專利名稱：分離/檢測柱及其試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種具有兩個固定相的分離/檢測柱及其試劑盒，所述兩個固定相的 對紫外線或著色劑的光學響應性和分離樣品中的組分的能力二者均不同。
背景技術：
作為快速精煉少量樣品的裝置，市售可得分離/檢測(分離-檢測)柱(快速管)， 其為填充有浸潰了熒光指示劑的硅膠的聚乙烯管柱。通過使樣品與柱的末端連接并且在柱 中填充洗脫液，該分離/檢測柱可容易分離樣品中的少量化合物。在該分離/檢測柱中，通 過照射紫外線可檢查分離狀態，并且通過切斷管可容易提取已分離的化合物。此外，與制備 TLC或其它棒狀柱的情況不同，該分離/檢測柱不使用固定劑等助劑，因此可防止助劑對樣 品的影響。
一種已知的分離劑為含有多糖衍生物(例如多糖苯基氨基甲酸酯衍生物)的分離 劑，其可用于分離光學異構體，但是含有多糖衍生物的一些分離劑具有紫外響應性。在上述 分離/檢測柱的情況下，當通過照射紫外線檢查化合物的分離時，不能使用具有紫外響應 性的分離劑，因此，就使用具有紫外響應性的分離劑的分離/檢測而言，上述分離/檢測柱 仍必須被考慮。
發明概述 本發明要解決的問題本發明的一個目的是提供一種可檢測通過分離劑分離的樣品中的組分的分離/檢測 柱，所述分離劑具有與所述組分相同的光學響應性。
解決問題的方式本發明人發現，在柱管中，將不具有分離樣品的分離能力但是具有紫外響應性的分離 劑層與具有不同的紫外響應性和分離樣品的分離能力的分離劑層的下游側連接，從而使通 過后一種分離劑分離的組分很好地被檢測，因此本發明人完成本發明。
換言之，本發明提供一種分離/檢測柱，所述柱具有柱狀或管狀的具有液體滲透 性的第一和第二固定相，其中第一和第二固定相的末端連接使得液體可滲透；和在第一和 第二固定相的軸向滲透的流動相，其中第一固定相具有分離樣品中的組分的分離能力和對 紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同，和第二固定 相具有不同于所述組分的光學響應性。
本發明還提供分離/檢測柱，其中第二固定相不具有分離能力。
本發明還提供分離/檢測柱，其中第一和第二固定相分別由在柱管中的粒狀填料 形成的填充層、具有液體滲透性的柱狀體或具有液體滲透性的分離劑層形成，所述分離劑 層在不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體的周面上形成。
本發明還提供分離/檢測柱，其中柱狀體的形狀為圓柱形，并且支持體的形狀為 圓柱形或圓管狀。
本發明還提供分離/檢測柱，其中第一固定相含有用于光學異構體的分離劑，而第二固定相不含用于光學異構體的分離劑。
本發明還提供一種分離/檢測試劑盒，所述試劑盒包含柱管，所述柱管具有光透 性；第一粒狀填料，所述第一粒狀填料具有分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著 色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同；和第二粒狀填料，所述第 二粒狀填料具有不同于所述組分的光學響應性。
本發明還提供一種分離/檢測試劑盒，所述試劑盒包含柱管；第一粒狀填料，所 述第一粒狀填料具有分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著色劑的光學響應性，所 述光學響應性與該組分的光學響應性相同；和第二圓柱體和第二薄層層析棒中的一個或二 者，其可與柱管連接，使得液體自由滲透，其中第二圓柱體具有不同于所述組分的光學響應 性和液體滲透性，和第二薄層層析棒具有不具有液體滲透性的圓柱形或圓管狀支持體和第 二分離劑層，所述第二分離劑層在支持體的周面上形成并且具有不同于所述組分的光學響 應性和液體滲透性。
本發明還提供一種分離/檢測試劑盒，所述試劑盒包含第一圓柱體和第一薄層 層析棒中的一個或二者，所述第一圓柱體具有液體滲透性、分離樣品中的組分的分離能力 和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同，所述第 一薄層層析棒具有不具有液體滲透性的圓柱形支持體和在支持體的周面上形成的第一分 離劑層；柱管，所述柱管具有光透性并且與第一圓柱體或第一薄層層析棒連接，使得液體自 由滲透；和第二粒狀填料，所述第二粒狀填料具有不同于所述組分的光學響應性，其中第一 分離劑層具有分離能力、與所述組分相同的光學響應性和液體滲透性。
