一種紅細胞模擬粒子、其制備方法以及含該模擬粒子的質控物或校準物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本申請涉及血液細胞分析領域，具體涉及一種紅細胞模擬粒子、其制備方法以及 含該模擬粒子的質控物或校準物。
【背景技術】
[0002] 紅細胞是人血液中的重要組成成分，紅細胞的數量和形態相關參數是血液常規篩 查的重要參數。血液細胞分析儀器對外周全血進行分析可以獲得紅細胞的參數信息，為了 有效的對儀器的紅細胞相關結果輸出進行監控和校準，需要制備能夠有效模擬紅細胞特征 的紅細胞模擬粒子。
[0003] 目前，紅細胞模擬粒子相關技術在本應用領域往往存在以下缺陷：
[0004] (1)紅細胞呈現雙凹圓盤形貌，這種狀態下紅細胞形態分布不均一，特別當遇到不 同的處理試劑或保存試劑時，不均一特征會更加明顯，這也給細胞固定化后長期放置時細 胞形態的保持帶來挑戰；（2)紅細胞模擬粒子難以保持體積的長期穩定，在血細胞分析儀 質控物和校準物要求的有效期內MCV (平均紅細胞體積）變化較大。
[0005] 因此，如何獲得形態均一且體積能夠保持長期穩定的紅細胞模擬粒子顯得非常必 要。

【發明內容】

[0006] 為解決上述問題，本申請提供了一種紅細胞模擬粒子及其制備方法。所述紅細胞 模擬粒子形狀為球形，形態均一，其形態和體積能夠保持長期穩定；所述紅細胞模擬粒子的 制備方法簡單。本申請還提供了含該模擬粒子的血液細胞分析質控物或校準物。
[0007] 本申請第一方面提供了一種紅細胞模擬粒子，所述紅細胞模擬粒子的形狀為球 形。
[0008] 優選地，所述紅細胞模擬粒子是將天然紅細胞經過球形化和固定化后得到的球形 細胞。
[0009] 本申請第一方面提供的紅細胞模擬粒子，形狀為球形，形態均一，在經過后續試劑 處理后或長期放置后細胞形態、體積能夠保持長期穩定，避免了現有技術中紅細胞模擬粒 子形狀為雙凹圓盤導致的細胞形態不均一的缺陷。
[0010] 本申請第二方面提供了一種紅細胞模擬粒子的制備方法，包括以下步驟：
[0011] (1)配制紅細胞處理液，采用所述紅細胞處理液對血液樣本中的紅細胞進行球形 化和固定化一步處理或分步進行球形化處理、固定化處理，所述紅細胞處理液包括以下組 分：
[0012] 細胞球形化組分：其包括表面活性劑，所述表面活性劑為陽離子、陰離子、非離子 和/或兩性離子表面活性劑，所述表面活性劑的質量濃度以能夠使紅細胞球形化，且不破 壞紅細胞和不出現血紅蛋白泄漏到胞外的濃度為準，本領域技術人員能夠根據各類表面活 性劑的性質選擇合適的濃度；
[0013] 細胞膜磷脂固定組分，用于固定細胞膜磷脂；
[0014] 血紅蛋白氧化組分，用于氧化血紅蛋白；
[0015] 細胞膜蛋白質固定組分：其包括醛類，用于固定細胞膜蛋白質；
[0016] 將所述紅細胞處理液的滲透壓控制為300-8000sm/kg ? H20, pH控制為5. 0-9. 0 ;
[0017] (2)將經步驟（1)處理后的紅細胞進行洗滌、保存，得到紅細胞模擬粒子。
[0018] 本申請中，用于制備紅細胞模擬粒子的紅細胞來源為天然存在的動物紅細胞，優 選地，和人紅細胞體積接近的動物紅細胞，例如猴子的紅細胞、鱷魚的紅細胞，或者豬的紅 細胞，更優選是人的紅細胞。
[0019] 本申請可以對紅細胞進行球形化處理和固定化一步處理，也可以先進行球形化處 理，再進行固定化處理。
