一種枸杞多糖的快速檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及用比色法測定來測試材料，尤其是一種枸杞多糖的快速檢測方法。
【背景技術】
[0002] 杞多糖是枸杞的主要有效成分，它是一種由酸性雜多糖與多肽或蛋白質構成的復 合多糖，其分子量大、結構組成極為復雜，具有抗菌、抗腫瘤、抗衰老、保肝護肝的功效，同時 也是枸杞子降血糖、降血壓、降脂、抗炎等的活性物質。
[0003] 枸杞多糖在枸杞子中含量為3~5%，水溶性良好，又不被樹脂吸附，所以工業生產 上枸杞多糖的富集和精制比較困難，而枸杞多糖又由于其提高免疫力和保健功效，價格遠 遠高于其它植物多糖產品，市場上出現了用淀粉、麥芽糊精或其它低價植物多糖冒充枸杞 多糖的現象。目前，對于枸杞多糖的檢測傳統采用硫酸蒽酮法，其是利用糖在濃硫酸作用 下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮 反應生成藍綠色糠醛衍生物，進行比色測定糖的含量，故可用于糖的定量。但是，其水解多 糖時間長達2h，不利于大批量檢測。

【發明內容】

[0004] 為了克服現有的硫酸蒽酮法檢測枸杞多糖存在水解多糖時間長、不利于大批量檢 測的不足，本發明提供一種多糖水解時間短、檢測速度快、利于大批量檢測的枸杞多糖的快 速檢測方法。
[0005] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案為：一種枸杞多糖的快速檢測方法，其 特征在于：其經過下列工藝步驟： (1) 繪制標準曲線：準確吸取葡聚糖標準應用液〇. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00ml置比色 管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酚溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混勻，沸水浴2min，冷卻后用 分光光度計在485nm處測光密度值；以試劑空白為參比，以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐 標繪制標準曲線； (2) 多糖提取：稱取待測樣品1. 0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去離子水混勻，沸 水浴中加熱lh，冷卻至室溫后定容至200ml，混勾后過濾，收集濾液； (3) 乙醇沉淀多糖：將步驟（2)中得到的濾液置于燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻后加 入無水乙醇40ml，靜置15min，將溶液轉移至離心管中，離心，棄上清液，沉淀用80%乙醇洗 滌3次后供測定用； (4) 樣品測定：將步驟（3)中得到的沉淀用2. 0ml、1. 8mol/L硫酸溶解并定容至25ml ; 準確吸取1. 〇ml置于比色管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酸溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混 勻，沸水浴2min，冷卻后在分光光度計上在485nm處測光密度值，以公式
進行計算，得枸杞多糖含量； 其中：在計算公式中， X -試樣中枸杞多糖含量，g/lOOg ; \ 一樣品提取時定容體積，ml ; V2-提取多糖物質取液量，ml ; C 一從標準曲線上查的樣品測定管中葡聚糖含量，mg; V3 -測定葡聚糖定容體積，ml ; V4 -樣品比色管取樣液體積，ml ; m -試樣質量，g。 所述的離心管的轉速控制為3500rpm，離心時間5min。
[0006] 本發明的檢測方法中，先是利用水提醇沉法提取多糖物質，再與苯酚-硫酸反應 生成有色物質進行比色測定含量，與傳統方法比較，本發明利用乙醇沉淀多糖物質將檢測 時間從2h減少到lh，本方法縮短了樣品水解時間，提高了實驗效率，利于大批量檢測。
【附圖說明】
[0007] 下面結合附圖和實施例對本發明做進一步說明。
[0008] 圖1是本發明不同水解時間對枸杞多糖含量測定結果的影響曲線圖。
【具體實施方式】 實施例