本發明還提供一種分離/檢測試劑盒，所述試劑盒包含第一柱狀體和第一薄層 層析棒中的一個或二者，所述第一柱狀體具有液體滲透性、分離樣品中的組分的分離能力 和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同，所述第 一薄層層析棒具有不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體和在支持體的周面上形成的第 一分離劑層；第二柱狀體和第二薄層層析棒中的一個或二者，所述第二柱狀體具有不同于 所述組分的光學響應性和液體滲透性，所述第二薄層層析棒具有不具有液體滲透性的柱狀 或管狀支持體和在支持體的周面上形成的第二分離劑層；和連接件，所述連接件連接第一 柱狀體或第一薄層層析棒和第二柱狀體或第二薄層層析棒，使得液體自由滲透，其中第一 分離劑層具有分離能力、與所述組分相同的光學響應性和液體滲透性，和第二分離劑層具 有不同于所述組分的光學響應性和液體滲透性。
本發明還提供分離/檢測試劑盒，其中第二填料、第二圓柱體、第二分離劑層或第 二柱狀體不具有分離能力。
本發明還提供分離/檢測試劑盒，其中第二柱狀體的形狀為圓柱形，并且支持體 的形狀為圓柱形或圓管狀。
本發明還提供分離/檢測試劑盒，其中第一填料、圓柱體、柱狀體或分離劑層含有 用于光學異構體的分離劑，而第二填料、圓柱體、柱狀體或分離劑不含用于光學異構體的分 離劑。
本發明還提供分離/檢測柱或分離/檢測試劑盒，其中所述用于光學異構體的分 離劑為多糖衍生物。
本發明還提供分離/檢測柱或分離/檢測試劑盒，其中所述多糖衍生物由多糖與芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的任一種構成，所述基團與多糖的羥基或氨基部 分或完全置換。
本發明的有益效果由于形成第一和第二固定相，本發明可提供一種可檢測通過分離劑分離的樣品中的組 分的分離/檢測柱，所述分離劑具有與所述組分相同的光學響應性。
附圖簡述

圖1為描述本發明的連接件的第一實施例的圖；圖2為描述本發明的連接件的第二實施例的圖；圖3為描述本發明的連接件的第三實施例的圖；圖4為描述用于本發明的一個實施方案的分離/檢測柱的圖；和 圖5為描述使用圖4中的分離/檢測柱通過光學分離t-SO檢測提余液組分的狀態的圖。發明內容
本發明的分離/檢測柱具有第一和第二固定相，第一和第二固定相具有液體滲透 性和柱狀或管狀形狀。本文的液體滲透性是指使液體從固定相的一端滲透到另一端的特 性，同時在相對于固定相的軸向的截面方向上潤濕固定相的整個區域(當固定相垂直于軸 取剖面時，固定相的截面的整個區域)。
第一固定相具有對紫外線或著色劑的光學響應性和分離樣品中的組分的分離能 力。此處“對紫外線的光學響應性””是指光發射(例如紫外線引起的熒光)或紫外線的吸 收。“對著色劑的光學響應性”是指通過著色劑產生的著色。“分離樣品中的組分的分離能 力”是指對于樣品中的組分之中的至少兩種組分呈現不同的吸附。
第一固定相的光學響應性與樣品中的組分的光學響應性相同。“相同的光學響應 性”此處是指一種光學響應性與另一種光學響應性通過顏色或亮度在光學上不能區別。
第二固定相具有不同于所述組分的光學響應性(即，第一固定相的光學響應性) 的光學響應性。“不同的光學響應性”是指對紫外線的照射或著色劑的著色處理的一種光 學響應與另一種光學響應足夠不同，通過顏色或亮度在光學上可區別。“對紫外線的光學 響應性的差別”是指，例如照射紫外線時發射不同顏色的光、紫外線引起發射光與吸收紫外 線、紫外線引起發射光與對紫外線沒有響應，或吸收紫外線與對紫外線沒有響應。“對著色 劑的光學響應性的差別”是指，例如著色劑顯現顏色與著色劑不著色，和著色劑顯現不同的 顏色。
第一和第二固定相分別可由在柱管中的粒狀填料形成的填充層(下文中稱為“填 充型固定相”)，具有液體滲透性的柱狀體(下文中稱為“一體型固定相”)，或在不具有液體 滲透性的柱狀或管狀支持體的周面上形成的具有液體滲透性的分離劑層(下文中稱為“薄 層型固定相”)構成。
填充型固定相可通過在柱管中填充填料來構成。作為第一固定相的填充型固定相 可通過將第一填料填充到柱管中構成，第一填料含有具有與樣品中的組分相同的光學響應 性和分離能力的分離劑。
對于第一填料，可使用由具有光學響應性和分離能力的分離劑形成的顆粒，由具有光學響應性的粒狀載體和被載體負載并且具有分離能力的分離劑構成的顆粒，或由不具有光學響應性的粒狀載體和被這些載體負載并且具有光學響應性和分離能力的分離劑構成的顆粒。
分離劑至少具有分離能力。如果載體不具有光學響應性，則除了分離能力以外，分離劑還具有光學響應性。不具有光學響應性的分離劑，例如不具有紫外響應性的分離劑的實例為不含芳族基團的分離劑。具有紫外響應性的分離劑的實例為含有芳族基團的分離劑。分離劑根據在樣品中待分離的組分適當地確定。例如，在分離光學異構體的情況下，用于光學異構體的分離劑用作分離劑。
