專利名稱：一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法
技術領域：
本發明涉及藥品監測技術領域，尤其涉及一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法。
背景技術：
中醫認為，組織損傷引起的疼痛是因為損傷后，局部氣滯血瘀造成，不通則痛。復方南星止痛膏由江蘇南星藥業有限責任公司生產，藥品批準文號為:國藥準字Z10970019。復方南星止痛膏是由諸多芳香行氣和活血化瘀藥組成，具有散寒除濕、活血止痛之功效。復方南星止痛膏是由天南星、川烏、丁香、肉桂、白芷、細辛、川芎、徐長卿、乳香、沒藥、樟腦、冰片等12味中藥，再輔以松香、石蠟、凡士林、水楊酸甲酯制成，具有散寒除濕、活血止痛的功效，可顯著擴張用藥部位的微血管，促進局部血液循環，使新陳代謝旺盛。現代藥理研究表明，復方南星止痛膏能使炎性細胞釋放的致痛物質減少，從而降低或取消了對外周痛覺神經的刺激而發揮止痛效應(胡晨，陳榮明，殷書梅，等.復方南星止痛膏的鎮痛作用觀察及機理探討，南京中醫藥大學學報，2009，25(2):140 142.)。因其作用明顯、療效確切、使用方便，復方南星止痛膏在臨床上得到了廣泛的應用(陳永強，吳軍豪，姚宏明，呂建元，孫彥林，殷書梅.復方南星止痛膏治療寒濕瘀阻型骨關節炎249例臨床研究，上海中醫藥雜志，2010，44(12):59飛1.徐峰，潘立群，等.復方南星止痛膏對膝骨關節炎止痛效果的臨床研究，江蘇中醫藥，2011，43 (12): 22 23.)。根據上述研究結果，復方南星止痛膏具有較好的臨床抗炎、鎮痛的效果。而且，近年來有不少研究報道，復方南星止痛膏具有抗炎、鎮痛作用是由于其處方中大多數藥物含有揮發油類物質，如丁香含丁香酚，肉桂含桂皮醛，乳香、沒藥為油膠樹脂，白芷、細辛、川穹也含有揮發油，樟腦、冰片均為揮發性物質。這些揮發油都有很強的生物活性，有鎮痛、抗過敏等作用(陳榮民，姜淼，殷書梅.復方南星止痛膏對甲醛等致炎性疼痛模型大鼠止痛作用及c-f0S表達的 影響，世界中西醫結合雜質，2008，3(8):454 456.)。卞慧敏等研究發現(卞慧敏，俞晶華，姜淼，等.復方南星止痛膏抗炎作用研究，中藥藥理與臨床，2007, 23(5): 164^165.)復方南星止痛膏中的揮發性成分可以抑制大鼠慢性肉芽腫的形成，降低急性炎癥大鼠足腫脹，降低炎癥組織中IL-UTNF-a、PGE2水平，從而起到抗炎的作用。復方南星止痛膏中的可揮發性組分可提高小鼠對電、熱刺激的通閾值；對蟾蜍坐骨神經有局部麻醉作用，可阻斷疼痛的神經傳導沖動；并可顯著擴張用藥部位的微血管，使血流加快，促進局部血液循環，使新陳代謝旺盛；而且還能夠能提高大鼠足跖腫脹壓痛的通閾值，減少醋酸致小鼠的扭體次數，增加外周血中β-ΕΡ，減少PGE2的含量，有一定的鎮痛作用。因此，在復方南星止痛膏中，具有抗炎和止痛作用的主要是其中的揮發性組分，對其中揮發性組分的檢測對于復方南星止痛膏的質量評價和控制具有重要指導意義，從而能夠更好地控制其質量，保證臨床用藥的安全性和有效性，有關復方南星止痛膏中揮發性組分的檢測方法在國內外尚未見報道。

發明內容
本發明的目的在于提供一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，本發明提供的方法能夠準確地測定復方南星止痛膏中的揮發性成分，有利于對研發和生產過程的指導。本發明提供了一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，包括以下步驟:a)提供復方南星止痛膏待測樣品；b)采用頂空進樣的方式對所述步驟a)的待測樣品進行氣相色譜檢測；c)根據所述步驟b)得到的氣相色譜與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜，得到待測樣品的檢測結果；所述步驟b)中的檢測溫度為200°C ^250°C ；所述步驟b)中檢測的分流比為(3 15):1。優選的，所述步驟a)中待測樣品中復方南星止痛膏的質量分數為1°/Γ10%。優選的，所述步驟a)為:將復方南星止痛膏與分散基質混合，得到混合物；將所述混合物進行加熱，得到復方南星止痛膏待測樣品。優選的，所述分散基質為甲基硅油或硅膠。優選的，所述加熱的溫度為70°C 90°C ；所述加熱的時間為5min 20min。優選的，所述檢測溫度采用程序升溫的方式達到；所述程序升溫為:以第一升溫速率從初始溫度升溫至中間溫度；再以第二升溫速率從中間溫度升溫至檢測溫度；所述程序升溫的初始溫度為80°C 120°C ；所述中間溫度為120°C 150°C。優選的，所述程序升溫的初始溫度為80°C 120°C。優選的，所述第一升溫速率為1°C /min 5°C /min ；所述第二升溫速率為20°C /minlOO /min。優選的，所述步驟b)中頂空進樣過程中對待測樣品加熱溫度為100°C ^140°C ；所述頂空進樣中定量環的溫度為120°C ^150°C ；所述頂空進樣中傳輸線的溫度為140°C ^160oC ；所述頂空進樣中待測樣品的加熱時間為30min"50min ；所述頂空進樣中的加壓時間為0.lmin、.5min ；所述頂空進樣中定量環的填充時間為0.3min"lmin ；所述頂空進樣中定量環的平衡時間為0.02min"0.08min ；所述頂空進樣中的進樣時間為0.5min 3min。