[0020] 在一個實施方式中，所述紅細胞處理液包括紅細胞處理液A和紅細胞處理液B，所 述紅細胞處理液A包括所述細胞球形化組分，所述紅細胞處理液B包括所述細胞膜磷脂固 定組分、所述血紅蛋白氧化組分和所述細胞膜蛋白質固定組分。在一步處理中，紅細胞處理 液A和B混合為一份溶液。當采用所述紅細胞處理液對紅細胞分步進行球形化處理、固定 化處理時，首先采用所述紅細胞處理液A對紅細胞進行球形化處理，然后采用所述紅細胞 處理液B對所述紅細胞進行固定化處理。優選地，球形化處理和固定處理之間可以將經球 形化處理后的紅細胞進行洗滌。
[0021] 更優選地，采用生理鹽水洗滌經球形化處理后的紅細胞，采用緩沖液懸浮紅細胞， 所述緩沖液為檸檬酸鈉緩沖液、Tris緩沖液、PBS緩沖液或HEPES緩沖液。
[0022] 優選地，將所述紅細胞處理液A和所述紅細胞處理液B的滲透壓控制為 300-8000sm/kg ? H20, pH 控制為 5. 0-9. 0。
[0023] 本申請使用細胞球形化組分對紅細胞進行球形化處理，所述細胞球形化組分為至 少一種表面活性劑，優選地，所述表面活性劑為通式I所示的陽離子表面活性劑或通式II 所示的陰離子表面活性劑，通常的使用濃度為〇. 〇〇5g/L-〇. 5g/L，
其中&為C 6 14烷基，R 2為C i 4烷基，R 3為C i 4烷基， (I )， r4為c14烷基或芐基，Z為鹵素尚子；
[0025] r5-so3x(ii)，其中馬為C 12 18烷基，X為堿金屬離子。
[0026] 更優選地，所述表面活性劑為十二烷基磺酸鈉、十六烷基三甲基氯化銨、十烷基三 甲基氯化銨、十四烷基三甲基氯化銨或十二烷基二甲基芐基氯化銨。
[0027] 為了使細胞體積穩定，本申請使用細胞膜磷脂固定組分固定細胞膜磷脂，加強了 細胞膜的穩定性，同時，得到的紅細胞模擬粒子的磷脂仍然可以被表面活性劑溶解導致細 胞被溶解。
[0028] 為了減少對紅細胞血紅蛋白的影響和進一步穩定細胞內血紅蛋白，本申請采用血 紅蛋白氧化組分氧化血紅蛋白。
[0029] 優選地，所述細胞膜磷脂固定組分和所述血紅蛋白氧化組分中均包括重鉻酸鹽， 重鉻酸鹽的使用濃度為〇? Olg/L-5. Og/L，優選0? 05g/L-2. 5g/L。
[0030] 更優選地，所述重鉻酸鹽為重鉻酸鉀或重鉻酸鈉。
[0031] 本申請使用細胞膜蛋白質固定組分對細胞膜蛋白質進行固定化，對細胞膜進一步 強化，維持細胞的球形形態和提高細胞的穩定性。所述細胞膜蛋白質固定組分包括醛類，優 選地，所述醛類為甲醛、戊二醛、乙二醛、丙酮醛和多聚甲醛中的至少一種。
[0032] 優選地，所述紅細胞處理液中，所述細胞膜蛋白質固定組分的體積分數為 0? 01% -0? 1%〇
[0033] 所述紅細胞處理液的滲透壓和pH控制在一定范圍內；優選地，使用滲透壓調節劑 調節所述紅細胞處理液的滲透壓，所述滲透壓調節劑為氯化鈉、磷酸二氫鈉、氯化鉀或檸檬 酸鈉。使用滲透壓調節劑對所述紅細胞處理液進行滲透壓微調可以對細胞體積作進一步的 調整，減少了細胞批間的體積細小差異。
[0034] 優選地，使用緩沖液調節所述紅細胞處理液的pH，所述緩沖液為檸檬酸鈉緩沖液、 Tris緩沖液、PBS緩沖液或HEPES緩沖液。
[0035] 優選地，所述紅細胞處理液中還含有疊氮化鈉，在所述紅細胞處理液中的濃度為 2X 10 4g/mL-2X 10 2g/mL，疊氮化鈉起防腐殺菌的作用。
[0036] 可以根據實際需要制備含有紅細胞的血液樣本，所述血液樣本可以為混合血液樣 本或純紅細胞