對于分離劑，可使用具有光學響應性的低分子分離劑和高分子分離劑二者。低分子分離劑的實例為配體交換類型分離劑、電荷轉移(η-η)類型分離劑、氫鍵類型分離劑、包含類型分離劑、離子鍵類型分離劑、插入類型分離劑、冠醚或它們的衍生物、以及環糊精或它們的衍生物。高分子分離劑的實例為多糖衍生物、聚酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、蛋白質和酒石酸衍生物。
已知各種分離劑作為用于光學異構體的分離劑，但是當考慮通用性時，由于多糖衍生物的分離性能，優選多糖衍生物。該多糖衍生物可為由多糖與芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的一個構成的化合物，所述基團與多糖的羥基或氨基部分或完全置換，并且該化合物的實例為纖維素苯基氨基甲酸酯衍生物、纖維素苯基酯衍生物、直鏈淀粉苯基氨基甲酸酯衍生物和直鏈淀粉苯基酯衍生物。這些衍生物的苯基可具有一個或多個選自碳數量為1-20的烴和鹵素的取代基。多糖芳族酯衍生物的一個具體實例為纖維素三(4-甲基苯甲酸酯)。多糖芳族氨基甲酰基衍生物的一個具體實例為直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。多糖芳族醚衍生物的一個具體實例為纖維素三芐基醚。
對于載體，使用不具有分離能力的物質。在第一填料的情況下，如果分離劑不具有與樣品中的組分相同的光學響應性，則載體具有該光學響應性。不具有光學響應性的載體， 例如不具有紫外響應性的載體的實例為不含芳族基團的載體，而具有光學響應性的載體， 例如具有紫外響應性的載體的實例為含有芳族基團的載體。
就改進分離性能而言，對于載體，優選使用多孔材料。載體的表面可在不具有分離能力的范圍內進行修飾。載體的實例為交聯聚苯乙烯、 交聯丙烯酸類聚合物、包括環氧聚合物在內的合成聚合物、纖維素和交聯纖維素(為通過交聯加強的纖維素)、包括交聯瓊脂糖、交聯葡聚糖和交聯甘露聚糖在內的多糖，以及無機物質例如氧化鋁、硅膠、中孔硅膠、沸石、硅藻土、熔融二氧化硅、粘土材料、氧化鋯和金屬。
作為第一固定相的一體型固定相可通過具有與所述組分相同的光學響應性、液體滲透性和分離能力的第一柱狀體形成。該第一柱狀體由至少在表面上具有分離劑的柱狀多孔材料構成。這樣的多孔材料可為通過使在柱中填充的第一填料的顆粒粘結、分離劑形成的柱狀多孔材料或者載體形成的柱狀多孔材料及其負載的分離劑形成的多孔材料。
在通過使第一填料的顆粒粘結形成的多孔材料的情況下，基于在日本專利申請公布號H4-93336中公開的方法，將可溶于第一填料不能溶解于其中的溶劑的塑料顆粒與第一填料混合，通過加熱和加壓處理將得到的混合物模塑，并通過溶劑處理將可溶的塑料從得到的模塑體中除去。通過分離劑產生的柱狀多孔材料也可使用上述方法形成。
載體形成的柱狀多孔材料可通過使載體顆粒粘結或通過使用載體使柱狀體多孔化而形成。如果載體顆粒為聚合物或有機化合物(例如多糖)，則多孔材料可通過使用上述 方法使載體顆粒粘結而形成。使用在日本專利公布號3397255和日本專利公布號3317749 中公開的方法，即溶膠-凝膠方法，可通過用載體使柱狀體多孔化而形成多孔材料。
使用已知的方法，例如載體物理吸收分離劑或使分離劑與載體化學結合，將分離 劑負載于載體形成的柱狀多孔材料上，以修飾或改進多孔材料的孔的表面。
當檢測分離時，就在固定相的整個截面中液體滲透的速度均一化而言，優選柱狀 體為圓柱體。
作為第一固定相的薄層型固定相可通過具有液體滲透性的分離劑層形成，該分離 劑層在不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體的周面上形成。支持體的非液體滲透性此處 是指在相對于支持體的軸向的支持體的整個截面(當支持體垂直于軸取剖面時，支持體的 截面的整個區域)中支持體不滲透液體的特性。支持體的實例為由玻璃、金屬、合成樹脂或 通過連接合成樹脂片材處理成排斥液體的紙制成的柱狀體或管。就以均勻的厚度容易形成 分離劑，和容易與具有不同形式的固定相連接而言，優選支持體為圓柱形或圓管狀。
分離劑層在支持體的周面上形成。根據支持體的形式，分離劑層可在支持體的外 周面或內周面上形成。分離劑層具有液體滲透性。該分離劑層可通過第一填料的層或至少 在表面上具有分離劑并且具有液體滲透性的片材形成。就當分離/檢測時允許流動相以適 當的速度移動而言，優選分離劑層的厚度為O. 005-5 _，如果該厚度為0.01-3 mm則更好， 而如果該厚度為O. 1-1 _則甚至更好。該薄層型固定相的形成視需要，例如可通過在支持 體的周面上涂布含有粘合劑等其它組分的分離劑漿料，或者圍繞支持體的周面放置在表面 上具有分離劑的液體可滲透的片材。
