專利名稱：過敏原檢測芯片的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種過敏原檢測芯片、其制備方法、包含該過敏原檢測芯片的套組及其應用，以用于檢測樣品中的各種抗過敏原IgE及/或IgG抗體。
背景技術：
過敏反應(allergic reaction)是因外來之異物(通稱為過敏原(allergen))，經皮膚、呼吸道或消化道進入人體后，刺激身體免疫機制，而產生各種臨床癥狀，例如，發疹、皮膚紅腫、發癢、惡心、嘔吐、食欲不振、流鼻水、鼻炎、氣喘、呼吸困難、發熱、關節疼痛、休克等等。過敏反應分類為四種，包括(1)第一型速發型IgE引發的過敏反應。
(2)第二型抗體依賴性細胞毒殺過敏反應。
(3)第三型免疫復合物引發的過敏反應。
(4)延遲性T細胞引發的過敏反應。
一般的過敏癥多屬第一型或第三型，但也有一個癥狀是由數種過敏反應合并造成。目前對于過敏癥的治療，除了第一型過敏反應可利用減敏治療之外，其余過敏反應都只能靠藥物而減緩臨床癥狀。因此，確認造成患者發病之過敏原并避免患者與其接觸，是改善過敏癥最有效的方式。
一般而言，目前對于過敏原的檢測，主要為皮膚敏感試驗以及血清IgE抗體試驗。前者系將低濃度、低劑量的過敏物質注射至皮下組織，以觀察其過敏反應；雖然皮膚敏感試驗準確性高且成本低，但因需要皮下注射多次，易使受測者感到不適與恐懼，此外，還存在著易產生偽陽性反應而造成誤判，以及因直接注射過敏原而造成過敏性休克的危險。血清IgE抗體試驗則是利用酶聯免疫吸附分析法(ELISA)，而檢測血清中抗各種過敏原的IgE抗體及其濃度；雖然此法可一次檢測多種過敏原，但因其需要大量的檢體及檢驗材料，因此造成成本高昂而無法完全普及化。
生物芯片技術系結合許多不同領域的技術，使樣品檢測與分析過程連續化、微型化，以快速、準確及大量地檢測核酸、蛋白質、細胞或其它生物組成份。目前的生物芯片中無任何的蛋白質芯片可直接應用于臨床的檢測及診斷，特別是檢測造成過敏反應的過敏原的芯片。
因此，對于醫學檢驗技術的領域而言，可快速、準確、大量、多樣、低檢體用量、高靈敏度及低成本的過敏原檢測方法，仍有急迫之需要。

發明內容
有鑒于此，本發明結合蛋白質芯片及抗原-抗體專一性反應，而制備一過敏原檢測芯片，其不僅與酶聯免疫吸附分析法相同，在短時間內進行大量篩檢，更重要的是，本發明的過敏原檢測芯片可大量縮小所需要的檢體用量，以達成上述之要求。
本發明的第一種形式是提供一種過敏原檢測芯片，包括固體基材以及至少一種過敏原，其固定于該固體基材之上，其中該固體基材包括(i)基底層；(ii)粘著中間介層，其位于該基底層之上；以及(iii)表面層，其位于該粘著中間介層之上。
在另一具體實施例中，固體基材本身即可提供支持的功能，同時可與過敏原結合，因此，本發明也提供一種過敏原檢測芯片，包括(i)固體基材；以及(ii)至少一種過敏原，其固定于該固體基材之上。
本發明的第二種形式是提供一種過敏原檢測芯片之制備方法，包括(a)將一粘著中間介層涂布于一基底層；(b)將一表面層涂布于該粘著中間介層；以及(c)將至少一種過敏原固定在該表面層之上。
在另一具體實施例中，由于固體基材本身即可提供支持的功能，同時可與過敏原結合，因此，本發明也提供一種過敏原檢測芯片之制備方法，包括將至少一種過敏原固定在一固體基材之上。
本發明的第三種形式是提供一種檢測過敏原之套組，包括(i)上述任何一種過敏原檢測芯片；(ii)封閉溶液，用以阻隔該檢測芯片上未結合該等過敏原之部份；(ii)二次抗體，其可專一性地與抗過敏原抗體結合；(iii)清洗溶液；以及(iv)信號產生工具，其可操作性地與該二次抗體偶聯而產生信號。
