一種鑒定判別白肋煙品種特異性、一致性和穩定性的方法
【專利說明】-種鑒定判別白肋煙品種特異性、一致性和穩定性的方法
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技術領域
[0002] 本發明涉及煙草品種鑒定判別方法，具體涉及一種鑒定判別白肋煙品種特異性、 一致性和穩定性的方法。
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【背景技術】
[0004] 白肋煙是生產混合型卷煙不可缺少的原料，而品種又是決定煙葉品質的內在因 素，我國已培育出一些適宜不同區域種植的優良品種，并在生產上逐步推廣。白肋煙屬于自 花授粉的經濟作物，目前存在品種被引種并繁殖的現象，既侵犯了品種所有者的利益，也導 致了白肋煙品種出現混雜，對白肋煙育種工作產生了較大破壞，直接影響白肋煙的持續發 展。
[0005] 新品種的特異性、一致性和穩定性測試是新品種保護的技術基礎和授權的科學依 據。經檢索，涉及煙草品種鑒定判別的中國專利申請件僅201110408448. 3號《一種鑒別 煙草品種的SCAR標記引物及其方法》，是針對烤煙的生物分子技術方法。至今未見對白肋 煙品種鑒別的系統技術方案。
[0006] 關于作物新品種的特異性、一致性和穩定性的判別方法，一般都包括確定測試性 狀、制定性狀分級標準、確定標準品種、篩選近似品種、設計田間試驗、觀測和分析測試性 狀、判別一致性、穩定性和特異性這些步驟，但不同的作物，其確定的測試性狀、制定的性狀 分級標準、確定的標準品種、田間試驗方法等是不同的，因而新品種一致性、穩定性和特異 性的判別方法也有所差異。在煙草上，目前已經有關于烤煙新品種的特異性、一致性和穩定 性的測試指南，但至今還沒有白肋煙新品種的特異性、一致性和穩定性的測試方法。
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【發明內容】

[0008] 技術問題：本發明提供一種能夠準確鑒定白肋煙品種，為白肋煙品種授權提供準 確依據，減少了田間工作量，增加試驗準確性的鑒定判別白肋煙品種特異性、一致性和穩定 性的方法。 技術方案：本發明的鑒定判別白肋煙品種特異性、一致性和穩定性的方法，具體步驟如 下： (1)確定測試性狀：對現有白肋煙品種資源的植物學性狀、農藝性狀、抗病性狀、經濟性 狀、品質性狀進行重復鑒定，每份品種資源至少進行3個生長周期的鑒定，篩選出45個性狀 作為測試性狀，包括27個必測性狀和18個補充性狀； 所述必測性狀即為每個需要鑒定判別的測試品種必須進行觀測、描述的基本性狀，包 括15個質量性狀和12個數量性狀，所述質量性狀具體包括：株型、葉形、葉色、葉柄、葉耳、 葉面、葉緣、葉尖、葉肉組織、葉片厚度、主脈粗細、茸毛、成熟特征、花色、花序特征，所述數 量性狀具體包括：自然株高、打頂株高、著生總葉數、有效葉數、節距、莖圍、腰葉長、腰葉寬、 頂葉長、頂葉寬、莖葉角度、大田生育期； 所述補充性狀即在上述必測性狀不能區別測試品種和近似品種時，仍需進一步測試而 選用的性狀，包括10個質量性狀和8個數量性狀，所述質量性狀具體包括：苗色、苗期生 長勢、大田生長勢、腋芽生長勢、原煙顏色、原煙身份、原煙葉片結構、原煙葉面狀態、原煙光 澤、原煙顏色強度，所述數量性狀具體包括：中心花開放期、黑脛病抗性、青枯病抗性、赤星 病抗性、TMV抗性、PVY抗性、畝產量、中部葉煙堿含量； (2) 制定性狀分級標準：將步驟（1)中確定的測試性狀的每個性狀根據其在步驟（1)的 重復鑒定中的表達范圍劃分為2-6種狀態，每一種狀態對應一個相應的數字代碼，稱為一 個級別； (3) 確定標準品種：從所述步驟（1)重復鑒定的品種資源中，依據各品種資源在重復 鑒定中的性狀表現的典型性，篩選出36個具備廣泛代表性的已知品種作為標準品種，以 用于性狀分級的參照標準、輔助判斷試驗的可靠性，具體包括：BanketA-l、Burley21、 Burley27、Burley29、Burley34、BurleyWloski、Gold.no.Burley、Greeneville17A、 K14(BY14)、K21(BY21)、Kentucky12、Kentucky14、Kentucky24、Kentucky56、Kentucky 8959、KBM20、KY17 (少葉）、L-8、S?K、Tennessee90、Virginia509、Virginia1013、 