作為第二固定相的填充型固定相可通過將具有不同于第一固定相的光學響應性 的第二填料填充到柱管中形成。上述分離劑中光學響應性不同于在第一固定相中的分離劑 的粒狀分離劑或粒狀載體可用于第二填料。作為第二固定相的一體型固定相可通過具有不 同于第一固定相的光學響應性和液體滲透性的第二柱狀體形成。除了使用光學響應性不同 于第一固定相的分離劑的分離劑之外，第二柱狀體可采用與第一柱狀體相同的方式形成， 并且可由載體形成的柱狀多孔材料構成。作為第二固定相的薄層型固定相可通過在支持體 的周面上形成具有不同于第一固定相的光學響應性的液體可滲透的層而形成。該層的形成 例如可通過，在支持體的周面上涂布光學響應性不同于第一固定相中的分離劑的粒狀分離 劑，在支持體的周面上涂布載體的漿料，或圍繞支持體的周面放置不具有分離劑的液體可 滲透的片材。
第二固定相可具有或可不具有分離能力。就允許在第二固定相中進一步分離組分 而言，優選第二固定相具有分離能力，因為例如可進行來自第一固定相的期望的組分的斑 點的進一步分析，在除去第二固定相之后的提取操作和其后的分析可能更容易。就精確檢 測在第一固定相中的分離狀態而言，優選第二固定相不具有分離能力，由于例如，在第一固 定相中分離的組分的檢測和制備分離和在第一固定相中分離劑的Rf值的精確測量變得更 容易。
就檢查在第二固定相中的斑點而言，優選第二固定相不具有光學響應性，并且進 一步優選第二固定相具有與樣品中的組分或第一固定相的光學響應性顯著不同的光學響 應性。例如，如果第一固定相含有用于光學異構體的分離劑，則優選第二固定相不含用于光學異構體的分離劑，而如果第一固定相的組分或固定相吸收紫外線，則優選第二固定相對紫外線不具有響應性，并且通過用紫外線照射而發射光。可形成以此方式調節了光學特性的第二固定相，例如，通過在不具有紫外響應性的固定相上涂布因受紫外線照射而發射熒光的突光劑。
如果僅包括第一固定相，則柱管可具有或可不具有光透性。光透性此處是指允許檢查在第二固定相上的斑點的光學特性(例如著色、光發射、吸光度)的透明性。如果包括第二固定相，則柱管具有光透性。
就觀察在分離操作期間的狀態例如流動相的位置和狀態以及斑點的狀態而言，優選柱管具有允許檢查至少這些狀態的透明性。對于該柱管，可使用石英玻璃管和由氟樹脂例如PFA (四氟乙烯-全氟烷基乙烯基醚共聚物)制成的管。柱管可具有在軸向起透鏡作用的厚度，且就使得斑點的視覺觀察更容易而言，優選放大斑點的該柱管。
柱管的長度應為適當表現填料的分離能力的長度，并且就觀察組分的分離而言， 優選柱管長，但是就容易處理和容易檢測/分離操作而言，優選柱管短。因此，優選用于第一或第二固定相的柱管的長度為2-50 cm，如果該長度為3-30 cm則更好，如果該長度為 3-20 cm則甚至更好。
就快速分離組分而言，優選柱管薄，而就容易檢測組分及其制備性分離而言，優選柱管厚。因此，優選柱管的內徑為O. 1-10 mm，如果該內徑為O. 1-8 mm則更好，而如果內徑為O. 1-5 mm則甚至更好。
就分離組分而言，優選填料的粒徑小，而就快速分離組分而言，優選組分的粒徑大。因此，優選填料的粒徑為O. 5-50 μ m，如果粒徑為1-30 μ m則更好，而如果粒徑為1_20 μ m則甚至更好。填料的粒徑可簡單地為代表填料的顆粒大小的值，并且可為平均粒徑或者可為目錄值(catalog value)。填料的粒徑可例如通過激光衍射方法和散射方法確定。
第一固定相和第二固定相的末端彼此連接，使得液體自由滲透。“液體自由滲透” 是指在軸向在固定相的整個截面(與固定相的軸垂直相交的固定相截面)中液體從第一固定相滲透到第二固定相。第一和第二固定相可直接連接，或者可經由用于連接兩個固定相的連接件連接，使得液體自由滲透，或者可經由具有液體滲透性的間隔物連接。第一和第二固定相各自可為上述填充型固定相或一體型固定相或薄層型固定相。
如果第一和第二固定相為填充型固定相，則該分離/檢測柱可由以下形成具有光透性的柱管，含有分離劑并被填充到柱管一端中的填料，和不含分離劑并被填充到柱管另一端中的填料或粒狀載體。優選在柱管的中心設置間隔物。該間隔物的實例為比填料更粗糙的顆粒，例如脫脂棉、纖維塊(例如，玻璃棉)、濾紙、玻璃過濾器和海沙。
如果第一和第二固定相中的一個為填充型固定相而另一個為一體型固定相，則該分離/檢測柱可通過將形成填充型固定相的柱管與一體型固定相直接或`經由間隔物或經由連接件連接而形成。為了使填充型固定相與一體型固定相直接連接，例如，將一體型固定相插入填充`型固定相的柱管的一端中。
連接件的實例為與第一固定相的末端和第二固定相的末端二者相互配合的連接件，或者圍繞第一固定相的一端和第二固定相的一端的外周面放置的粘著劑材料。
連接管的實例為由不具有液體滲透性并且外插到第一固定相的末端和第二固定相的末端中的合成樹脂圓形管11構成的連接件，如圖1所示；由不具有液體滲透性并且外插到第一固定相的末端和第二固定相的末端中的圓形管12和設置在圓形管12的內周面的 中心部分的液體滲透材料13 (例如陶瓷紙或玻璃棉)構成的連接件，如圖2所示；和由非 液體可滲透的圓柱體14和涂布圓柱體14的外周面的液體可滲透的材料15構成、以便內插 到柱管或圓管狀支持體中的連接件，如圖3所示。