本發明的第四種形式是提供一種檢測過敏原的方法，包括(a)提供上述任何一種過敏原檢測芯片；(b)用一封閉溶液阻隔該檢測芯片上未結合該等過敏原之部份；(c)將患者的血清樣品與該檢測芯片接觸；(d)以清洗溶液進行清洗步驟；(e)提供一信號產生工具，其可操作性地與二次抗體偶聯而產生信號，其中該二次抗體可專一性地與抗過敏原抗體結合；以及(f)測量該信號產生工具所產生的信號。
為了讓本發明之上述和其它目的、特征，及優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例并配合所附圖標，做詳細說明如下


第1圖是本發明的過敏原檢測芯片的示意圖。
第2(A)-(J)圖是塵螨過敏原芯片所測得的結果。
第3(A)-(D)圖是不同過敏原芯片所測得的結果。
第4(A)-(B)圖是牛奶過敏原芯片所測得的結果。
第5(A)-(B)圖是不同過敏原芯片所測得的結果。
第6(A)-(B)圖是本發明具有大于100個過敏原點/平方公分的高密度過敏原檢測芯片。
參考標號說明10過敏原芯片 20固體基材30基底層 40粘著中間介層50表面層 60過敏原具體實施方式
請參見圖1，本發明的過敏原檢測芯片10包括固體基材20以及至少一種過敏原60，其固定于固體基材20之上，其中固體基材20包括(i)基底層30；(ii)粘著中間介層40，其位于基底層30之上；以及(iii)表面層50，其位于粘著中間介層40之上。
適合于作為基底層30的例子包括，但并不限于，玻璃、硅芯片、陶瓷材料、金屬、聚二氟乙烯(PVDF)膜或醋酸纖維膜等。表面層50系用于結合過敏原，可使用的材料包括，但并不限于，硝化纖維(NC；nitrocellulose)或聚苯乙烯(PS；polystyrene)等，較佳為硝化纖維。此外，為使表面層50能穩定地接著于基底層30，較佳是在這兩層之間使用一層粘著中間介層40，可使用的粘著中間介層包括，但并不限于，環氧樹脂(epoxy resin)或其它具有相似官能團之化學物質。
在本發明的另一具體實施例中，固體基材20也可以是一層可直接用于結合過敏原的材質，例如，由有機分子聚合而成之聚合物，其中這樣的有機分子包括，但并不限于，苯乙烯、乙烯、丙烯、酯類、丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸或烷基丙烯酸酯。在本發明中，可直接用于結合過敏原的固體基材的例子，包括，但并不限于，聚苯乙烯(PS)、聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚碳酸酯(PC)等。
本發明可檢測的過敏反應，包括任何IgE-及/或IgG-引發的過敏反應，因此，可固定在上述固體基材上的過敏原，包括任何可引發哺乳動物過敏反應的物質，包括，但并不限于，塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑或貓皮屑等之萃取物。
本發明之過敏原檢測芯片可制備成具有高密度的芯片，較佳地，固定在芯片上的過敏原密度是大于100個過敏原點/平方公分，更佳地，是大于200、400、800、1600個過敏原點/平方公分或更多。在本發明之過敏原檢測芯片上，每個檢測點(過敏原點)所需使用的樣品或試劑，是小于0.5微升(μL)的用量，更佳地是在納升(nL)等級的用量。這樣的過敏原檢測芯片可有效地將各種不同的過敏原固定在同一芯片上，以達到大量、多樣、低檢體用量及低成本的目的。
