專利名稱：過敏原劑型的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種含過敏原的藥物產品，尤其是快速分散的固體過敏原劑型，以及此類劑型的制備方法。
背景技術：
在適于西方生活方式的國家，過敏癥是主要的健康問題。而且，過敏性疾病在這些國家越來越流行。盡管過敏癥通常不被認為是威脅生命的疾病，但哮喘每年導致相當數量的死亡。在約30％的青少年中異常的流行導致在生活質量，工作日和錢財方面的重大損失，并成為在西方世界的主要健康問題當中的一類。
過敏癥是一種復雜的疾病。許多因素促成致敏事件。其中個體的易感性被定義為迄今仍了解不足的一些基因之間的相互作用。另一個重要因素是過敏原接觸超過某閾值。包括污染，兒童期感染，寄生蟲感染，腸道微生物等的一些環境因素可能在致敏過程中很重要。一旦個體被致敏并且建立了過敏性免疫應答，僅微量過敏原的存在就足以轉變為癥狀。
過敏性疾病的自然病程通常在兩個水平伴有惡化。首先，有癥狀和疾病嚴重程度的進展。例如，從花粉熱進展到哮喘。其次，引起不適的過敏原大多數時候會發生播散而造成過敏性多反應性。長期炎癥導致粘膜防御機制總體的弱化，引起非特異性刺激并最終破壞粘膜組織。嬰兒可能最初對食物例如牛奶敏化，產生濕疹或胃腸疾病；然而，絕大多數時候他們會自發地不再有這些癥狀。這些嬰兒在其隨后的生活中處于發生吸入過敏癥的危險中。
在我們呼吸的空氣里最普遍的某種粒徑微粒當中發現最重要的過敏原來源。這些來源非常普遍并且包括草花粉(grass pollen)和屋塵螨糞便微粒，它們合在一起是形成約50％所有過敏癥的原因。在全世界有重要性的還有動物皮屑例如貓和狗的皮屑，其它花粉例如艾屬植物花粉，和微小真菌例如鏈格孢屬。在地域性的基礎上其它的花粉可以占優勢，例如在北歐和中歐的樺屬花粉，在美國東部和中部的豚草屬，以及在日本的日本雪松花粉。昆蟲例如蜜蜂和黃蜂毒液以及食物各自占所有過敏原的大約2％。
過敏，即I型超敏反應，是由對外來非致病物質的不適當的免疫反應所引起。過敏癥的重要臨床表現包括哮喘，花粉熱，濕疹和胃腸道疾病。過敏反應很迅速而且在與引起不適的過敏原接觸20分鐘內就可以到達峰值。而且，過敏反應是特異性的，含義即特定個體對特定過敏原敏感，而該個體不必定對已知可引起過敏疾病的其他物質表現過敏反應。過敏表型特征在于靶器官粘膜的顯著炎癥和在循環中以及肥大細胞和嗜堿性白細胞表面上存在IgE類過敏原特異性抗體。
過敏發作是由外來過敏原與過敏原特異性IgE抗體的反應引發，此時抗體結合到在肥大細胞和嗜堿性白細胞表面上的高親和力IgE特異性受體。肥大細胞和嗜堿性白細胞含有預先形成的介質，即組胺，類胰蛋白酶和其他物質，它們在兩個或多個受體結合的IgE抗體的交聯后釋放。IgE抗體通過同時結合一個過敏原分子而交聯。在肥大細胞表面上受體結合的IgE的交聯還導致負責吸引嗜酸性細胞、過敏原特異性T細胞和其他類型細胞到過敏性反應位點的信號分子的釋放。這些細胞與過敏原、IgE和效應細胞相互作用導致在遇到過敏原后12-24小時發生癥狀重新出現(晚期反應)。
過敏性疾病的處理包括診斷和含預防性治療的治療。過敏癥診斷涉及過敏原特異性IgE的驗證和過敏原來源的鑒定。在很多情況中細致的既往病史可能足以診斷過敏癥和鑒定引起不適的過敏原來源材料。然而絕大多數時候，診斷依賴于客觀測定，例如皮膚針刺試驗，血液檢測，或誘發試驗。
治療選擇有三種主要類別。首先的可能是避免或減少過敏原接觸。盡管避免過敏原是顯而易見的，例如對于食物過敏原，但對于屋塵螨過敏原可能很困難或昂貴，或對于花粉過敏原也許是不可能的。其次和使用最廣泛的治療選項是開處經典對癥藥物如抗組胺藥和類固醇。對癥的藥物是安全有效的；然而，它們不能改變疾病的自然病因，并且它們不能控制疾病的播散。第三種可供選擇的治療方法是特異性過敏疫苗接種，其在多數情況下減輕或緩解所討論的過敏原引起的過敏癥狀。
常規的特異性過敏接種是對過敏性疾病的病因治療。它干擾基本免疫機制，導致患者免疫狀態持久改善。因此，相對于對癥藥物治療，特異性過敏接種的保護效應延伸到治療期之后。一些接受治療的患者被治愈，此外，大多數患者感受到疾病嚴重程度和所經歷癥狀的減輕，或者至少阻止病情加重。因此，特異性過敏接種具有預防作用，減少花粉熱發展為哮喘的危險，同時減少發展新的敏感性的危險。
作為成功的過敏接種的基礎的免疫學機制未被確切了解。例如針對特定病原體的抗體產生的特異性免疫應答被認為是適應性免疫應答。此應答可以與先天免疫應答區別開，后者是一種針對病原體的非特異性反應。過敏疫苗是要解決適應性免疫應答的問題，其中包括具有抗原特異性的細胞和分子，例如T細胞和產生抗體的B細胞。沒有相應特異性的T細胞幫助，B細胞就不能成熟為產生抗體的細胞。參與刺激過敏性免疫應答的T細胞主要是Th2型。在Th1和Th2細胞之間建立新的平衡已被提出對特異性過敏接種的免疫學機制是有益和重要的。這是由Th2細胞的減少、從Th2向Th1細胞的偏移還是Th1細胞的上調引起的，存在爭議。最近，調節T細胞已經被認為對過敏免疫接種機制是重要的。根據這種模型，調節T細胞，即Th3或Tr1細胞，下調相應抗原特異性的Th1和Th2細胞兩者。雖然存在這些不確定性，但通常認為有效疫苗必須具有刺激過敏原特異性T細胞優選TH1細胞的能力。
盡管有其效力和優點，特異性過敏接主要出于兩個原因沒有被廣泛應用。一個原因是與常規接種程序有關的不便，包括反復接種，例如在數月內多次注射。更重要的另一個原因是過敏性副反應的危險。針對感染因子的普通接種使用單次或幾次高劑量免疫接種有效進行。然而，由于病理性免疫應答已在進行，這種策略不能用于過敏接種。
因此常規的特異性過敏接種采用在延長時間期限內應用的多次皮下免疫接種進行。該過程被分為提高劑量和維持階段的兩個階段。在提高劑量階段，應用增加劑量，典型地延續16個星期，以微劑量開始。當達到所推薦的維持劑量時，該劑量被用于維持階段，典型地每6個星期進行注射。由于過敏性副反應(原則上盡管極為罕見但可危及生命)的危險，每次注射后患者必須處于醫學監護30分鐘。另外，臨床診所應當有所預備以應對急診處理。毫無疑問，基于不同給藥途徑的疫苗會消除或減少目前給予皮下地疫苗所固有的過敏性副反應的危險，并且也將促進更廣泛的使用，甚至可能在家自己接種。
改進用于特異性過敏接種的疫苗的嘗試已經進行30多年并且包括多種途徑。一些方法通過修飾IgE反應性而著重于過敏原自身。另一些則關注這種給藥途徑。
免疫系統通過口腔和口腔粘膜可以到達，例如，過敏原舌下給藥是已知的給藥途徑。
按照慣例，采用口腔粘膜途徑的過敏疫苗包括定期給藥過敏原溶液，間隔至少一天。相比之下，給予的治療(累積)維持劑量超出維持相當的皮下劑量5-500倍。這種劑型和給藥途徑的明顯缺點是與患者精確和均勻自身給藥正確劑量相關的問題(可能必須給予數滴，每滴的均勻性，應用部位準確性等)。此外，需要冷藏藥物并且在制劑中包括防腐劑在內。
Netien等人(″Galenica 16-Medicaments homeopathiques″ed.2，1986，77-99頁)公開了將液體溶液浸到乳糖、蔗糖或此類混合物的固體微粒(顆粒)或常規壓制片上以用于藥物如過敏原的舌下給藥。
DD-A.0107208公開了一種制備含過敏原的常規壓制片的方法。給藥后該片劑被唾液溶解，隨后過敏原通過口腔粘膜吸收。制劑中包含一種水不溶性賦形劑，即滑石，以及石蠟和脂肪酸，其不理想，因為它會在患者口中留下不適的殘余。此外，在制片過程中產生的摩擦力可能對過敏原的物理穩定性有損害。
EP 278877公開了一種舌下用的藥物組合物，其中將過敏原溶液噴到固體載體小球上，使固體載體包有過敏原溶液。所得的制劑據說迅速地但非瞬間地崩解。然而，沒有公開如何達到該目的。此外，該制劑包含乳糖形式的還原糖，所述還原糖易與過敏原反應。
為了確保盡可能多的某種過敏原的給藥劑量呈現于口腔粘膜，并且崩解產物與粘膜的接觸時間最大，非常重要的是劑型在與口腔唾液接觸后即使崩解。本領域中已知快速分散的固體劑型，其在口腔中迅速地釋放出活性成分。
美國專利No 4,371,516公開了在水中迅速崩解的含活性成分的藥物劑型。該藥物劑型包括在10秒內崩解的開放式基質網狀結構的載體材料。
在WO 00/61117中公開的基于冷干魚明膠的載體被設計為在口腔中給藥時與唾液接觸后瞬間釋放活性成分。
在WO 00/44351中公開的冷干的改性淀粉載體被設計為在口腔中給藥時與唾液接觸后瞬間釋放活性成分。
WO 99/21579公開了一種含疫苗和口腔用佐劑的快速分散劑型。
WO 02/13858公開了含口腔用快速溶解“餅”形式的疫苗的快速溶解藥物組合物。WO 02/13858的發明目的似乎是提供在胃腸道中保持完整的病毒或細菌疫苗。通過在餅中混入諸如碳酸鈣的抗酸劑保護抗原對抗胃的酸性內容物而實現該目的。
WO 00/51568公開了一種快速崩解壓制低脆性片劑，它被設計為與唾液接觸在口腔中不超過30秒溶解，形成易于吞咽的懸浮物。
在美國專利No 4,371,516中聲稱所述制劑對口腔疫苗有用。在WO 00/61117，WO 00/44351，WO 99/21579和WO 02/13858中，也聲稱所述發明針對非感染免疫調節狀況例如全身性過敏狀況如花粉熱。然而，在所有這些申請中均沒有公開怎樣制備快速分散的過敏原疫苗固體劑型的技術信息或實施例。例如，在所有公開的制劑中均沒有指出某種過敏原適當的劑量。給予患者正確的過敏原劑量非常重要，因為過量可能誘發患者過敏性休克。此外，沒有給出有關這類制劑的穩定性或脆性的適當措施的識別和指示。
發明概述本發明涉及含至少一種過敏原和基質且適于口腔粘膜施用過敏原的快速分散非壓制固體劑型形式的藥物產品，其特征在于含過敏原的劑型是穩定、足夠堅固的，而且患者使用時不會釋放危險量的過敏原殘余物。
此外，適于口腔粘膜給藥的快速分散非壓制固體劑型包含基質形成劑和過敏原，其中過敏原是穩定的，而且該劑型相對于過敏原釋放而言具有低脆性，該劑型溶解迅速而且不需要佐劑。
尤其是本發明涉及適于過敏原給藥的藥物產品，它包含適于口腔粘膜給藥的快速分散非壓制固體劑型，包括(a)由至少一種基質形成劑形成的基質，和(b)使個體對所述過敏原脫敏的有效劑量的過敏原，其中(c)在25℃和60％的相對濕度下保存3個月后，所述劑型中過敏原含量的損失低于最初過敏原含量的50％，和(d)在經受脆性測試時，所述固體劑型的過敏原損失低于大約0.5μg過敏原提取物或低于約0.05μg主要過敏原。
在本發明的一個優選實施方案中，固體劑型包含魚明膠和甘露醇作為基質形成劑。
在本發明另一個優選的實施方案中，固體劑型包含淀粉和甘露醇作為基質形成劑。
本發明還提供制備這些固體劑型的方法以及通過施用這些固體劑型治療過敏癥的方法。
發明詳述本發明基于多項驚人的發現，它們均不能預先推測而合理預期會成功。首先，所基于的發現是有可能使用快速分散非壓制劑型用于過敏原給藥，而且有可能通過使用這樣的制劑獲得有效的過敏癥治療。尤其是，已經表明的確有可能經由口腔粘膜途徑使用快速分散非壓制固體劑型遞送足量過敏原至患者免疫系統，而不引起不希望水平的副作用。此外，本發明提供了獲得治療作用而無不可接受的副作用的相關劑量水平。
其次，本發明所基于的發現是不使用佐劑通過使用快速分散非壓制劑型可獲得有效治療。
第三，本發明所基于的發現是可以把過敏原配制為快速分散非壓制劑型，同時滿足過敏原對穩定性和低脆性所需的特殊要求。尤其是，已經表明有可能平衡對立的需求，即一方面劑型應當快速分散，而另一方面既要穩定又要有低脆性，以獲得足夠限度的快速分散、穩定并具有低脆性的劑型。
過敏原蛋白質易于降解，其受到它們所處的環境中多種因素的影響。尋求恰當的過敏癥治療尤其是過敏免疫是過敏原以治療相關劑量被完整遞送到免疫系統。因此，過敏原必須在制備、貯藏和使用過程中保持穩定。本研究已經表明事實上可將過敏原蛋白質配制成快速分散非壓制劑型，就過敏原劑量和過敏原活性而言其是穩定的。此外，還很驚奇地發現這些制劑在室溫下也確實是穩定的。該發現對于最終產品的處理過程具有特殊意義的重要性。在生產工廠、運輸或藥房儲藏過程中的冷凍儲藏經常與高成本有關，因為冷藏設備必須嚴密監控而且投資可靠的冷藏設備非常昂貴。此外，就患者的依從性而言，也優選劑型可以貯藏在室溫下。
因此，本研究已經表明事實上可能將過敏原蛋白質制成無需佐劑就治療有效的快速分散非壓制劑型。此外這種含過敏原的固體劑型在有利條件下下穩定。
當過敏原蛋白質被制成快速分散非壓制劑型，還有利的是所得的劑型在直接接觸時不會大量釋放過敏原到周圍的環境或操作劑型的使用者。在先的非壓制快速分散固體劑型的特征在于由于非壓制基質的固有性質(脆，易碎，幾乎象薄脆餅)，與壓制片相比，其機械強度低。在例如包裝、貯藏、運輸和患者使用劑型的過程中，含過敏原的殘余微粒可以釋放到環境和患者。當活性成分是過敏原時這是特別有害的，因為過敏原可以在易感者中引起過敏反應或誘發過敏反應，這種致敏或過敏性應答是劑量依賴性的。已提出了例如塵埃過敏原形式的環境污染的最高允許水平(視所討論的過敏原而定)應低至2微克的主要過敏原/克屋塵(Allergy.Principles and practice(1993，4.ed.)，Mosby-Year book，Vol.I 520頁)。
從含基質形成劑，活性成分和其它可選擇物質的固化系統中除去液體從而制備非壓制快速分散的固體劑型，優選在原位制備。原位制備過程通常包括在諸如泡罩式包裝的最終容器內從活性成分和基質形成賦形劑的固化系統中除去溶劑。商業上所采用的原位技術不能對劑型進行常規包衣。在大多數情形中劑型包衣的應用會影響固體劑型的分散，從而危害劑型的即時釋放特性。
因此，盡管這些要求的性質對立，本研究已經表明事實上可能將有效劑量的過敏原蛋白質制成快速分散非壓制劑型，同時獲得低脆性并保持快速分散特性。
上述所有發現都獲得實驗室研究或適用的采用實驗動物的臨床前試驗或臨床試驗的支持。
術語“快速分散劑型”指在口腔接受后少于約90秒內崩解的劑型，優選少于約60秒，優選少于約30秒，更優選少于約20秒，甚至更優選在口腔內少于約10秒，甚至更優選少于約5秒，以及最優選少于約2秒。本發明的固體劑型可以是片劑、膠囊，糖錠或小膠囊的形式。
術語“非壓制”指固體劑型通過從含基質形成劑，活性成分和其它適宜成分的固化系統中除去液體，得到含過敏原的固體基質而制備。
術語“固體劑型”指非液體的單位劑型或口腔給藥時的粉劑，因此“固體劑型”指例如含單位劑量活性成分的片劑。術語片劑，固體劑型和疫苗形式在此可互換使用。
術語“基質形成劑”指任何藥學上可接受的在固體劑型中將充當活性成分載體的水溶性或水分散性賦形劑。
術語“賦形劑”指除活性成分以外可以添加到制劑中的任何成分。
術語“在所述劑型中過敏原含量的損失”指在例如貯藏，運輸和使用過程中劑型中過敏原的例如降解或失活。可以以生物活性/效價的損失或過敏原實際含量的損失來測定損失。優選地，將過敏原含量的損失測定為至少一種主要過敏原的損失。例如可以采用Obispo等人所述的ELISA法(Allergy，1997，52，806-813頁，使用過敏原特異性試劑)測定損失。