圖1中的連接件可適宜用于連接填充型固定相、連接一體型固定相或連接填充型 固定相與一體型固定相。圖2中的連接件可適宜用于連接各自在支持體的外周面上具有分 離劑層的薄層型固定相，或者連接該薄層型固定相與另一種類型的固定相。圖3中的連接 件可適宜用于連接各自在圓管狀支持體的內周面上具有分離劑層的薄層型固定相，或連接 該薄層型固定相與填充型固定相。
圖示的連接件均具有圓管狀或圓柱形形狀，但是也可具有不是圓形但是與一體型 固定相或填充型固定相的截面形狀匹配的截面形狀，或者可具有在一端截面形狀為圓形而 在另一端截面形狀不是圓形(例如多邊形)的管狀或柱狀形式。
如果第一和第二固定相中的一個為填充型固定相而另一個為薄層型固定相，則該 分離/檢測柱的形成可通過將形成填充型固定相的柱管和構成薄層型固定相的具有分離 劑層的支持體直接或經由間隔物或經由連接件連接，就和連接填充型固定相和一體型固定 相的情況一樣。
如果第一和第二固定相均為一體型固定相，則分離/檢測柱的形成可通過經由連 接件將構成第一和第二固定相的相應的一體型固定相連接。這些一體型固定相可插入柱管 中，并且在柱管中直接連接，或經由間隔物連接。
如果第一和第二固定相中的一個為一體型固定相而另一個為薄層型固定相，則分 離/檢測柱的形成可通過將一體型固定相和構成薄層型固定相的具有分離劑層的支持體 直接或經由連接件連接。
如果第一和第二固定相均為薄層型固定相，則分離/檢測柱的形成可通過在支 持體的周面的一端上形成含有分離劑的液體可滲透的第一分離劑層，和在與第一分離劑層 相鄰的支持體的周面的另一端上形成由不含分離劑的填料或粒狀載體構成的液體可滲透 的第二分離劑層。
如果第一和第二固定相均為填充型固定相或均為薄層型固定相，則該分離/檢測 柱的形成也可通過使用第一柱管或第一支持體形成第一固定相，使用第二柱管或第二支 持體形成第二固定相，和分別將相應的柱管或支持體經由連接件連接。
如果第一和第二固定相均為薄層型固定相，則分離/檢測柱的形成也可通過使 用用于第一和第二固定相的支持體中的一個的柱狀支持體，和使用用于另一個支持體的外 插到柱狀支持體中的管狀支持體，并且如果在管狀支持體的內周面上形成分離劑層，則將 這些支持體直接連接。
第一固定相的長度和第二固定相的長度可相同或不同，只要在各固定相中適當地 表現分離能力即可。如果第一固定相具有足以分離化合物的長度，并且第二固定相具有足 以檢測組分的長度，則這是足夠的。例如，優選第一固定相的長度為1-40 cm，如果長度為1.5-25 cm則更好,而如果長度為2-18 cm則甚至更好。優選第二固定相的長度為1_40 cm, 如果長度為1.5-25 cm則更好,而如果長度為2-18 cm則甚至更好。
在本發明的分離/檢測柱中，在軸向將流動相進料至第一和第二固定相。本發明的分離/檢測柱可用于分離樣品中的組分，這是通過在第一固定相的一端連接樣品，視需 要干燥連接的樣品，將流動相從第一固定相的一端進料到第二固定相的另一端，以通過第 一固定相分離樣品中的組分，和允許至少一種分離的組分到達第二固定相，或者在第二固 定相中進一步分離組分。通過照射紫外線到第二固定相上，或通過使用著色劑進行著色處 理，本發明的分離/檢測柱也可用于檢測到達第二固定相的組分。通過提取部分或全部含 有到達第二固定相的組分的第二固定相和視需要提取組分，本發明的分離/檢測柱也可用 于制備性分離到達第二固定相的組分。
水、鹽溶液、有機溶劑或其混合溶劑可用于流動相。可使用一種類型或兩種或更多 種類型的有機溶劑。鹽的實例為硫酸銅溶液或高氯酸鹽。醇(例如甲醇、乙醇和異丙醇)或 烴(例如己烷)可用于有機溶劑。適量的酸和堿可混合用于流動相。就穩定待檢測的組分 而言，乙酸、丙酸和四氟乙酸例如可用于酸，而二乙基胺、單乙醇胺和三乙胺例如可用于堿。
在使用著色劑通過光學響應性在第二固定相中檢測組分的情況下，已知的技術可 用于著色劑及其著色處理。著色劑的實例為茴香醛溶液、磷鑰酸溶液、碘、茚三酮溶液、高錳 酸鉀溶液、DNPH溶液、氯化錳溶液和溴甲酚綠溶液。著色處理的實例為通過涂布、噴霧或暴 露使著色劑附著于第二固定相和視需要加熱第二固定相以顯色的處理。
在本發明的分離/檢測柱中，就流動相在固定相的軸向的均一液體滲透而言，優 選第一和第二固定相為圓柱形或圓管狀。在填充型固定相的情況下，通過放液填充填料、在 分離劑溶液中浸沒多孔材料或通過在支持體上涂布分離劑的漿料，可容易形成允許像這樣 的均一液體滲透的固定相。
在填充型固定相或通過在分離劑或載體的圓柱體中形成敞開式(open-cell)泡 沫而構成多孔材料的一體型固定相的情況下，可不使用形成相所需的助劑(例如用于形成 薄層層析板中分離層的粘合劑)地形成固定相，因此可防止助劑對分離的影響。該固定相 也容易形成和用于其它檢測/分離設備，例如薄層層析板，因此其可操作性優良。