優選的，所述步驟c)中的標準指紋圖譜按照以下方法獲得:將多個批次的復方南星止痛膏進行氣相色譜檢測，分別得到多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜圖；采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統對所述多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜圖進行分析，得到氣相標準指紋圖譜。優選的，所述復方南星止痛膏的批次數為至少10個批次。本發明提供一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，包括以下步驟:a)提供復方南星止痛膏待測樣品山)采用頂空進樣的方式對所述步驟a)的待測樣品進行氣相色譜檢測；c)根據所述步驟b)得到的氣相色譜與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜，得到待測樣品的檢測結果；所述步驟b)中的檢測溫度為200°C 250°C;所述步驟b)中檢測的分流比為(3 15):1。本發明提供的方法得到了復方南星止痛膏中揮發性成分的特征色譜峰，即指紋譜圖，并且各色譜峰的分離度較高，從而可以通過得到的特征色譜峰判斷復方南星止痛膏的品質；在上述檢測條件下，避免了其他物質對復方南星止痛膏中特征組分的干擾，能夠減少色譜峰的干擾，使得本發明提供的方法具有較高的準確度，從而有利于指導對復方南星止痛膏的研發和生產。


圖1為本發明實施例1得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；圖2為本發明實施例2得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；圖3為本發明實施例3得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；圖4為本發明實施例4得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；圖5為本發明實施例5得到的氣相色譜圖；圖6為本發明實施例擴18得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；圖7為本發明實施例擴18得到的復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜；圖8為本發明實施例29得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；圖9為本發明實施例30得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖10為本發明實施例31得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖11為本發明實施例32得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖12為本發明實施例33得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖13為本發明實施例34得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖14為本發明實施例35得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖15為本發明實施例36得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖16為本發明實施例37得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖17為本發明實施例38得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖18為本發明實施例39得到的待測樣品的氣相色譜圖；圖19為本發明比較例I得到的甲基硅油的氣相色譜圖；圖20為本發明比較例2得到的陰性樣品的氣相色譜圖；圖21為本發明比較例3得到的樟腦的氣相色譜圖；圖22為本發明比較例4得到的冰片的氣相色譜圖。
具體實施例方式本發明提供了一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，包括以下步驟:a)提供復方南星止痛膏待測樣品；
