基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法
【專利摘要】一種基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，是建立一個多項目混合熒光免疫反應體系和反應后分光檢測體系，用不同的熒光染料分別制備熒光結合物，混合在固相載體上反應，利用不同的熒光染料具有特定的、不同的激發光波長與發射光波長的性質，在檢測時通過將某一熒光染料的激發光波長與其發射光波長對應的信號接收器聯動，連續、逐一進行熒光免疫反應后的分光分析，實現對各項目的分別測定。本發明可以將多個檢測項目組合在一起，一次完成，可有效地增加檢測通量，提高檢驗效率。
【專利說明】基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫藥檢測技術，特別涉及一種基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法。
【背景技術】
[0002]免疫標記技術是將某種可微量或超微量測定的物質(如放射性核素、熒光染料、酶等)作為示蹤物標記于抗體或抗原上制成標記物，利用抗原-抗體特異性反應原理，建立相應的反應體系，以檢測標記物的有無或含量來間接反映樣品中待檢抗原或抗體的有無或量的多少。
[0003]突光免疫技術屬于標記免疫技術的一種。是以突光染料為示蹤物標記抗體或抗原，利用抗原抗體反應的原理，實現定性或定量分析的技術。應用上主要分兩大類:免疫組織化學(包括流式細胞術)和熒光免疫測定。免疫組織化學主要應用熒光染料標記抗體，與組織或細胞中的抗原結合，在專用顯微鏡下觀察經激發光激發的熒光，對相應的抗原進行定性或/和定位，也稱為熒光抗體技術；或與混合細胞成分作用，利用流式細胞儀進行細胞的分類研究。
[0004]熒光免疫測定是用熒光染料標記抗體或抗原，利用抗原抗體反應的特異性和熒光染料的檢測靈敏度，對生物材料(血液、尿液等體液或組織提取液、細胞培養液等)中水溶性成分進行定性或定量測定。
[0005]近年來，免疫金斑點滲濾法和免疫層析法得到了迅速的發展和應用，其中也包括了熒光法。其基本原理就是將第一抗體(也稱捕獲抗體)標記在硝酸纖維素(NC)膜上或其它固相載體的表面上，成為固相抗體，然后將待檢標本與標記了第二抗體的膠體金或標記了熒光染料的第二抗體(熒光結合物)先后或同時與捕獲抗體作用，在NC膜上相應區域就形成了反應條帶，如果是膠體金就形成肉眼可見的紅色條帶，如果是熒光結合物，則需在專用儀器內讀取熒光強度，根據膠體金條帶的深淺或熒光強度得出定性或定量的結果。這兩種方法，操作簡便，反應快捷，被列入POCT(Point Of Care Test)范疇,受到廣泛的關注。
[0006]一般而言，上述方法一個試驗只能檢測一個項目。以免疫層析法為例，每個測試條只能檢測一個項目，比如肌鈣蛋白I (TnI)測試條，只能檢測血清TnI濃度，如果想同時檢測肌紅蛋白和肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的濃度，只有在同一個測試條上3個相鄰的位置上分別標記3種相應的捕獲抗體，成為所謂的“3合1”(3 in I)測試條。目前，這種組合測試條僅是個例，“層析”條的有限空間限制了更多項目的組合及其應用。
[0007]熒光染料研究隨著熒光標記技術的廣泛應用取得了飛躍的進步。時間分辨熒光分析法的展開、雙光子的應用和量子點的研究開拓了熒光染料發展的新的領域。在傳統的熒光染料領域也取得了令人矚目的進展。例如僅Alexa Fluor系列熒光染料其發射光譜從近紫外到近紅外有約20種之多，這就為制備具有不同發射光譜的熒光結合物提供了范圍廣泛的選擇可能。
[0008]每種熒光染料均有其特定的激發光波長和相應的發射光波長。獲取激發光的途徑主要是:連續白光光源加窄帶濾光片獲取所需單色光；激光二極管和單色LED光源。得益于科技進步和制作工藝的發展，在這些領域都取得了迅速的發展。從近紫外到近紅外光波段，可以制備出任意波長的窄帶濾光片；在激光領域，可以定制近紫外到近紅外光波段內任意波長的激光二極管。這樣就可以用不同波長的激光二極管組合成激發光源；也可以用連續白光光源，如鹵素燈或氙燈與適用的濾光片組合以獲取激發光源；同時，LED單色光源的研發及其功率的提高，其作為激發光源應用的前景值得期待。