在本發明的過敏原檢測芯片的制備中，首先是將一粘著中間介層涂布于一基底層；接著將一表面層涂布于該粘著中間介層；然后以至少一種過敏原固定在該表面層之上，其中，基底層、粘著中間介層、表面層及過敏原是如上之定義。涂布的方式并無特別限制，且為熟悉化學工程及半導體制程領域的人士所習知，例如，旋轉涂布法(spin coating)、網印涂布法(screen printing)、滾筒涂布法(roller coating)、簾幕涂布法(curtaincoating)、浸鍍涂布法(dip coating)等，較佳是使用旋轉涂布法以完成各層之涂布。在涂布粘著中間介層之前，可視需要地先清潔基底層的表面，以除去附著于基底層的雜質或灰塵，并且有利粘著中間介層之附著。上述清潔步驟可包括使用溶劑(例如，表面活性劑、水、酒精、丙酮等)清洗及/或超聲波震蕩之前處理。
如上所述，如果使用可直接結合過敏原的固體基材的話，則可將過敏原直接固定在該固體基材上，以制備本發明的過敏原檢測芯片。
本發明也提供一種檢測過敏原的套組(kit)，也稱為試劑盒，它包括(i)上述任何一種過敏原檢測芯片；(ii)封閉溶液，用以阻隔檢測芯片上未結合該等過敏原之部份；(ii)二次抗體，其可專一性地與抗過敏原抗體結合；(iii)清洗溶液；以及(iv)信號產生工具，其可操作性地與該二次抗體偶聯而產生信號。
此處所使用的名詞“封閉溶液”，是用于阻隔檢測芯片上未結合該等過敏原之部份，以避免后續檢體或二次抗體或其它物質附著于芯片上，而導致產生檢測上的誤判。可使用的封閉溶液系為熟悉免疫檢測之人士所熟知，一般如牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白(casein)或動物明膠(gelatin)等的溶液，均可作為本發明的封閉溶液。
此處所使用的名詞“二次抗體”，是可以專一性地與血清中抗過敏原抗體結合的外源抗體，這樣的二次抗體可包括抗IgE之抗體或抗IgG之抗體，也可以是單克隆抗體或多克隆抗體。一般而言，二次抗體可結合抗過敏原抗體的恒定區片段(Fc)或變異區片段(Fab)，并且，這些抗體均可自市面上購得(例如，Bethyl Laboratories，Inc，TX，USA；BiogenesisLtd，England；Jackson Laboratory，Maine，USA等等)。
“清洗溶液”是在添加試劑的步驟后(如下詳述)，用于清洗未結合的殘余試劑之目的。可適合用于本發明之清洗溶液包括，但并不限于，磷酸鹽緩沖溶液(PBS)、三羥甲基胺基甲烷緩沖液(TBS)等等，并可視需要添加蛋白抑制劑(例如，苯甲脒(benzamidine))或表面活性劑(例如，NP-40、Tween-20、Tween-80等系列)。
此處所使用的名詞“信號產生工具”，系可操作性地與上述二次抗體偶聯而產生信號，其為在此技藝中人士所熟知，并可依需要而選擇使用。例如，包括，但并不限于，放射性標記物、螢光標記物(例如，鑭系螢光物)、磷光標記物、冷光標記物(例如，生物冷光標記物或化學冷光標記物)或酶等等。其中，可使用的酶包括，但并不限于，堿性磷酸酶(AP)、過氧化氫酶(HRP)或β-半乳糖苷酶等等；使用上述酶可配合一適當的底物使其反應顯色，底物的選擇可根據所選擇的酶而定，并且是在此技藝之人士所習知。適合的底物包括，但并不限于，對-硝基苯酚磷酸鹽(pNPP)、2，2′-連氮基-雙-(3-乙基苯-唑-6-磺酸)(ABTS)、5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸鹽/硝基藍四唑(BCIP/NBT)或酚AS-TR磷酸鹽或3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺(TMB)等等。
