專利名稱：一種小檗堿類化合物的液相色譜-熒光檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種小檗堿類化合物的分析測試技術，更具體的說，涉及一種對小檗堿類化合物進行液相色譜—熒光檢測的方法。
小檗堿類化合物廣泛地分布于罌粟科、毛莨科、小檗科和防己科等植物中，部分為人工合成。小檗堿類化合物大多具有特殊而顯著的生理活性，多年來一直為人們所重視。建立一個專一性強、靈敏高的檢測方法，對深入研究和開發這類化合物常常具有十分重要的意義。
目前已建立的小檗堿化合物測定方法有紫外分光光度法、薄層層析法、熒光分光度法、同位素標記法、液相色譜法和氣相色譜—質譜法等。其中除了氣相色譜—質譜法具有良好的檢測靈敏度和專一性外，其余各種方法或是靈敏度較低，或是專一性較差，難以充分滿足實驗的要求。而由于氣相色譜—質譜儀的價格昂貴，加上樣品預處理過程繁瑣復雜，使該方法的實際應用受到了很大的限制。
液相色譜法具有較強的分離能力，專一性良好。目前在化合物的分離方面已得到了廣泛的應用。液相色譜法的檢測能力與其分離能力相比存在著較大的差距，尋找提高液相色譜檢測能力的途徑，為目前色譜分析的研究熱點之一。
本發明的目的在于克服上述缺陷和不足而提供一種利用小檗堿類化合物在某些溶劑中具有強烈熒光效應特性的液相色譜—熒光檢測方法。為小檗堿類化合物的研究開發，提供一種靈敏度高、專一性強的液相色譜定量測定方法。
為達到上述目的，本發明的檢測方法流程如下1.將流動相加壓，使其流經進樣裝置、色譜柱、檢測器后流出。
2.將含有小檗堿類化合物的試樣經由進樣裝置隨著流動相進入色譜柱，經色譜分離后的組份逐一流過檢測器進行檢測。
所述的流動相系采用鹵代烴類溶劑，包括二氯甲烷、二氯乙烷、三氯甲烷為主進行配制，鹵代烴類溶劑的配比大于其他任意一種組份的配比。和其他液相色譜分析一樣，流動相的具體組成和配比須根據試樣的種類、樣品預處理的方式、待測化合物的性質及色譜柱中固定相的特性，通過實驗來確定。
所述的檢測器為熒光檢測器。通過熒光掃描確定待測化合物在其流動相中的特征熒光激發波長和發射波長，以此確定檢測器的熒光激發、發射波長，以進一步提高方法的靈敏度和專一性。
與目前已建立的小檗堿類化合物的液相色譜測定法相比，本發明的檢測靈敏度約可提高2-3個數量級，專一性更強，與氣相色譜-質譜法的檢測水平相當。而儀器價格低，樣品預處理過程簡捷，可對生物樣品中痕量小檗堿類化合物進行檢測。本發明在小檗堿類化合物研究和開發的各個方面，都具有良好的應用前景。


圖1為小檗堿類化合物的母體結構示意圖。
圖2為本發明的操作流程示意圖。
圖3為空白尿樣色譜圖。
圖4為服藥后的尿樣色譜圖。
下面結合附圖2，闡述本發明的最佳實施例。
流動相1的配比為二氯甲烷-甲醇-二乙胺-乙酸(90∶9∶0.4∶0.5)。2為高壓泵。3為進樣裝置。色譜柱4為不銹鋼柱200mm×4.0mm ID，內裝Lichrosurb SI 60(5μ)填料。熒光檢測器5為Waters 470型，熒光激發波長為358nm，熒光發射波長為526nm。小檗堿(Berberine)的最低檢測限為2pg(信噪比優于2.5∶1)。
以下是應用本發明對健康人口服鹽酸黃連素片劑后尿液中的小檗堿進行定量分析的測定結果，如圖3、圖4所示。結果表明空白尿樣對色譜測定完全無干擾，服藥后尿樣中的小檗堿代謝產物與小檗堿完全分離，具有良好的專一性。在健康人一次口服0.2克鹽酸黃連素120小時后的尿樣中，利用本發明尚可檢測出痕量的小檗堿。
權利要求
1.一種小檗堿類化合物的液相色譜—熒光檢測方法，其特征在于(1)將流動相加壓，使其流經進樣裝置、色譜柱、檢測器后流出；(2)將含有小檗堿類化合物的試樣經由進樣裝置隨著流動相進入色譜柱，經色譜分離后的組份逐一流過檢測器進行檢測；所述的流動相系采用鹵代烴類溶劑包括二氯甲烷、二氯乙烷、三氯甲烷為主進行配制，鹵代烴類溶劑的配比大于其他任意一種組份的配比，所述的檢測器為熒光測器。
全文摘要
本發明涉及一種小檗堿類化合物的液相色譜-熒光檢測方法。加壓后的流動相，流經進樣裝置、色譜柱、檢測器后流出。含有小檗堿類化合物的試樣經由進樣裝置隨著流動相進入色譜柱，經色譜分離后的組分逐一流過熒光檢測器進行檢測。流動相系采用鹵代烴類溶劑，包括二氯甲烷、二氯乙烷、三氯甲烷為主進行配制。本發明的檢測靈敏度比目前已建立的液相色譜測定方法高2-3個數量級，方法的專一性更強。
文檔編號G01N30/00GK1147637SQ9311252
公開日1997年4月16日 申請日期1993年8月19日 優先權日1992年8月25日
發明者余琛, 洪有采, 黃偉民, 張慧, 徐修容 申請人:上海市徐匯區中心醫院