[0009] 一種枸杞多糖的快速檢測方法，其經過下列工藝步驟： (1) 繪制標準曲線：準確吸取葡聚糖標準應用液0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00ml置比色 管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酚溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混勻，沸水浴2min，冷卻后用 分光光度計在485nm處測光密度值；以試劑空白為參比，以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐 標繪制標準曲線； (2) 多糖提取：稱取待測樣品1. 0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去離子水混勻，沸 水浴中加熱lh，冷卻至室溫后定容至200ml，混勾后過濾，收集濾液； (3) 乙醇沉淀多糖：將步驟（1)中得到的濾液置于燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻后加 入無水乙醇40ml，靜置15min，將溶液轉移至離心管中，控制離心管的轉速為3500rpm，離心 時間5min，棄上清液，沉淀用80%乙醇洗滌3次后供測定用； (4) 樣品測定：將步驟（2)中得到的沉淀用2. 0ml、1. 8mol/L硫酸溶解并定容至25ml ; 準確吸取1. 〇ml置于比色管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酸溶液1. 0ml，濃硫酸10ml混 勻，沸水浴2min，冷卻后在分光光度計上在485nm處測光密度值，以公式
進行計算，得枸杞多糖含量；其中， 在計算公式中， X -試樣中枸杞多糖含量，g/l〇〇g ; \ 一樣品提取時定容體積，ml ; V2-提取多糖物質取液量，ml ; C 一從標準曲線上查的樣品測定管中葡聚糖含量，mg; v3 -測定葡聚糖定容體積，ml ; V4 -樣品比色管取樣液體積，ml ; m -試樣質量，g。 本發明在多糖提取時，不同水解時間對枸杞多糖含量測定結果的影響如下表：
其多糖提取時，不同水解時間對枸杞多糖含量測定結果的影響曲線，如圖1所示。
[0010] 由圖1及附表結果可知，沸水浴提取多糖的時間0. 5h與2. Oh結果相差較大，而 1. 0h，1. 5h和2. Oh結果相差很小，為節省時間，選擇1. Oh水解時間。
[0011] 本發明克服了硫酸蒽酮法檢測枸杞多糖水解時長的問題，縮短檢測時間，利于大 批量檢測。
【主權項】
1. 一種枸杞多糖的快速檢測方法，其特征在于：其經過下列工藝步驟： (1) 繪制標準曲線：準確吸取葡聚糖標準應用液0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. OOml置比色 管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酚溶液I. 0ml，濃硫酸IOml混勻，沸水浴2min，冷卻后用 分光光度計在485nm處測光密度值；以試劑空白為參比，以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐 標繪制標準曲線； (2) 多糖提取：稱取待測樣品1.0 g置于200ml容量瓶中，加入100mL去離子水混勻，沸 水浴中加熱lh，冷卻至室溫后定容至200ml，混勾后過濾，收集濾液； (3) 乙醇沉淀多糖：將步驟（2)中得到的濾液置于燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻后加 入無水乙醇40ml，靜置15min，將溶液轉移至離心管中，離心，棄上清液，沉淀用80%乙醇洗 滌3次后供測定用； (4) 樣品測定：將步驟（3)中得到的沉淀用2. 0ml、I. 8mol/L硫酸溶解并定容至25ml ; 準確吸取1.0 ml置于比色管中，補水至2. 0ml，加入20g/L苯酸溶液I. 0ml，濃硫酸IOml混 勻，沸水浴2min，冷卻后在分光光度計上在485nm處測光密度值，以公式進行計算，得枸杞多糖含量； 其中：在計算公式中， X -試樣中枸杞多糖含量，g/l〇〇g ; V1 一樣品提取時定容體積，ml ; V2-提取多糖物質取液量，ml ; C 一從標準曲線上查的樣品測定管中葡聚糖含量，mg; V3 -測定葡聚糖定容體積，ml ; V4 -樣品比色管取樣液體積，ml ; m -試樣質量，g。2. 根據權利要求1所述的一種枸杞多糖的快速檢測方法，其特征在于：所述的離心管 的轉速控制為3500rpm，離心時間5min。
【專利摘要】本發明公開了一種枸杞多糖的快速檢測方法。其主要解決現有硫酸蒽酮法檢測枸杞多糖存在水解多糖時間長的問題。其經過下列工藝步驟：吸取葡聚糖標準應用液補水，加入苯酚溶液、濃硫酸混勻，沸水浴，冷卻后在485nm處以試劑空白溶液為對照繪制標準曲線；待測樣品沸水浴水解并定容，過濾，收集濾液；濾液加熱濃縮，冷卻后加入無水乙醇，靜置，離心，沉淀加入乙醇洗滌后供測定；沉淀用硫酸溶解并定容；吸取樣品補水，加入苯酚溶液、濃硫酸混勻，沸水浴，冷卻后在485nm處測光密度值，計算得出枸杞多糖含量。本發明的方法水解時間縮短，檢測效率高，利于大批量檢測。
【IPC分類】G01N21/78, G01N21/31
【公開號】CN105352952
【申請號】CN201510819156
【發明人】王麗娜, 侯進森, 張偉
【申請人】威海百合生物技術股份有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月23日