Virginia1048、Virginia1053、WhiteBurley5、白肋 162、鄂白 99-2-4、鄂煙 101、鄂煙 1 號、鄂煙211、鄂煙4號、鄂煙5號、鶴峰黃煙、牡曬82-38-5、日本白肋、省白肋窄葉；選擇與 所述步驟（2)中劃分的級別相對應的標準品種，得到各性狀、級別代碼和標準品種的對應關 系； (4) 篩選近似品種：根據選育單位提供的待鑒定判別測試品種的性狀描述資料，從現有 白肋煙品種資源中選取1~5個品種，作為與測試品種進行比較的品種即近似品種；所述近 似品種的選取標準為：待鑒定判別測試品種的所用親本，或用其親本之一培育出的其他品 種； (5) 設計田間試驗：進行連續2~3個相同季節的生長周期測試，每個生長周期測試都 將待鑒定判別的測試品種、所述步驟（4)中篩選的近似品種和所述步驟（3)中確定的標準 品種一起等行距種植，采用隨機區組設計，設置3次重復或4次重復，每個小區的種植株數 不少于60株；測試地點的條件需要滿足測試品種、近似品種和標準品種植株的正常生長及 其性狀的正常表達； (6) 觀測和分析測試性狀：按照植物的生長進程，對所述步驟（1)中確定的測試性狀進 行觀測，用步驟（2)中確定的性狀級別對應的標準品種的性狀狀態分別對待鑒定判別的測 試品種和步驟（4)中篩選的近似品種的各性狀的表現狀態進行描述； (7) 判別測試品種的一致性：首先采用2%的群體標準和95%的可接受概率對測試品種 的一致性進行初步判別：若步驟（5)中每個小區種植株數為60株，而測試品種每個小區非 典型株超過3株，則直接判定測試品種不具備一致性；否則進一步通過必測性狀的以所述 步驟（2)和（3)中代碼為分析單元計算的變異度來判別：每個小區觀察測定15株，若測試 品種某性狀的變異度不超過5%，或者測試品種某性狀的變異度不超過標準品種在該性狀上 的變異度，則判定測試品種在該性狀上表現一致，否則判定為不一致； (8) 判別測試品種的穩定性：在連續2~3個生長周期的測試結果中，如果測試品種同 一性狀的表現處于步驟（2)和（3)中所述代碼的同一代碼內，或者第二次或第三次測試的 變異度與第一次測試的變異度無顯著差異，則表示該測試品種在此性狀上是穩定的，否則 為不穩定，以連續2~3個生長周期的測試結果評價測試品種的穩定性采用95%的接受概 率； (9) 若所述步驟（7)和（8)的測試結果顯示測試品種沒有一致性和穩定性，則直接地判 定該測試品種不具有特異性，否則按照如下方法判別測試品種的特異性：通過比較測試品 種與步驟（4)中篩選的近似品種的所有必測性狀上的差異進行評價，具體判定方法是：當 測試品種至少在1個質量性狀或者數量性狀上與近似品種具有明顯且一致的差異時，或者 至少有兩個數量性狀的性狀表達與近似品種處于不同的步驟（2)和（3)中所述的代碼時， 即判定測試品種具有特異性；對于質量性狀，如果測試品種和近似品種的性狀表達處于不 同的代碼，則認為兩個品種在該性狀上具有明顯差異；對于數量性狀，如果測試品種和近似 品種的性狀表達相差2個及2個以上代碼，即判定兩個品種在該性狀上具有明顯差異；如果 測試品種和近似品種的某個數量性狀表達處于同一個代碼或者處于相鄰的不同代碼，而兩 個品種的該數量性狀的算術平均值在95 %水平上存在顯著差異，也判定兩個品種在該性狀 上具有明顯差異；若采用必測性狀不能區別測試品種和近似品種時，則進一步采用補充性 狀按上述方法判別測試品種的特異性；所述一致的差異是指在2~3個獨立的生長周期中， 觀測到的性狀差異具有重現性。
[0009] 本發明方法的優選方案中，步驟（1)中的質量性狀是指以不連續狀態表達的性狀， 或者性狀表達范圍至少部分是連續的，但其變異范圍是多維的性狀；所述數量性狀是指性 狀表達包括了從一個極端到另一個極端之間的整個變異范圍的性狀。
[0010] 本發明方法的優選方案中，步驟（3)中得到的各性狀、級別代碼和標準品種的對應 關系為：




[0011] 本發明方法的優選方案中，步驟（5)中參試種子未做影響植株正常生長和性狀表 達的處理，需為同一批次。
[0012] 本發明方法的優選方案中，步驟（6)中的性狀觀測包括群體測量、個體測量、群體 目測和個體目測，在必測性狀中，除大田生育期外，均為個體目測或測量的性狀，在補充性 狀中，每個性狀均為群體目測或測量的性狀；每個需要個體目測或測量的性狀在每個小區 的觀察分析株數為15個單株；根據每個測試性狀的特點不同而采用不同的描述方法，對于 質量性狀描述