b)采用頂空進樣的方式對所述步驟a)的待測樣品進行氣相色譜檢測；c)根據所述步驟b)得到的氣相色譜與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜，得到待測樣品的檢測結果；所述步驟b)中的檢測溫度為200°C "250°C ；所述步驟b)中檢測的分流比為(3 15):1。本發明提供一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，本發明提供的方法將復方南星止痛膏的待測樣品進行氣相色譜圖檢測，將得到的氣相色譜圖與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜進行比較，得到待測樣品的檢測結果。本發明提供的檢測方法得到了復方南星止痛膏中揮發性成分的特征色譜峰，并且各色譜峰的分離度較高，實現了對復方南星止痛膏中揮發性成分的準確測定，有利于指導復方南星止痛膏的研發和生產；而且能夠更好的保證復方南星止痛膏的質量，從而保證了臨床使用的安全性和有效性。本發明首先提供復方南星止痛膏的待測樣品，優選先將復方南星止痛膏與分散基質混合，得到混合物；將所述混合物進行加熱，得到復方南星止痛膏待測樣品。本發明對所述復方南星止痛膏與分散基質混合的容器沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的制備待測樣品的技術方案即可。本發明優選將所述復方南星止痛膏與分散基質在頂空進樣瓶中混合；在本發明中，為了能夠充分地檢 測到復方南星止痛膏中的揮發性組分，所述待測樣品中復方南星止痛膏的質量分數優選為1°/Γ10%，更優選為2.59Γ7.5% ;所述分散基質優選為甲基硅油或硅膠，更優選為甲基硅油；所述將所述混合物進行加熱的溫度優選為700C 90°C，更優選為75°C 85°C ;所述將所述混合物進行加熱的時間優選為5mirT20min，更優選為8mirTl5min ;本發明為了得到分散均勻的待測樣品，將所述復方南星止痛膏與分散基質混合后，優選將得到的混合物進行超聲，本發明對所述超聲的方法沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的超聲的技術方案即可。得到待測樣品后，本發明采用頂空進樣的方式對所述待測樣品進行氣相色譜檢測。本發明對所述頂空進樣的儀器沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的頂空進樣的設備即可；在本發明中，所述頂空進樣中，對待測樣品加熱溫度優選為100°c ^140°C,更優選為110°C 130°C，最優選為115°C ^125 °C ;所述頂空進樣中定量環的溫度優選為120°C 150 °C，更優選為125 °C 145 °C，最優選為130°C "140°C ;所述頂空進樣中傳輸線的溫度優選為140°C 160°C，更優選為145°C ^155°C ;所述頂空進樣中待測樣品的加熱時間優選為30min 50min,更優選為35min 45min ;所述頂空進樣中加壓的時間優選為0.lmin"0.5min,更優選為0.2min"0.35min ;所述頂空進樣中定量環的填充時間優選為0.3min"lmin,更優選為0.4min"0.8min ;所述頂空進樣中定量環的平衡時間優選為0.02min 0.08min,更優選為0.04min 0.06min ;所述頂空進樣中進樣時間優選為0.5min 3min,更優選為 Imin 2min ；本發明對所述氣相色譜檢測的儀器沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的氣相色譜儀即可，如美國安捷倫(Aglient)公司生產的型號為Aglient6890的氣相色譜儀；在本發明中，所述氣相色譜檢測中的檢測器優選為氫火焰離子化檢測器；本發明對所述氣相色譜檢測中的載氣沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的用于氣相色譜檢測中的載氣即可，如氮氣，氮氣的純度優選為99.999% ;本發明對待測樣品進樣前的靜置時間沒有特殊的限制，可以在得到待測樣品后直接進樣，也可以靜置一段時間后再進樣，所述靜置的時間優選為Ot~lOh，更優選為0h 8h ;所述檢測溫度為200°C "250°C，優選為210°C "240°C，更優選為220°C 235°C，所述氣相色譜檢測的柱溫優選采用程序升溫的方式達到，所述程序升溫的初始溫度優選為80°C 120°C，更優選為85°C 115°C，最優選為95°C 105°C;所述程序升溫的具體過程優選為:以第一升溫速率從初始溫度升溫至中間溫度；再以第二升溫速率從中間溫度升溫至檢測溫度；所述中間溫度為120°C 150°C。本發明首先以第一升溫速率將柱溫從初始溫度升溫至中間溫度，所述中間溫度優選為120°C 150°C，更優選為125°C 140°C ;所述第一升溫速率優選為1°C /mirT5°C /min,更優選為2V /mirT4°C /min ;在將柱溫升至中間溫度后，本發明優選在中間溫度條件下，保溫Imin 8min,更優選為3min 5min ；將柱溫升至中間溫度后，本發明再以第二升溫速率將柱溫升至檢測溫度，所述第二升溫速率優選為20°C /min^40°C /min，更優選為25 V /mirT35°C /min ;將柱溫升至檢測溫度后，本發明優選將其在檢測溫度下保溫lmin"5min,更優選為2min"4min。