本發明包括可構造上述本發明的分離/檢測柱的試劑盒。該分離/檢測試劑盒可 為包括以下的分離/檢測試劑盒柱管，所述柱管具有光透性；第一填料，所述第一填料具 有分離樣品中的組分的分離能力和與所述組分相同的光學響應性；和第二填料，所述第二 填料具有不同于第一分離劑的光學響應性，并且可具有分離能力。在該分離/檢測試劑盒 中，本發明的分離/檢測柱的形成是通過填充第一填料到柱的一端中和填充第二填料到 柱的另一端中，使得與第一填料層相鄰或經由間隔物。由于分離/檢測試劑盒可自由設定 用于分離/檢測柱的填料的類型和固定相的長度，當考慮分離條件時，該分離/檢測試劑盒 是有效的。
分離/檢測試劑盒也可為包括以下的分離/檢測試劑盒柱管、第一填料，以及與 柱管連接使得液體自由滲透的第二圓柱體和第二薄層層析棒中的一個或二者。第二圓柱體 為具有不同于第一填料的光學響應性的光學響應性并且可具有分離能力的一體型固定相。 第二薄層層析棒具有不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體和在該支持體的外周面或內 周面上形成的分離劑層，其中該分離劑層是具有不同于第一填料的光學響應性的光學響應 性并且可具有分離能力的元件，并且構成薄層型固定相。在該分離/檢測試劑盒中，第一固 定相可通過填充第一填料到柱管中形成。本發明的分離/檢測柱可通過將第二圓柱體或第 二薄層層析棒插入到柱管的末端中而形成。由于該分離/檢測試劑盒可自由設定用于分離/檢測柱的第一填料的類型，并且容易連接第一固定相和第二固定相，例如考慮分離條件， 可有效利用該分離/檢測試劑盒。
薄層層析棒包括分離劑層在外周面上形成的柱狀或管狀支持體形式和分離劑層 在內周面上形成的管狀支持體形式。對于柱狀支持體，例如可使用截面形狀為多邊形或圓 形的棒，而對于管狀支持體，例如可使用截面形狀為多邊形的管、柱管或具有與柱管相同尺 寸的管。
分離/檢測試劑盒可為包括以下的分離/檢測試劑盒第一圓柱體和第一薄層層 析棒中的一個或二者、與第一圓柱體和/或第一薄層層析棒連接使得液體自由滲透的具有 光透性的柱管、和第二填料。第一圓柱體為一體型固定相，其具有液體滲透性，具有分離樣 品中的組分的分離能力，并且具有與所述組分的光學響應性相同的光學響應性。第一薄層 層析棒具有支持體和在支持體的外周面或內周面上形成的分離劑層，其中分離劑層為具有 液體滲透性、分離樣品中的組分的分離功能和與所述組分的光學響應性相同的光學響應性 的元件，并且構成薄層型固定相。在該分離/檢測試劑盒中，第二固定相可通過填充第二填 料到柱管中形成。本發明的分離/檢測柱可通過將第一圓柱體或第一薄層層析棒插入到柱 管的末端中而形成。該分離/檢測試劑盒有效用于制備性分離組分，例如因為在分離/檢測 柱中第二固定相為填充型固定相，并且包含任意斑點的固定相部分可作為粒狀填料提取。
分離/檢測試劑盒可為包括以下的分離/檢測試劑盒第一柱狀體和第一薄層層 析棒中的一個或二者，第二柱狀體和第二薄層層析棒中的一個或二者，和連接第一柱狀體 或第一薄層層析棒和第二柱狀體或第二薄層層析棒使得液體自由滲透的連接件。在該分離 /檢測試劑盒中，本發明的分離/檢測柱可通過連接第一柱狀體或第一薄層層析棒和第二 柱狀體或第二薄層層析棒而形成。由于在分離/檢測柱中第一和第二固定相可容易連接， 該分離/檢測試劑盒對容易檢測分離是有效的。
分離/檢測試劑盒可為包括以下的分離/檢測試劑盒不需要具有光透性的第一 柱管；第一填料；具有光透性的第二柱管；第二填料；和連接這些柱管使得液體自由滲透的 連接件。在該分離/檢測試劑盒中，本發明的分離/檢測柱可通過將其中填充第一填料的 第一柱管和其中填充第二填料的第二柱管經由連接件連接而形成。該分離/檢測試劑盒可 通過再次填充填料而多次在一個柱管中形成各固定相，并且可容易連接這些固定相，因此， 就容易形成各填充型固定相，和在使用分離/檢測柱后控制廢物的產生而言，其非常有效。
分離/檢測試劑盒可包括圓柱形或圓管狀固定相；截面形狀為非圓形例如多邊 形的柱狀或管狀固定相；和連接這些固定相使得液體自由滲透的連接件。該分離/檢測試 劑盒可形成其中將具有不同截面形狀的固定相連接的分離/檢測柱。截面形狀為非圓形的 固定相例如通過對圓管狀柱的側面加壓而形成，該圓管狀柱通過填充填料到柱管中形成。 截面形狀為橢圓形的柱可提高填充密度并且使得填充均勻，就進一步改進分離能力而言是 優選的，而就容易產生毛細管現象、減少待填充的填料的量，和使得更容易從側面視覺觀察 斑點而言，優選截面形狀為橢圓形或長方形的固定相。該分離/檢測試劑盒可形成具有對 于固定相中的一個具有上述優點的固定相的分離/檢測柱。
