一種藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種鐵離子的測定方法，特別涉及一種藻類營養鹽中鐵離子濃度的測 定方法。
【背景技術】
[0002] 如今，藻類科研及生產規模日益壯大，工業生產及實驗室培養中，鐵元素一直是藻 類營養鹽中的關鍵營養成分。不同藻類對鐵元素的價位要求不同，有些藻類需要H價鐵，而 另一些需要亞鐵。常用的鐵元素營養鹽主要是巧樣酸與鐵的絡合物，即巧樣酸鐵或巧樣酸 亞鐵。巧樣酸鐵在配制及存放過程中部分被還原為巧樣酸亞鐵，巧樣酸亞鐵在配制及存放 過程中極易被氧化為巧樣酸鐵，兩者的膽存液都會形成巧樣酸鐵與巧樣酸亞鐵的混合物， 不同化學價位及不同濃度的鐵離子則影響了藻類的正常生長，如何正確的測量出藻類營養 鹽中的巧樣酸鐵及巧樣酸亞鐵的含量對藻類的培養至關重要。
[0003] 但是，人工養殖或實驗室研究中，藻類營養鹽中巧樣酸鐵與巧樣酸亞鐵的含量由 于配制試劑、配制方法及膽藏條件等因素產生了明顯差異。目前只有定量檢測鐵元素的方 法，但對于巧樣酸鐵與巧樣酸亞鐵的混合物，尚無定量檢測的方法，也沒有確定巧樣酸鐵與 巧樣酸亞鐵的比例的方法，給生產及科學研究造成了諸多不便。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，該方法通過紫外 分光光度法實時、定量檢測巧樣酸鐵的含量，同時也能算出巧樣酸亞鐵的含量，簡單、快速、 準確率高、檢測范圍寬、檢測成本低。
[0005] 為了實現W上技術效果，本發明是通過如下步驟實現：
[0006] -種藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其步驟包括：
[0007] (1)配制；價鐵離子濃度為6X l〇-3mol/L的巧樣酸鐵標準液，冷卻至18-25C ;選 擇該H價鐵離子濃度偏離標準小，誤差小。
[000引 似將步驟（1)中的巧樣酸鐵標準液稀釋至不同濃度的稀釋液，利用光吸收酶標 儀測得巧樣酸鐵稀釋液在450nm處的吸光度平均值，W A450平均值為縱坐標，對應該吸光 度值的鐵離子濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線；選擇在450nm處測吸光度值，繪制標準曲 線，否則標準曲線非線性。
[0009] (3)測定藻類營養鹽樣品在450nm處的吸光度值，根據步驟（1)中繪制的標準工 作曲線，計算樣品中的H價鐵離子濃度；選擇在450皿處測吸光度值，巧樣酸鐵的吸光值 在0. 1-0. 5之間，而巧樣酸亞鐵吸光值為0,能很好地區分巧樣酸鐵和巧樣酸亞鐵該兩種物 質。
[0010] (4)藻類營養鹽膽存液樣品中的H價鐵離子的初始濃度減去步驟（2)中的實測H 價鐵離子濃度，為藻類營養鹽樣品中的二價鐵離子濃度。
[0011] 所述步驟（2)中，巧樣酸鐵稀釋液中的H價鐵離子濃度為0、0.6Xl(T3m〇i/L、 1. 2X l〇-3mol/L、2. 4X l〇-3mol/L、4. 8X l〇-3mol/L 及 6X l〇-3mol/L。
[0012] 所述藻類營養鹽樣品的成分為巧樣酸鐵和巧樣酸亞鐵的混合液。
[0013] 所述步驟（1)中，配好后的巧樣酸鐵標準液在空氣中暴露時間不超過3分鐘。避 免了巧樣酸鐵被還原。
[0014] 所述步驟（2)中，標準液稀釋時，采用的稀釋液為無氧蒸觸水。
[0015] 所述步驟（2)中，在稀釋標準液時混勻即可，不能產生氣泡，且環境操作溫度低于 25 C。避免了巧樣酸鐵被還原。
[001引所述步驟（3)中，藻類營養鹽樣品測定前，將樣品在4C下密封保存且不能混有氣 泡，樣品在空氣中暴露時間不超過3分鐘。
[0017] 所述藻類營養鹽樣品的成分為巧樣酸鐵。
[0018] 發明的有益效果是；1、本發明提供的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法可實時 定量檢測藻類營養鹽膽存液中巧樣酸鐵基巧樣酸亞鐵的含量，簡單、快速，準確率高、檢測 范圍寬。2、本測定方法由于中間過程少，無需添加其它試劑，樣品無需預處理，因而比國標 法更加接近實際值，測試成本低、時間短。3、本檢測方法可直接測定巧樣酸鐵，在微藻領域 使用，針對性強、靈敏度高，
[0019] 計算誤差時，由于國標法不能直接測定巧樣酸鐵含量，因而用國標法測定巧樣酸 亞鐵推算巧樣酸鐵含量，并與本方法直接測定的巧樣酸鐵做比較。
【附圖說明】
[0020] 圖1是實施例1中新制巧樣酸鐵與巧樣酸亞鐵光譜對比曲線。
[0021] 圖2是實施例1中巧樣酸鐵標準曲線圖。
[0022] 圖3是實施例3中，采用國標法檢測時的巧樣酸鐵標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0023] 下面結合實施例，對本發明作進一步說明：
[0024] 實驗所用到的設備；紫外分析儀UV-1800。
[00巧]實驗所用到的試劑；一水巧樣酸（QftO, ?&0)、構稼酸鐵饋（CeHwFeNOs)、硫酸亞鐵 (FeS化? 7&0)、無氧蒸觸水；