[0009]在生物化學定量測定中，常利用反應中形成的特征性發色基團在特定吸收光譜吸光度的改變實現定量分析。目前廣泛使用的自動化生化分析儀中均利用棱鏡或光柵逐一對反應杯的透射光進行分光，在計算機的控制下，測定各個反應杯的特定吸收光譜吸光度的改變而實現大量樣本的快速檢測，這一技術俗稱為“后分光技術”。其要點在于，將混合光通過棱鏡或光柵解析還原成“單色光”，在特征光譜的位置設置光電轉換元件(如光電管)固定接受此處的光強度變化，系列的光電管形成一個陣列，可以根據使用者的指令，捕捉特定波長處的光電信息，從而濾除無關雜色光的干擾，進而對特定發色基團作出精密的定性或定量分析。

【發明內容】

[0010]本發明的目的，就在于提供一種基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法。
[0011]本發明的目的是這樣實現的:一種基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法是，建立多項目混合熒光免疫反應體系和相應的檢測體系，根據熒光染料分別具有特定的激發光波長與發射光波長的性質，在檢測體系中通過將某一熒光染料激發光波長與與其相應的發射光波長對應的信號接收器聯動，逐一、連續進行分析，從而實現分別檢測；
[0012]所述多項目混合熒光免疫反應體系的建立包括以下步驟:
[0013](I)確定項目組合數N,選定N+1種激發光波長不同的突光染料,其中一種突光染料固定用于試劑內參照；
[0014](2)根據項目組合，選擇相應的配對抗體，即捕獲抗體和標記抗體；并在(I)所述選定的熒光染料的范圍內選擇熒光染料，取標記抗體分別制備熒光結合物，混合成混合熒光結合物；
[0015](3)將針對不同被檢測物的多項目捕獲抗體混合、混勻后，包被于固相載體上；
[0016](4)另選一對抗原抗體作為內參照物，將抗原用步驟(I)所述用于試劑內參照的熒光染料，制備熒光結合物，加入步驟(2)所述混合熒光結合物中，其抗體與步驟(3)所述捕獲抗體混合后包被于步驟(3)所述固相載體上；
[0017](5)將待檢樣本與上述包含內參照物的混合熒光結合物先后或同時滴加在上述固相載體上進行熒光免疫反應，反應結束后去除游離熒光結合物，即為待檢的反應區；
[0018]所述檢測體系的建立包括以下步驟:
[0019](a)根據步驟(I)選定的N+1種熒光染料的激發光波長，確定激發光源；
[0020](b)根據步驟(I)選定的N+1種熒光染料的發射光波長定制固定波長分光檢測器，在分光光路上與各熒光染料相應的發射光波長處分別設置信號接收器，組成信號接收器陣列，用于分別接收各選定的熒光染料的發射光信號；
[0021]將上述步驟(5)所述反應區置于激發光的照射區域，用激發光源照射，將發射光聚焦，直接或經分光檢測器檢測，所得發射光信號經模/數轉換、計算機軟件處理，最終給出檢測結果。
[0022]所述多項目混合熒光免疫反應體系是指用于包括單項測定在內的I項以上的測試的反應體系，最大的組合項目數為步驟(I)所述的組合項目數N。
[0023]步驟(I)中所述熒光染料包括異硫氰酸熒光素、異硫氰酸羅丹明、6-羧基熒光素酰胺酯、熒光烷衍生物類、1，8_萘二酰亞胺類、香豆素類、鑭系元素螯合物、量子點或包裹熒光染料的納米顆粒。
[0024]步驟(3)和步驟(5)中所述固相載體包括硝酸纖維膜、尼龍膜、聚苯乙烯片或膠乳顆粒、納米二氧化硅顆粒、磁性微粒、特殊處理的玻璃表面或玻璃微珠。
[0025]所述分別檢測的方法，包括常規發射光強分析法、時間分辨熒光分析法中的一種或兩種的組合。
[0026]步驟(a)中所述激發光源包括激光二極管、單色LED管、窄帶濾光片與連續白光光源的組合、連續白光光源或者特定的激發光。
