專利名稱：曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法
技術領域：
本發明為一種液相色譜藥物對映體分離方法。具體地講，本發明敘述了一種曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法。
曲美布汀又名三甲丁酯，是消除痙孿的藥物，目前以消旋體的方式被人們所使用。結構式如下圖所示。此藥對胃、腸、結腸痙孿有顯著療效。從曲美布汀的結構式可知，含有一個不對稱碳原子，因而曲美布汀具有一對對映體，但是關于純(R)和(S)對映體的生理活性、毒性、藥理動力學還未見報道。
目前國外專利已經申請曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法(JP05,215,736)，手性柱為涂敷三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯手性柱(250×4.6mmI.D)，柱填料的擔體為平均粒度10μm，比表面積20m2/g的大孔硅珠；洗脫液為0.1M的HClO4-NaClO4和CH3CN(80/20，V/V)。
本發明的目的在于克服現有技術的不足而提供一種曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法。
本發明的目的通過以下措施來實現本發明所用的手性填料擔體為大孔硅膠，平均粒度6μm，平均孔徑15nm，比表面積67.2m2/g，經硅烷化預處理，元素分析結果C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％。手性填料為涂敷型，涂敷的手性試劑為三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯，涂敷量是15％(質量)，涂敷時采用的溶劑為HCCl3，然后在濕的手性填料中加入正己烷，水浴溫度下緩慢蒸除正己烷，這樣能使三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯在硅膠擔體表面分布均勻，具有色譜對映體分離能力。濕法裝柱，采用四氯化碳-二氧六環(v/v)作懸浮液，正己烷作頂替液。
本發明所述的液相色譜分離在HP1090高效液相色譜儀上進行，所用洗脫液為正己烷/異丙醇(v/v)，流速為1.0mL/min，每次20μL進樣量。正己烷/異丙醇(v/v)的體積比是98∶2～90∶10。
本發明所述的手性柱的制備和色譜分離是這樣實現的本發明所用的大孔硅膠，平均粒度6μm，平均孔徑15nm，比表面積67.2m2/g，經硅烷化預處理，元素分析結果C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％。
本發明所述的手性柱為涂敷型，涂敷的手性試劑為三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯，涂敷過程分三步進行。在硅烷化硅膠中加入三氯甲烷，電磁攪拌，在旋轉蒸發儀上蒸除三氯甲烷。將三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯溶于三氯甲烷中，靜置過夜。取此溶液加入上述硅烷化硅膠中，電磁攪拌，在旋轉蒸發儀上蒸除三氯甲烷。重復上述過程一次。最后將余下的三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯溶液加到已經涂敷二次的硅烷化硅膠中，電磁攪拌。將此硅烷化硅膠加入正己烷中，電磁攪拌，水浴溫度下緩慢蒸除正己烷，抽濾，用正己烷和異丙醇依次洗滌，抽干，制得的固定相真空干燥。濕法裝柱，采用四氯化碳/二氧六環(v/v)作懸浮液，正己烷作頂替液。
本發明所述的液相色譜分離在HP1090高效液相色譜儀上進行，配有晶體管二級陣列檢測器和數據處理工作站，全波長檢測。
本發明曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法的特點如下1.使用涂敷三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯手性柱。色譜擔體為大孔硅膠，平均粒度6μm，平均孔徑15nm，比表面積67.2m2/g。經氨基丙基三乙氧基硅烷預處理后元素分析結果C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％，比表面積41-56m2/g.三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯的涂敷量15％(wt)。2.洗脫液為正己烷/異丙醇(v/v)。洗脫液中異丙醇含量在色譜分離對映體性能方面具有較大的影響，異丙醇含量增加，分離度逐漸降低。柱溫對色譜分離對映體的分離度影響較大。隨著溫度的逐漸升高，對映體的保留時間和分離度逐漸降低。