術語“過敏原含量由所述劑型的損失”指在例如貯藏，運輸和使用過程中劑型中過敏原的例如釋放。可以以生物活性/效價的損失或過敏原實際含量的損失來測定損失。優選地，將過敏原含量的損失測定為至少一種主要過敏原的損失。例如可以采用Obispo等人所述的ELISA法(Allergy，1997，52，806-813頁，使用過敏原特異性試劑)測定損失。
術語“穩定”指在最終容器中在25℃和60％相對濕度下貯藏3個月后測定為生物活性/效價的損失或至少一種主要過敏原的含量損失的過敏原含量損失小于最初含量的50％的劑型。例如可采用上述的ELISA法測定損失。
術語“低脆性”指在受到外力時從劑型損失的含過敏原材料的量。如果含過敏原材料損失包含少于0.5μg過敏原提取物或0.05μg主要過敏原/固體劑型，則該固體劑型具有足夠的脆性和堅固性以進行運輸，貯藏和操作。對于本發明的目的，可以采用本發明的方法測定脆性。
根據下列等式計算“抗張強度σ”σ＝3Wa×9.8Nmm-2/2d2b其中w＝破碎最大負荷(kgF)a＝支持物間的距離d＝快速分散固體劑型的厚度(mm)b＝快速分散固體劑型的直徑(mm)“破碎最大負荷”指使用適當的儀器(例如CT5，EngineeringSystems，1Loach Court，Radford Bridge Road，Nottingham NG81NA，UK)在三點彎曲測試中破碎一個單位需要的最大力。
術語“口腔粘膜給藥”指為了獲得活性成分的局部或全身效應，將劑型置于舌下或口腔中的任何其它位置以使活性成分得以與患者口腔或咽部粘膜接觸的一種給藥途徑。口腔粘膜給藥途徑的一個例子是舌下給藥。
術語“舌下給藥”指為了得到活性成分的局部或全身效應，將劑型置于舌下的一種給藥途徑。
術語“過敏原”指任何天然存在的蛋白質或蛋白質混合物，其已經被報道在反復暴露于個體時可誘發過敏性反應，即IgE介導的反應。天然存在的過敏原的例子包括花粉過敏原(樹，雜草，藥草和草花粉過敏原)，螨過敏原(來自例如屋塵螨和貯藏螨(storage mite))，昆蟲過敏原(吸入性，唾液和毒液來源的過敏原)，動物過敏原，來自例如狗，貓，馬，大鼠、小鼠等的例如唾液，毛發和皮屑，真菌過敏原和食物過敏原。可以以過敏原提取物，純化過敏原，修飾過敏原或重組過敏原或重組突變過敏原，任何超過30個氨基酸的過敏原片段或其任意組合的形式使用過敏原。
在這里所用的表述“過敏原提取物”指通過提取生物學過敏原來源材料而獲得的提取物，一般如下所述“Allergenic extracts”，H.Ipsen等人，第20章，“Allergy，principle and practise”(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis。這樣的提取物可以通過對水溶性材料進行水提取，后接純化步驟如過濾，以獲得溶液即提取物。然后提取物可以進行進一步純化和/或加工處理如冷凍干燥，除去基本上所有的水。通常地，過敏原提取物包括蛋白質和其它分子的混合物。過敏原蛋白質經常被分類為主要過敏原，中間過敏原，次要過敏原或無分類。過敏原提取物通常既包括主要過敏原也包括次要過敏原。主要過敏原通常占一般過敏原提取物的約5-15％，更常為約10％。過敏原的分類是基于對特定過敏原的臨床重要性的評估，如下面所給出。在提取物中發現的重要的主要過敏原的例子包括草組1和5和6過敏原(例如Phlp1，5和6)，塵埃螨組1和2過敏原(例如Derp1，Derp2)，樹花粉過敏原1(Betv1)，雪松花粉過敏原1和2(例如Cryj1，Cryj2)，豚草屬花粉1和2(Amba1，Amba2)，貓過敏原(即Feld1)。一般過敏的人將對一種或多種主要過敏原敏感并反應，進而還可對次要過敏原敏感并反應。
在此所述的過敏原提取物的量指這種過敏原提取物的干物質含量。
優選地，干物質的水含量不超過10重量％，更優選5重量％。
在此處所用的表述“生物學過敏原來源材料”指含一種或多種過敏原的任何生物材料。這種材料的實例為螨PMB(純螨體)或WMC(全螨培養物)，來自例如草，藥草，雜草和樹的脫脂或非脫脂花粉，動物毛發和皮屑，毛皮，真菌菌絲體和孢子，昆蟲體、毒液或唾液和食物。
生物學過敏原來源材料可以包含污染材料，例如對于過敏原花粉來源材料而言，污染材料為外來花粉以及植物和花的碎屑。
污染程度應被減到最小。優選地，污染物的含量不應超過生物來源材料的10％(W/W)。
用標準蛋白質測定例如BCA或Lowry法測定，過敏原提取物通常含過敏原提取物干物質含量的至少10％蛋白質，其余部分由其它“非蛋白質材料”組成，其可以是諸如源自生物學過敏原來源的脂質，糖類或結合水的成分。
在800微巴以下的壓力冷凍干燥液體過敏原提取物持續高達100小時的時間以除去水分，可獲得凍干材料，過敏原提取物可以以這種形式配制和貯藏。
在過敏原提取物的技術領域中沒有國際公認的標準化方法。存在多種不同的提取物強度單位，即生物效價。采用的方法和使用的單位通常測定過敏原含量和生物活性。關于這點的例子是SQ-單位(標準化質量單位)，BAU(生物學過敏原單位)，BU(生物學單位)，UM(質量單位)，IU(國際單位)和IR(反應指數)。因此，如果使用除在此所公開以外的來源的提取物，需要將它們針對在此公開的提取物進行標準化以確定它們SQ單位或任何上述單位的效價。該主題見“Allergenic extracts”，H.Ipsen等人，第20章，“Allergy，principle and practise”(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis and Lowenstein H.(1980)ArbPaul Ehrlich Inst 75122。
給定提取物的生物效價，即體內過敏原活性，取決于許多因素，最重要的是提取物中主要過敏原的含量，其隨著生物學來源材料的組成而變化。
被用于得到期望的生物效價的過敏原提取物克數量隨所討論的提取物類型而變化，對于給定類型的提取物，過敏原提取物的量隨提取物實際的生物效價在每批之間有所不同。
對于給定批次的提取物，用來得到期望的生物效價的過敏原提取物的克數量可以采用下列步驟測定a)采用一種或多種體內免疫學試驗測定不同量的參照提取物的生物效價以建立生物效價與參照提取物量之間的對應關系。所述體內免疫學試驗的實例是皮膚針刺試驗(SPT)，結膜誘發試驗(CPT)，過敏原攻擊支氣管(BCA)和監測一種或多種過敏癥狀的各種臨床試驗，參見例如Haugaard等人，J Allergy Clin Immunol，Vol.91，No.3，pp 709-722，March 1993。
b)在生物效價和參照提取物之間建立的對應關系的基礎上，選擇用于本發明劑型的一個或多個相關劑量的生物效價，適當考慮以下因素的平衡i)治療或緩解過敏癥狀的作用，ii)體內免疫學試驗所記錄的副作用，和iii)i)和ii)在個體間的變異性。實現平衡以得到最大適當治療效果而無不可接受水平的副作用。本領域的技術人員熟知平衡這些因素的方法。
所發現的一個或多個相關劑量的生物效價可以表示為任何可用的生物效價單位，例如SQ單位，BAU，IR單位，IU，參見上文。
c)由參照提取物制備一種或多種生物效價參照標準提取物，如果使用的話，基于在分配到一個或多個相關劑量的生物效價單位值，計算參照標準提取物的生物效價單位值，例如下面所述可從FDA獲得對于BAU的這種標準。
d)對于每種提取物類型的參照標準提取物，選擇多個評估提取物生物效價的參數。這種評估參數例如總過敏原活性、限定的主要過敏原的量和提取物的總體分子組成。可以采用體外競爭性免疫測定法檢測總過敏原活性，例如ELISA和MagicLite發光免疫測定法(LIA)，使用針對用標準方法所獲得的提取物的標準化抗體混合物，例如在小鼠和兔中產生的抗體，或過敏患者血清混合物。主要過敏原的含量可以例如采用火箭免疫電泳法(RIE)定量并與參照標準比較。可以采用例如交叉免疫電泳法(CIE)和十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢查總體分子組成。
e)對于給定批次的未知生物效價的提取物(測試提取物)，可以如下確定用于獲得期望的生物效價水平的提取物量(用在本發明的固體劑型中的有效劑量)對于每種所選擇的評價參數，采用如上所述的相關檢測方法，將測試提取物與參照標準提取物相比較，并且基于檢測結果計算具有期望的生物效價的提取物的量。
SQ-單位根據ALK-Abello A/S的“SQ生物效價”標準化方法確定SQ-單位，其中100,000SQ單位等于標準皮下維持劑量。視過敏原的來源和所用的制備方法而定，通常1mg的提取物含100,000-1,000,000SQ-單位。利用免疫測定可以檢測精確的過敏原量，即主要過敏原總含量和總過敏原活性。
BAU(生物學過敏原單位)是按照FDA對過敏原產品的要求確定的生物效價單位，如下所述“Quantitative determination of relativepotency of allergenic extracts”(“Methods of teallergenproducts testing Laboratory”“ELISA competition assay”.第15頁，#49N-0012，FDA，1993年10月)。按照上述方法，含100,000SQ-單位的草提取物劑量等于2600-4700BAU的含量。同樣，按照上述方法可以評估其它提取物。
術語“用于脫敏的有效劑量過敏原”將解釋為在以單一劑量或增加劑量服用一次或反復服用時導致例如適應性免疫應答并因此使過敏癥患者脫敏的劑量。優選地，該術語將表示按照治療方案(持續一段時間，從幾次應用到數月內至少每天一次應用)重復給藥所述固體劑型之后誘導適應性免疫應答所必需的各劑型中過敏原的量。優選脫敏包括劑量給藥后過敏癥狀緩解。臨床過敏癥狀包括鼻炎，結膜炎，哮喘，蕁麻疹，濕疹，其中包括皮膚、眼睛、鼻，上下呼吸道的反應，常見癥狀例如眼和鼻的發紅和癢，鼻癢和流涕，咳嗽，哮鳴，呼吸短促，瘙癢和組織腫脹。
在這里使用“含量均一性”指劑量單位相對于指定劑量的變化。
在這里所用的“水含量”指采用Karl Fischer滴定原理定量測定的固體劑型單位中殘余水的含量。該方法基于以下原理，即給定量的I2導致等量水的轉化(歐洲藥典(EP)第3版，2.5.12)。
在這里所用的“水分活性aw”是指樣品中的有效水。水分活性測定采用本領域技術人員公知的方法進行，例如冷鏡露點技術，用改變電阻或電容的感應器或采用氯化鋰電極測定相對濕度可根據下列等式計算awaw＝p/ps＝ERH(％)/100，其中p＝產品表面水蒸氣的分壓ps＝飽和壓力，或者在產品溫度下水蒸氣在純水上的分壓ERH＝平衡相對濕度術語“大約”或“近似地”表示在由本領域普通技術人員確定的特定值的可接受范圍內，其部分取決于該值是如何測定或確定的，例如檢測系統的限制，例如，“大約”可以表示給定值的至多20％的范圍，優選至多10％，更優選至多5％，并且仍更優選至多1％。
現已驚奇地發現，本發明的固體劑型提供一種口腔粘膜過敏原藥物產品，其提供有效過敏原劑量，以劑量-反應方式給出過敏原特異性免疫應答，并且具有可接受的副作用。
更進一步地發現制備含過敏原的低脆性的非壓制快速分散固體劑型的實際可能性。該劑型足夠堅固，在患者使用時不會釋放危險量的殘余物。
此外，驚奇地發現這些制劑在室溫下是穩定的。
過敏原在含水環境中會不同程度地特別易于降解，例如在過敏原水溶液或水含量高和/或水分活性高的產品中。
歐洲藥典關于過敏原產品的專題論述和“Note for guidance onallergen products”，CPMP(London 13，March 1996)規定，對于冷凍干燥的產品(即裝在小瓶中的過敏原提取物)，水分含量應當不超過5％，而且這些產品應當冷凍貯存(-20℃)。冷藏(2-8℃)也是對保質期有限的液基舌下制劑的要求。已經驚奇地發現，包括不穩定過敏原在內的過敏原在室溫條件下是穩定的。甚至是水含量高于規定的5％的最大水平的本發明劑型在室溫下也是穩定的。不受理論約束，這可以由以下事實解釋快速分散固體劑型的賦形劑結合劑型中的殘余水并降低過敏原固體劑型的水分活性。因此，通過降低制劑的水分活性，可能得到過敏原無降解的穩定制劑，即使水含量高于對小瓶裝的過敏原提取物規定的最大水平5％也是可能的。
水分活性是對產品保質期有影響的一個重要因素。眾所周知，產品的水分活性影響細菌的生長以及藥品的穩定性、效價和一致性。由于蛋白質相對脆弱的性質，它的穩定性也受水分活性顯著影響。大多數蛋白質必須維持構象以保持活性。維持低的水分活性水平有助于防止或誘發構象變化，而這對于確保過敏原形式的蛋白質穩定是重要的。無論是否由酶引起，蛋白質水解降解也受水分活性影響。
進一步地認為，水含量將影響固體劑型的機械強度。通常，高值將增加固體劑型變得更容易潮解的危險，而較低值將影響固體劑型的堅固性，例如，固體劑型變得更加脆而易碎。
采用本領域技術人員已知的方法進行水分活性測定，例如冷鏡露點技術，用改變電阻或電容的感應器測定相對濕度或采用氯化鋰電極。
固體劑型的水分活性優選不超過0.70，并且優選在0.1-0.7之間，更優選0.2-0.6，更優選的是在0.3-0.5之間以及最優選的是在0.4-0.5之間。
根據如實施例1所述的方法測定的固體劑型的水含量優選不超過25％，優選0.1-20％，更優選的是在0.5-15％之間，更優選的是在2-8％之間，更優選的是在4-7％之間，最優選的是在4.5-6％之間的水。
根據本發明的一個實施方案提供了快速分散固體劑型的過敏原藥物產品，它在口腔中與唾液接觸迅速溶解，因此使過敏原緊密接觸粘膜的免疫相關組織并使過敏原解決這些問題。天然存在的過敏原的例子包括花粉過敏原(樹，藥草，雜草和草花粉過敏原)，昆蟲過敏原(吸入性，唾液和毒液過敏原，例如螨過敏原，蟑螂和蠓過敏原，膜翅目昆蟲毒液過敏原)，動物毛發和皮屑過敏原(來自如狗，貓，馬，大鼠，小鼠等)以及食物過敏原。來自樹，草和藥草的重要花粉過敏原是諸如源自山毛櫸目，木樨科，松目和懸鈴木科的分類目，包括例如白樺(樺屬)，榿木(榿木屬)，鵝耳櫪(鵝耳櫪屬)和橄欖(橄欖屬)，雪松(日本柳杉和檜屬)，懸鈴樹(懸鈴屬)，禾本科的目，包括例如以下屬的草黑麥草屬，梯牧草屬，早熟禾屬，狗牙根屬，鴨茅屬，絨毛草屬，墻草屬，黑麥屬和高粱屬，Astrales和蕁麻目的目包括例如以下屬的藥草豚草屬，蒿屬和墻草屬。其他重要的吸入過敏原是那些來自塵螨屬和埋內歐塵螨的屋塵螨，儲藏螨例如害嗜鱗螨，食甜螨屬和食酪螨屬，那些來自蟑螂，蠓和蚤例如蠊，大蠊屬，搖蚊和貓櫛首蚤貓亞種，和那些來自哺乳動物例如貓(貓屬)，狗(犬屬)，牛(牛屬)和馬(馬屬)的過敏原，毒液過敏原包括例如源自蜇或叮咬的昆蟲例如按膜翅目昆蟲分類目的那些，包括蜜蜂(蜜蜂總科)，黃蜂(胡蜂總科)和螞蟻(螞蟻總科)。來自真菌的重要吸入過敏原是例如那些源自鏈格孢屬和支孢霉屬的過敏原。