[0027]所述信號接收器可以是高敏光電管，或是光導纖維導引至光電倍增管，或是實時影像記錄儀。
[0028]步驟(5)中所述突光免疫反應包括雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、抗原抗體結合競爭抑制法或間接免疫法。
[0029]所述連續白光光源包括鹵素燈、氙弧燈或白光LED。
[0030]所述特定的激發光是指量子點的激發光，以粒徑不同的量子點為熒光染料，可在同一波長激發光的作用下，發出不同波長的發射光。
[0031]內參照為儀器內設固定必檢通道:即每種組合的每次測試都自動進行內參照測試；軟件的數據處理是分別以該通道的光強為參比得出各項目相對光強，依據同法制備各自的校準曲線，作為定性或定量的依據。
[0032]根據目前的資料，常用熒光染料的激發/發射光譜分布于從近紫外到近紅外的廣泛波段內，因而可供選擇的熒光染料具有很大的范圍，也就是說，可供組合的檢測項目數將完全可以滿足絕大多數情況下的檢測要求。
[0033]對于熒光染料來說，其激發光波長與發射光波長是固定的、特征性的，因而，某一激發光波長必須與其發射光波長對應的信號接收器(光電管等)聯動，當某一波長激發光照射反應區時，與其對應的信號接收器同時啟動，接收和輸出信號。
[0034]內參照的設置是基于兩個方面的要求，對反應條自身有效性的監督和檢測數據的處理:各項目光強與內參照物光強的比值是最終報告的基礎；內參照的測定占用儀器內設固定通道，無需操作者的指令自動完成；也因此，盡管對每個項目組合而言可以選擇不同的抗原-抗體對作為內參照，而實際上所有的項目組合可以使用相同的內參照。
[0035]在不同單色激發光作用下，反應區內不同檢測對象的熒光結合物分別發出不同波長的熒光，雜色光的產生應極少；在預定項目組合數較少的情況下，雜色光干擾可以忽略不計時，可以無需分光檢測，利用光電轉換元件如光電管，直接接收發射光信號，完成檢測，這樣，可以簡化儀器的結構。
[0036]上述單色熒光可能會混以不同成分的雜光，特別是組合項目多、激發光譜接近，激發光譜相鄰的熒光結合物可能受到影響而產生干擾，這時，將“單色光”聚焦，引入棱鏡或光柵進行分光，在各熒光染料特征發射光譜處接收光強信號，即可最大限度地排除雜光的干擾，對各檢測對象做出精密的定性或定量的分析。
[0037]單一激發光源，如連續白光光源照射反應區時，熒光結合物會同時被激發，形成混合光束，在預訂項目組合較少，各發射光譜在峰值處的重疊可以忽略不計時，將其引入分光檢測器，可以無需單色光激發器，完成測試，此一設計，可以避免激光二極管或LED管因電源、環境溫度等外部因素導致的光譜漂移對檢測結果的影響，激發光源結構較為簡單。
[0038]量子點熒光是一個特殊的情況，其激發光為一特定波長單色光，熒光的發射波長取決于量子點的大小，因而，用量子點為熒光染料時，可利用特定單色光為激發光源，經分光檢測器實現分別檢測。
[0039]本發明可以將多個檢測項目組合在一起，一次完成，可有效地增加檢測通量，減少樣本消耗，降低檢測成本，提高檢驗效率，對現有的熒光免疫檢測技術是一個突破。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0040]圖1是采用激光二極管(包括LED管)作為激發光源的示意圖。
[0041]圖2是強光源加平面旋轉的單色濾光片獲得激發光的示意圖。
[0042]圖3是強光源加環形旋轉的單色濾光片獲得激發光的示意圖。
[0043]圖4是反應區激發熒光直接檢測示意圖。
[0044]圖5是分光檢測熒光發射光的示意圖。
[0045]圖6是本發明的方法原理框圖。
【具體實施方式】
[0046]1.激發光源的確定
[0047]1.1確定未來可能需要使用的熒光染料的種類，例如，未來可能要使用5種熒光染料為① Alexa Fluor 488、② Alexa Fluor 546、③ Alexa Fluor 610、④ Alexa Fluor660、⑤Alexa Fluor 750，另加Alexa Fluor 350作為內參照熒光染料。其激發波長/發射波長分別為 499nm/519nm、561nm/572nm、610nm/629nm、663nm/691nm、752nm/776nm 和346nm/442nm。定制波長分別是 499nm、561nm、610nm、663nm、752nm 和 346nm 的激光二極管(或LED管)，作為激發光源。