在本發明的較佳具體實施例中，檢測過敏反應之過敏原檢測套組更可利用生物素(biotin)及鏈霉抗生物素蛋白(streptavidin)的專一性結合，而達到放大信號及提升準確性之目的。將二次抗體(例如，抗人類IgE抗體)與生物素偶聯，并辨識結合至血清樣品中的抗過敏原抗體，然后加入偶聯一信號產生工具(如上所述)的鏈霉抗生物素蛋白，再利用適當的底物而呈色。藉由二次抗體與抗過敏原抗體的第一次辨識，以及生物素對于鏈霉抗生物素蛋白的第二次專一結合，不但可放大檢測信號，并且可大幅降低誤差。
本發明也提供一種檢測過敏原之方法，包括(a)提供上述任何一種過敏原檢測芯片；(b)用一封閉溶液阻隔該檢測芯片上未結合該等過敏原之部份；(c)將患者的血清樣品與該檢測芯片接觸；(d)以清洗溶液進行清洗步驟；(e)提供一信號產生工具，其可操作性地與二次抗體偶聯而產生信號，其中該二次抗體可專一性地與抗過敏原抗體結合；以及(f)測量該信號產生工具所產生之信號。
在步驟(c)中，更可加入標準品抗體或陽性對照組或陰性對照組，以建立可用于定量之內部標準曲線，或作為參考比較之用途。上述試劑的使用及反應條件可參見AntibodyA Laboratory Manual，Ed.Harlow &Dayid Lane，1988，此處納入為參考資料。
實施例本發明將藉由以下的實施例而作更進一步地詳細說明，但這些實施例僅是作為舉例說明，而非用以限定本發明的范疇。
實施例1過敏原檢測芯片的制備取一適當大小的玻璃載片，以表面活性劑、去離子水、丙酮、去離子水及酒精清洗，清洗的過程均在超聲波震蕩器中進行。將含有環氧樹脂的粘著中間介層溶液，以旋轉涂布的方式涂布在玻璃載片，然后烘干。分析載片的平整度及螢光背景，挑選涂布均勻且低螢光背景的載片，再以旋轉涂布的方式，將表面層(含硝化纖維或聚苯乙烯的溶液)涂布在粘著中間介層上，然后烘干。同樣分析并挑選涂布均勻且低螢光背景的載片，即可作為本發明的固體基材。
將各種過敏原以適當的濃度(原倍或1/10倍體積稀釋)點在上述固體基材。點上過敏原后，可在37℃靜置1小時或4℃靜置隔夜而完成過敏原檢測芯片的制作。
實施例2塵螨過敏原芯片的分析將塵螨過敏原(購自Center Lab.；批號9D00242)以4℃靜置隔夜的方式，分別點在表面層為NC或PS的固體基材，并以牛血清白蛋白在4℃靜置隔夜封閉之后，將得自三軍總醫院的7位過敏患者的血清抗體(3級或4級)加入至每一載片，在30℃培養2小時。然后加入偶聯生物素的抗人類IgE抗體(購自KPL，編號074-1004)，在30℃培養2小時。接著加入偶聯螢光原(Cy5)的鏈霉抗生物素蛋白，在30℃培養1小時，然后以掃描儀檢測各點的螢光強度，結果如圖2、表1A及表1B所示。
表1A以硝化纖維為表面層的塵螨過敏原芯片分析

*螢光值(S)系以平均值表示。
表1B以硝化纖維為表面層的塵螨過敏原芯片分析

*螢光值(S)系以平均值表示。
實施例3不同過敏原芯片的分析(一)分別以不同濃度(原倍或1/10倍體積稀釋)的(1)混合豬草、(2)花生、(3)蝦、及(4)大豆作為過敏原，點在表面層為NC或PS的固體基材。以購自AlerCHEK批號210901、106801及109901的血清抗體作為測試樣品，其余步驟相同于實施例2。結果如圖3所示，其中，“陽性對照組”表示點上原倍(未稀釋)的過敏原，以患者的血清作為樣品，二次抗體為偶聯生物素的山羊抗人類IgE抗體，最后以偶聯Cy5的鏈霉抗生物素蛋白反應所測得的結果。
實施例4牛奶過敏原芯片的分析以牛奶作為過敏原，點在表面層為NC的固體基材上。以得自臺大醫院的過敏患者(3級)的血清抗體作為測試樣品，其余步驟相同于實施例2。結果如圖4及表2所示。在圖4中，“檢測抗體”是將二次抗體點在芯片上，清洗后加入偶聯Cy5的鏈霉抗生物素蛋白以檢測反應結果；以及“偶聯Cy5的鏈霉抗生物素蛋白”是將鏈霉抗生物素蛋白直接點在芯片上，清洗后檢測反應結果。兩者均可作為本實施例的陽性對照組。
