVP-K30為聚乙烯吡咯烷酮的簡寫。所述表面活性劑 為Pluronic F-68或Brij35。
[0016] 因緩沖物質、親水性大分子物質和表面活性劑均可以為多種具體物質，且其作用 原理相同，故本實施例僅舉例每一類物質中的一種具體物質。具體設置如表1所示。
[0017] 表1
本發明稀釋液的制備方法如下： 用量筒量取800mL去離子水于適合量程燒杯中，分別稱取上述表1中各實例和對照例的 物質加入到該燒杯中，充分攪拌至完全溶解，調pH至8.0，定容至1L。
[0018] 分別量取0.5mL上述不同配比的稀釋液，并對樣品進行倍比稀釋，然后將稀釋后的 樣品運用到免疫熒光層析檢測試紙條上進行零濃度和低濃度的熒光檢測，其中零濃度樣本 的濃度為〇. 〇〇ng/ml，低濃度樣本的濃度為0.50ng/ml。零濃度樣本用于檢測各實施例是否 存在假陽性;低濃度樣本用于檢測各實施例靈敏度的高低。本實施例的具體檢測結果如表2 所示。
[0019] 表2
通過表2可知:通過對照例3可知，本發明中各組分的過量或不足將導致熒光標記物無 法充分復溶，不僅達不到高的檢測靈敏度，甚至會帶來更多的假陽性問題。
[0020] 以上所述的【具體實施方式】，對本發明的目的、技術方案和有益效果進行了進一步 詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發明的【具體實施方式】而已，并不用于限定本發明 的保護范圍，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含 在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種免疫熒光層析檢測用樣本稀釋液，其特征在于，包括緩沖物質、封閉劑、親水性 大分子物質、表面活性劑和氯化鈉。2. 根據權利要求1所述的一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，其特征在于， 所述緩沖物質的濃度為5~500mmol/L，封閉劑的濃度為1~50g/L，親水性大分子物質 的濃度為〇.〇〇lg/L~100g/L，表面活性劑的濃度為O.OOlg/L~50g/L，氯化鈉的濃度為150 ~1000mmol/L 〇3. 根據權利要求1或2所述的一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，其特征在于， 所述緩沖物質為1.21~121.65g/L的N-三（羥甲基）甲基-3-氨基丙磺酸，或1.04~ 104.65g/L的3-嗎啉丙磺酸。4. 根據權利要求1或2所述的一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，其特征在于，所述 封閉劑為酪蛋白。5. 根據權利要求1或2所述的一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，其特征在于，所述 親水性大分子物質為聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。6. 根據權利要求1或2所述的一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，其特征在于，所述 表面活性劑為Pluronic F-68或Brij35。
【專利摘要】本發明公開了一種熒光免疫層析檢測用樣本稀釋液，解決了現有預處理試劑僅僅只是防止物質非特異地吸附到免疫層析試紙條上時，不能更好地提高檢測的靈敏度和準確度的問題。本發明包括緩沖物質、封閉劑、親水性大分子物質、表面活性劑、金屬螯合劑、防腐劑和氯化鈉。本發明能更好地提高檢測的靈敏度和準確度，效果十分顯著。
【IPC分類】G01N33/533
【公開號】CN105606798
【申請號】CN201610216337
【發明人】代敏, 林 源, 譚韜
【申請人】四川新健康成生物股份有限公司
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2016年4月8日