[0048]1.2定制這6種波長的窄帶濾光片，與連續白色光源，組成激發光源，用以激發反應區內熒光結合物。
[0049]1.3以連續白光光源為激發光源，或其它單一光源為激發光源(以量子點為熒光染料時)；采取這一激發光方式，檢測通道設置須以發射光波長為依據，也即選定熒光染料時，發射光譜不得重疊。
[0050]應用時，可根據實際需求，在上述激發光源中三取其一。
[0051]2.發射光信號接收器
[0052]2.1直接接受反應區經激發光激發的發射光信號，這些信號分別經模/數轉換、計算機軟件處理，包括校準曲線的建立，最終給出檢測結果。如此構成一個完整的檢測系統。
[0053]2.2檢測系統設置與熒光染料匹配的檢測通道，如以1.1所舉例的5種熒光染料，則設①、②、③、④、⑤通道和內參照通道。并令激發光發射/發射光接收聯動。設以①為檢測Alexa Fluor 546通道，則選擇①通道，即啟動499nm激發光，519nm接收器同時工作，此即為聯動。操作者根據不同的項目組合選擇通道，給出指令，儀器則按程序接收和處理指定通道的信號。
[0054]內參照為儀器內設固定必檢通道:即每種組合的每次測試都自動進行內參照測試；軟件的數據處理是分別以該通道的光強為參比得出各項目相對光強，依據同法制備的各自的校準曲線，作出定性或定量的報告。
[0055]3.定制分光檢測器
[0056]3.1定制棱鏡或光柵分光檢測器，具備與所選定的熒光染料發射波長位置相應的信號接受器陣列。以1.1所舉例的6種熒光染料，則須具備519nm、572nm、629nm、691nm、776nm和442nm固定波長信號接收器。它們接收經分光剔除雜色光干擾的“單色光”信號，這些信號分別經模/數轉換、計算機軟件處理，包括校準曲線的建立，最終給出檢測結果。如此構成一個完整的更為精密的檢測系統。
[0057]3.2如2.2所述設置儀器檢測通道和參比通道。
[0058]4.以上1.1、1.2和2 ;或1.1、1.2和3 ;或1.3和3構成激發/接收分析系統，為以下各種實施方式所通用。
[0059]4.1免疫滲濾法
[0060]4.1.1設計適當的測試項目組合，如甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)和糖類抗原50 (CA50)組成腫瘤標志物三項，選擇相應的配對抗體。將各自的捕獲抗體和兔IgG (內參照試劑)以適當的濃度混合，標記在NC膜的表面；NC膜下墊置吸水材料，如多層濾紙，制成反應板，備用。
[0061]4.1.2在上述檢測系統已設定的固定發射波長的5種熒光染料中選擇3種，如①、③、⑤，分別標記與上述捕獲抗體配對的抗體，制備熒光結合物。另取羊抗兔IgG標記以Alexa Fluor 350 (內參照試劑)，將這些熒光結合物以適當的濃度混合，備用。
[0062]上述內參照試劑，即兔IgG-熒光標記羊抗兔IgG系統在各種項目組合和各種方法中通用而且必用。以下各種實施方法中均包含此系統，不再特別記述。
[0063]4.1.3將定量待檢標本加在NC膜上,待滲濾后,加上定量混合突光結合物,待滲濾完全；或預先將標本與混合熒光結合物按比例混勻后，定量加到NC膜上，待滲濾完全。
[0064]4.1.4滴加中性緩沖溶液，以求更充分濾除未結合(游離)的熒光結合物。
[0065]4.1.5將反應板置于檢測裝置下，操作者選擇①、③、⑤通道，給出指令，進行檢測。得出一組AFP、CEA、CA50的檢測結果。
[0066]4.2免疫層析法
[0067]4.2.1設計適當的測試項目組合，如免疫滲濾法的腫瘤標志物三項,選擇相應的配對抗體。將各自的捕獲抗體以適當的濃度混合，吸附于NC膜上，真空干燥。