分離/檢測試劑盒可包括多個試劑盒的組成元件作為一個試劑盒。分離/檢測試 劑盒可包括可用于構造和使用分離/檢測柱的其它組成元件。這些其它元件的實例為上 述連接件、柱管的端蓋、連接柱管和流動相的管的管接頭、分離/檢測柱的底座、在分離/檢測時容納分離/檢測柱和流動相的容器、以及視需要插入柱管或連接件中的上述間隔物。
分離/檢測試劑盒可包括分離劑不同的兩種或更多種類型的填料、圓柱體、柱狀體和薄層層析棒，并且可包括尺寸、材料和物理性質不同的兩種或更多種類型的柱管、圓柱體、柱狀體和薄層層析棒。就考慮分離/檢測柱的分離條件而言，該分離/檢測試劑盒非常有效。實施例
現在描述本發明的一個實施例，但是本發明不局限于以下實施例。
圖4顯示本實施例的一個分離/檢測柱。
圖4中的分離/檢測柱包括具有紫外透明性的管1、在管I的一端中填充的第一填料層2、在管I的另一端中填充的第二填料層3、設置在第一和第二填料層2和3之間并且具有液體滲透性的間隔物4，和插入管I的另一端中的端蓋5。
管I為由聚四氟乙烯制成的管。管I的外徑為3臟，管I的內徑為I臟，管I的長度為6 cm。
第一填料層2 為 Daicel Chemical Industries, Ltd.制造的 Chiralpak AD (Daicel Chemical Industries,Ltd.的注冊商標)(下文中稱為“AD填料”)的層。AD填料的粒徑為20 μ m。第一填料層2的填料長度為3 cm。
第二填料層3為硅膠層。該硅膠含有含錳的硅酸鋅作為熒光劑。硅膠的粒徑為15 μ m。第二填料層3的填充長度為3 cm。
間隔物4和端蓋5分別由石英棉制成。間隔物4的填充長度為4 mm。
如下形成圖4中的分離/檢測柱將端蓋5插入管I的另一端上，通過放液從管I 的一端填充硅膠，從管I的一端插入間隔物4以停止第二填料層的一端側，和通過放液從管 I的一端填充AD填料直至達到管I的一端。
樣品溶液附著于管I的一端，即第一填料層2的一端。樣品溶液為反式苗氧化物 (t-SO)溶液。該樣品溶液的溶劑為含有1:9體積比的正己烷和異丙醇的混合溶劑，樣品的濃度為10，000質量ppm。通過直接在樣品溶液中浸沒分離/檢測柱的一端，進行樣品溶液的附著。例如，可通過使用Pasteur移液管將樣品溶液從分離/檢測柱的一端滴入第一填料層2中，進行樣品溶液的附著。
然后，將約O. 05 mL展開劑(流動相)從分離/檢測柱的一端滴入第一填料層2 中，使得展開劑滲透至第一填料層2中。展開劑為含有9:1體積比的正己烷和異丙醇的混合溶劑。滲透后，將分離/檢測柱放置在含有展開劑的容器中，使得分離/檢測柱的一端浸沒在展開劑中，使樣品在第一和第二填料層2和3中展開。
通過使展開劑展開直至通過毛細管現象到達端蓋5，并照射紫外線到第二填料層 3上，觀察到如在圖5中陰影部分所示的熒光，并且觀察到通過第一填料層2分離的t-SO的提余液組分(幾乎不被AD填料吸收的組分)的斑點作為不發射熒光的區域。
工業適用性近年來，需要進一步開發有效的藥 物組分和作為其原料的可用光學異構體，并且還需要開發更準確地檢查光學異構體和分離光學異構體的技術。根據本發明，可使用柱層析容易進行通過具有紫外響應性的分離劑(例如使用多糖衍生物的用于光學異構體的分離劑)進行的光學分離，并且可容易提供用于液相層析條件的初始設定和優化的有用材料。因此， 由于本發明，可預期進一步開發涉及通過層析分離的技術，例如開發更有用的光學異構體 和建立用于光學異構體的更具生產性的制造方法。
附圖標記說明 I管2第一填料層 3第二填料層 4間隔物 5 端蓋11、12圓形管 13、15液體滲透材料 14圓柱體。
權利要求
1.一種分離/檢測柱，所述分離/檢測柱具有柱狀或管狀的具有液體滲透性的第一和第二固定相，其中第一和第二固定相的末端彼此連接使得液體可滲透；和在第一和第二固定相的軸向上滲透的流動相，其中第一固定相具有分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同，和第二固定相具有不同于所述組分的光學響應性。
2.權利要求1的分離/檢測柱，其中第二固定相不具有分離能力。
3.權利要求1或2的分離/檢測柱，其中第一和第二固定相分別由柱管中的粒狀填料形成的填充層、具有液體滲透性的柱狀體或具有液體滲透性的分離劑層形成，所述分離劑層在不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體的周面上形成。
4.權利要求3的分離/檢測柱，其中柱狀體的形狀為圓柱形，并且支持體的形狀為圓柱形或圓管狀。
5.權利要求1-4中任一項的分離/檢測柱，其中第一固定相含有用于光學異構體的分離劑，而第二固定相不含用于光學異構體的分離劑。
6.權利要求5的分離/檢測柱，其中所述用于光學異構體的分離劑為多糖衍生物。
7.權利要求6的分離/檢測柱，其中所述多糖衍生物由多糖與芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的任一種構成，所述基團與多糖的羥基或氨基部分或完全置換。