[0026] 國標法試劑；鹽酸輕胺（冊一畑2 ?肥1)、鄰二氮菲咕2&馬? &0)、Imol/L己酸軸 (C&COONa)、金屬鐵、鹽酸、蒸觸水。
[0027] 1、標準液的配制
[0028] 取巧樣酸0. 3g，構稼酸鐵饋0. 3g，用煮沸的蒸觸水將巧樣酸和構稼酸鐵饋溶解， 混合后定容至lOOmU冷卻至18-25°C，H價鐵離子終濃度為6Xl(r3m〇l/L的巧樣酸鐵標準 液。該巧樣酸鐵現配現用，配好后在空氣中暴露時間不超過3分鐘。
[0029] 取巧樣酸0. 3g，硫酸亞鐵（FeS〇4 ? 7&0) 0. 17g，用煮沸的蒸觸水先將巧樣酸 溶解，再將硫酸亞鐵溶解，混勻后定容至lOOmU冷卻至18-25°C，二價鐵離子終濃度為 6X l(T3mol/L的巧樣酸亞鐵標準液。
[0030] 2、標準工作曲線的繪制
[0031] 分別取3mL上述步驟配制的巧樣酸鐵標準液與巧樣酸亞鐵標準液，用紫外分光光 度計測定吸收光譜（190nm-750nm)，發現在450nm處，巧樣酸鐵的吸光值在0. 1-0. 5之間，而 巧樣酸亞鐵吸光值為0,具體如圖1所示，所W選取A450為測定值。
[0032] 取6支1. 5mL的離也管，按照下表的加入比例，配制不同濃度的巧樣酸鐵溶液（單 位；y L)
[0033]
【主權項】
1. 一種藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其步驟包括： (1) 配制三價鐵離子濃度為6Xl(T3m〇l/L的檸檬酸鐵標準液，冷卻至18-25°C ; (2) 將步驟（1)中的檸檬酸鐵標準液稀釋至不同濃度的稀釋液，利用光吸收酶標儀測 得檸檬酸鐵稀釋液在450nm處的吸光度平均值，以A450平均值為縱坐標，對應該吸光度值 的鐵離子濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線； (3) 測定藻類營養鹽樣品在450nm處的吸光度值，根據步驟（1)中繪制的標準工作曲 線，計算樣品中的三價鐵離子濃度； (4) 藻類營養鹽貯存液樣品中的三價鐵離子的初始濃度減去步驟（2)中的實測三價鐵 離子濃度，為藻類營養鹽樣品中的二價鐵離子濃度。
2. 根據權利要求1所述的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其特征在于：所述 步驟（2)中，檸檬酸鐵稀釋液中的三價鐵離子濃度為0、0.6XKT 3m〇l/L、1.2Xl(T3m〇l/L、 2. 4X l(T3mol/L、4. 8X l(T3mol/L 及 6X l(T3mol/L。
3. 根據權利要求1所述的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其特征在于：所述藻 類營養鹽樣品的成分為檸檬酸鐵和檸檬酸亞鐵的混合液。
4. 根據權利要求1所述的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其特征在于：所述步 驟（1)中，配好后的檸檬酸鐵標準液在空氣中暴露時間不超過3分鐘。
5. 根據權利要求1所述的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其特征在于：所述步 驟（2)中，標準液稀釋時，采用的稀釋液為無氧蒸餾水。
6. 根據權利要求1所述的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其特征在于：所述步 驟（2)中，在稀釋標準液時混勻即可，不能產生氣泡，且環境操作溫度低于25°C。
7. 根據權利要求1所述的藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，其特征在于，所述步 驟（3)中，藻類營養鹽樣品測定前，將樣品在4°C下密封保存且不能混有氣泡，樣品在空氣 中暴露時間不超過3分鐘。
【專利摘要】本發明涉及一種鐵離子的測定方法，特別涉及一種藻類營養鹽中鐵離子濃度的測定方法，配制三價鐵離子濃度為6×10-3mol/L的檸檬酸鐵標準液；將標準液稀釋至不同濃度的稀釋液，利用紫外分光光度計測得稀釋液在450nm處的吸光度平均值，繪制標準曲線；測定樣品在450nm處的吸光度值，根據標準曲線，計算樣品中的三價鐵離子濃度；樣品中的三價鐵離子的初始濃度減去實測三價鐵離子濃度，為樣品中的二價鐵離子濃度。本測定方法可實時定量檢測藻類營養鹽貯存液中檸檬酸鐵及檸檬酸亞鐵的含量，簡單、快速，準確率高、檢測范圍寬，中間過程少，無需添加其它試劑，樣品無需預處理，因而測試成本低、時間短。
【IPC分類】G01N21-33, G01N21-31
【公開號】CN104596965
【申請號】CN201510056756
【發明人】孫溢華, 何培民, 施定基, 劉媛媛, 徐文婷, 賈睿, 賈曉惠
【申請人】上海海洋大學
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年2月3日