表2以硝化纖維為表面層的牛奶過敏原芯片分析

*螢光值(S)系以平均值表示。
實施例5不同過敏原芯片的分析(二)在本實施例中，分別使用(1)豬草、(2)蛋黃、(3)蛋白、(4)牛奶、(5)花生、(6)蝦、(7)大豆、(8)煙曲霉(Aspergillus fumigatus)、(9)白色念珠菌(Candida albicans)及(10)青霉菌屬(Pencillium notatum)作為過敏原，分別以各種不同的濃度(原倍、1/10倍稀釋及10倍濃縮)點在表面層為NC的固體基材。以得自臺大醫院的過敏患者(3級)的血清抗體作為測試樣品，其余步驟相同于實施例2。結果如圖5及表3所示。其中，“檢測抗體”及“偶聯Cy5的鏈霉抗生物素蛋白”是相同于實施例4的步驟。
表3以硝化纖維為表面層的各種過敏原芯片分析

*螢光值(S)系以平均值表示。
實施例6過敏原檢測芯片的密度規格測試將0.1克/毫升的大豆溶液藉由點陣機而點至實施例1所制備的過敏原檢測芯片上(硝化纖維及聚苯乙烯)。點陣密度為484點/4.41平方公分(約110點/平方公分)，固定后藉由考馬斯亮藍(Coomassie Blue)染色，以鑒別各點的效能。結果如圖6所示。
在上述的分析中，過敏原的級數是根據MAST-CLA試驗(HITACHI化學診斷公司)所訂定的標準而區分。此外，本發明藉由所測得的螢光值/背景值的比例(S/N)而決定待測樣品中是否存在有抗過敏原的抗體，亦即，本發明定義當S/N的比值大于2時，則可初步判定為具有過敏的陽性反應，反之，當比值小于2時，則為陰性反應。
由以上結果可知，本發明的過敏原檢測芯片可有效地將各種不同的過敏原固定在同一芯片上，藉此可大量、多樣、低檢體用量及低成本地檢測引起患者過敏反應的過敏原的種類及濃度，以供專科醫師作為后續處理及治療之目的。此外，藉由生物素-鏈霉抗生物素蛋白的專一性反應，或藉由偶聯其它高感度的信號產生工具，本發明的過敏原檢測芯片可具有相當高靈敏度及準確性的分析結果。
雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其并非用以限定本發明，任何熟悉此技藝者，在不脫離本發明的精神和范圍內，當可作各種更動與潤飾，例如，其它種類過敏原、偶聯二次抗體的信號產生工具以及各種可得之檢測方法之改善及修正，都是在本發明的范疇之內。因此本發明的保護范圍，當視后附之權利要求書所界定者為準。
權利要求
1.一種過敏原檢測芯片，其特征在于，包括固體基材以及至少一種過敏原，其固定于該固體基材之上，其中該固體基材包括(i)基底層；(ii)粘著中間介層，其位于該基底層之上；以及(iii)表面層，其位于該粘著中間介層之上。
2.如權利要求1所述的過敏原檢測芯片，其中該基底層包括玻璃、硅芯片、陶瓷材料、金屬、聚二氟乙烯膜或醋酸纖維膜。
3.如權利要求1所述的過敏原檢測芯片，其中該粘著中間介層包括環氧樹脂。
4.如權利要求1所述的過敏原檢測芯片，其中該表面層包括硝化纖維或聚苯乙烯。
5.如權利要求1所述的過敏原檢測芯片，其中該過敏原系選自塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及貓皮屑所組成的組中之萃取物。
6.一種過敏原檢測芯片，包括(i)固體基材；以及(ii)至少一種過敏原，其固定于該固體基材之上。