在本發明更優選的實施方案中，過敏原是Betv1，Alng1，Cora1and Carb1，Quea1，Cryj1，Cryj2，Cupa1，Cups1，Juna1，Juna2，juna3，Olee1，Ligv1，PlaI1，Plaa2，Amba1，Amba2，Ambt5，Artv1，Artv 2Parj1，Parj2，Parj3，Salk1，Avee1，Cynd1，Cynd7，Dacg1，Fesp1，HolI1，Lolp1和5，Pha a1，Pasn1，Phlp1，Phlp5，Phlp6，Poap1，Poap5，Secc1，Secc5，Sorh1，Derf1，Derf2，Derp1，Derp2，，Derp7，Derm1，Eurm2，Glyd1，Lepd2，Blot1，Tyrp2，Blag1，Blag2，Pera1，Feld1，Canf1，Canf2，Bosd2，Equc1，Equc2，Equc3，Musm1，Ratn1，Apism 1，Apim2，Vesv1，Vesv2，Vesv5，Dolm1，Dolm2，Dolm5，Pola1，Pola2，Pola 5，Soli1，Soli2，Soli3和Soli4，Alta1，Clah1，Aspf1，Bosd4，Mald1，Glym1，Glym2，Glym3，Arah1，Arah2，Arah3，Arah4，Arah5或者這些中任何的源自分子育種的改組(shufflant)雜種(Maxygen有限公司)在本發明最優選的實施方案中，過敏原是草花粉過敏原或塵螨過敏原或豚草屬過敏原或雪松花粉或貓過敏原或白樺過敏原。
在本發明的另一個實施方案中，快速分散固體劑型含至少兩種不同類型的過敏原，其源于相同的過敏原來源，或源于不同的過敏原來源。例如快速分散固體劑型包含草組1，草組2/3，草組5和草組6過敏原或者螨組1和組2過敏原，分別來自不同的螨和草種類，雜草過敏原如短小和巨大豚草屬過敏原，不同的真菌過敏原如鏈格孢屬和支孢霉屬，樹過敏原如白樺，榛，角樹，櫟屬和榿木屬過敏原，食物過敏原如花生，大豆和牛奶過敏原。
摻入快速分散固體劑型的過敏原可以是提取物，純化過敏原，修飾過敏原，重組過敏原或重組過敏原突變體的形式。過敏原提取物可以天然含有相同過敏原的一個或多個同種型，而重組過敏原典型地僅代表一個過敏原同種型。在一個優選的實施方案中過敏原是提取物的形式。另一個優選的實施方案中過敏原是重組過敏原。又一個優選的實施方案中過敏原是天然存在的低IgE結合突變體或重組的低IgE結合突變體。
過敏原可以以等摩爾量存在或者存在的過敏原的比例可以變化，優選高至1∶20本發明又一個優選的實施方案中，低IgE結合過敏原是根據WO99/47680或WO 02/40676或PCT/DK03/00322(″過敏原突變體″)的過敏原。
幾種實驗室測定可用于表征過敏原。使用最廣泛的技術是十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，等電聚焦(IEF)，交叉免疫電泳法(CIE)和火箭免疫電泳法(RIE)。個體過敏原的定量可以采用多種定量免疫電泳技術(QIE)，放射免疫擴散(RIE)或者采用酶聯免疫吸附測定(ELISA)進行。總過敏原活性的測定最常用放射過敏原吸附測定(RAST)，Magic Lite測定(LIA)或相關技術進行。也可以使用基于ELISA的技術。
有關通常應用的測定生物效價的公認測定的指南可見例如Notefor Guidance on Allergen Product；The European Agency forthe Evaluation of Medicinal Product，CPMP_BWP_243_96，London，1996。
將過敏原分類為主要過敏原可以采用幾項測試。如果至少25％的患者表現強IgE結合(評分3)和50％的患者表現至少中度結合(評分2)，則該過敏原通常分類為主要過敏原；結合的測定通過CRIE(交叉放射免疫電泳法)(CRIE強結合，即在1天后在X-光片上可見IgE結合；CRIE中度結合，即在3天后結合；CRIE微弱結合，即在10天后結合)。至少10％的患者表現為IgE強結合，則該過敏原分類為中間過敏原；少于10％患者的表現出明顯特異性的結合，就將其分類為次要過敏原。也可以使用其它的方法測定IgE結合，例如IgE印跡法。
在經典的增加劑量脫敏法中，快速分散固體劑型形式的過敏原劑量增加到某個最大值。單位劑量劑型的優選效價從150-1,000,000SQ-U/劑型，更優選的效價是500-500,000SQ-U/劑型，更優選的效價是500-375,000SQ-U/劑型，更優選的效價是2500-375,000SQ-U/劑型，更優選的效價是2500-250,000SQ-U/劑型，更優選25,000-250,000SQ-U/劑型，更優選25,000-125,000SQ-U/劑型，更優選25,000-100,000SQ-U/劑型和最優選25,000-75,000SQ-U/劑型。
在本發明的另一個實施方案中固體劑型是重復的單一劑量，優選在2500-375,000SQ-U/劑型范圍之內，更優選2500-250,000SQ-U/劑型，更優選25,000-250,000SQ-U/劑型，更優選25,000-125,000SQ-U/劑型，甚至更優選25,000-100,000SQ-U/劑型，和最優選25,000-75,000SQ-U/劑型。
在一個特別優選的實施方案中固體劑型包含草過敏原提取物，其中效價是150-1,000,000SQ-U/劑型，更優選效價是500-500,000SQ-U/劑型，更優選的效價是500-375,000SQ-U/劑型，更優選的效價是2500-375,000SQ-U/劑型，更優選的效價是2500-250,000SQ-U/劑型，優選的效價是25,000-250,000SQ-U/劑型，更優選25,000-125,000SQ-U/劑型，更優選25,000-100,000SQ-U/劑型和最優選25,000-75,000SQ-U/劑型。
在又一個實施方案中本發明固體劑型的效價是約5-50,000BAU/劑型，更優選的效價是15-25,000BAU/劑型，更優選的效價是約15-17,600BAU/劑型，更優選的效價是約65-17,600BAU/劑型，更優選的效價是約65-15,000BAU/劑型，更優選的效價是約650-15,000BAU/劑型，更優選650-6,000BAU/劑型，更優選650-4,700BAU/劑型，最優選650-3,500BAU/劑型．在本發明的另一個實施方案中固體劑型是重復的單一劑量，優選在約65-17,600BAU/劑型的范圍之內，更優選約65-15,000BAU/劑型，更優選約650-15,000BAU/劑型，更優選650-6,000BAU/劑型，甚至更優選650-4,700BAU/劑型，最優選650-3,500BAU/劑型。
在一個特別優選的實施方案中固體劑型包含草過敏原提取物，其中效價是約5-50,000BAU/劑型，更優選的效價是15-25,000BAU/劑型，更優選的效價約15-17,600BAU/劑型，更優選的效價約65-17,600BAU/劑型，更優選的效價是約65-15,000BAU/劑型，更優選的效價約650-15,000BAU/劑型，更優選650-6,000BAU/劑型，更優選650-4,700BAU/劑型，最優選650-3,500BAU/劑型。
1mg過敏原提取物通常包含100,000-1,000,000SQ-單位。這意味著1,000,000SQ被包含在1mg提取物到10mg過敏原提取物中，100,000SQ被包含在0.1mg提取物到1mg過敏原提取物中。以相似的方式，任何SQ劑量都可以轉化為過敏原提取物劑量范圍。在這個基礎上，以SQ給出的上述劑量范圍可以被重新計算為mg或μg過敏原提取物的劑量范圍，其中對于范圍的SQ低限，采用相應過敏原提取物范圍的低限，而其中對于范圍的SQ上限，采用相應過敏原提取物范圍的上限。
因此，在又一個實施方案中本發明的固體劑型具有約0.15μg-10mg/劑型的過敏原提取物含量，更優選約0.5μg-5mg/劑型的過敏原提取物含量，更優選約0.5μg-3.75mg/劑型的過敏原提取物含量，更優選約2.5μg-3.75mg/劑型的過敏原提取物含量，更優選約25μg-2.5mg/劑型的過敏原提取物含量，更優選約25μg-2.5mg/劑型的過敏原提取物含量，更優選約25μg-1.25mg/劑型，甚至更優選約25μg-1mg/劑型，最優選約25μg-0.75mg/劑型。
在本發明的另一個實施方案中固體劑型是重復的單一劑量，優選在約2.5μg-3.75mg/劑型的范圍內，更優選2.5μg-2.5mg/劑型，更優選約25μg-2.5mg/劑型，更優選約1.5μg-1.25mg/劑型，甚至更優選約25μg-1mg/劑型，最優選約25μg-0.75mg/劑型．在又一個實施方案中，本發明的固體劑型具有的主要過敏原含量約0.015μg-1mg/劑型，更優選約0.05μg-500μg/劑型，更優選約0.05μg-375μg/劑型，更優選約0.25μg-375μg/劑型，更優選約0.25μg-250μg/劑型，更優選約2.5g-250μg/劑型，更優選約2.5μg-125μg/劑型，甚至更優選約2.5μg-100μg/劑型，最優選約2.5μg-75μg/劑型。
在本發明的另一個實施方案中固體劑型是重復的單一劑量，優選在約0.25μg-375μg/劑型的范圍內，更優選約0.25μg-250μg/劑型，更優選約2.5g-250μg/劑型，更優選約2.5μg-125μg/劑型，甚至更優選約2.5g-100μg/劑型，最優選約2.5g-75μg/劑型。
取決于所討論過敏原來源，幾個主要過敏原可以構成主要過敏原含量。通常主要過敏原的數目是在1-10，大多數為1-5。
主要過敏原可以被包含在過敏原提取物中或被重組制備。重組主要過敏原的用量可以與包含這種主要過敏原的過敏原提取物中的相同或以更高劑量。更高劑量被認為更有效，但也被認為伴有潛在更頻繁或更嚴重的副作用的危險。
在又一個優選的實施方案中主要過敏原包括草組1過敏原例如phlp1，lolp1，sorh1，dacg1，cynd1，hol11，phaa1，草組2/3過敏原例如.phlp2/3，lolp 2/3，草組5過敏原例如phlp5，lolp5，dacg5，poap5，草組6過敏原例如phlp6，poap6，樹花粉組1過敏原例如betv1，alng1，cora1，carb1，螨組1過敏原例如derp1，derf1，eurm1，螨組2過敏原例如derp2，derf2，eur m2，貓過敏原例如feld1，雪松組1和組2過敏原例如cryj1，cryj2，短小和巨大豚草屬花粉過敏原例如amba1，amba2，amb1，ambt2。
發現劑量反應效應，參見口腔粘膜給藥的固體過敏原劑型的實施例6。因為過敏個體是不均一的一類，當他們接觸到即使同一過敏原時也表現出不同的癥狀以及其癥狀嚴重程度的不同，因此有效劑量可能變化。一些患者可以耐受更大劑量而沒有出現不能接受的副作用，而其他的人高度敏感。在一些情況中可以給予逐步升高的劑量以達到高劑量水平，因為通常相信更大的劑量被認為是更有效的劑量。據信對于大多數一般過敏人群而言，本發明的過敏原有效劑量將優選在65BAU/固體劑型-17,600BAU/固體劑型之間，但低至4和高至47,000BAU的劑量可能適用于其它過敏癥患者。關于這個同樣地，過敏原提取物0.5μg-3.75mg/劑型的劑量或者主要過敏原含量0.05μg-375μg/劑型的劑量可以適合普通的過敏癥個體。
對于主要過敏原的低過敏原性變體，即引起速發或遲發過敏反應的能力降低的過敏原，本發明的劑型優選每劑型含10-100倍更多的主要過敏原。這種低過敏原性變體可以是重組或天然來源的。
本發明的固體劑型的過敏原含量可以采用常規的免疫測定法測定，例如CIE(交叉免疫電泳法)，RIE(放射免疫電泳法)和SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)和針對提取物成分如主要過敏原的免疫測定法例如ELISA和Magic Like特異性IgE測定(LIA)。
為了確保最終產品足夠的保質期，優選在制備以后在物理和化學特性例如過敏原的效價和含量，機械堅固性和感官特性方面不顯著改變的劑型。
為了本發明的目的，藉由主要過敏原含量評價活性成分即過敏原的穩定性。進一步地還優選通過過敏原效價檢測如總過敏原活性來評估穩定性。
固體劑型的“最初過敏原活性”或“至少一種主要過敏原的最初含量”表示在制備工藝結束后最終劑型中“過敏原活性”或“至少一種主要過敏原的含量”的值。
固體劑型的“理論過敏原活性”或“至少一種主要過敏原的理論含量”表示在被制成固體劑型之前，一劑加入過敏原(例如以提取物的形式)的“過敏原活性”或“至少一種主要過敏原的含量”的值。
至少一種主要過敏原的過敏原含量損失優選少于總最初含量的50％，更優選少于總最初含量的30％，更優選少于總最初含量的20％，更優選少于最初含量的15％，更優選少于最初含量的10％，更優選少于最初含量的5％，更優選少于最初含量的2％。
更進一步地根據實施例1中所述方法總過敏原活性損失應當優選少于總最初活性的50％，更優選少于總最初活性的30％，更優選少于總最初活性的20％，更優選少于總最初活性的15％。
通常，根據ICH(例如ICH指南ICQ/Q1AR2(被CPMP采用，2003年三月，出版號CPMP/ICH/2736/99))和FDA的現行指南進行穩定性測試。穩定性測試的條件經常稱為1-4區條件。1和2區代表EC，日本和美國的氣候條件。通常，本發明的固體劑型在其最終容器中應在“長期”條件25℃/60RH下優選保持穩定至少3個月，更優選至少6個月，更優選至少12個月，甚至更優選至少18個月，最優選至少2年，更優選在中間條件30℃/65RH下，甚至更優選在“加速條件”40℃/75RH下。
為了確保固體劑型在貯藏過程中和患者使用時足夠堅固，劑型需要對外力具有某種抗性，但同時固體劑型必需在口中快速崩解。
因此，除了活性成分即過敏原的穩定性外，還可通過其它參數評估固體劑型，例如機械堅固性如脆性，抗張強度和破碎最大負荷。另外，固體劑型的穩定性可以通過物理特性如分散時間和感官特性如劑型的視覺外觀進行評估。
可以通過例如測定本發明固體劑型的破碎最大負荷或抗張強度來評估這些參數。由可計算抗張強度的公式中明顯看出，所獲得的抗張強度值取決于許多可變化的參數。例如，固體劑型的厚度或直徑將引起數值的變化。因此，破碎最大負荷被認為是評價本發明的固體劑量單位堅固性的更準確參數。
在一個實施方案中固體劑型的破碎最大負荷不小于0.05Kgf并低于0.9KgF.優選破碎最大負荷在0.05-0.9KgF之間的劑型，更優選在0.1-0.8KgF之間，最優選在0.1-0.6KgF之間。
在本發明又一個實施方案中固體劑型的抗張強度小于1.0N/mm2，更優選低于0.9N/mm2。
為了確保在吞咽前過敏原最大限度地暴露于粘膜的免疫有效組織，優選地，快速分散劑型與唾液接觸后在口中瞬間或快速崩解。在優選的實施方案中固體劑型在少于約90秒內崩解，優選在少于約60秒內，優選在少于約30秒內，更優選在少于約20秒內，更優選在少于約15秒內，甚至更優選在口腔中少于約10秒內，甚至更優選少于約5秒內，最優選在口腔少于約2秒內。
在本發明的優選實施方案中，本發明的組合物是含固體網狀結構的過敏原和任何水溶性或水分散性基質的快速分散固體劑型。通過從固體狀態的組合物升華溶劑而得到網狀結構，所述組合物含過敏原溶液和基質。更優選地，通過凍干而獲得網狀結構。
