用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條及其制備方法和抗繆勒氏管激素濃度的測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條及其制備方法和抗繆勒氏管激素濃度的測定方法，屬于生物技術領域；所述的試紙條包括底板，所述的底板上附著有依次排列的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。本發明的試紙條具有檢測結果準確，方便，成本低廉的優點。
【專利說明】
用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條及其制備方法和抗繆 勒氏管激素濃度的測定方法
技術領域
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用于定量檢測人抗繆勒氏管激素(AMH) 的免疫層析試紙條及其制備方法和抗繆勒氏管激素(AMH)濃度的即時快速測定方法。
【背景技術】
[0002] 隨著現代生活方式的改變，普遍的晚婚晚育現象、不良的現代生活方式(如過度節 食減肥、吸煙飲酒、熬夜）、巨大的工作精神壓力，造成不孕不育率迅速上升。因此，對女性生 育能力的盡早評估是十分必要的。抗繆勒氏管激素就是這樣的創新性卵巢儲備功能的評價 指標;抗繆勒氏管激素，又稱AMH，是早期卵泡的直接產物，由二硫化物橋連接兩個72KDa單 體組成的糖蛋白二聚體，由女性卵巢組織的粒層細胞分泌。AMH最初表達于初級卵泡的顆粒 細胞層，在直徑約〇. 1~〇. 2_的竇前卵泡及直徑約2_左右小竇狀卵泡中表達最強，而在> 4_竇狀卵泡中表達逐漸減弱至完全消失，對于卵泡發育具有重要的調節作用，血清AMH水 平不受垂體促性腺激素的影響，在整個月經周期中數值變化不大。
[0003] 相對于目前常用的預測卵巢儲備及卵巢反應性(年齡及竇卵泡數目（AFC)，卵泡刺 激素(FSH)和雌二醇(E2)等)傳統方法而言，血清AMH值可即時生成準確、可靠的標準化結果 來評估卵巢儲備功能;可更早、靈敏反映卵巢儲備功能的改變。在監測卵巢儲備力、診斷卵 巢相關疾病、預測IVF成功率及預防0HSS并發癥等方面具有其他指標不可比擬的優勢;AMH 是目前預測卵巢反應、評估卵巢儲備功能的最理想生物標志物。
[0004] 對于AMH的檢測，目前臨床的方法包括:酶聯免疫法(ELISA)、化學發光(CLIA)、電 化學發光法等方法，但這些方法都有各自的特點及不足。ELISA法由于定量準確，廣泛應用 于醫院檢驗科，但檢測時間長，不便捷;化學發光法和電化學發光法由于設備昂貴，并且不 適合單人份和較小批量檢測用，目前在臨床應用還是相對較少。因此，臨床上迫切需求建立 一種快速、便捷、經濟的AMH檢測方法。

【發明內容】

[0005] 有鑒于此，本發明實施例提供一種用于定量檢測AMH的免疫層析試紙條，其具有成 本低廉，測定便捷的優點。
[0006] 本發明還提供了一種用于定量檢測AMH的免疫層析試紙條的制備方法。
[0007] 本發明還提供了一種用于定量檢測AMH的免疫層析試紙條的應用。
[0008] -方面，本發明提供一種用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條，所述的試紙條 包括底板，所述的底板上附著有沿縱向依次排列的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水 墊。
[0009] 進一步的，所述的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊在所述的底板上從左 到右依次排列，所述的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊的長度比為13-17:10-12: 20-24:24-24。
[0010] 進一步的，所述的標記抗體墊包括包被有標記物的第一AMH單克隆抗體。
[0011] 進一步的，所述的標記物標記的第一AMH單克隆抗體是熒光標記或膠體金標記的 AMH抗體。
