一種中藥注射劑微量樹脂的檢查方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種中藥注射劑的檢查方法，尤其設及一種中藥注射劑微量樹脂的檢 查方法，屬于中藥注射劑安全性評價領域。 技術背景
[0002] 中藥注射劑最早產生于上世紀四十年代，由錢信忠等學者開創，現已廣泛應用于 臨床。2010年版《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）一部就收錄有燈盞細辛等單 方和復方注射劑。中藥注射劑能提升藥效、使某些中藥的療效能得到更好地發揮，在推進中 藥劑型發展，拓展中藥的應用范圍，服務廣大人民健康等方面的確功不可沒。從技術上來 講，業界大體上已經解決了中藥注射劑的有效性問題（盡管作用機制尚不完全清除），安全 性依然是業界難題。
[0003] 隨著中藥注射劑的廣泛應用，不良反應不斷發現，甚至致死性不良反應也屢有報 道。近年來發生的"清開靈注射液事件"、"雙黃連注射液事件"、"魚腥草注射液事件"等說 明中藥注射劑的安全性不容忽視，受到業界甚至公眾的廣泛關注。
[0004] 傳統中藥的療效最早來自口服和外用，沒有注射給藥方式。大多中藥注射劑的研 發也源自口服劑的療效，如清開靈注射液、雙黃連注射液、丹參注射液和燈盞細辛注射液。 口服能夠吸收的中藥成分基本上都屬于小分子物質，因為大分子物質不易吸收，或者需降 解之后才能吸收，而降解產物吸收后不可能在機體重新組裝成原來的大分子物質。
[0005] 中藥注射劑具有生物提取物的特征，目前的制備流程沒有針對性的大分子物質去 除工藝。因此，中藥注射劑含有小分子物質，也含有少量或微量的大分子物質。大分子和小 分子尚無統一的分子量界限，但學術界對于"分子量越大口服越難吸收"的觀點深入人屯、。 W2010年版《中國藥典》二部收載的2271個藥物（品種）為例，在治療全身性疾病的口服 化學藥物中，分子量大于500的較少見，超過1000的則罕見（只有環抱素、維生素B12、腺巧 鉆胺、依托紅霉素4個，但吸收不太理想），超過3000的則沒有。分子量與吸收的關系實際 上已經在藥物設計方面得到了廣泛應用。一般認為中藥注射劑中可能含有的蛋白質、踩質 (縮合踩質）、多糖、核酸和樹脂均視為大分子物質，2000年版《中國藥典》也對其中的蛋白 質、踩質和樹脂開始進行檢查。因此，我們推測，基于傳統口服劑上升而來的中藥注射劑療 效來自所含的小分子物質，與分子量大于3000的物質幾乎無關。
[0006] 由于中藥注射劑具有生物提取物的特征，因此在提取的過程中不可避免地帶來一 些生物大分子，比如植物蛋白質、核酸等，還有可能帶入踩質、樹脂、多糖等大分子。該些大 分子口服是不能直接吸收的，必須經過消化道的降解才可能W小分子吸收。蛋白質是抗原 性最強的常見物質，而且分子量越大抗原性越強，越容易引起過敏反應或類過敏反應。據此 推測，中藥注射劑含有的微量蛋白質是導致過敏或類過敏等特有不良反應的主要原因，其 他大分子如多糖、核酸、踩質、樹脂等也可能參與了該些不良反應。因此中藥注射劑的安全 性很大程度上取決于所含的大分子成分。對來自中藥的大分子成分分析如下：
[0007] 熱原；多為細菌的細胞壁的脂多糖成分，分子量較大，能引起恒溫動物發熱、休克、 甚至死亡。
[000引蛋白質；多為植物蛋白，部分為動物蛋白或微生物蛋白。蛋白質類物質是抗原性較 強的化學物質，能引起各種過敏反應（包括I、ii、m、iv型）。由于與人的種屬差異較大， 中藥注射劑含有的蛋白質類大分子的抗原性均較強。
[0009] 踩質；踩質是引起中藥注射劑注射后疼痛的主要物質之一。踩質后蛋白質結合為 更大的分子復合物后，可增強蛋白質的過敏性。
[0010] 多糖；蛋白多糖或糖蛋白本身就具有很強的抗原性，一般高于原有的蛋白質。單純 的多糖也能夠通過"免疫佐劑"效應增強免疫的作用，即也能增強過敏反應。