構成本發明的快速分散固體劑型中部分基質的藥學上可接受賦形劑是基質形成劑和其它適宜的賦形劑例如抗酸劑，稀釋劑，增強劑，粘膜粘著劑，增香劑，矯味劑，防腐劑，抗氧化劑，表面活性劑，粘性增強劑，著色劑，pH調節劑，甜味劑等。這些賦形劑都以配制過敏原治療劑領域的技術人員所了解的方式按照常規藥學實踐來選擇。
本發明適用的基質形成劑包括源自動物或植物蛋白質的賦形劑，例如明膠，糊精和大豆，小麥和亞麻籽蛋白質；樹膠如阿拉伯膠，瓜爾膠，瓊脂和黃原膠；多糖；淀粉和改性淀粉，alignates；羧甲基纖維素；角叉菜膠；右旋糖酐；果膠；合成聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；和多肽/蛋白質或多糖復合物例如明膠-阿拉伯膠復合物。明膠是水溶性膠體大分子的非均勻混合物。可以通過對諸如骨，皮膚，腱，韌帶等動物來源的富含膠原材料的水解作用得到平均分子量分布的非均勻混合物。明膠可以源自哺乳動物例如牛，豬或非哺乳動物例如溫水或冷水魚。明膠可以是水解或非水解的，交聯或非交聯的。它們可進一步是膠凝或非膠凝型，非凝膠型典型地源自于冷水魚。在另一個特別的實施方案中采用淀粉。淀粉是糖類聚合物的復雜混合物。
適用于本發明的其它基質形成劑包括糖類如甘露醇，右旋糖，半乳糖和海藻糖；環狀糖例如環糊精；無機鹽例如磷酸鈉，氯化鈉和硅酸鋁；以及具有2-12個碳原子的氨基酸例如甘氨酸，L-丙氨酸，L-天冬氨酸，L-谷氨酸，L-羥脯氨酸，L-異亮氨酸，L-亮氨酸和L-苯丙氨酸。
固體劑型優選包含至少約50％W/W的配料溶液的至少一種基質形成劑。在此文中所用的術語“配料溶液”表示在固化步驟前所制備的基質形成劑、過敏原和其它任選賦形劑的制劑的非固體體積。
在本發明的一個實施方案中，用于形成固體劑型的配料溶液包含約5-30％W/W，更優選約5-20％W/W，甚至更優選在約5-12％W/W之間的至少一種基質形成劑。
對配料溶液干物質含量的需求也將取決于片劑的尺寸。優選本發明的固體劑型直徑在約3到約30mm之間，更優選在約5到約20mm之間。本發明的固體劑型優選重量在約1到約100mg之間，更優選在約10到約50mg之間，最優選在約25到約35mg之間。本發明的固體劑型優選厚度在約0.5到約7.5mm之間，更優選在約1到約5mm之間。
已經發現含魚明膠和甘露醇作基質形成賦形劑的快速分散固體劑型在穩定性，視覺外觀，低脆性，抗張強度，破碎最大負荷和口感方面特別有利。在優選的實施方案中快速分散固體劑型包含過敏原以及魚明膠和甘露醇形式的基質形成劑的固體網狀結構。為了獲得固體網狀結構，應當控制魚明膠與甘露醇的比。在一個優選的實施方案中魚明膠與甘露醇的比例是約2∶20到約20∶1，更優選從約2∶10到約10∶1，最優選約3∶5.5到約6.5∶3。
但又一個實施方案中魚明膠與甘露醇的比例是4∶3。
在另一個實施方案中魚明膠與甘露醇的比例是6.5∶5.5。
在又一個實施方案中魚明膠與甘露醇的比例是6.0∶5.08。
本發明的固體劑型可以由配料溶液制備，首先將其冷凍，然后冷凍干燥。在優選的實施方案中魚明膠含量為配料溶液的約2-20％W/W之間，而甘露醇的含量為配料溶液的約1-20％W/W之間。在另一個優選的實施方案中魚明膠的含量為配料溶液的約2-10％W/W之間，而甘露醇的含量為配料溶液的約1-10％W/W之間。在另一個更優選的實施方案中魚明膠的含量為配料溶液的約3-6.5％W/W之間，而甘露醇含量為配料溶液的約3-5.5％W/W之間。
在又一個實施方案中基質包含占配料溶液約4％W/W的魚明膠和占配料溶液約3％W/W的甘露醇。
在另一個實施方案中基質含占配料溶液約6.5％W/W的魚明膠和占配料溶液約5.5％W/W的甘露醇。
在又一個實施方案中基質含占配料溶液6.0％W/W的魚明膠和占配料溶液5.08％W/W的甘露醇。
還已經發現含淀粉和甘露醇作為基質形成賦形劑的快速分散固體劑型在穩定性，視覺外觀，低脆性，抗張強度，破碎最大負荷和口感方面特別有利。在優選的實施方案中快速分散固體劑型包含過敏原和基質形成劑的固體網狀結構，所述基質形成劑為淀粉和甘露醇形式，淀粉優選從例如馬鈴薯，小麥，玉米，谷物或稻米預糊化。為了獲得固體網狀結構，應當控制淀粉與甘露醇的比例。在一個優選的實施方案中淀粉與甘露醇的比例是約2∶20到約20∶1，更優選從約2∶10到約10∶1，最優選約3∶5.5到約6.5∶3。
但又一個實施方案中淀粉與甘露醇的比例是1∶1。
由配料溶液制備本發明的固體劑型，首先將其冷凍，隨后冷凍干燥。在優選的實施方案中淀粉的含量為配料溶液的約2-20％W/W之間，而甘露醇的含量為配料溶液的約1-20％W/W之間。在另一個優選的實施方案中淀粉的含量為配料溶液的約2-10％W/W之間，而甘露醇的含量為配料溶液的約1-10％W/W之間。在又一個優選的實施方案中淀粉的含量為配料溶液的約3-6.5％W/W之間，而甘露醇為配料溶液的約3-5.5％W/W之間。
在另一個實施方案中基質含有占配料溶液約4.4％W/W的淀粉和占配料溶液約4.4％W/W的甘露醇。
為避免過敏原的變性，沉淀并確保穩定的產品，優選在含過敏原和基質的溶液固化之前調節pH。對溶液中不同過敏原的最適宜pH幾乎跨越整個pH范圍，如同它們的等電點(pI)那樣。過敏原混合物像提取物同樣地具有對溶解性和穩定性而言最適宜的pH，其由類似提取物中各過敏原濃度之類的因素所決定。因此可以想對本發明制劑個別單獨確定可行的pH范圍。通過對不同pH的制劑進行加速穩定性研究來確定對所討論過敏原的最適宜pH。
優選地，包含過敏原提取物的基質組合物應當調節pH在3.5-10之間，更優選4-9，最優選6-9。
此外本領域公知，，離子強度可以是影響冷凍干燥的固體劑型的穩定性的參數，主要通過其對冷凍干燥工藝的影響。也已知高離子強度影響沉淀。因此，必須采用本領域技術人員公知的測定方法建立最適宜的離子強度。優選地，10μg/ml的提取物的離子強度在1-1500μS/cm之間(S＝Simens)，更優選300-800μS/cm，最優選約500μS/cm，對于含基質和過敏原的系統，優選離子強度在1-2000μS/cm，更優選約500-1500μS/cm。
本發明的固體劑型可以更進一步含有著色劑，增香劑，pH調節劑或矯味劑。適宜的著色劑包括紅色，黑色和黃色氧化鐵以及FD&C染劑例如FD&C藍No.2和FD&C紅色No.40。適宜的增香劑包括薄荷，覆盆子，甘草，橙，檸檬，葡萄柚，焦糖，香草，櫻桃和葡萄香料以及其組合。適宜的pH調節劑包括檸檬酸，酒石酸，磷酸，鹽酸和馬來酸。適宜的甜味劑包括天冬酰苯丙氨酸甲酯，乙酰舒泛K和竹芋蛋白。適宜的矯味劑包括碳酸氫鈉，離子交換樹脂，環糊精包合物，吸附物或微囊化活性劑。
通常佐劑被用于增強過敏原的吸收以及增強過敏原的免疫刺激性。
在本發明另一個優選的具體實施方案中，本發明的快速分散固體劑型不含佐劑。
同樣驚奇地發現，不必向快速分散固體劑型中引入佐劑以增強所討論過敏原的免疫刺激性。換句話說，如實施例6所例證，在此所述的固體劑型可以產生特異性免疫應答。
在本發明的一個實施方案中至少一種佐劑被引入本發明的劑型內。適宜佐劑的例子是鋁鹽，諸如Alhydrogel的氫氧化鋁，無毒細菌碎片，細胞因子，霍亂毒素(及其脫毒部分)，霍亂毒素亞單位b，殼聚糖，大腸桿菌的同源熱不穩定片段(及其脫毒部分)，皂甙，細菌產物例如脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP)，脂質體，CpG(免疫刺激性DNA序列)，微粒聚合物形式的丙交酯/乙交酯同±共聚物等。所討論的過敏原不能穿透要穿過的屏障這一事實經常作為理由以在過敏原藥物產品例如疫苗中使用佐劑。因此佐劑可以用作吸收增強劑或它們可以充當免疫刺激劑。然而佐劑的使用可能會有嚴重的缺點，例如免疫應答多種機制的非預期刺激作用，系統性紅斑狼瘡或影響粘膜的屏障能力因而讓有害物質通過。此外，從工業的角度來看，除有關藥品注冊的大量文件要求以外，添加佐劑還構成進一步的制造和材料成本。
非壓制快速分散的固體劑型某種程度上可以是粘膜粘著性的。然而在本發明優選的實施方案中，為增加劑型與口腔粘膜的接觸時間，向所述劑型中進一步加入粘膜粘著賦形劑可能是必要的。適宜的粘膜粘著賦形劑是聚丙烯酸聚合物例如卡波姆和卡波姆衍生物；纖維素衍生物例如羥丙基甲基纖維素，羥乙基纖維素，羥丙基纖維素和羧甲基纖維素鈉；天然聚合物例如明膠，藻酸鈉，果膠和甘油。
在本發明又一個實施方案中，為了有足夠的接觸時間用于例如在口腔粘膜吸收，溶解在唾液中的過敏原劑型直到給藥后3分鐘才被吞咽。
在又一個優選實施方案中，過敏原劑型在口腔中不被稀釋，例如通過攝入類似水的液體，直到5分鐘后。
過敏癥治療也存在不良事件或副作用。特別是，旨在調節致敏個體中正在進行的反應的治療可能引起在給予過敏原后誘發副作用的危險。通常觀察到的與口腔粘膜治療有關的副作用據報道發生在眼，鼻，口，上下氣道中而且取決程度可接受。最常見的是癢現象。不良反應例如過敏性休克、上下氣道腫脹、呼吸困難、血壓下降、心臟停搏是不能被接受的。
本發明的快速分散固體劑型可以被制造和包裝在含多個固體劑型的一次性容器例如多劑量容器中。在美國專利Nos.5,729,958和5,343,762中所述的方法和材料特別受青睞。適宜的多劑量容器的例子是全鋁泡罩式包裝，由聚合物例如聚丙烯制成的泡罩式包裝，PVC的泡罩式包裝和由PVC/PVdC薄片制成的泡罩，用例如層壓至砑光牛皮紙的鋁箔密封，Aclar或Triplex。
在一個實施方案中，快速分散劑型被制造和包裝由PVC/PVdC薄片制成、用層壓至砑光牛皮紙的鋁箔密封的泡罩式包裝中。在另一個關于此的實施方案中泡罩式包裝包在適宜大小的鋁袋中，鋁袋由層壓至砑光牛皮紙的鋁箔制成。
在另一個實施方案中快速分散劑型包裝在由鋁制成并用層壓至砑光牛皮紙的鋁箔密封的泡罩式包裝中。
在又一個實施方案中快速分散劑型被包裝在由例如五層鋁箔制成并用層壓至砑光牛皮紙的鋁箔密封的多層泡罩式包裝中。
在另一個實施方案中，快速分散劑型被包裝在由鋁箔制成并用層壓至砑光牛皮紙的鋁箔密封的泡罩式包裝中，其包裝方式使兒童難以打開泡罩式包裝，例如兒童安全包裝。
因為這種非壓制劑型的固有性質，通常這種類型的固體劑型表現出與壓制片劑相比低機械強度的特點。這可能導致在從泡罩囊中取出時和在患者使用劑型的過程中釋放含過敏原的殘余微粒。在多數情況下這是無關緊要的，或主要是美觀的問題。然而，當活性成分是過敏原時這是特別有害的，因為低量的過敏原可以在有傾向的人身上引發過敏反應或使先前非致敏的個體敏化。通常接觸為對例如花粉過敏原或塵螨過敏原累積的主要過敏原蛋白質10μg/年的范圍，其足以導致致敏或癥狀。
在操作固體劑型時，過敏原可能接觸到如氣道或眼睛的靶器官并在過敏的人中引起反應。一個劑型可能含的過敏原和人在一年或更長時間所接觸到的一樣多，取決于接觸的性質。采用結膜過敏原攻擊可以引起過敏癥患者的眼睛癥狀。基于這樣的攻擊研究，可以估計引起結膜癥狀需要多少過敏原提取物。在患有嚴重的草花粉引起的花粉熱的患者群體中，提出引起結膜癥狀的草花粉提取物的最低劑量是3000SQ-U/ml×0.05ml＝150SQ-U(中值)(S.R.Durham，S.M.Walker，E.M.Varga，M.R.Jacobson，F.O′Brien，W.Noble，S.J.Till，Q.A.Hamid，和K.T.Nouri-Aria.Long-term clinical efficacyof grass-pollen immunotherapy.N.Engl.J.Med.341(7)468-475，1999)。
為了確保在打開多劑量容器時來自固體劑型的含過敏原的殘余物不釋放到環境中，重要的是劑型的脆性盡可能地低，而不影響口服給藥后過敏原從劑型的釋放。
因此，在一個實施方案中，在人工處理的過程中可從每一固體劑型中釋放少于約500SQ-U，更優選少于約250SQ-U，更優選少于約150SQ-U，更優選少于約75SQ-U，更優選少于約25SQ-U，最優選少于約10SQ-U。
在另一個實施方案中，在人工處理的過程中可從每一固體劑型中釋放少于約13BAU，更優選少于約7BAU，最優選少于約5BAU，更優選少于約1.95BAU，更優選少于約0.65BAU，最優選少于約0.26BAU。
在又一個實施方案中，在人工處理的過程中可從每一固體劑型中釋放少于約0.5μg過敏原提取物，更優選少于約0.25μg過敏原提取物，最優選少于約0.15μg過敏原提取物，更優選少于約0.075μg過敏原提取物，更優選少于約0.025μg過敏原提取物，最優選少于約0.01μg過敏原提取物。
在另一個實施方案中，在人工處理的過程中可從每一固體劑型中釋放少于約0.05μg主要過敏原，更優選少于約0.025μg主要過敏原，最優選少于約0.015μg主要過敏原，更優選少于約0.0075μg主要過敏原，更優選少于約0.0025μg主要過敏原，最優選少于約0.001μg主要過敏原。
在本發明的一個優選實施方案中，在取出劑型后多劑量容器中塵埃的殘余含量不超過總過敏原含量的約2％，更優選固體劑型總過敏原含量的約0.5％，更優選固體劑型總過敏原含量的約0.2％，最優選固體劑型總過敏原含量的約0.1％，更優選約0.01％，更優選約0.005％，，更優選固體劑型總過敏原含量的約0.003％，最優選固體劑型總過敏原含量的約0.001％在此所用的“脆性測試”應指測定固體劑型粉碎，破碎，成為粉末的容易程度的任何適宜的測試。用于本發明的適宜的脆性測試描述如下并包括歐洲藥典第三版(EP 3rd ed.)制藥技術操作2.9.7。通常片劑的脆性測試按照EP 3rd ed.2.9.7.和USP<1216>的描述進行，其中評估片重的損失作為完整劑型的參數。歐洲藥典第三版2.9.7的脆性測試使用直徑286mm和厚度約39mm的轉鼓。片劑的樣品放在100目篩上并使用風壓或軟刷去除任何松散的碎渣。稱重片劑，隨后放置在轉鼓內。在轉鼓內片劑被轉動100次。依照剛才所述，去除松散的碎渣并再次稱重片劑。然后結果表示為質量損失并計算為最初質量的百分比。按照USP<1216>，可以使用直徑在283-291mm之間，厚度在36-40mm之間，轉速為25±1rpm的轉鼓。相應地，采用這樣的方法可以通過肉眼檢查和測定片重評估當前劑型的完整性。或者，由于本發明的劑型重量輕，可以采用對所討論的過敏原特異性的免疫測定法代替稱重。
已經發現使用改良脆性測試是有用的工具來評價哪種組合物就堅固性和機械強度而言是最穩定的。
在一個實施方案中，在任何對待測組合物施加足夠外力的合適的脆性測試中，測定為過敏原釋放量的所述固體劑型的脆性少于約500SQ-U每固體劑型，更優選少于約250SQ-U每固體劑型，更優選少于約150SQ-U每固體劑型，更優選少于約75SQ-U每固體劑型，更優選少于約50SQ-U每固體劑型，更優選少于約25SQ-U每固體劑型，最優選少于約10SQ-U每固體劑型。
在更優選的實施方案中，在按照歐洲藥典第三版所進行的脆性測試中，作為過敏原釋放量所測定的脆性是少于約500SQ-U每固體劑型，更優選少于約250SQ-U每固體劑型，更優選少于約150SQ-U每固體劑型，更優選少于約75SQ-U每固體劑型，更優選少于約50SQ-U每固體劑型，更優選少于約25SQ-U每固體劑型，最優選少于約10SQ-U每固體劑型。