[0068]4.2.2在上述檢測系統已設定的5種固定發射波長的熒光染料中選擇3種，如②、③、⑤，分別標記與上述捕獲抗體配對的抗體，制備熒光結合物，以適當的濃度混合，噴涂在玻璃纖維墊上，真空干燥。
[0069]4.2.3將吸水墊、上述NC膜、玻璃纖維墊和樣品墊依次黏貼在不干膠墊片上，切條，制成免疫層析試驗條帶，備用。
[0070]4.2.4將定量待檢標本滴加于樣品墊上,待檢標本因毛細作用形成側向液流,流經玻璃纖維墊時，溶解并帶動熒光結合物流過NC膜上的捕獲抗體帶，完成反應，未結合物隨液流繼續前行，為吸水墊所容留。
[0071]4.2.5將反應完全的條帶置于檢測裝置下，選擇②、③、⑤通道，給出指令，進行測試。得出標本的AFP、CEA和CA50的定量結果。
[0072]4.3常規微孔板熒光免疫檢測法
[0073]4.3.1設計適當的測試項目組合，如免疫滲濾法的腫瘤標志物三項,選擇相應的配對抗體。將各自的捕獲抗體以適當的濃度混合，吸附于微孔中。洗去未結合物，拍干備用。
[0074]4.3.2在上述檢測系統已設定的5種固定發射波長的熒光染料中選擇3種，如②、
③、④分別標記與上述捕獲抗體配對的抗體，制備熒光結合物，以適當的濃度混合，備用。
[0075]4.3.3將定量待檢標本加入微孔，溫育固定時間后，洗去未結合物，拍干；
[0076]4.3.4將定量突光結合物混合物加入微孔,溫育固定時間后，洗去未結合物，拍干;
[0077]上述4.3.3和4.3.4操作可并為一步進行。
[0078]4.3.5將微孔置于檢測裝置下，選擇②、③、④通道，給出指令，進行測試。得出標本的AFP、CEA和CA50的定量結果。
[0079]4.4上述3種檢測方式中同一種項目組合應用了 3種熒光染料的不同組合，意在說明，在選定的熒光染料范圍內，允許任意挑選、組合使用。
[0080]如圖1所示，不同波長的激光二極管(或LED管)I圍繞反應區5并以此為共同的“聚焦”點，形成對稱的倒錐形排列。在二極管陣列與反應區之間有一旋轉的遮光板2，上面開有一個孔3，它經過每個二極管發出的光路，這樣可以連續獲得所需的單色激發光，同時保證在任一個時點只有一束激光可以投照到反應區5。通過電路控制，使陣列中的二極管相繼開關，在任一時點只有一個二極管處于開啟狀態，即在任何時點只有一個二極管發光時，可以取消遮光板的設置。
[0081]如圖2所示，單色激發光的獲取，可以采用連續白光光源6經窄帶濾光片8實現。在旋轉的濾光板7上，沿圓周對稱鑲嵌排列所選定的窄帶濾光片，置于光源與反應區5之間，這樣可以連續獲得所需的單色激發光，同時保證在任一時點只有一種單色光投照在反應區上。
[0082]如圖3所示，窄帶濾光片8可以排列鑲嵌在濾光環9上。光源6置于濾光環內。濾光環旋轉，可以連續獲得所需的單色激發光，同時保證在任一時點只有一種單色光投照在反應區上。
[0083]如圖1、圖2、圖3所示，激發光與反應區平面形成一個夾角。此角度的合理取值，應由實驗確定。
[0084]如圖4所示，在雜色光的干擾可忽略不計時，反應區5經單色激發光激發的熒光經聚焦系統10直接由接收器11接收信號。
[0085]如圖5所示，反應區5由單色激發光激發所產生的發射光(包括多少不一的雜色光)經聚焦系統10被引入棱鏡(或光柵)12分光，形成單色光束13，分別由接收器陣列14接收和輸出。
[0086]圖6是本發明的方法原理框圖，混合免疫熒光反應在反應區形成反應產物的混合(混合的熒光結合物存在其中)；混合的熒光結合物經單色激發光激發可直接測量，或經后分光的進一步過濾、解析、還原，從而實現多個檢驗項目同時(多通道)分析檢測。
【權利要求】
