抗體組合物及其在白血病淋巴瘤分型中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于抗體醫藥技術領域，具體而言，本發明涉及抗體組合物及其在白血病 和淋巴瘤分型中的應用以及分型試劑盒等。
【背景技術】
[0002] 常見的血液腫瘤主要包括各類白血病、骨髓增生異常綜合征、多發性骨髓瘤以及 惡性淋巴瘤等，是嚴重危害人民生命健康的重大疾病。在診斷發現血液疾病后，通常需要進 行分型。例如，中國專利第00133797號公開了可用于白血病分型的蛋白芯片，其包括抗至少 19種細胞表面抗原的抗體；中國專利第200910082657號公開了可用于急性淋巴細胞白血病 基因分型的基因芯片，其包括62種DNA片段；中國專利第201410250033號公開了可用于急性 淋巴細胞白血病基因分型的試劑盒，其包括三組共58個引物對。這些分型的方案正在向越 來越復雜的方向發展。
[0003] 臨床上也采用流式細胞術進行分型。由于CD45是白細胞共同的抗原，所以當前基 本上是以CD45vs SSC(CD45/SSC)設門的流式細胞術免疫分型，尤其是在初篩中進行分型 (初篩方案是每個血液腫瘤病人均需要做的）。例如，王卉等（四色流式細胞術分析B細胞型 急性淋巴細胞白血病免疫表型.中國實驗血液學雜志，11 (2): 137)、張瑋等（流式細胞術 CD45/SSC設門在急性白血病免疫分型中的應用.西安交通大學學報(醫學版），28(4):462) 和劉光明等(六色流式細胞術用于兒童急性B系淋巴細胞白血病相關免疫表型的檢測.中國 小兒血液與腫瘤雜志，17(3): 104)均報道了以CD45/SSC設門對各類白血病進行流式細胞術 免疫分型的技術，然而，本發明人發現，即便不計算抗CD45抗體，這些技術需要大量的抗不 同細胞表面抗原的抗體，少則也要約10種，而且如上所述，分型的方案正在向越來越復雜的 方向發展，使用的抗體種類有越來越多的趨勢。這不但增加了分型的成本，而且增加了操作 難度，所以推廣得到了限制。
[0004] 而本發明人沒有受現有技術的發展趨勢的限制，經過十余年臨床實踐和研究，令 人意外地篩選出包括抗CD45抗體在內的七種抗體，組合為兩種組合物，每組四種抗體，配合 四色流式細胞儀，僅需一次上機操作，就可有效進行多種血液腫瘤的免疫分型（特別是初 篩），而且節約了成本、操作更趨簡單、快速，特別適合于臨床白血病、淋巴瘤的初篩中推廣 應用。

【發明內容】

[0005] 本發明要解決的技術問題是提供兩種新的抗體組合物及包括它們的試劑盒，用于 進行白血病和淋巴瘤分型。另外，本發明還提供了使用它們進行白血病和淋巴瘤分型的方 法和應用等。
[0006] 具體而言，在第一方面，本發明提供了抗體組合物，其包括抗⑶45抗體、抗⑶13抗 體、抗⑶33抗體和抗⑶7抗體。
[0007] 優選本發明第一方面的抗體組合物由抗CD45抗體、抗CD13抗體、抗CD33抗體和抗 ⑶7抗體組成。
[0008]更優選本發明第一方面的抗體組合物中每種抗體被標記不同的熒光標記，優選每 種抗體被分別標記FITC、PE、PerCP-Cy5.5和APC。這樣可以在四色流式細胞儀單管(檢測一 根流式管時）即可同時檢測出抗CD45抗體、抗CD13抗體、抗CD33抗體和抗CD7抗體的結果。 [0009 ]在第二方面，本發明提供了抗體組合物，其包括抗⑶45抗體、抗⑶117抗體、抗⑶34 抗體和抗⑶19抗體。
[0010] 優選本發明第二方面的抗體組合物由抗⑶45抗體、抗⑶117抗體、抗⑶34抗體和抗 ⑶19抗體組成。
[0011]更優選本發明第二方面的抗體組合物中每種抗體被標記不同的熒光標記，優選每 種抗體被分別標記FITC、PE、PerCP-Cy5.5和APC。這樣可以在四色流式細胞儀單管(檢測一 根流式管時）即可同時檢測出抗CD45抗體、抗CD 117抗體、抗CD34抗體和抗CD 19抗體的結果。 [0012]在本文中，抗體本身是本領域技術人員所熟知的，特異結合(抗)相應抗體。抗體可 以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體，在本發明的【具體實施方式】中，優選是單克隆抗體。 抗體可以是鼠源的，也可以是人源的。在本文中，如沒有相反的指示，各抗體的抗原，即各細 胞表面抗原(⑶45、⑶13、⑶33、⑶7、⑶117、⑶34和⑶19)，均為人細胞表面抗原。