在甚至更優選的實施方案中，采用包括下列步驟的方法，作為過敏原釋放量所測定的脆性少于約500SQ-U每固體劑型，更優選少于約250SQ-U每固體劑型，更優選少于約150SQ-U每固體劑型，更優選少于約75SQ-U每固體劑型，更優選少于約50SQ-U每固體劑型，更優選少于約25SQ-U每固體劑型，最優選少于約10SQ-U每固體劑型a)將各自包含固體劑型的各個密封泡罩置于適合脆性測定的裝置中；b)以適當的速度移動包含固體劑型的密封泡罩持續恰當的時間；c)取出包含固體劑型的密封泡罩；d)打開泡罩并將固體劑型和任何殘余物置于容器中；
e)從容器中取出固體劑型單位，將任何松散的殘余物留在所述容器中；f)對所述殘余物進行過敏原特異性測定，測定所述殘余物中的過敏原含量；和g)任選地計算所述殘余物中的過敏原含量占固體劑型單位的總過敏原含量的百分比。
在另一個實施方案中，采用包括下列步驟的方法，作為過敏原釋放量所測定的所述固體劑型的脆性是在人工處理過程中少于約0.5μg過敏原提取物每固體劑型，更優選少于約0.25μg過敏原提取物每固體劑型，更優選少于約0.15μg過敏原提取物每固體劑型，更優選少于約0.075μg過敏原提取物每固體劑型，更優選少于約0.025μg過敏原提取物每固體劑型，最優選少于約0.01μg過敏原提取物每固體劑型a)將各自包含固體劑型的各個密封泡罩置于適合脆性測定的裝置中；b)以適當的速度移動包含固體劑型的密封泡罩持續恰當的時間；c)取出包含固體劑型的密封泡罩；d)打開泡罩并將固體劑型和任何殘余物置于容器中；e)從容器中取出固體劑型單位，將任何松散的殘余物留在所述容器中；f)對所述殘余物進行過敏原特異性測定，測定所述殘余物中的過敏原含量；和g)任選地計算所述殘余物中的過敏原提取物含量占固體劑型單位的總過敏原提取物含量的百分比。
在另一個實施例中，采用包括下列步驟的方法，作為過敏原釋放量所測定的脆性少于0.05μg主要過敏原，更優選少于0.025μg主要過敏原，更優選少于約0.015μg主要過敏原每固體劑型，更優選少于約0.0075μg主要過敏原每固體劑型，更優選少于約0.0025μg主要過敏原每固體劑型，最優選少于約0.001μg主要過敏原每固體劑型
a)將各自包含固體劑型的各個密封泡罩置于適合脆性測定的裝置中；b)以適當的速度移動包含固體劑型的密封泡罩持續恰當的時間；c)取出包含固體劑型的密封泡罩；d)打開泡罩并將固體劑型和任何殘余物置于容器中；e)從容器中取出固體劑型單位，將任何松散的殘余物留在所述容器中；f)對所述殘余物進行過敏原特異性測定，測定所述殘余物中至少一種主要過敏原的主要過敏原含量；和g)任選地計算所述殘余物中至少所述主要過敏原占固體劑型單位的總主要過敏原含量的百分比。
在另一個優選的方法實施方案中在步驟a)中采用1-100個包含固體劑型的泡罩和如歐洲藥典V.2.9.7所述的脆性測定裝置，在步驟b)中固體劑型以25±1rpm旋轉100轉，和在步驟f)中過敏原特異性測定是免疫化學過敏原特異性測定。
在測定脆性方法的又一個優選實施方案中，采用ELISA測定法測定過敏原含量。
此外，口服劑型必須具有吸引人的外觀。因此，作為質量控制的一部分，本發明的快速分散固體劑型優選地經肉眼檢查例如顏色，外形，不規則度和缺損。
為了確保患者最佳的依從性，還可以測試劑型的口感。例如，當劑型放入口中并讓其崩解的時候，患者對該劑型的感覺是令人愉悅的。
因為過敏原對過敏癥患者而言非常具有生物效力，即即使小量也可引發反應，因此在治療過程中含量均一性是重要的參數，以確保例如在服用相同劑量時患者所經歷的模式是可重復的。優選地，在多劑量容器內的單位的過敏原含量變化與設定劑量相比在±10％之內，優選±7％之內，最優選在±5％之內。
多劑量容器可以包含任何可想得到的數目的快速分散固體劑型。優選固體過敏原劑型按組包裝和使用。以液體混合物的形式分散到單個容器中，然后去除水，來包裝單個固體劑型。可以在更大片板上排列多個泡罩并將多個片板包裝在一起銷售。例如，諸如泡罩式包裝的容器可包含多個固體劑型，優選1-100個固體劑型，更優選1-35個，最優選每個泡罩式包裝1-10個固體劑型。另一個實施方案使得制造、分配和貯存更為經濟，通過使用多個泡罩式包裝，其可以例如提供2，3，4，5，6或更多用于單一目的療程使用。這種特定包裝方案特別用于單一劑量的治療，并因如此處所述缺乏提高劑量步驟的給藥方案而成為可能。。
另一個實施方案提供了用于治療過敏癥或緩解過敏癥狀的治療包裝。該治療包裝包括多個劑量固體劑型的密封包裝，其中每個劑型包含有效量的過敏原。該治療包裝可以包含例如至少2，4，6，7，10，14，30，60，90，100，120，200，240或更多固體劑型。該治療包裝可以包含用于整個治療的足夠的劑型，或足以用于治療的一部分。有利的是該治療包裝包含至少一個月的單位劑量供應。
在本發明另一個有利的實施方案中，治療包裝的所有固體劑型都包含相同的過敏原劑量，因此免除了制備、分配和貯藏多個劑量單位用于治療個體單一過敏癥的必要。
含治療包裝的試劑盒還可以包含有關固體劑型使用的說明書。說明書可以包括警告，劑量方案說明，或對于使用者有價值的任何其它信息。說明書實體上可以包括例如單獨的說明書小冊子，一張紙，一份告示，和/或一份或多份印在容器例如裝有單位劑量的包裝盒上的布告。提供的說明書也可以是光盤或其它計算機可讀介質或錄像帶。
最理想的是，通過原位工藝過程除去可含有水和/或其它有機溶劑并且快速分散的懸浮和/或溶劑化液體而由液體混合物形成治療包裝的多個固體劑型。
在另一個實施方案中，治療包裝中的每個固體劑型都位于多泡罩式包裝中的單獨密封的泡罩內。
在又一個實施方案中，治療包裝的固體劑型包含明膠，更優選魚明膠。
但另一個實施方案中治療包裝的固體劑型還包含甘露醇。
在另一個治療包裝的實施方案中，固體劑型的有效量是約2.5μg-3.75mg提取物/固體劑型。
臨床過敏癥表現和癥狀有數種并可以根據致敏個體和所患過敏癥而變化。像水腫，瘙癢，發紅，流淚和流涕(鼻炎和結膜炎)的癥狀和上下氣道的癥狀像哮鳴，咳嗽，呼吸短促，皮膚病況像濕疹，蕁麻疹和瘙癢都是常見的。還可經歷其它癥狀如疲勞。對癥治療旨在減輕或影響癥狀嚴重程度或減少對其它平行給予的藥物的需求。對癥藥物包括抗組胺藥物例如H1和H2受體拮抗劑，鼻內和全身用皮質類固醇，非甾體抗炎藥物，鼻減充血劑例如腎上腺素受體激動劑。治療和緩解一種或多種過敏癥狀或減少對其它藥物的需求是本發明又一個目的。
過敏癥在包括人和動物例如狗和馬在內的哺乳動物中是一種廣泛普遍的疾病。因此，本發明又一個目的在于提供一種在哺乳動物中治療過敏癥或緩解過敏癥狀的方法，包括口腔粘膜給藥有效量的過敏原疫苗劑型，其包括(a)基質，和(b)在上述任何實施方案中的至少一種過敏原。
對特別是季節性過敏癥例如花粉熱的治療通常涉及與引起不適的過敏原的接觸存在或增加的一年中的某個特別時間。過敏原季節將隨過敏原來源例如花粉和在特定地域對過敏原來源的氣候條件而變化。因此，過敏原的季節將取決于氣候而在世界各個地方不同，但通常對于同一地域會落在年中相同的時期，隨那年的實際條件而變化(參見例如″Aerobiology and inhalant allergies″，Chapter 19，T.A.E.Platts-Mills&W.R.Solomon(Ed.S.Manning)1993，Mosby-YearBook，St.Louis)。技術人員熟知，在特定地區對特定過敏原通常預計季節開始的時間。
在本發明的一個實施方案中，提供的治療方法包括季節前的治療，即在過敏原季節前給予本發明的固體劑型。在一個特別優選的實施方案中，季節前治療期包括在過敏原季節前施用本發明的固體劑型超過2周，更優選4-20周，最優選8-12周。
本發明的另一個目的在于提供一種過敏癥或過敏癥狀的治療方法，包含口腔粘膜給藥有效量的過敏原疫苗劑型，其包括(a)基質，和(b)至少一種過敏原，還包括至少一種抗過敏藥物，例如在任何上述實施方案中的抗組胺藥和組胺合成抑制劑。優選這種抗過敏藥物包括溴基非尼拉敏，西替立嗪，非索那丁，賽庚啶，右氯苯那敏，羥嗪，酮保泰松，美喹他嗪，苯咪唑嗪，咪唑斯汀，依巴斯汀，阿司咪唑，卡比沙明，阿利馬嗪，布克利嗪，賽克利嗪，氫氯酸鹽，多西拉敏，曲托喹啉。
本發明還包括包含含過敏原和至少一種基質形成劑的非壓制快速分散固體劑型的藥物產品用于口腔粘膜治療過敏癥或緩解過敏癥狀的用途在本發明的另一個實施方案中，包含具有低脆性的穩定、快速分散、非壓制的過敏原固體劑型的藥物產品用于口腔粘膜治療過敏癥或過敏癥狀，所述固體劑型包含(a)基質，和(b)至少一種過敏原，還包含抗組胺藥。
另一個實施方案提供了治療過敏癥或緩解過敏癥狀的方法，包括提供一種a)治療包裝和b)重復口腔粘膜給藥治療包裝中的一個或多個劑型直至癥狀得到緩解。
又一個實施方案還提供了一種利用單一劑量完成整個過敏治療的治療方案，而不必提高劑量，即增加不同水平的過敏原，直至達到特定的劑量。此實施方案是有利的，對于單一治療不需要多個劑量用量，在劑型生產，分配和貯藏上簡化又經濟。此外，通過簡化治療過程，提高了患者的依從性，直接導致更大的臨床有效性。
本發明的另一個實施方案是含可口服給藥的固體劑型的藥物產品，所述固體劑型包含至少一種藥學可接受材料形成的基質，使人對所述過敏原脫敏的有效量過敏原，在25℃和60％相對濕度下保存三個月后所述劑型的過敏原含量為最初過敏原含量的至少約50％。優選地所述藥物是糖錠，片劑，膠囊或小膠囊的形式。
根據美國專利No.4,371,516所公開的工藝，可以采用升華工藝制備本發明的快速分散固體劑型。相應地，將過敏原和基質形成賦形劑的固化溶液進行升華。優選通過冷凍干燥溶液進行升華工藝。為了制備任何預期形狀的固體形式，在冷凍干燥步驟期間，溶液包含在多劑量容器的凹陷內。多劑量容器可以采用液氮或固態二氧化碳冷卻。冷凍步驟后在多劑量容器中的冷凍溶液經過減壓，并且如果期望，控制應用加熱以幫助溶劑升華。
本發明進一步地包括過敏原用于制備具有低脆性的穩定、快速分散、非壓制過敏原疫苗固體劑型的用途，所述固體劑型包括(a)基質，和(b)至少一種過敏原形式，用于治療過敏癥或緩解過敏癥狀。
在另一個實施方案中提供了制備適于口腔粘膜給藥、具有低脆性的快速分散非壓制固體穩定劑型的方法，該劑型包含至少一種基質形成劑和使個體對至少一種過敏原脫敏的有效劑量，所述方法包括如下步驟a)制備含所述至少一種過敏原和至少一種基質形成劑的水溶液，b)將溶液引入模具的一個或多個凹陷內，c)采用貯存溫度和室壓力的標準條件對裝填的片板進行冷凍和冷凍干燥以在每個凹陷中獲得所述固體劑型。
在另一個實施方案中提供了制備適于口腔粘膜給藥、具有低脆性的快速分散非壓制固體穩定劑型的方法，該劑型包含至少一種基質形成劑和使個體對至少一種過敏原脫敏的有效劑量，所述方法包括如下步驟a)制備含所述至少一種過敏原和至少一種基質形成劑的水溶液，b)將溶液引入層壓泡罩片板的一個或多個凹陷內，c)采用貯存溫度和室壓力的標準條件對裝填的片板進行冷凍和冷凍干燥以在每個凹陷中獲得所述固體劑型。
在優選的方法實施方案中，泡罩片板是全鋁泡罩片板。在特別優選的方法實施方案中，泡罩片板是多層全鋁的泡罩片板。
在另一個實施方案中提供了獲得包含適于口腔粘膜給藥的快速分散非壓制固體穩定劑型的藥物產品的方法，該劑型包含至少一種基質形成劑和使個體對至少一種過敏原脫敏的有效劑量，所述劑型具有低脆性，該方法包括1)制備穩定的快速分散非壓制固體劑型，2)采用包括下列步驟的測定法測定所述劑型的脆性，a)將各自包含固體劑型的各個密封泡罩置于適合脆性測定的裝置中；b)以適當的速度移動包含固體劑型的密封泡罩持續恰當的時間；c)取出包含固體劑型的密封泡罩；d)打開泡罩并將固體劑型和任何殘余物置于容器中；e)從容器中取出固體劑型單位，將任何松散的殘余物留在所述容器中；f)對所述殘余物進行過敏原特異性測定，測定所述殘余物中至少一種主要過敏原的主要過敏原含量；和g)計算所述殘余物中至少所述主要過敏原占固體劑型單位的總主要過敏原含量的百分比。
檢測劑型是否達到低脆性的要求，和3)重復1)和2)直到達到對劑型的要求口腔粘膜免疫治療可以被視為誘導耐受和誘導粘膜免疫的方法。口腔粘膜富含樹突細胞，其有著很強的抗原呈遞潛能。樹突細胞被認為可加工過敏原并隨后遷移到局部淋巴結，在其中它們將過敏原衍生的肽呈遞給過敏原特異性T細胞。在舌下免疫治療過程中，這種樹突細胞-T細胞相互作用被認為可誘導具有調節潛能的T細胞或增加過敏原特異性Th1細胞對過敏原特異性Th2細胞的比例。在過敏原接種過程中監測的多種免疫學參數，單獨或組合，可以作為治療作用或療效的合適標志。這些包括全身和粘膜抗體應答，例如特異性IgA，IgG和IgE抗體；在血液或粘膜分泌物中的細胞因子水平例如INFγ，IL-2，IL-4，IL-5，IL-10，IL-12和TNFα；激活，趨化，增殖，信號轉導，生成細胞因子以及調節T細胞，Th1細胞，TH2細胞，CD8細胞，其它T細胞亞群或B細胞或NK細胞的其它應答，以及細胞表面標志表達例如CD(分化簇)標志例如CD4，CD8，CD23，CD25，CD62L，CLA，β7，CCR9，CD69，CD45RO，CCR 3，CXCR5，效應細胞功能例如嗜堿性白細胞的總組胺含量；血液、組織和分泌物中嗜酸性白細胞、嗜堿性白細胞、淋巴細胞，單核細胞的數目；嗜酸性細胞、嗜堿性白細胞、淋巴細胞、單核細胞介質釋放，細胞因子產生，激活，趨化，增殖，信號轉導及其它應答。
在優選的實施方案中，本發明的疫苗的特征是可以發現一種或多種以下免疫學改變增加的過敏原特異性IgG應答，增加的過敏原特異性IgA應答，減少的過敏原特異性IgE應答，極少的局部副作用；嗜酸性白細胞，嗜堿性白細胞，淋巴細胞和/或單核細胞的過敏原特異性效應細胞應答減少；誘導具有調節潛能的T細胞，過敏原特異性Th1細胞相對于過敏原特異性Th2細胞的比例增大，誘導其它具有調節潛能的細胞，減少過敏原特異性Th2細胞應答。
過敏癥也是在動物特別是馴養動物和陪伴寵物中已知的疾病。本領域已知它們對于多種過敏原來源包括草，屋塵螨和寄生蟲會產生過敏癥。已知食血即吸血昆蟲侵染可導致稱為蚤變應性皮炎(FAD)的超敏反應。在本發明優選的實施方案中，動物疫苗的過敏原包括源自或轉移自寄生蟲例如體外寄生蟲(例如蚤，蜱，蚊，蠅)的過敏原，寄生蠕蟲毒液(象犬惡絲蟲例如惡絲蟲屬或盤尾絲蟲病例如盤尾絲蟲)和屋塵螨。更優選的是唾液過敏原，來自蚤，象櫛頭蚤屬例如犬屬櫛頭蚤和貓屬櫛頭蚤，硬蜱如硬蜱屬，花蜱，軟蜱如鈍緣蜱屬，和來自蠓如庫蠓屬。
實施例縮略詞API活性蛋白質成分ELISA酶聯免疫吸附測定DDT二硫蘇糖醇HRP辣根過氧化物酶
LIAMagic Lite特異性IgE測定LITE-試劑發光標記的抗IgEPMP順磁顆粒SDS-PAGE十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳TMB四甲基聯苯胺實施例1.含梯牧草(Phleum pratense)花粉提取物和魚明膠的過敏原疫苗組成表1