在本發明中，為了得到復方南星止痛膏中更多揮發性組分的色譜峰，且使得到的色譜峰之間具有較高的分離度，提高對復方南星止痛中揮發性成分檢測的準確度，所述氣相色譜檢測中待測樣品的體積流量優選為0.5mL/min"5mL/min,更優選為lmL/min"3mL/min;所述氣相色譜檢測中的分流比為(3 15): 1，優選為(5 10): 1，更優選為5:1 ;所述氣相色譜檢測中進樣口的溫度優選為230°C 270°C，更優選為240°C 260°C，最優選為245 0C 255°C。按照上述技術方案所述的過程完成對待測樣品的氣相色譜檢測后，得到待測樣品的氣相色譜，本發明將所述待測樣品的氣相色譜與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜進行比較，得到待測樣品的檢測結果。在本發明中，所述復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜優選按照以下方法獲得:將多個批次的復方南星止痛膏進行氣相色譜檢測，分別得到多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜圖；采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統對所述多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜圖進行分析，得到氣相標準指紋圖譜。本發明為了得到復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜，本發明提供多個批次復方南星止痛膏，本發明對所述復方南星止痛膏的來源沒有特殊限制，采用本領域技術人員熟知的復方南星止痛膏即可。本發明對所述復方南星止痛膏的批次數沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的復方南星止痛膏的批次數即可；在本發明中，所述復方南星止痛膏的批次數優選為至少10個，更優選為10個 15個。本發明將得到的復方南星止痛膏進行氣相色譜檢測，分別得到多個復方南星止痛膏的氣相色譜圖，所述檢測過程參見上述技術方案所述的對復方南星止痛膏待測樣品的氣相色譜檢測過程，在此不再贅述。得到所述多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜后，本發明將所述多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統進行分析，得到氣相標準指紋圖譜。本發明對中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統的分析沒有特殊限制，將得到的氣相色譜的測定結果導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，按照系統自帶的分析程序進行分析即可。得到氣相標準指紋圖譜后，本發明將上述技術方案得到的待測樣品的氣相色譜圖與所述氣相標準指紋圖譜進行比較，得到待測樣品的檢測結果。為了能夠得到準確的檢測結果，本發明對比待測樣品氣相色譜圖與所述氣相標準指紋圖譜中的共有色譜峰。在本發明中，所述共有指紋峰優選按照以下方法獲得::以氣相色譜圖中的一個色譜峰為參照峰，計算得到其他色譜峰的相對保留時間和相對峰面積；以所述相對保留時間和相對峰面積在多個氣相色譜圖中穩定的色譜峰為共有指紋峰。本發明選擇得到的氣相色譜圖中其中一個色譜峰為參照峰，計算得到其他色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，本發明對參照峰的選擇沒有特殊的限制，可以選擇任意一個色譜峰作為參照峰，如在本發明圖5中所示的2號色譜峰，其大小、位置適中，分離度較好且較穩定，以2號色譜峰為參照峰，計算得到其他色譜峰的相對保留時間和相對峰面積；得到各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積后，本發明比較得到的各個氣相色譜圖中每個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，得到在各個氣相色譜圖中相對保留時間和相對峰面積穩定的色譜峰，即其相對峰面積和相對保留時間均沒有明顯的變化，將所述相對保留時間和相對峰面積穩定的色譜峰標定為共有指紋峰；得到所述共有指紋峰后，本發明將上述技術方案得到的待測樣品的氣相色譜圖與所述氣相標準指紋圖譜進行比較，比較其共有指紋峰的相對峰面積和相對保留時間，得出待測樣品中揮發性組分的種類，從而可以根據得到的結果對待測樣品的品質進行評價，有利于對科研和工業生產的指導。本發明還對得到的共有指紋峰進行成分鑒定，本發明對所述成分鑒定的方法沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的成分鑒定的技術方案即可，如可以采用氣相-質譜聯用法對成分進行鑒定，結果表明，復方南星止痛膏中的揮發性組分包括樟腦、異龍腦和龍腦等。