[0011] 核酸；具有免疫調節作用，多通過"免疫佐劑"效應增強過敏反應。
[0012] 樹脂；是一類分子量較大的聚合物，可W引起疼痛，也可增強免疫反應。
[0013] 現有中藥注射劑的生產工藝一般都采用"醇水法"或"水醇法"制備中藥注射劑的 原料。"醇水法"主要是采用己醇提取中藥材，回收溶劑后再加水去除沉淀后制得；而"水 醇法"則主要是采用水提取藥材，適當濃縮然后用80%左右的己醇沉淀，將上清液制備成原 料。除此之外還有"酸堿法"等。然而，該些方法制得的原料均不同程度地含有大分子雜質， 如含有蛋白質、多糖、核酸、踩質、樹脂等。對于蛋白質和踩質，前期有人建立了靈敏的中藥 注射劑微量蛋白和踩質檢查方法。
[0014] 因此，盡管《中國藥典》已有樹脂檢查方法，為了能進一步從嚴控制中藥注射劑中 的大分子物質，仍需要開發一種方法，W便能更靈敏地檢查中藥注射劑中的微量樹脂。

【發明內容】

[0015] 因為中藥注射劑中的樹脂屬于大分子類物質，我們利用分子篩原理先將中藥注射 劑中的大分子類物質進行不同程度地富集制備大分子富集液，用大分子富集液再進行檢 查，即用氯仿萃取獲得殘渣，再用冰醋酸溶液檢查殘渣的溶解性；為了有利于結果觀察，對 冰醋酸溶液還需進行離屯、處理。
[0016] 本發明所述的一種中藥注射劑微量樹脂的檢查方法，按W下步驟進行：
[0017] 1)用截留一定分子量的分子篩按照一定比例富集中藥注射劑原液中的大分子物 質，制備大分子富集液；
[0018] 2)取5mL的大分子富集液加一滴濃鹽酸，如無沉淀則不再檢查，即樹脂檢查陰性；
[0019] 3)步驟2)如果有沉淀產生，則再取一份體積的大分子富集液加入氯仿進行充分 萃取；
[0020] 4)將萃取后的氯仿層分離揮干得殘渣；
[0021] 5)將殘渣加入一定體積的冰醋酸充分振搖混勻，并轉移到試管內，再加入冰醋酸 1. 5倍體積的水，然后振搖混勻得冰醋酸溶液；
[0022] 6)將步驟5)獲得的冰醋酸溶液進行離屯、后觀察試管底部是否有沉淀，如有可見 沉淀則樹脂檢查陽性。
[0023] 對W上操作步驟進一步說明如下：
[0024] 步驟1)中，中藥注射劑原液指的是中藥注射液或是注射用中藥注射劑按所附 使用說明書制備的溶液；分子篩的截留分子量是3k-3化；大分子富集液制備的截留比是 2:1~10:1，即最少從2份體積中藥注射劑原液中制備1份大分子富集液，最多從10份中 藥注射劑原液中制備1份大分子富集液。優選的，分子篩截留分子量是3k，截留比是10:1。
[0025] 步驟3)中，大分子富集液的一份體積為0.5~lOmU萃取用氯仿的體積是大分子 富集液體積的1~3倍。優選的，所用大分子富集液的較佳體積為5mU萃取用氯仿的體積 是10血。
[0026]步驟5)，所用冰醋酸的體積為0.5~5血。優選的，體積為2血。
[0027]步驟6)，離屯、的離屯、力為500~lOOOOg，離屯、時間為1~10分鐘。優選的，離屯、 力為3000g，離屯、10分鐘。
[002引本發明所述中藥注射劑微量樹脂的檢查方法，即將中藥注射劑原液中的大分子物 質富集后再參照《中國藥典》方法并在觀察前進行離屯、即能檢查到中藥注射劑中的樹脂存 在，其靈敏度明顯較《中國藥典》方法高。通過調整富集比和樣品體積可W方便地對檢查靈 敏度進行調整而用于具體中藥注射劑的樹脂檢查，能夠用于中藥注射劑的安全性評價。
【附圖說明】
[0029] 圖1本發明所述一種中藥注射劑微量樹脂的檢查方法的流程示意圖。
[0030] 圖2四種中藥注射劑原液樹脂檢查的陰性結果：從左至右依次是清開靈注射液、 雙黃連注射液、丹參注射液、燈盞細辛注射液。
[0031] 圖3四種中藥注射劑經3k分子篩按10:1制備成大分子富集液后的樹脂檢查：清 開靈注射液、雙黃連注射液、丹參注射液樹脂檢查陽性，從左至右依次是A清開靈注射液、B 雙黃連注射液、C丹參注射液、D燈盞細辛注射液。
【具體實施方式】
[0032] 下面通過【具體實施方式】對