7.如權利要求6所述的過敏原檢測芯片，其中該固體基材包括由有機分子聚合而成之聚合物，其中該有機分子系選自苯乙、乙烯、丙烯、酯類、丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸及烷基丙烯酸酯所組成的組中。
8.如權利要求6所述的過敏原檢測芯片，其中該過敏原系選自塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及貓皮屑所組成的組中之萃取物。
9.如權利要求1項或第6所述的過敏原檢測芯片，其中在該過敏原檢測芯片上之過敏原密度，是大于100個過敏原/平方公分芯片。
10.一種過敏原檢測芯片的制備方法，其特征在于，包括(a)將一粘著中間介層涂布于一基底層；(b)將一表面層涂布于該粘著中間介層；以及(c)將至少一種過敏原固定在該表面層之上。
11.如權利要求10所述的制備方法，其中該基底層包括玻璃、硅芯片、陶瓷材料、金屬、聚二氟乙烯膜或醋酸纖維膜。
12.如權利要求10所述的制備方法，其中該粘著中間介層包括環氧樹脂。
13.如權利要求10所述的制備方法，其中該表面層包括硝化纖維或聚苯乙烯。
14.如權利要求10所述的制備方法，其中該過敏原系選自塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及貓皮屑所組成的組中之萃取物。
15.如權利要求10所述的制備方法，其中該涂布的方法包括旋轉涂布、浸鍍涂布、網印涂布、滾筒涂布或簾幕涂布。
16.如權利要求15所述的制備方法，其中該涂布的方法是旋轉涂布。
17.如權利要求10所述的制備方法，其中在涂布該粘著中間介層之前，還包括清潔該基底層表面的步驟。
18.如權利要求17所述的制備方法，其中該清潔步驟系使用溶劑清洗及/或超聲波震蕩之前處理。
19.如權利要求18所述的制備方法，其中該溶劑系選自表面活性劑、水、酒精及丙酮所組成的組中。
20.一種過敏原檢測芯片的制備方法，包括將至少一種過敏原固定在一固體基材之上。
21.如權利要求20所述的制備方法，其中該固體基材包括由有機分子聚合而成之聚合物，其中該有機分子系選自苯乙烯、乙烯、丙烯、酯類、丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸及烷基丙烯酸酯所組成的組中。
22.如權利要求20所述的制備方法，其中該過敏原系選自塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及貓皮屑所組成的組中之萃取物。
23.一種檢測過敏原的套組，包括(i)權利要求1-9中任一項所述的過敏原檢測芯片；(ii)封閉溶液，用以阻隔該檢測芯片上未結合該等過敏原之部份；(iii)二次抗體，其可專一性地與抗過敏原抗體結合；(iv)清洗溶液；以及(v)信號產生工具，其可操作性地與該二次抗體偶聯而產生信號。
24.如權利要求23所述的套組，其中該過敏原系選自塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及貓皮屑所組成的組中之萃取物。
25.如權利要求23所述的套組，其中該二次抗體包括抗IgE之抗體或抗IgG之抗體。
26.如權利要求25所述的套組，其中該抗體包括單克隆抗體或多克隆抗體。
27.如權利要求23所述的套組，其中該清洗溶液包括磷酸鹽緩沖溶液(PBS)或三羥甲基胺基甲烷緩沖液(TBS)。
28.如權利要求27所述的套組，其中該清洗溶液還包括一表面活性劑。
29.如權利要求23所述的套組，其中該信號產生工具系選自放射性標記物、螢光標記物、磷光標記物、冷光標記物及酶所組成的組中。
30.如權利要求29所述的套組，其中該冷光標記物包括生物冷光標記物或化學冷光標記物。