本發明考察了本發明提供的方法的精密度、穩定性和重復性，所述精密度考察的具體過程如下:將同一來源的待測樣品按照上述技術方案所述的待測樣品的檢測方法連續檢測5次，將得到的氣相色譜圖按照上述相似度評價的過程計算各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，然后計算相對保留時間和相對峰面積的相對標準偏差，結果表明，本發明提供的方法得到待測樣品的共有指紋峰的相對保留時間的RSD均小于1%，相對峰面積的RSD均小于4.88%，這說明，本發明提供的方法具有較高的精密度；所述穩定性考察的具體過程如下:將同一待測樣品，按照上述技術方案所述的檢測方法，分別在0h、2h、4h、6h和8h進樣，將得到的氣相色譜圖按照上述相似度評價的過程計算得到各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，然后計算相對保留時間和相對峰面積的相對標準偏差，結果表明，本發明提供的方法得到待測樣品的共有指紋峰的相對保留時間的RSD均小于0.12%，相對峰面積的RSD均小于4.06%，這說明，本發明提供的方法具有較高的穩定性；
所述重復性考察的具體過程如下:制備6份同一來源的復方南星止痛膏的待測樣品，將其按照上述技術方案所述的檢測方法進行檢測，將得到的氣相色譜圖按照上述相似度評價的過程計算得到各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，然后計算相對保留時間和相對峰面積的相對標準偏差，結果表明，本發明提供的方法得到待測樣品的共有指紋峰的相對保留時間的RSD均小于1%，相對峰面積的RSD均小于4.24%，這說明，本發明提供的方法具有較高的重復性。本發明提供一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，包括以下步驟:a)提供復方南星止痛膏待測樣品山)采用頂空進樣的方式將所述步驟a)的待測樣品進行氣相色譜檢測；c)根據所述步驟b)得到的氣相色譜與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜，得到待測樣品的檢測結果；所述步驟b)中的檢測溫度為200°C 250°C;所述步驟b)中檢測的分流比為(3 15):1。本發明提供的方法得到了復方南星止痛膏中揮發性成分的特征色譜峰，并且各色譜峰的分離度較高，從而可以通過得到的特征色譜峰判斷復方南星止痛膏的品質；在上述檢測條件下，避免了其他物質對復方南星止痛膏中特征組分的干擾，能夠減少色譜峰的干擾，使得本發明提供的方法具有較高的準確度，從而有利于指導對復方南星止痛膏的研發和生產。另外，本發明提供的方法具有較高的精密度、穩定性和重復性，有利于其推廣應用。為了進一步說明本發明，下面結合實施例對本發明提供的一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法進行詳細地描述，但不能將它們理解為對本發明保護范圍的限定。本發明在以下實施例中采用美國安捷倫(Agilent)公司生產的型號為Aglient6890的氣相色譜儀，配氫火焰離子化檢測器，美國Agilent公司生產的型號為Aglient6890-5973的GC-MS聯用儀；法國Millipore公司生產的Mill1-Q超純水系統；甲醇為分析純；甲基硅油為工業級;批號為:100425、100424、100423、100422、100421、100420、100419、100418、100417和100416，依次標記為S1 Sltl的復方南星止痛膏，由江蘇南星藥業股份有限公司提供；缺天南星、川烏、丁香、肉桂、白芷、細辛、川芎、徐長卿、乳香、沒藥、樟腦、冰片12味中藥的復方南星止痛膏陰性制劑，由江蘇南星藥業股份有限公司提供；樟腦對照品的批號為，由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用；冰片對照品的批號為，由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。實施例1 2分別精密稱取IOmg復方南星止痛膏，分別將其置于20mL頂空進樣瓶中，分別向其中加入50mg娃膠研勻、ImL甲基娃油混勻,壓蓋密封,將頂空進樣瓶在80°C下加熱IOmin,超聲混勻后，得到待測樣品；將得到的待測樣品采用頂空進樣的方式置于氣相色譜儀中進行檢測，檢測條件如下:頂空條件:樣品加熱溫度為120°C，定量環溫度為140°C，傳輸線溫度為160°C ;樣品加熱時間為30min，加壓時間為0.2min，定量環填充時間為0.5min，定量環平衡時間為0.05min,進樣時間為0.5min ；氣相條件:程序升溫起始溫度為100°C，保持7min，以2 V /min的速率升溫至130°C，再以20°C /min的速率升至250°C，保持2min ;流速為lml/min ;分流比為10:1 ;進樣口溫度為250°C ;FID檢測，檢測器溫度:250°C，檢測得到復方南星止痛膏的氣相色譜圖。檢測結果如圖f 2所示，圖f 2分別為本發明實施例f 2得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖，由圖1和圖2比較可以看出，圖2中出峰較多，因此，在實施例中采用甲基硅油為分散基質。實施例3 4準確稱取20mg復方南星止痛骨,將其置于5mL試管中，向其中加入1.5mL甲基娃油，混勻得到混懸液；將得到的混懸液采用頂空進樣的方式置于氣相色譜儀中進行檢測，檢測條件如下:頂空條件:樣品加熱溫度為120°C，定量環溫度為135°C，傳輸線溫度為150°C ;樣品加熱時間為30min，加壓時間為0.2min，定量環填充時間為0.5min，定量環平衡時間為