[0012]進一步的，所述的包被膜上包被有檢測帶和質控帶，所述檢測帶固定有第二AMH單 克隆抗體，所述的質控線上固定有兔抗鼠IgG抗體。
[0013] 進一步的，所述的包被膜為硝酸纖維素膜。
[0014] 另一方面，本發明提供一種用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條的制備方法， 包括如下步驟:在試紙條的底板上依次固定樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。
[0015] 進一步的，所述的包被膜通過如下方法制備而得：
[0016] 使用第一磷酸鹽緩沖液分別稀釋兔抗小鼠IgG和AMH抗體得到兔抗小鼠IgG溶液和 AMH抗體溶液，所述的第一磷酸鹽緩沖液濃度為0.01-0.03M，pH值為7.2-7.6，所述的兔抗小 鼠IgG溶液和AMH抗體溶液的濃度均為lmg/ml-1.5mg/ml;使用定量噴膜儀以0.8-1.2yl/cm 的量將二者以0.5cm-l. 0cm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，35-38 °C烘干0.5-1.5h，加入干燥 劑封存備用。
[0017] 進一步的，所述的標記抗體墊由如下方法制備而得：
[0018] 制備AMH抗體溶液:用第一硼酸鹽緩沖液將AMH抗體透析得到AMH抗體溶液，所述的 第一硼酸鹽緩沖液濃度為0.03-0.07M，pH值為8.0-8.5，透析溫度為3-5°C，透析時間T彡 16h;將所述的AMH抗體溶液濃度調整為1.5-2mg/ml;
[0019] 熒光微球預處理:使用pH4.5-5.0的MES活化緩沖液洗滌熒光微球，加入碳二亞胺 和琥珀酰亞胺使二者終濃度均為18-22mmol/L，室溫反應10-20min，充分洗滌熒光微球；
[0020] 用濃度為0.03-0.07M的pH值為8.0-8.5的第二硼酸鹽緩沖液將預處理過的所述的 熒光微球復溶后加入所述AMH抗體溶液中，使所述的AMH抗體與熒光微球的質量比為1 -4: 50，室溫反應1.5-2.5h，加入第二磷酸鹽緩沖液室溫封閉20-40min，所述的第二磷酸鹽緩沖 液中BSA的質量分數為10 %，所述的第二磷酸鹽緩沖溶液濃度為0.02M，pH值為7.2-7.6;用 第三磷酸鹽緩沖液保存液復溶至反應前體積，所述的第三磷酸鹽緩沖液中按質量百分數計 包括0.3-0.7 %的BSA和0.2-0.3 %的Tween-20，所述的第三磷酸鹽緩沖液pH值為7.2-7.6， 濃度為0.01-0.0311;使用定量噴膜儀以3-5111/〇11噴涂于玻璃纖維墊上，避光35-38°(：烘干 lh，加入干燥劑封存備用。
[0021] 再一方面，本發明還提供一種抗繆勒氏管激素濃度的測定方法，包括如下步驟：
[0022] 標準曲線的繪制:將抗繆勒氏管激素標準品配制成梯度濃度標準溶液進行熒光強 度測定，以檢測線、質控線的熒光強度比值為縱坐標，抗繆勒氏管激素標準溶液濃度為橫坐 標，擬合成標準曲線。
[0023] 樣品的檢測:將待測樣品滴到試紙條上，然后用熒光檢測裝置檢測，得出所述的樣 品中的AMH的濃度；
[0024] 所述的試紙條為權利要求1-6任一項所述的試紙條。
[0025] 使用時，在樣品墊上加入樣品液，在毛細作用下，樣品液向吸水墊一端泳動，當待 測標本中含有抗繆勒氏管激素(AMH)時，AMH與熒光微球上的抗體結合形成復合物，隨著層 析作用，復合物向前移動到達檢測線T處，復合物中的AMH和包被膜上的AMH抗體結合聚集在 T線處，未結合的熒光微球標記物會繼續前行，到達質控線C時，兔抗小鼠IgG抗體與熒光微 球上的鼠源性單抗結合，在C線處出現熒光微球的聚集。整個反應在15分鐘內完成，并進行 上機讀卡，T線和C線都會產生相應的熒光信號，熒光檢測儀會根據定標卡上的信息將實際 檢測值代入預設的標準曲線中算出定量的結果。
[0026]與現有技術相比，本發明至少具有如下優點：
[0027]本發明將AMH單克隆抗體共價偶聯在熒光微球上，噴于玻璃纖維墊上后作為檢測 的流動相，將兔抗小鼠IgG和另一種AMH單克隆抗體包被于硝酸纖維素膜上作為捕獲固相， 按照常規免疫層析法的原理進行標本的檢測，結合簡便易行的熒光檢測儀進行檢測，在實 現高靈敏度檢測的同時又能大大縮短檢測的時間。