實施例1.高效液相色譜手性柱的制備在5g硅烷化硅膠中加入20mL三氯甲烷，電磁攪拌15min，在旋轉蒸發儀上蒸除三氯甲烷。將0.882g三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯溶于23mL三氯甲烷中，靜置過夜。取此溶液8mL加入上述硅烷化硅膠中，電磁攪拌15min，在旋轉蒸發儀上蒸除三氯甲烷重復上述過程一次。最后將7mL溶液加到已經涂敷二次的硅烷化硅膠中，電磁攪拌15min。將此硅烷化硅膠加入50mL正己烷中，電磁攪拌20min，水浴溫度下緩慢蒸除正己烷，抽濾，用正己烷和異丙醇依次洗滌，抽干，制得的固定相在70℃，P2O5存在下真空干燥10h。濕法裝柱(250mm×4.6mmI.D.)，采用1∶2四氯化碳/二氧六環(v/v)作懸浮液，正己烷作頂替液。
樣品曲美布汀對映體溶在90∶10正己烷/異丙醇(v/v)中，洗脫液流速為1.0mL/min，每次20μL進樣量。用洗脫液90∶10正己烷/異丙醇(v/v)平衡色譜柱30min。1.3.5-三叔丁基苯被用來測定死時間。
柱溫在24.9，30.0，35.0，40.0和45℃時曲美布汀對映體的色譜分離結果如表1所示。從表1可見，隨著柱溫從24.9℃升高到45.0℃，對映體的容量因子和分離因子逐漸降低；分離度在24.9℃～30.0℃范圍內變化不大；在30.0℃～45.0℃范圍內降低；在柱溫24.9℃時，分離度Rs＝1.02。因此，升高柱溫不利于對映體的分離。
表1柱溫變化時，曲美布汀對映體的容量因子、分離因子、分離度柱溫(℃) 24.9 30.0 35.040.045.0k1′ 3.31 2.98 2.381.991.63k2′ 4.52 4.00 3.112.552.06α 1.37 1.35 1.311.281.26Rs1.02 1.01 1.020.990.91表中k1′，先洗脫對映體的容量因子；k2′，后洗脫對映體的容量因子；α、分離因子；Rs，分離度。
實施例2高效液相色譜手性柱的制備和死時間的測定如實施例1。樣品曲美布汀對映體溶在洗脫液90∶10正己烷/異丙醇(v/v)中，洗脫液流速為1.0mL/min，每次20μL進樣量。用洗脫液90∶10正己烷/異丙醇(v/v)平衡色譜柱30min。溫度為室溫。
改變洗脫液正己烷/異丙醇(v/v)中異丙醇含量，色譜分離曲美布汀對映體的容量因子、分離因子、分離度的結果如表2。從表2可見，隨著洗脫液中異丙醇含量從4％增加到12％，曲美布汀對映體的容量因子逐漸降低，分離因子變化不大，分離度逐漸降低。因此，洗脫液中異丙醇含量在4％時，對映體的分離度最大，分別為Rs＝1.14和α＝1.41。表2洗脫液中異丙醇含量不同時時，曲美布汀對映體的容量因子、分離因子、分離度異丙醇(％)(v/v) 4 6 8 10 12k1′ 4.35 3.31 2.76 2.422.15k2′ 6.10 4.52 3.74 3.252.88α 1.41 1.37 1.35 1.351.34Rs1.14 1.02 0.89 0.860.80表中k1′，k2′，α，Rs，參見表1。
權利要求
1.一種曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法，其特征在于涂敷15％(質量)三(4-甲基苯甲酸)纖維素酯于大孔硅膠擔體上，制備手性填料，濕法裝填液相色譜柱，直接分離曲美布汀對映體；洗脫液為正己烷/異丙醇(v/v)；其中大孔硅膠平均粒度6μm，平均孔徑15nm，比表面積67.2m2/g，經氨基丙基三乙氧基硅烷預處理后元素分析C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％。
2.如權利要求1所述的色譜藥物對映體分離方法，其特征在于洗脫液為正己烷/異丙醇的體積比是98∶2～90∶10。
全文摘要
本發明公開了一種曲美布汀藥物對映體的液相色譜分離方法。涂敷15%(質量)三(4－甲基苯甲酸)纖維素酯于大孔硅膠擔體上,制備手性填料,濕法裝填液相色譜柱,直接分離曲美布汀對映體。洗脫液為正己烷/異丙醇(v/v)。該方法使用的色譜擔體價格較低,洗脫液為有機溶劑,在制備曲美布汀藥物對映體時較易除去。
文檔編號G01N30/02GK1258003SQ9912658
公開日2000年6月28日 申請日期1999年12月18日 優先權日1999年12月18日
發明者王來來, 呂士杰, 李樹本 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所