0.05min,進樣時間為lmin。氣相條件:程序升溫起始溫度為100°C，保持7min，以20°C /min的速率升至250°C，保持2min ;流速為lmL/min ;進樣口溫度為250°C;FID檢測，檢測器溫度為300°C;分流比分別為10:1及5:1，檢測得到復方南星止痛膏的氣相色譜圖。結果如圖3 4所示，圖3 4分別為本發明實施例3 4得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖，比較圖3和圖4可以看出，實施例4得到的氣相色譜圖中的色譜峰峰面積大，也就是說分流比為5:1得到的檢測結果要好于分流比為10:1得到的檢測結果，在下述實施例中采用分流比為5:1。實施例5分別精密稱定5.0mg復方南星止痛膏和復方南星止痛膏的陰性制劑，將其分別置于體積為20mL頂空進樣瓶中，向其中加入200mg甲基硅油，壓蓋密封，將得到的混合溶液在80°C下加熱lOmin，超聲混勻后，得到待測樣品和陰性制劑樣品；將得到的待測樣品和陰性制劑樣品采用頂空進樣的方式置于氣相色譜儀中進行檢測，檢測條件為:頂空條件:樣品加熱溫度為120°C，定量環溫度為135°C，傳輸線溫度為150°C ;樣品加熱時間為40min，加壓時間為0.2min，定量環填充時間為0.5min，定量環平衡時間為
0.05min,進樣時間為1.0min ；色譜柱為HP-5MS 柱(30mX 0.25mmX 0.25 μ m);柱溫為初始溫度 100°C，保持 3min，以2°C /min的升至130°C,再以30°C /min升至230°C,保持2min。體積流量為lmL/min ;分流比為5:1 ;進樣口溫度為250°C，檢測得到待測樣品和陰性制劑的氣相色譜圖。結果如圖5所示，圖5為本發明實施例5得到的氣相色譜圖，其中圖A為復方南星止痛膏的氣相色譜圖，圖B為復方南星止痛膏陰性制劑的氣相色譜圖，通過比較圖A和圖B可以看出，本發明提供的方法得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖中，6個主要色譜峰的分離度良好，本發明提供的方法具有較強的專屬性，適用于復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測。實施例6按照實施例5所述的待測樣品的制備方法，將批號為100425的復方南星止痛膏制備得到待測樣品；
將得到的待測樣品按照實施例5所述的對待測樣品的檢測方法進行檢測，連續進樣5次，得到待測樣品的氣相色譜圖。本發明得到氣相色譜圖后，以2號色譜峰為參照峰，計算得到各主要共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明，各主要共有峰的相對保留時間RSD均小于1%;相對峰面積RSD均小于4.88%，這說明本發明提供的方法精密度良好。實施例7按照實施例5所述的待測樣品的制備方法，將批號為100425的復方南星止痛膏制備得到待測樣品；將得到的待測樣品按照實施例5所述的對待測樣品的檢測方法進行檢測，唯一不同為將待測樣品分別于0h、2h、4h、6h、8h進樣，得到待測樣品的氣相色譜圖。本發明得到氣相色譜圖后，以2號色譜峰為參照峰，計算得到各主要共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明，各主要共有峰的相對保留時間RSD均小于0.12% ;相對峰面積RSD均小于4.06%，這說明本發明提供的方法在8h內對待測樣品進行檢測，具有較好的穩定性。實施例8按照實施例5所述的待測樣品的制備方法，將批號為100425的復方南星止痛膏制備得到待測樣品；分別取6份上述待測樣品，將其按照實施例5所述的對待測樣品的檢測方法進行檢測，得到待測樣品的氣相色譜圖。本發明得到氣相色譜圖后，以2號色譜峰為參照峰，計算得到各主要共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明，各主要共有峰的相對保留時間RSD均小于0.12% ;相對峰面積RSD均小于4.24%，這說明本發明提供的方法具有較好的重復性。實施例9 18按照實施例5所述的檢測方法，分別得到10個批號為100425、100424、100423、100422、100421、100420、100419、100418、100417 和 100416 的復方南星止痛膏的氣相色譜圖；本發明將得到的氣相色譜圖導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”，以2號色譜峰為參照峰，結果如圖6所示，圖6為本發明實施例擴18得到的復方南星止痛膏的氣相色譜圖，圖7為本發明得到的復方南星止痛膏氣相標準指紋圖譜；本發明計算得到10批樣品中6個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值，結果如表I和表2所示，表I為本發明實施例擴18得到的色譜峰的相對保留時間，表2為本發明實施例擴18得到的色譜峰的相對峰面積。表I本發明實施例擴18得到的色譜峰的相對保留時間