31.如權利要求29所述的套組，其中該酶系選自堿性磷酸酶、過氧化氫酶及β-半乳糖苷酶所組成的組中。
32.如權利要求31所述的套組，還包括一底物，其中該底物可與該酶反應而呈色。
33.如權利要求29所述的套組，其中該信號產生工具還包括生物素。
34.如權利要求33所述的套組，還包括一抗生物素蛋白，其可操作性地與放射性標記物、螢光標記物、磷光標記物、冷光標記物或酶偶聯。
35.如權利要求34所述的套組，其中該酶系選自堿性磷酸酶、過氧化氫酶及β-半乳糖苷酶所組成的組中。
36.如權利要求35所述的套組，還包括一底物，其中該底物可與該酶反應而呈色。
37.如權利要求23所述的套組，其中該封閉溶液包括牛血清白蛋白、酪蛋白或動物明膠的溶液。
38.一種檢測過敏原的方法，包括(a)提供權利要求1-9中任一項的過敏原檢測芯片；(b)用一封閉溶液阻隔該檢測芯片上未結合該等過敏原之部份；(c)將患者的血清樣品與該檢測芯片接觸；(d)以清洗溶液進行清洗步驟；(e)提供一信號產生工具，其可操作性地與二次抗體偶聯而產生信號，其中該二次抗體可專一性地與抗過敏原抗體結合；以及(f)測量該信號產生工具所產生的信號。
39.如權利要求38所述的方法，其中該過敏原系選自塵螨、羽毛、花粉、霉菌、細菌、蛋黃、蛋白、豬草、牛奶、花生、蝦、蟹、魚、蚌、黃豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及貓皮屑所組成的組中之萃取物。
40.如權利要求38所述的方法，其中該二次抗體包括抗IgE之抗體或抗IgG之抗體。
41.如權利要求40所述的方法，其中該抗體包括單克隆抗體或多克隆抗體。
42.如權利要求38所述的方法，其中步驟(c)還包括將對照標準品抗體與該檢測芯片接觸。
43.如權利要求38所述的方法，其中該清洗溶液包括磷酸鹽緩沖溶液或三羥甲基胺基甲烷緩沖液。
44.如權利要求43所述的方法，其中該清洗溶液還包括一表面活性劑。
45.如權利要求38所述的方法，其中該信號產生工具系選自放射性標記物、螢光標記物、磷光標記物、冷光標記物及酶所組成的組中。
46.如權利要求45所述的方法，其中該冷光標記物包括生物冷光標記物或化學冷光標記物。
47.如權利要求45所述的方法，其中該酶系選自堿性磷酸酶、過氧化氫酶及β-半乳糖苷酶所組成的組中。
48.如權利要求47所述的方法，還包括加入一底物，其中該底物可與該酶反應而呈色。
49.如權利要求45所述的方法，其中該信號產生工具還包括生物素。
50.如權利要求49所述的方法，還包括加入一抗生物素蛋白，其可操作性地與放射性標記物、螢光標記物、磷光標記物、冷光標記物或酶偶聯。
51.如權利要求50所述的方法，其中該酶系選自堿性磷酸酶、過氧化氫酶及β-半乳糖苷酶所組成的組中。
52.如權利要求51所述的方法，還包括一底物，其中該底物可與該酶反應而呈色。
53.如權利要求38所述的方法，其中該封閉溶液包括牛血清白蛋白、酪蛋白或動物明膠的溶液。
全文摘要
本發明涉及一種過敏原檢測芯片、其制備方法、包含該過敏原檢測芯片的套組及其應用，以用于檢測樣品中的各種抗過敏原IgE及/或IgG抗體。一種過敏原檢測芯片，包括固體基材以及至少一種過敏原，其固定于該固體基材之上，其中該固體基材包括(i)基底層；(ii)粘著中間介層，其位于該基底層之上；以及(iii)表面層，其位于該粘著中間介層之上。本發明的過敏原檢測芯片具有相當高靈敏度及準確性的分析結果。
文檔編號G01N33/569GK1430052SQ0114527
公開日2003年7月16日 申請日期2001年12月31日 優先權日2001年12月31日
發明者金權, 李惇 申請人:合富生化科技股份有限公司