1.一種基于多項目混合突光免疫反應的分光分析法，其特征在于:建立多項目混合突光免疫反應體系和相應的檢測體系，根據熒光染料分別具有特定的激發光波長與發射光波長的性質，在檢測體系中通過將某一熒光染料激發光波長與與其相應的發射光波長對應的信號接收器聯動，逐一、連續進行分析，從而實現分別檢測； 所述多項目混合熒光免疫反應體系的建立包括以下步驟: (1)確定項目組合數N，選定N+1種激發光波長不同的熒光染料，其中一種熒光染料固定用于試劑內參照； (2)根據項目組合，選擇相應的配對抗體，即捕獲抗體和標記抗體；并在(I)所述選定的突光染料的范圍內選擇突光染料，取標記抗體分別制備突光結合物，混合成混合突光結合物； (3)將針對不同被檢測物的多項目捕獲抗體混合、混勻后，包被于固相載體上； (4)另選一對抗原抗體作為內參照物，將抗原用步驟(1)所述用于試劑內參照的熒光染料，制備熒光結合物，加入步驟(2)所述混合熒光結合物中，其抗體與步驟(3)所述捕獲抗體混合后包被于步驟(3)所述固相載體上； (5)將待檢樣本與上述包含內參照物的混合突光結合物先后或同時滴加在上述固相載體上進行熒光免疫反應，反應結束后去除游離熒光結合物，即為待檢的反應區； 所述檢測體系的建立包括以下步驟: (a)根據步驟(1)選定的N+1種熒光染料的激發光波長，確定激發光源； (b)根據步驟(1)選定的N+1種熒光染料的發射光波長定制固定波長分光檢測器，在分光光路上與各熒光染料相應的發射光波長處分別設置信號接收器，組成信號接收器陣列，用于分別接收各選定的熒光染料的發射光信號； 將上述步驟(5)所述反應區置于激發光的照射區域，用激發光源照射，將發射光聚焦，直接或經分光檢測器檢測，所得發射光信號經模/數轉換、計算機軟件處理，最終給出檢測結果。
2.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:所述多項目混合熒光免疫反應體系是指用于包括單項測定在內的I項以上的測試的反應體系，最大的組合項目數為步驟(1)所述的組合項目數N。
3.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:步驟(1)中所述熒光染料包括異硫氰酸熒光素、異硫氰酸羅丹明、6-羧基熒光素酰胺酯、熒光烷衍生物類、1，8_萘二酰亞胺類、香豆素類、鑭系元素螯合物、量子點或包裹熒光染料的納米顆粒。
4.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:步驟⑶和步驟(5)中所述固相載體包括硝酸纖維膜、尼龍膜、聚苯乙烯片或膠乳顆粒、納米二氧化硅顆粒、磁性微粒、特殊處理的玻璃表面或玻璃微珠。
5.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:所述分別檢測的方法，包括常規發射光強分析法、時間分辨熒光分析法中的一種或兩種的組合。
6.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:步驟(a)中所述激發光源包括激光二極管、單色LED管、窄帶濾光片與連續白光光源的組合、連續白光光源或者特定的激發光。
7.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:所述信號接收器可以是高敏光電管，或是光導纖維導引至光電倍增管，或是實時影像記錄儀。
8.根據權利要求1所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:步驟(5)中所述熒光免疫反應包括雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、抗原抗體結合競爭抑制法或間接免疫法。
9.根據權利要求6所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:所述連續白光光源包括鹵素燈、氙弧燈或白光LED。
10. 根據權利要求6所述的基于多項目混合熒光免疫反應的分光分析法，其特征在于:所述特定的激發光是指量子點的激發光，以粒徑不同的量子點為熒光染料，可在同一波長激發光的作用下，發出不同波長的發射光。
【文檔編號】G01N21/64GK103743897SQ201410045888
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年2月8日 優先權日:2014年2月8日
【發明者】于方治 申請人:于方治