[0028]通過對試紙條的改進，將熒光免疫層析技術引入AMH的檢測中，結合熒光檢測儀， 實現了 AMH的單人份定量檢測，為臨床使用提供了極大便利。
[0029]本發明操作簡便、適合大規模生產，檢測所需的便攜式設備也已經上市，對于AMH 的定量診斷有著積極的意義。
[0030]對于AMH檢測，本發明申請實現了不同于以上方法的檢測系統上的創新:高靈敏度 檢測AMH的同時又能大大縮短檢測的時間，15分鐘內實現單人份定量檢測，為臨床使用提供 了極大便利，更適合專業科室操作。
【附圖說明】
[0031]圖1為本發明AMH檢測試紙條的正面結構示意圖；
[0032]圖2為本發明AMH檢測試紙條的側面結構示意圖；
[0033]圖3為本發明實施例3中的檢測標準曲線；
[0034]圖4為應用本發明與羅氏電化學方法，對40例樣本測定的AMH濃度值的相關性示意 圖。
【具體實施方式】
[0035] 下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細描述，應當理解，以下實施例是為了 方便本領域技術人員對本發明方案的理解，但不作為對本發明的限定。
[0036] -種用于定量檢測AMH的免疫層析試紙條，所述的試紙條包括底板，所述的底板上 附著有依次排列的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。
[0037] 上述方案中的試紙條已經可以完成檢測，下面在此基礎上給出優選方案：
[0038] 所述的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊在所述的底板上從左到右依次 排列，所述的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊的長度比為13-17:10-12:20-24: 20-24;所述的標記抗體墊包括包被有標記物的第一 AMH單克隆抗體;所述的標記物標記的 第一 AMH單克隆抗體是熒光標記或膠體金標記的AMH抗體;所述的包被膜上包被有檢測帶和 質控帶，所述檢測帶固定有第二AMH單克隆抗體，所述的質控線上固定有兔抗鼠IgG抗體;所 述的包被膜為硝酸纖維素膜。
[0039] 上述試紙條的制備方法包括如下步驟:在試紙條的底板上依次固定樣品吸收墊、 標記抗體墊、包被膜和吸水墊；
[0040] 所述的包被膜通過如下方法制備而得：
[0041 ] 使用第一磷酸鹽緩沖液分別稀釋兔抗小鼠IgG和AMH抗體得到兔抗小鼠IgG溶液和 AMH抗體溶液，所述的第一磷酸鹽緩沖液濃度為0.01-0.03M，pH值為7.2-7.6，所述的兔抗小 鼠IgG溶液和AMH抗體溶液的濃度均為lmg/ml-1.5mg/ml;使用定量噴膜儀以0.8-1.2yl/cm 的量將二者以0.5cm-l. 0cm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，35-38 °C烘干0.5-1.5h，加入干燥 劑封存備用。
[0042] 所述的標記抗體墊由如下方法制備而得：
[0043] 制備AMH抗體溶液:用第一硼酸鹽緩沖液將AMH抗體透析得到AMH抗體溶液，所述的 第一硼酸鹽緩沖液濃度為0.03-0.07M，pH值為8.0-8.5，透析溫度為3-5°C，透析時間T彡 16h;將所述的AMH抗體溶液濃度調整為1.5-2mg/ml;
[0044] 熒光微球預處理:使用pH4.5-5.0的MES活化緩沖液洗滌熒光微球，加入碳二亞胺 和琥珀酰亞胺使二者終濃度均為18-22mmol/L，室溫反應10-20min，充分洗滌熒光微球； [0045]用濃度為0.03-0.07M的pH值為8.0-8.5的第二硼酸鹽緩沖液將預處理過的所述的 熒光微球復溶后加入所述AMH抗體溶液中，使所述的AMH抗體與熒光微球的質量比為1 -4: 50，室溫反應1.5-2.5h，加入第二磷酸鹽緩沖液室溫封閉20-40min，所述的第二磷酸鹽緩沖 液中BSA的質量分數為10 %，所述的第二磷酸鹽緩沖溶液濃度為0.02M，pH值為7.2-7.6;用 第三磷酸鹽緩沖液保存液復溶至反應前體積，所述的第三磷酸鹽緩沖液中按質量百分數計 包括0.3-0.7 %的BSA和0.2-0.3 %的Tween-20，所述的第三磷酸鹽緩沖液pH值為7.2-7.6， 濃度為0.01-0.0311;使用定量噴膜儀以3-5111/〇11噴涂于玻璃纖維墊上，避光35-38°(：烘干 lh，加入干燥劑封存備用。