草提取物按照Ipsen和Lwensten(1983)Jour.Allergy.Clin.Immunol.722，150-159頁所述的方法制備草花粉提取物。簡言之，在5℃采用碳酸氫銨提取草花粉20小時。通過離心除去顆粒物質，用水透析上清(3次)，凍干并冷藏直至重構。
固體劑量制備工藝1、將甘露醇加入一等份凈化水(不少于總批次要求的50％)并使之溶解。
2、加入明膠到甘露醇溶液，用磁力攪拌器攪拌溶液直至明膠完全溶解3、將第二等份凈化水(不超過總批次要求的35％)用于在小瓶中重構過敏原提取物。把重構的過敏原提取物加入到甘露醇-明膠溶液。
4、采用新鮮制備的氫氧化鈉溶液(3％W/W)調節整個制劑的pH到pH7.5。
5、計算完成制劑所需要的凈化水附加量并轉移到整個混合物中。
6、將溶液定量配料預成型的泡罩式包裝中。在室溫條件下定量配料溶液。
7、定量配料后，使填滿的泡罩包裝通過液氮冷凍管。在冷凍干燥前，所有冷凍產物立刻置于冷凍保藏。采用保藏溫度和室壓力的標準條件冷凍干燥各個單位。
8、用蓋箔密封凍干的單位并最終包裝成袋。
固體劑型平均重18mg且平均直徑11mm。
分析方法簡述鑒定(ID)，蛋白質譜按廠家說明書以Novex Mini Cell XcellII系統(Invitrogen)通過SDS-PAGE確定蛋白質譜。簡言之，用樣品緩沖液稀釋樣品，加入還原劑(0.5M DDT)，并在70℃保持10分鐘并使之冷卻5分鐘。將樣品、內部參照和標準低范圍大小標志(BIO-RAD)/孔加到NuPAGE 4-12％Bis-Tris梯度凝膠上。以200V進行電泳約35分鐘。隨后凝膠用銀染色。蛋白質模式應當類似于內部參照。
肉眼檢查所有單位經肉眼檢查，例如顏色，形狀，不規則度和缺損，以確保可接受的外觀。
崩解如歐洲藥典(第三版)或現行的USP所述進行測試。
水含量采用Karl Fischer滴定原理測定殘余水。該方法基于給定量的I2會導致等量H2O轉化的原理，定量測定樣品中的水含量。
簡言之，使用Karl Fisher滴定器，按照產品說明，測定1-3個固體劑型/小瓶，一式三份，一起的還有盲樣品(4/運行)和KF標準樣品，參見實施例10。
總過敏原活性采用為競爭性免疫測定法的LIA(在Eiken等人，Allergy 1992，47495-497中所描述的)進行測試。將結合到順磁顆粒(PMP)(ADVIA Centaur PMP，ALK-Abello A/S，Denmark)的100μl抗人IgE單克隆抗體洗三次，加入100μl含有特異性梯牧草IgE抗體的患者血清混合物并于2-8℃在振蕩器上溫育2小時，由此特異性IgE結合PMP。采用明膠緩沖液洗滌PMP三次以除去IgG抗體。將10個固體劑型溶于明膠緩沖液，制備每片625SQ-Units或1250SQ-Units的稀釋物。應用樣品或已知含量的生物素化梯牧草API的參照，并于2-8℃振蕩溫育過夜。樣品和生物素化API將競爭IgE結合位點，當樣品中的過敏原濃度升高時，結合的生物素化API的量將降低。溫育后，樣品在明膠緩沖液中洗三次，應用LITE-試劑，例如鏈霉抗生物素偶聯的吖啶酯化學發光化合物(ADVIA Centaur LiteReagents，ALK-Abello A/S)。樣品于2-8℃在振蕩器上溫育2小時，在明膠緩沖液中洗3次并在發光計上讀數。反應與樣品中過敏原的濃度反相關。
主要過敏原含量根據Obispo等人，Allergy，1997，52，806-813頁，采用ELISA技術進行測試。
ELISA法測定梯牧草主要過敏原5(Phlp5)的濃度。將與Phlp5分子上不同表位反應的兩種單克隆抗體(ALK-Abello A/S，DK)于4℃包被微量滴定板過夜。洗滌后(0.1M PBS，0.05％Tween-20的洗滌緩沖液洗滌4次)并用封閉緩沖液(2％酪蛋白緩沖液)封閉滴定板，施加樣品/參照，其隨后結合抗體。再次洗滌后(用洗滌緩沖液洗滌4次)，將針對梯牧草抗原的生物素化兔多克隆抗體(ALK-Abello A/S，DK)加到孔中并使之反應。
在用洗滌緩沖液洗滌4次后，向孔中施加與HRP(辣根過氧化物酶)(DAKO，Denmark)偶聯的鏈霉抗生物素并使之在室溫反應1小時(振蕩)。采用洗滌緩沖液洗滌4次后，加入HRP酶的底物(TMB，KEMEN TEC)并使之反應20分鐘，然后用0.5N硫酸停止反應。在450nm用分光光度計例如Multilable計數器Victor2測定產生的顏色。
脆性使用下列方法測定快速分散劑型的脆性。
含10個泡罩、每個泡罩含一個固體劑型的密封泡罩片板被切分為10個單獨的泡罩，每個泡罩置于如歐洲藥典第三版V.2.9.7所述的適于脆性測定的一件裝置中，劑型單位以25±1rpm旋轉100轉。將各個泡罩取出，打開，并將固體劑型轉移到一個適宜的容器中。然后從容器中取出固體劑型，在所述容器中留下任何松散的殘余物。進行免疫化學的過敏原特異性測定(ELISA)以檢測殘余物中過敏原的含量的量(參見上文)。
穩定性結果表2