[0013]在第三方面，本發明提供了用于白血病和淋巴瘤分型的試劑盒，其包括第一容器 和第二容器，其中，第一容器包括本發明第一方面的抗體組合物，第二容器包括本發明第二 方面的抗體組合物。
[0014] 本發明第三方面的試劑盒可以僅采用包括抗CD45抗體在內的7種抗體，就能對多 種血液腫瘤（白血病、淋巴瘤、骨髓增生異常綜合征等)進行初篩分型，在血液腫瘤免疫分型 中應用前景廣闊。
[0015] 在本文中，第一容器和第二容器中的標號僅僅為表示不同容器，并不對容器本身 的材質、形狀構成限制，只要容器能容納并保存本發明的抗體組合物即可。容器可以是管、 瓶，其材質可以是塑料或玻璃。
[0016] 本發明第三方面的試劑盒還可以包括其他參與進行白血病和淋巴瘤分型的試劑 和設備。優選本發明第三方面的試劑盒中還包括紅細胞裂解液(如，10X紅細胞裂解液)和/ 或緩沖液(如，磷酸鹽緩沖液）。本發明第三方面的試劑盒中還可以包括與流式細胞儀配套 使用的流式管、細胞計數板、渦旋振蕩器、移液器、離心機等，尤其是流式管、細胞計數板等 耗材。
[0017] 另外，本發明第三方面的試劑盒還可以包括指導進行白血病和淋巴瘤分型的說明 書或手冊。
[0018] 在第四方面，本發明提供了白血病和淋巴瘤分型的方法，其包括：
[0019] (1)處理骨髓或外周血樣品，使得呈單個細胞懸液狀態；
[0020] (2)將步驟(1)處理的樣品等分，分別與權利要求2所述的抗體組合物和權利要求4 所述的抗體組合物混合入兩根流式管，混勻后孵育；
[0021] (3)向步驟(2)孵育的兩根流式管加入紅細胞裂解液，混勻后孵育，離心，去上清并 重懸;和，
[0022] (4)四色流式細胞儀檢測步驟(3)重懸的兩根流式管，并計算結果。
[0023]由于是對已經診斷出白血病和淋巴瘤的病人樣品進行分型，不再出具有診斷信息 的結果(如果混有健康人的樣品，反而干擾分型的準確性），而且也沒有樣品的獲取步驟，甚 至可以是使用教學用樣品來進行教授白血病和淋巴瘤分型的方法，因此本發明第四方面的 方法是非診斷的免疫分型方法。
[0024] 優選在本發明第四方面的方法中，計算結果是計算抗以下細胞表面抗原的抗體對 的熒光結果（流式細胞儀檢測的熒光結果）：CD33vs CD13、CD33vs CD7、CD7vs CD13、 CD117vs CD34、CD117vs CD19和CD19vs CD34，即，計算以下抗體對的熒光結果:抗CD33抗體 vs抗⑶13抗體、抗⑶33抗體vs抗⑶7抗體、抗⑶7抗體vs抗⑶13抗體、抗⑶117抗體vs抗⑶34 抗體、抗⑶117抗體vs抗⑶19抗體和抗⑶19抗體vs抗⑶34抗體。在本文中，如無相反指示，檢 測均是以CD45vs SSC(即CD45/SSC)設門。
[0025] 在第五方面，本發明提供了本發明第一方面的抗體組合物和本發明第二方面的抗 體組合物聯合在制備白血病和淋巴瘤分型的試劑盒中的應用。
[0026] 優選在本發明第五方面的應用中，試劑盒是本發明第三方面的試劑盒。
[0027]也優選在本發明第五方面的應用中，白血病和淋巴瘤分型的方法是本發明第四方 面的方法。
[0028] 本發明的有益效果在于:優化了抗體組合和標記對應抗體的熒光標記組合以及結 果判讀方法，只需要使用7種抗體即可有效對多種血液腫瘤（白血病、淋巴瘤、骨髓增生異常 綜合征等)進行初篩分型，節約了成本，操作更趨簡單、快速。
[0029] 為了便于理解，以下將通過具體的附圖、實施例對本發明進行詳細地描述。需要特 別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構