[0046]下面是具體實施例 [0047] 實施例1
[0048] AMH的熒光免疫層析試紙條的制備：
[0049] A、抗體的制備:選用商品化的AMH單克隆抗體，用0.0 5M pH8.5的硼酸鹽緩沖液4 °C 透析過夜（18h);選用商品化的AMH單克隆抗體，用0.02M pH7.4的PBS 4°C透析過夜（16h);
[0050] B、標記A M H單克隆抗體的熒光微球墊的制備：選用直徑為10 0 n m的熒光微球 (Bangslab公司，激發波長350nm，檢測波長615nm)，用0.05M，pH4.5MES緩沖液調節微球濃度 為質量分數1%，然后使用碳二亞胺(EDC)和琥珀酰亞胺(NHS)共價偶聯的方式將AMH單克隆 抗體標記到熒光微球上。將制備好的熒光微球使用定量噴膜儀以3iil/cm的量噴涂于熒光微 球墊上；
[0051] C、硝酸纖維素膜的制備：
[0052] 使用含有質量分數1 %蔗糖的濃度為0.02M的pH7.4PBS分別將AMH單克隆抗體和兔 抗小鼠IgG抗體均稀釋到lmg/ml濃度，使用定量噴膜儀分別將二者以0.5cm的間隔噴涂于硝 酸纖維素膜上，35-38 °C烘干lh，加入干燥劑封存備用；
[0053] D樣品墊的處理：
[0054] 將樣品墊放入樣品墊處理液(含有質量分數1%BSA和0.1%Triton X-100的0.1M pH7.4磷酸鹽緩沖液或者含有質量分數1 %BSA的0.1M Tris緩沖液）中浸泡處理1小時后， 35-38 °C 烘干 5h;
[0055] E試紙條的組裝：
[0056]下述操作必須在濕度小于38%，溫度20_25°C的房間內進行。
[0057]在PVC底板上依次相互交錯2mm粘貼上硝酸纖維素膜、結合了 AMH抗體的熒光微球 墊、樣品墊、吸水墊，然后切割成0.6cm寬，即得到試紙條。
[0058]圖1為本發明中試紙條的正面結構示意圖，圖2為本發明中試紙條的側面結構示意 圖；如圖1和圖2所示，本實施例的AMH的熒光免疫層析試紙條包括底板6、底板上的包被有質 控帶C和檢測帶T的硝酸纖維素膜4、覆蓋于硝酸纖維素膜一側的高強度吸水紙4、覆蓋于硝 酸纖維素膜的另一側的熒光標記的AMH單克隆抗體墊、和樣品墊1;所述的檢測帶T包被有 AMH單克隆抗體;所述的質控帶包被有兔抗鼠IgG抗體。
[0059] 實施例2
[0060]本實施例的試紙條制備方法包括以下步驟：
[00611 A、抗體的制備:選用商品化的AMH單克隆抗體，用0.05M pH8.5的硼酸鹽緩沖液4 °C 透析過夜;選用商品化的AMH單克隆抗體，用0.02M pH7.4的PBS 4°C透析過夜；
[0062] B、標記AMH單克隆抗體的膠體金墊的制備：
[0063] 取膠體金50ml，過濾。
[0064]用水稀釋抗體3倍（約lmg/ml)，30min內加完，邊加便混勻，在冰附近，混勻力度要 小，防止破壞抗體與膠體金的連接
[0065] 加入10%BSA，使溶液終濃度為1%，加入10%PEG使終濃度為0.2%，15min內加完。
[0066] 1000(^/1^11，60111111離心，仔細吸出上清，沉淀物用含1%834的？8液（含0.02% NaN3)，將沉淀重懸為原體積的1 /10，4°C保存。
[0067]將制備好的膠體金標記物使用定量噴膜儀以3iil/cm的量噴涂于標記墊上。
[0068] C、硝酸纖維素膜的制備：
[0069]使用含有1 %蔗糖的0.02M pH7.4PBS分別將AMH單克隆抗體和兔抗小鼠IgG抗體均 稀釋到lmg/ml濃度，使用定量噴膜儀分別將二者以0.5cm的間隔噴涂于硝酸纖維素膜上， 35-38°C烘干lh，加入干燥劑封存備用；
[0070] D樣品墊的處理：
[0071] 將樣品墊放入樣品墊處理液(含有1%BSA和0.1%Triton X-100的0.1M pH7.4磷 酸鹽緩沖液或者含有1 %BSA的0.1M Tris緩沖液）中浸泡處理1小時后，35-38°C烘干5h; [0072] E試紙條的組裝：