8.一種分離/檢測試劑盒，所述分離/檢測試劑盒包括柱管，所述柱管具有光透性；第一粒狀填料，所述第一粒狀填料具有分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同；和第二粒狀填料，所述第二粒狀填料具有不同于所述組分的光學響應性。
9.權利要求8的分離/檢測試劑盒,其中第二填料不具有分離能力。
10.權利要求9的分離/檢測試劑盒,其中第一填料含有用于光學異構體的分離劑，而第二填料不含用于光學異構體的分離劑。
11.一種分離/檢測試劑盒，所述分離/檢測試劑盒包括柱管；第一粒狀填料，所述第一粒狀填料具有分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同；和第二圓柱體和第二薄層層析棒中的一個或二者，其可與柱管連接，使得液體自由滲透，其中第二圓柱體具有不同于所述組分的光學響應性和液體滲透性，和第二薄層層析棒具有不具有液體滲透性的圓柱形或圓管狀支持體和第二分離劑層，所述第二分離劑層在支持體的周面上形成，并且具有不同于所述組分的光學響應性和液體滲透性。
12.權利要求11的分離/檢測試劑盒，其中第二圓柱體和第二分離劑層不具有分離能力。
13.權利要求12的分離/檢測試劑盒，其中第一填料含有用于光學異構體的分離劑，而第二分離劑層不含用于光學異構體的分離劑。
14.一種分離/檢測試劑盒，所述分離/檢測試劑盒包括第一圓柱體和第一薄層層析棒中的一個或二者，所述第一圓柱體具有液體滲透性、分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同，所述第一薄層層析棒具有不具有液體滲透性的圓柱形支持體和在支持體的周面上形成的第一分離劑層；柱管，所述柱管具有光透性，并且與第一圓柱體或第一薄層層析棒連接，使得液體自由滲透；和第二粒狀填料，所述第二粒狀填料具有不同于所述組分的光學響應性，其中所述第一分離劑層具有分離能力、與所述組分相同的光學響應性和液體滲透性。
15.權利要求14的分離/檢測試劑盒,其中第二填料不具有分離能力。
16.權利要求15的分離/檢測試劑盒,其中第一圓柱體和第一分離劑層含有用于光學異構體的分離劑，而第二填料不含用于光學異構體的分離劑。
17.一種分離/檢測試劑盒，所述分離/檢測試劑盒包括第一柱狀體和第一薄層層析棒中的一個或二者，所述第一柱狀體具有液體滲透性、分離樣品中的組分的分離能力和對紫外線或著色劑的光學響應性，所述光學響應性與該組分的光學響應性相同，所述第一薄層層析棒具有不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體和在支持體的周面上形成的第一分離劑層；第二柱狀體和第二薄層層析棒中的一個或二者，所述第二柱狀體具有不同于所述組分的光學響應性和液體滲透性，所述第二薄層層析棒具有不具有液體滲透性的柱狀或管狀支持體和在支持體的周面上形成的第二分離劑層；和連接件，所述連接件連接第一柱狀體或第一薄層層析棒與第二柱狀體或第二薄層層析棒，使得液體自由滲透，其中所述第一分離劑層具有分離能力、與所述組分相同的光學響應性和液體滲透性，和所述第二分離劑層具有不同于所述組分的光學響應性和液體滲透性。
18.權利要求11的分離/檢測試劑盒，其中所述第二柱狀體和第二分離劑層不具有分離能力。
19.權利要求11或14的分離/檢測試劑盒，其中所述第二柱狀體的形狀為圓柱形，所述支持體的形狀為圓柱形或圓管狀。
20.權利要求18或19的分離/檢測試劑盒，其中所述第一柱狀體和第一分離劑層含有用于光學異構體的分離劑，而所述第二柱狀體和第二分離劑層不含用于光學異構體的分離劑。
21.權利要求10、13、16和20中任一項的分離/檢測試劑盒，其中所述用于光學異構體的分離劑為多糖衍生物。
22.權利要求21的分離/檢測試劑盒,其中所述多糖衍生物由多糖與芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的任一種構成，所述基團與多糖的羥基或氨基部分或完全置換。
全文摘要
公開了一種可檢測通過分離劑分離的組分的分離/檢測柱，所述分離劑具有與樣品中的組分相同的光學響應性。分離/檢測柱如下構成用具有分離樣品中的組分的分離能力和紫外響應性的第一填料填充的具有紫外透明性的管(1)的一端；中間的由石英棉組成的間隔物(4)；用具有不同于第一填料的紫外響應性并且不具有前述分離能力的第二填料填充的管(1)的另一端；以及插入所述管(1)的另一端內的由石英棉組成的端蓋(5)。
文檔編號G01N30/88GK103038633SQ201180033859
公開日2013年4月10日 申請日期2011年7月8日 優先權日2010年7月8日
發明者蓑田稔治, 池田勇 申請人:株式會社大賽璐