表3

表4


*僅3個劑型的平均值實施例2.含梯牧草花粉提取物和淀粉的過敏原疫苗組成表5

制備工藝與實施例1相同，加入預糊化淀粉代替明膠(魚來源)。固體劑型平均重19mg和平均直徑11mm。
分析方法簡述與實施例1相同穩定性結果表6

表7


表8

實施例3.含草提取物和魚明膠的過敏原疫苗表9

制備工藝與實施例1相同固體劑型平均重30mg，平均直徑12mm。
分析方法簡述除未測定脆性和穩定性以外，與實施例1相同。
分析結果表10

該結果提供了含過敏原的固體劑型的實施方案，它在由6.5％魚明膠和5.5％甘露醇組成的基質形成劑中含三種不同劑量的草過敏原提取物。在制備后劑型中的過敏原含量和過敏原活性在可接受的限度內(參見下面)。此外，結果還表明所有劑型的水含量都在4-7％的優選范圍內。
結果從實施例1，2和3可以看出，有可能制備瞬間崩解的快速分散固體過敏原疫苗劑型。發現提取物總含量的損失是可以接受的，即使肉眼檢查在一些泡罩式包裝中檢測到殘余物(主要是含淀粉基質)，殘余物的量即過敏原含量損失在可接受的限度之內，即少于0.5μg提取物。因此，制備含過敏原的低脆性的非壓制快速分散固體劑型是有可能的。
穩定性數據表明制劑在室溫下以及在提高的溫度和濕度下保存9個月是穩定的。過敏原含量和總過敏原活性保持不變(在測定變異內并符合歐洲藥典第三版過敏原產品專論；總過敏原活性為理論值的50-200％，主要過敏原含量為理論值的65-135％)。
所有制備的批次經過肉眼檢查并發現其在可接受的限度之內。
實施例4過敏原疫苗組合物制備了含多種不同比例基質形成劑的固體過敏原疫苗劑型。
表11在不同包裝中所制備的含75,000SQ-U梯牧草草花粉提取物的固體劑型

在具有如前所述12mm單位直徑的泡罩式包裝中制備了所有劑型。所有劑型均快速地崩解，而且正如可見外觀，抗張強度和破碎最大負荷所評估的那樣是堅固的。
表12在魚明膠和甘露醇中含75000SQ-U的梯牧草草花粉提取物的固體劑型

在具有如前所述12mm單位直徑的泡罩式包裝中制備了所有劑型。
所有劑型均快速地崩解，而且正如可見外觀和破碎最大負荷所評估的那樣是堅固的。
實施例5均一性對按照實施例1所述的組成和制備的劑型測試過敏原含量的均一性。分別對含25000和125000SQ-Units的劑型，通過如實施例1所述的ELISA測定法，以草花粉梯牧草p5效價的均一性測定過敏原含量。如表13和14所示比較泡罩式包裝中10個個體單位。
表13.25000SQ-Unit劑型的含量均一性。

表14.125,000SQ-Unit劑型的含量均一性

所有變異均在可接受的限度之內，發現過敏原含量良好的均一性。
實施例6.對狗施用梯牧草草花粉疫苗按性別將狗平均分配到每個研究組中并按照表15定量給藥表15

對狗舌下給藥如表15所示的劑量。將劑型置于舌下，使狗嘴保持閉合以使劑型溶解。連續4周的時間對動物每天給藥一次。在治療期完成后抽取每組中所有狗的血樣。安慰劑組和高劑量組的各4條狗繼續4周的恢復期，之后抽取進一步的血樣。
方法如下測定血清或血漿中的梯牧草(Phlp)特異性IgG在4C以10μl/ml Phlp提取物包被ELISA平板(Costar)過夜。將平板洗4次，每兩次之間浸1分鐘，并在室溫下用2％酪蛋白緩沖液封閉非特異性結合1小時。在聚丙烯平板中稀釋各份血清或血漿樣品，轉移到ELISA平板并在室溫下溫育2小時。洗滌后，加入HRP標記的抗狗IgG(ICN)到ELISA平板并在室溫下溫育1小時。再次洗滌后，加入TMB到ELISA平板，加蓋并在室溫下溫育20分鐘。采用0.5M硫酸終止反應。使用分光光度計于450nm測定吸光度(OD)。
比較三組狗按1∶200稀釋的OD值安慰劑，25000SQ/劑和500000SQ/劑。采用Mann-Whitney秩和檢驗來計算三組間的統計學差異，該檢驗是比較兩個非配對組的非參數檢驗。接受500000SQ單位的狗具有比25000和安慰劑都更高的平均值，表明特異性抗體應答。
結果Mann-Whitney檢驗的P值如表16所示。
表16

P-水平≤0.05＝95％確定性的顯著。
在安慰劑與500,000SQ-U/劑組之間有清楚的顯著性差異，說明500,000SQ-U/劑舌下治療4周產生更高的體液特異性IgG水平。在安慰劑與25,000SQ-U/劑組之間有交界性的顯著性差異，也表明以25,000SQ-U/劑治療產生體液特異性IgG水平，盡管較以500000SQ-U/劑治療要弱。
實施例7.梯牧草草花粉疫苗對過敏者的給藥過敏癥患者，男性及女性，年齡在18-65歲，診斷為草花粉過敏癥，給予舌下劑量為一，二或三個單劑和/或為多劑的含草花粉提取物的固體劑型(按照實施例1)，采用設計為隨機、雙盲、安慰劑對照的試驗。
以進展的單劑評估安全性/耐受性。使用安慰劑和活性片劑(直徑12mm，干重約18mg)的組合以提供所需劑量，按劑量遞增方式逐步給藥單劑的安慰劑、2,500、25,000、75,000、125,000和375,000SQ-U。治療了47位草花粉過敏癥患者。將劑型置于舌下并保持1分鐘，然后吞咽。服用固體劑型后5分鐘禁止進食和飲水。觀察患者癥狀兩小時。記錄所有副作用，并在每次服藥后患者在視覺相似量表上記錄耐受性。發現含所述劑量的劑型被很好地耐受，高至并包括125,000SQ-U，不良事件在嚴重程度方面主要是輕微的，并限于口腔和咽喉的“癢”現象。在安慰劑組也報告有不良事件。例如，隨增加的劑量，更頻繁地報道“口癢”，不良事件的進展與進展的劑量相關。
更進一步地，對三個所選劑量2,500、25,000和75,000SQ-U以及安慰劑測定重復給藥的安全性/耐受性。47位草花粉過敏癥患者被分為大小相當的四組，接受每日舌下劑量達8周時間。3個含安慰劑、2,500和/或25,000SQ-U的片劑(直徑12mm，干重約18mg)的組合被用于得到所需劑量。在患者日志中記錄不良事件并收集癥狀。在所有三個積極治療組中，發現劑型中所含的劑量被很好地耐受。隨劑量增加，更頻繁地報告不良事件和癥狀。
因此，所測試的固體劑型以遞增劑量和單一的重復劑量治療對于臨床應用均是切實可行的。
實施例8.含梯牧草草花粉提取物和魚明膠的過敏原疫苗根據實施例1表1所述并按照實施例1制備的固體劑型在25℃/60％相對濕度下貯藏12個月，通過肉眼檢查，崩解，水含量，質量均一性，鑒定(蛋白質譜)，主要過敏原含量和總過敏原活性的測定而進行評價。如實施例1所述進行所有測試。除非另有說明，顯示對一組10個片劑一式兩份測定的平均值。
表17


肉眼檢查在研究過程中片劑外觀無變化。
崩解在研究過程中崩解時間無顯著變化。所有試驗樣品均立即崩解。
質量均一性在研究過程中質量均一性無明顯變化(對20片的評價)。
水含量在研究過程中水含量無明顯變化。
鑒定，SDS-page在研究過程中蛋白質譜無顯著變化；在所有測試時間樣品均類似于參照。
總過敏原活性經測定，片劑的總過敏原活性無顯著損失(12個月時，對于不同強度，變化為理論含量的105％-119％，數值在所進行測試的偏差之內)。
主要過敏原含量經測定，通過主要過敏原含量測定的片劑過敏原含量無明顯損失(貯藏12個月時，對于不同強度，變化為理論含量的99％-104％，數值在所進行測試的偏差之內)。
實施例9.含梯牧草草花粉提取物和魚明膠的過敏原疫苗組成如實施例1表1所述按照實施例1制備的固體劑型在25℃/60％相對濕度下貯藏18個月，通過肉眼檢查劑型即片劑和通過測定崩解時間，水含量，質量均一性，鑒定(蛋白質譜)，主要過敏原含量和總過敏原活性而進行評價。如實施例1所述進行所有測試。除非另有說明，顯示對一組10個片劑一式兩份測定的平均值。
表18

Mth＝月，N/A＝未分析對于含25,000SQ-Unit/固體劑型的固體劑型，僅進行ID分析。與0月相比，貯藏18個月后發現類似的ID模式(數據未顯示)。
在25℃/60％相對濕度下貯藏18個月以后，發現所述固體劑型是穩定的，即過敏原含量和總過敏原活性保持不變(在測定變異內并符合歐洲藥典第三版過敏原產品專論；總過敏原活性為理論值的50-200％，主要過敏原含量為理論值的65-135％)。此外，在研究期間對于所有測試的過敏原劑量，固體劑型的外觀沒有變化。另外，在研究期間，測試的劑型的質量均一性沒有變化。至于水含量，沒有明顯變化并在優選范圍4-7％之內。
實施例10.含梯牧草草花粉提取物和魚明膠的過敏原疫苗固體劑型的組成如實施例1的表9中所示。
根據實施例1制備固體劑型并使之經受穩定性試驗。
根據實施例1進行所有試驗。
穩定性結果表19

表20

表21

n.m.＝未測定通過對劑型(即片劑)的肉眼檢查以及通過測定崩解時限，水含量，質量均一性，鑒定(蛋白質譜)，主要過敏原含量和總過敏原活性(沒有顯示所有數據)判定劑型質量。
在25℃/60％相對濕度和40℃/75％相對濕度下貯藏6個月以后，發現所有劑量的固體劑型都是穩定的，即過敏原含量和總過敏原活性保持不變(在測定變異內并根據EMEA第三版過敏原產品專論；總過敏原活性為理論值的50-200％，主要過敏原含量為理論值的65-135％)。此外，在研究期間，對于所有測試的過敏原劑量，固體劑型的外觀沒有變化。另外，在研究期間所測試的劑型的質量均一性沒有變化。至于水含量，在研究期間沒有發現明顯變化。盡管所有測試樣品都在優選范圍4-7％之內，觀察到所有劑量在40℃/75％相對濕度下貯藏過程中水含量有略微增加的趨勢。
實施例11.在含梯牧草草花粉提取物和魚明膠的過敏原劑型中測定水含量和水分活性組成表22

根據實施例1制備固體劑型用Rotronic Hygroskop BT-RS1(Rotronic ag，瑞士)測定各種固體劑型的水分活性。每次測定使用10個片劑。穩定的讀出信號表明達到了平衡，并采用下列關系式把相對濕度隨后換算為水分活性。
aw＝Pw/＝RHequ/100其中aw是樣品的水分活性，Pw是樣品上的水蒸氣分壓，Pxw是純水上的水蒸氣壓力，而RHequ(ERH，相對濕度平衡)是樣品的相對濕度。
采用帶有774Oven樣品處理器的756 Karl Fischer庫侖計((Metrohm，Herisau，瑞士)測定片劑的水含量。將1-3個片劑置于玻璃小瓶內，并用PTFE包被的帽(Metrohm，Herisau，瑞士)密封。然后將樣品小瓶放置在774Oven樣品處理器((Metrohm，Herisau，瑞士)中，樣品中存在的任何水分在130C的溫度下蒸發。蒸發的水分通過氮氣被轉移到含Hydranal-Coulomat Oven試劑(Riedel-de-Haen)的反應室，隨后根據產品說明通過Karl Fischer滴定進行對釋放的水量的定量。結果見表24。
表23.含梯牧草草花粉提取物和魚明膠的多種過敏原劑型的水分活性和水含量