[0073]下述操作必須在濕度小于38%，溫度20_25°C的房間內進行。
[0074]在PVC底板上依次相互交錯2mm粘貼上硝酸纖維素膜、結合了 AMH抗體的膠體金墊、 樣品墊、吸水墊，然后切割成0.6cm寬，即得到試紙條。
[0075]如圖1和圖2所示，本實施例的AMH的膠體金免疫層析試紙條包括底板6、底板上的 包被有質控帶C和檢測帶T的硝酸纖維素膜4、覆蓋于硝酸纖維素膜一側的高強度吸水紙5、 覆蓋于硝酸纖維素膜的另一側的膠體金標記的AMH單克隆抗體墊、和樣品墊1;
[0076]所述的檢測帶T包被有AMH單克隆抗體;所述的質控帶包被有兔抗鼠IgG抗體。 [0077] 實施例3
[0078]熒光免疫層析定量檢測血液中抗繆勒氏管激素(AMH)濃度
[0079] 1.標準曲線的繪制
[0080] 將AMH標準品配制成 100ng/ml、40ng/ml、20ng/ml、5ng/ml、lng/ml、0ng/ml，用同一 批次的試紙條，每個點測試6次。按照統計學方法，以檢測線(T帶）、質控線(C帶)的熒光強度 比值(T帶檢測值/C帶檢測值)為縱坐標，抗繆勒氏管激素(AMH)標準溶液濃度為橫坐標，建 立方程并擬合成標準曲線，標準曲線如圖3所示。
[0081 ] 2 ?樣品的檢測：
[0082] 1)從包裝盒中取出實施例1的檢測條，撕開鋁箱袋包裝后，平放檢測條，取100yl樣 本加入加樣孔中，室溫避光反應15分鐘。
[0083] 2)開啟熒光檢測設備，并將檢測條及校準卡插入熒光檢測設備的插卡口，運行儀 器，儀器通過相應的分析軟件自動計算出待測樣本中的AMH的濃度。
[0084]目前已知AMH測定僅有適合醫院檢驗科用于批量檢測的酶聯免疫法(ELISA)、化學 發光(CLIA)、電化學發光法，還沒有適合單人份、快速檢測、即時出結果的檢測。
[0085] 對于AMH檢測，本專利實現了不同于以上方法的檢測系統上的創新:高靈敏度檢測 AMH的同時又能大大縮短檢測的時間，實現的單人份定量檢測，為臨床使用提供了極大便 利，更適合專業科室操作。
[0086] 3)與羅氏抗繆勒管激素檢測試劑盒(電化學發光法)檢測的相關性比較。
[0087]采用本發明的試條與熒光檢測設備組成的檢測體系，按照上述檢測方法檢測了 40 例人血清樣本；同時，用羅氏抗繆勒管激素檢測試劑盒（電化學發光法)檢測上述的40例樣 本。檢測結果見表1，相關性比較見圖4。兩種方法檢測結果的相關性r>0.975,具有顯著意 義。
[0088] 以羅氏抗繆勒管激素檢測試劑盒（電化學發光法)檢測上述的40例樣本的檢測結 果為橫坐標，以本發明申請的方法測定的結果為縱坐標，繪制相關性曲線;結果表明二者相 關性很好。
[0089] 表1.本法與羅氏抗繆勒管激素檢測試劑盒(電化學發光法)檢測比較

[0092]本發明方案未盡之處，本領域技術人員可根據需要選擇現有的技術來完成，如試 紙條的具體尺寸，檢測所用的具體時間和樣本取量等。
[0093]以上實施例僅為本發明的示例性實施例，不用于限制本發明，本發明的保護范圍 由權利要求書限定。本領域技術人員可以在本發明的實質和保護范圍內，對本發明做出各 種修改或等同替換，這種修改或等同替換也應視為落在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條，其特征在于，所述的試紙條包括底板， 所述的底板上附著有沿縱向依次排列的樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。2. 根據權利要求1所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條，其特征在于，所述的 樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊在所述的底板上從左到右依次排列，所述的樣品 吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊的長度比為13-17:10-12:20-24:24-24。3. 