權利要求
1.一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，包括以下步驟: a)提供復方南星止痛膏待測樣品； b)采用頂空進樣的方式對所述步驟a)的待測樣品進行氣相色譜檢測； c)根據所述步驟b)得到的氣相色譜與復方南星止痛膏的氣相標準指紋圖譜，得到待測樣品的檢測結果； 所述步驟b)中的檢測溫度為200°C ^250°C ； 所述步驟b)中檢測的分流比為(3 15):1。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟a)中待測樣品中復方南星止痛膏的質量分數為ι°/Γιο%。
3.根據權利要求Γ2任意一項所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟a)為: 將復方南星止痛膏與分散基質混合，得到混合物； 將所述混合物進行加熱，得到復方南星止痛膏待測樣品。
4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述分散基質為甲基硅油或硅膠。
5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述加熱的溫度為70°C 90°C； 所述加熱的時間為5min 20min。
6.根據權利要求1 所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測溫度采用程序升溫的方式達到； 所述程序升溫為: 以第一升溫速率從初始溫度升溫至中間溫度； 再以第二升溫速率從中間溫度升溫至檢測溫度； 所述程序升溫的初始溫度為80°C ^120°C ； 所述中間溫度為120°C 150°C。
7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述第一升溫速率為1°C/mirT5°C /min ； 所述第二升溫速率為20°C /min 40°C /min。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟b)中頂空進樣過程中對待測樣品加熱溫度為100°C 140°C ； 所述頂空進樣中定量環的溫度為120°C ^150°C ； 所述頂空進樣中傳輸線的溫度為140°C ^160oC ； 所述頂空進樣中待測樣品的加熱時間為30min"50min ； 所述頂空進樣中的加壓時間為0.lmin"0.5min ； 所述頂空進樣中定量環的填充時間為0.3mirTlmin ； 所述頂空進樣中定量環的平衡時間為0.02mirT0.08min ； 所述頂空進樣中的進樣時間為0.5min 3min。
9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟c)中的氣相標準指紋圖譜按照以下方法獲得: 將多個批次的復方南星止痛膏進行氣相色譜檢測，分別得到多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜圖； 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統對所述多個批次復方南星止痛膏的氣相色譜圖進行分析，得到標準指紋圖譜。
10.根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述復方南星止痛膏的批次數為至少10個 批次。
全文摘要
本發明提供了一種復方南星止痛膏中揮發性成分的檢測方法，包括以下步驟a)提供復方南星止痛膏待測樣品；b)采用頂空進樣的方式對所述步驟a)的待測樣品進行氣相色譜檢測；c)根據所述步驟b)得到的氣相色譜與復方南星止痛膏的標準氣相指紋圖譜，得到待測樣品的檢測結果；所述步驟b)中的檢測溫度為200℃~250℃；所述步驟b)中檢測的分流比為(3~15):1。本發明提供的方法得到了復方南星止痛膏中揮發性成分的特征色譜峰，并且各色譜峰的分離度較高，從而可以通過得到的特征色譜峰判斷復方南星止痛膏的品質，本發明提供的方法具有較高的準確度、穩定性和重復性，從而有利于指導復方南星止痛膏的研發和生產。
文檔編號G01N30/02GK103149296SQ20131006334
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月27日 優先權日2013年2月27日
發明者蕭偉, 夏月, 王振中, 李吉峰, 丁崗, 趙麗, 徐豐果, 章晨峰, 于丹 申請人:江蘇南星藥業有限責任公司, 江蘇康緣藥業股份有限公司