SD＝標準偏差盡管某些的水含量在5％以上，所有固體劑型的平均水分活性在0.41-0.46之間。
實施例12含梯牧草花粉提取物的過敏原疫苗組成表24

除采用來自加拿大Norland的魚明膠以外，如實施例1所述制備制劑。固體劑型平均直徑13mm。
表25

該結果提供了含過敏原的固體劑型的又一個實施方案，它在由6.0％魚明膠和5.08％甘露醇組成的基質形成劑中包含兩種不同劑量的草過敏原提取物。按照實施例1所述方法采用脆性試驗測試所述劑型。結果顯示，在作為過敏原釋放而檢測的脆性方面，所述制劑是穩定的。
權利要求
1.適于施用過敏原的藥物產品，其包含適于口腔粘膜給藥的快速分散、非壓制固體劑型，該劑型包括(a)由至少一種基質形成劑形成的基質，和(b)有效劑量的過敏原，以使個體對所述過敏原脫敏，其中，(c)在25℃和60％的相對濕度下保持3個月后，所述劑型中過敏原含量損失低于最初過敏原含量的50％，和(d)在經受脆性測試時，所述固體劑型的過敏原含量損失低于大約0.5μg過敏原提取物或低于約0.05μg主要過敏原。
2.根據權利要求1所述的藥物產品，其中以歐洲藥典2.9.7所述的脆性測試測定脆性。
3.根據權利要求1所述的藥物產品，其中在包括以下步驟的脆性測試中測定脆性a)將各自包含固體劑型的各個密封泡罩置于適合脆性測定的裝置中；b)以適當的速度移動包含固體劑型的密封泡罩持續恰當的時間；c)取出包含固體劑型的密封泡罩；d)打開泡罩并將固體劑型和任何殘余物置于容器中；e)從容器中取出固體劑型，將任何松散的殘余物留在所述容器中；f)對所述殘余物進行過敏原特異性測定，測定所述殘余物中的過敏原含量；和任選地計算在所述殘余物中的過敏原含量占所述固體劑型單位的總過敏原含量的百分比。
4.根據權利要求3所述的藥物產品，其中(a)使用1-100個含固體劑型的泡罩，(b)使用如歐洲藥典2.9.7所述的脆性測定裝置，(c)固體劑型以25±1rpm旋轉100轉，和(d)過敏原特異性測定是免疫化學過敏原特異性測定。
5.根據權利要求3或4所述的藥物產品，其中過敏原特異性測定是酶聯免疫吸附測定。
6.根據權利要求1-5任一項所述的藥物產品，包含約2.5μg到約3.75mg過敏原提取物。
7.根據權利要求6所述的藥物產品，包含約2.5μg到約2.5mg過敏原提取物。
8.根據權利要求7所述的藥物產品，包含約25μg到約2.5mg過敏原提取物。
9.根據權利要求8所述的藥物產品，包含約25μg到約1.25mg過敏原提取物。
10.根據權利要求9所述的藥物產品，包含約25μg到約1mg過敏原提取物。
11.根據權利要求10所述的藥物產品，包含約25μg到約750μg過敏原提取物。
12.根據權利要求1-5任一項所述的藥物產品，包含約0.25μg到約0.25mg主要過敏原。
13.根據權利要求12所述的藥物產品，包含約2.5μg到約0.25mg主要過敏原。
14.根據權利要求13所述的藥物產品，包含約2.5μg到約0.125mg主要過敏原。
15.根據權利要求14所述的藥物產品，包含約2.5μg到約0.1mg主要過敏原。
16.根據權利要求15所述的藥物產品，包含約2.5μg到約75μg主要過敏原。
17.根據權利要求1-5任一項所述的藥物產品，含有約65到約15,000BAU的劑量。
18.根據權利要求17所述的藥物產品，含有約650到約15,000BAU的劑量。
19.根據權利要求18所述的藥物產品，含有約650到約6,000BAU的劑量。
20.根據權利要求19所述的藥物產品，含有約650到約4,700BAU的劑量。
21.根據權利要求20所述的藥物產品，含有約650到約3,500BAU的劑量。
22.根據權利要求17-21任一項所述的藥物產品，其中所述過敏原是草花粉過敏原。
23.根據權利要求1-22任一項所述的藥物產品，其中在25℃和60％相對濕度保存3個月后過敏原含量損失少于最初含量的約30％。
24.根據權利要求23所述的藥物產品，其中在25℃和60％相對濕度保存3個月后過敏原含量損失少于最初含量的約20％。
25.根據權利要求24所述的藥物產品，其中在25℃和60％相對濕度保存3個月后過敏原含量損失少于最初含量的約15％。
26.根據權利要求25所述的藥物產品，其中在25℃和60％相對濕度保存3個月后過敏原含量損失少于最初含量的約10％。
27.根據權利要求26所述的藥物產品，其中在25℃和60％相對濕度保存3個月后過敏原含量損失少于最初含量的約5％。
28.根據權利要求27所述的藥物產品，其中在25℃和60％相對濕度保存3個月后過敏原含量損失少于最初含量的約2％。
29.根據權利要求1-28任一項所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.25μg過敏原提取物。
30.根據權利要求29所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.15μg過敏原提取物。
31.根據權利要求30所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.075μg過敏原提取物。
32.根據權利要求31所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.025μg過敏原提取物。
33.根據權利要求32所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.01μg過敏原提取物。
34.根據權利要求1-28任一項所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.025μg主要過敏原。
35.根據權利要求34所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.015μg主要過敏原。
36.根據權利要求35所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.0075μg主要過敏原。
37.根據權利要求36所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.0025μg主要過敏原。
38.根據權利要求37所述的藥物產品，其中每個固體劑型的損失少于約0.001μg主要過敏原。
39.根據權利要求1-38任一項所述的藥物產品，其中通過升華包含所述過敏原和至少一種基質形成劑的溶液而形成基質。
40.根據權利要求1-39任一項所述的藥物產品，其中劑型的水含量在約2重量％和約8重量％之間。
41.根據權利要求40所述的藥物產品，其中劑型的水含量在約4重量％和約7重量％之間。
42.根據權利要求1-41任一項所述的藥物產品，其中一種基質形成劑是明膠。
43.根據權利要求42所述的藥物產品，其中所述明膠包括魚明膠。
44.根據權利要求42或43所述的藥物產品，其中另一基質形成劑是甘露醇。
45.根據權利要求44所述的藥物產品，其中魚明膠與甘露醇的比例從約2∶20到約20∶1。
46.根據權利要求45所述的藥物產品，其中魚明膠與甘露醇的比例從約2∶10到約10∶1。
47.根據權利要求46所述的藥物產品，其中魚明膠與甘露醇的比例從約3∶5.5到約6.5∶3。
48.根據權利要求47所述的藥物產品，其中魚明膠與甘露醇的比例是4∶3。
49.根據權利要求47所述的藥物產品，其中魚明膠與甘露醇的比例是6.5∶5.5.。
50.根據權利要求47所述的藥物產品，其中魚明膠與甘露醇的比例是6.0∶5.08。
51.根據權利要求44-50任一項所述的藥物產品，其中基質由包含約2-約10％ W/W魚明膠和約1-約10％ W/W甘露醇的溶液形成。
52.根據權利要求51所述的藥物產品，其中所述溶液包含約3-約6.5％ W/W魚明膠和約3-約5.5％ W/W甘露醇。
53.根據權利要求52所述的藥物產品，其中所述溶液包含約6.5％W/W魚明膠和約5.5％ W/W甘露醇。
54.根據權利要求52所述的藥物產品，其中所述溶液包含6.0％W/W魚明膠和5.08％ W/W甘露醇。
55.根據權利要求1-41任一項所述的藥物產品，其中一種基質形成劑是淀粉。
56.根據權利要求55所述的藥物產品，其中另一基質形成劑是甘露醇。
57.根據權利要求56所述的藥物產品，其中淀粉與甘露醇的比例是從約2∶20到約20∶1。
58.根據權利要求56所述的藥物產品，其中淀粉與甘露醇的比例是從約2∶10到約10∶1。
59.根據權利要求56-58所述的藥物產品，其中所述基質由包含3-6.5％ W/W淀粉和3-5.5％ W/W甘露醇的溶液形成。
60.根據權利要求1-59任一項所述的藥物產品，其在人唾液中在約60秒之內崩解。
61.根據權利要求60所述的藥物產品，其在人唾液中在約30秒之內崩解。
62.根據權利要求61所述的藥物產品，其在人唾液中在約10秒之內崩解。
63.根據權利要求62所述的藥物產品，其在人唾液中在約5秒之內崩解。
64.根據權利要求63所述的藥物產品，其在人唾液中在約2秒之內崩解。
65.根據權利要求1-64任一項所述的藥物產品，其中過敏原選自樹花粉過敏原，草花粉過敏原，螨過敏原，昆蟲過敏原，毒液過敏原，動物毛發過敏原，皮屑過敏原和食物過敏原。
66.根據權利要求65所述的藥物產品，其中過敏原為提取物，純化過敏原，修飾過敏原或重組過敏原或重組過敏原的突變體或其任何組合的形式。
67.根據權利要求65-66所述的藥物產品，其中過敏原是草花粉過敏原。
68.根據權利要求67所述的藥物產品，其中過敏原為草提取物的形式。
69.根據權利要求65-66所述的藥物產品，其中過敏原為塵螨過敏原。
70.根據權利要求69所述的藥物產品，其中過敏原為塵螨提取物的形式。
71.根據權利要求1-70任一項所述的藥物產品，包含至少兩種不同的過敏原。
72.根據權利要求1-71任一項所述的藥物產品，其中不同固體劑型之間過敏原的過敏原含量的變化在約10％之內。
73..根據權利要求72所述的藥物產品，其中不同固體劑型之間過敏原含量的變化在約7％之內。
74.根據權利要求73所述的藥物產品，其中不同固體劑型之間過敏原含量的變化在約5％之內。
75.根據權利要求1-74任一項所述的藥物產品，其中固體劑型的抗張強度小于約1.0N/mm2。
76.根據權利要求1-75任一項所述的藥物產品，其中所述固體劑型的破碎最大負荷不小于約0.05Kgf并低于約0.9KgF。
77.根據權利要求1-76任一項所述的藥物產品，其中所述固體劑型的強度足以從泡罩包裝中取出而不會釋放含多于約0.5μg提取物的殘余物到環境中。
78.根據權利要求1-76所述的藥物產品，其中所述固體劑型的強度足以從泡罩包裝中取出而不會釋放含多于約0.05μg主要過敏原的殘余物到環境中。
79.根據權利要求1-76任一項所述的藥物產品，其中所述固體劑型的強度足以從泡罩包裝中取出而不會釋放含多于約13BAU的殘余物到環境中。
80.根據權利要求1-79任一項所述的藥物產品，其中劑型包含一種或多種賦形劑。
81.根據權利要求80所述的藥物產品，含有選自以下的賦形劑抗酸劑，稀釋劑，粘膜粘著劑，增強劑，增香劑，矯味劑，防腐劑，抗氧化劑，表面活性劑，粘性增強劑，著色劑，pH調節劑和甜味劑。
82.根據權利要求1-81任一項所述的藥物產品，還包含佐劑。
83.根據權利要求82所述的藥物產品，其中所述佐劑選自鋁鹽，無毒細菌碎片，細胞因子，霍亂毒素，霍亂毒素脫毒部分，殼聚糖，大腸桿菌的熱不穩定片段，大腸桿菌的熱不穩定片段脫毒部分，皂甙，脂多糖類、胞壁酰二肽，脂質體，免疫刺激DNA序列和丙交酯/乙交酯微粒聚合物。
84..根據權利要求1-83任一項所述的藥物產品，還包含抗過敏藥。
85.根據權利要求84所述的藥物產品，其中抗過敏藥是抗組胺藥。
86.多劑量容器，包含多個根據權利要求1-85任一項所述的固體劑型。
87.根據權利要求86所述的多劑量容器，其中所述多劑量容器是泡罩式包裝。
88.根據權利要求86所述的多劑量容器，其中所述多劑量容器是全鋁泡罩式包裝。
89.根據權利要求86所述的多劑量容器，其中所述多劑量容器是多層全鋁泡罩式包裝。
90.治療過敏癥或緩解過敏癥狀的方法，包括將權利要求1-85任一項所述的藥物產品口腔粘膜給藥。
91.制備具有低脆性的快速分散、非壓制固體穩定劑型的方法，該劑型包含至少一種基質形成劑并適于口腔粘膜給藥，其包含使個體對至少一種過敏原脫敏的有效劑量，該方法包括如下步驟a)制備含所述至少一種過敏原和所述至少一種基質形成劑的水溶液，b)將溶液引入模具的一個或多個凹陷內，c)采用貯存溫度和室壓力的標準條件對裝填的模具進行冷凍和冷凍干燥以在每個凹陷中獲得所述固體劑型。
92.根據權利要求91所述的方法，其中步驟(b)包括將溶液引入多層層壓泡罩片的凹陷中。
93.測定權利要求1-85中所定義的固體劑型的脆性的方法，包括下列步驟a)將各自包含固體劑型的各個密封泡罩置于適合脆性測定的裝置中；b)以適當的速度移動包含固體劑型的密封泡罩持續恰當的時間；c)取出包含固體劑型的密封泡罩；d)打開泡罩并將固體劑型和任何殘余物置于容器中；e)從容器中取出固體劑型，將任何松散的殘余物留在所述容器中；f)對所述殘余物進行過敏原特異性測定，測定所述殘余物中的過敏原含量；和任選地計算所述殘余物中的過敏原含量占固體劑型單位的總過敏原含量的百分比。
94.根據權利要求93所述的方法，其中(a)使用1-100個含固體劑型的泡罩，(b)使用如歐洲藥典V.2.9.7所述的脆性測定裝置，(c)固體劑型以25±1rpm旋轉100轉，和(d)過敏原特異性測定為免疫化學過敏原特異性測定。
95.根據權利要求94所述的方法，其中免疫化學測定是酶聯免疫吸附測定。
96.權利要求1-85中定義的固體劑型，其中所述固體劑型具有0.4-0.5的水分活性。
97.一種用于治療過敏癥或緩解過敏癥狀的試劑盒，包括a)在密封容器中的多個固體口服劑型，每個所述的固體口服劑型處于密封包裝中并包含有效量的適于口腔粘膜給藥的過敏原；和b)每個所述的固體劑型含相同量的過敏原。
98.根據權利要求97所述的試劑盒，還包括使用多個固體劑型的用法說明。
99.根據權利要求97-98所述的試劑盒，其中所述劑型是快速分散劑型。
100.根據權利要求97-99所述的試劑盒，其中每個固體劑型位于多泡罩式包裝的各個單獨密封的泡罩中。
101.根據權利要求97-100所述的試劑盒，其中所述固體劑型包含明膠。
102.根據權利要求101所述的試劑盒，其中所述固體劑型還包含甘露醇。
103.根據權利要求101-102所述的試劑盒，其中所述明膠是魚明膠。
104.根據權利要求97-103所述的試劑盒，其中過敏原的有效量為約2.5μg-約3.75mg提取物/固體劑型。
105.一種治療患過敏癥的哺乳動物患者的方法，包括a)提供根據權利要求97-104所述的試劑盒，和b)對所述患者重復施用試劑盒中的至少一種所述固體劑型，直到過敏癥狀緩解，其中所述重復施用中沒有提高劑量的步驟。
106.包含可口服給藥的固體劑型的藥物產品，所述劑型含由至少一種藥學上可接受的材料形成的基質、使人對所述過敏原脫敏的有效量的過敏原，所述劑型在25℃和60％相對濕度保存3個月后的過敏原含量為最初過敏原含量的至少約50％。
107.根據權利要求1-85或106任一項所述的藥物產品，其中該產品選自糖錠，片劑，膠囊和小膠囊。
108.根據權利要求1-85或106-107任一項所述的藥物產品，用于對過敏癥的口腔粘膜治療或過敏癥狀的緩解。
109.如權利要求1-85任一項中所定義的固體劑型用于過敏癥的口腔粘膜治療或過敏癥狀的緩解的用途。
全文摘要
本發明提供含過敏原的藥物產品，尤其是快速分散的固體過敏原劑型。特別提供了包含基質和至少一種過敏原的適于口腔粘膜給藥的快速分散、非壓制固體劑型。適宜的基質是明膠，淀粉和甘露醇。還提供了制備該劑型的方法。
文檔編號A61K47/36GK1731979SQ200380107865
公開日2006年2月8日 申請日期2003年11月26日 優先權日2002年11月26日
發明者H·H·雅克比, A·R·倫德伽德, C·G·赫格頓, S·阿斯姆爾-奧爾森, L·L·瑪爾柯達爾, J·S·安徒生 申請人:阿爾克-阿貝洛有限公司