根據權利要求1所述的所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條，其特征在于， 所述的標記抗體墊包括包被有標記物的第一 AMH單克隆抗體。4. 根據權利要求3所述的所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條，其特征在于， 所述的標記物標記的第一 AMH單克隆抗體是熒光標記或膠體金標記的AMH抗體。5. 根據權利要求1所述的所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條，其特征在于， 所述的包被膜上包被有檢測帶和質控帶，所述檢測帶固定有第二AMH單克隆抗體，所述的質 控線上固定有兔抗鼠 IgG抗體。6. 根據權利要求1所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的免疫層析試紙條，其特征在 于，所述的包被膜為硝酸纖維素膜。7. -種權利要求1-6任意一項所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條的制備方 法，其特征在于，在試紙條的底板上依次固定樣品吸收墊、標記抗體墊、包被膜和吸水墊。8. 根據權利要求7所述的用于定量檢測抗繆勒氏管激素的試紙條的制備方法，其特征 在于，所述的包被膜通過如下方法制備而得： 使用第一磷酸鹽緩沖液分別稀釋兔抗小鼠 I gG和AMH抗體得到兔抗小鼠 I gG溶液和AMH 抗體溶液，所述的第一磷酸鹽緩沖液濃度為〇. 01-0.03M，pH值為7.2-7.6，所述的兔抗小鼠 IgG溶液和AMH抗體溶液的濃度均為lmg/ml-1.5mg/ml;使用定量噴膜儀以0.8-1.2yl/cm的 量將二者以〇 . 5cm-l. Ocm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，35-38°C烘干0.5-1.5h，加入干燥劑 封存備用。9. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的標記抗體墊由如下方法制備而得： 制備AMH抗體溶液:用第一硼酸鹽緩沖液將AMH抗體透析得到AMH抗體溶液，所述的第一 硼酸鹽緩沖液濃度為〇. 03-0.07M，pH值為8.0-8.5，透析溫度為3-5°C，透析時間T彡16h;將 所述的AMH抗體溶液濃度調整為1.5-2mg/ml; 熒光微球預處理:使用PH4.5-5.0的MES活化緩沖液洗滌熒光微球，加入碳二亞胺和琥 珀酰亞胺使二者終濃度均為18-22mmol/L，室溫反應10-20min，充分洗滌熒光微球； 用濃度為〇. 03-0.07M的pH值為8.0-8.5的第二硼酸鹽緩沖液將預處理過的所述的熒光 微球復溶后加入所述AMH抗體溶液中，使所述的AMH抗體與熒光微球的質量比為1 -4:50，室 溫反應1.5-2.5h，加入第二磷酸鹽緩沖液室溫封閉20-40min，所述的第二磷酸鹽緩沖液中 BSA的質量分數為10 %，所述的第二磷酸鹽緩沖溶液濃度為0.02M，pH值為7.2-7.6;用第三 磷酸鹽緩沖液保存液復溶至反應前體積，所述的第三磷酸鹽緩沖液中按質量百分數計包括 0.3-0.7 %的BSA和0.2-0.3 %的Tween-20，所述的第三磷酸鹽緩沖液pH值為7.2-7.6，濃度 為0.01-0.03M;使用定量噴膜儀以3-5μ1/αη噴涂于玻璃纖維墊上，避光35-38°C烘干Ih，加 入干燥劑封存備用。10. -種抗繆勒氏管激素濃度的測定方法，其特征在于，包括如下步驟： 標準曲線的繪制:將抗繆勒氏管激素標準品配制成梯度濃度標準溶液進行熒光強度測 定，以檢測線、質控線的熒光強度比值為縱坐標，抗繆勒氏管激素標準溶液濃度為橫坐標， 擬合成標準曲線。 樣品的檢測:將待測樣品滴到試紙條上，然后用熒光檢測裝置檢測，得出所述的樣品中 的AMH的濃度； 所述的試紙條為權利要求1-6任一項所述的試紙條。
【文檔編號】G01N33/558GK105891490SQ201610207375
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月5日
【發明人】付國亮, 段學軍
【申請人】付國亮