專利名稱：“拉比西亞普米拉”萃取物的制備過程的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種植物萃取物的制備過程，特別涉及一種制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物，以及通過反向高效能液相色譜儀得出可再生化學解構的過程。
背景技術：
浡希爾(Burkhill)(1993)指出，傳統馬來西亞的藥物中，有一種名為「卡吉發蒂瑪」(Kacip Fatimah)的草藥(或稱為Selusoh Fatimah，Rumput Siti Fatimah，Akar Fatimah，Kachit Fatimah，Kachip Fatimah，Kachip Patimah，KunchiFatimah，Pokok Pinggang，Rumput Palis，Tadah Mata Hari，Mata PelandokRimba，Bunga Belangkas Hutan)，常用于分娩過程中。除了在產后煎服此種草藥作為保健藥物外，產前煎服亦可減輕陣痛。其它用途包括治療胃氣脹、痢疾、痛經、淋病及骨科疾病。
雖然現時食品行業對「卡吉發蒂瑪」(Kacip Fatimah)(學名為「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)或「拉比西亞坡佛娜」(Labisia Pothoina))的需求與日俱增，但萃取過程的再生效能仍然存在問題，原因是缺乏可靠的化學解構方法。

發明內容
因此，本發明的主要目的在于提供一種從「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程。
本發明的另一目的在于提供一種通過反向高效能液相色譜儀從水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物分隔出一種指標化合物的方法。
本發明的另一目的在于通過核磁共振光譜測定法、液相色譜儀、質譜測量法及紫外光光度測定法為從水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物中取得的指標化合物進行結構性分析。
本發明的上述及其它目的通過提供以下項目達致一種制備「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程，其通過以水萃取已脫水「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物形成水溶性萃取物，并把所取得的所述萃取物脫水，其特征在于所述已脫水「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)植物與水的比例為1∶6。
以及一種取得「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的最優化的可再生化學解構的過程，包括以下步驟(a)將根據權利要求1至6任一權利要求所述的過程所取得的已脫水萃取物與水的混合物進行離心處理；(b)通過搖均將從步驟(a)所取得的上清液稀釋至10毫升；(c)以0.45μm PTFE膜濾器過濾從步驟(b)所取得的已稀釋上清液；以及(d)以高效能液相色譜儀分析從步驟(c)所取得的已過濾上清液。
以及一種從根據權利要求1至6任一權利要求所述的過程取得的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物中分隔出一種指標化合物的過程，其特征在于其以半制備或制備反向高效能液相色譜儀進行。
以及一種分析從權利要求1至6任一權利要求所述的過程取得的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的指標化合物結構的過程，其特征在于其通過核磁共振光譜測定法、液相色譜儀、質譜測量法或紫外光光度測定法任何一種方式進行。
本發明涉及一種從「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物中制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程。由于「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)多用于食品、藥物等用途上，經考慮安全問題，本發明的過程中使用水作為溶劑。


圖1是采用反向高效能液相色譜儀為「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)進行解構的色譜圖。
具體實施例方式
本發明涉及一種從「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物，以及通過反向高效能液相色譜儀得出最佳的可再生化學解構的過程。
特別是，本發明涉及一種制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程，包括以下步驟(1)-(4)步驟1以溶劑(水)萃取已脫水的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物，形成水溶性萃取物，并把萃取物濃縮至干燥狀態；步驟2使用反向高效能液相色譜儀分析已脫水的濃縮水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物，得出最優化的可再生化學解構；
步驟3采用色譜法從水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物分隔出一種指標化合物，所運用的儀器是反向高效能液相色譜儀；以及步驟4通過核磁共振光譜測定法、液相色譜儀、質譜測量法及紫外光光度測定法為從水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物所取得的指標化合物進行結構分析。
如上所述，本發明的制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程，其公開了一種方法，包括以溶劑(水)萃取已脫水的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物，形成水溶性萃取物，并把萃取物濃縮至干燥狀態；并使用反向高效能液相色譜儀分析已脫水的濃縮水溶性「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)萃取物，得出最優化的可再生化學解構。有關過程可成功提供一種可持續再生的水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物制配過程。
此外，本發明的過程與傳統馬來西亞醫生多年來為個人使用而制備的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程是相容的。因此，本發明的過程可得出理想的萃取物，其不含化學雜質，并有可再生效能。
制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程原材料在進行本發明所述的水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物制備過程時，所用的原材料必須是「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物。本發明只可選用「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物作為原材料。
原材料在使用前以攝氏40度的溫度干燥3天使其完全脫水，使原材料不受溶劑的極性所影響。
上述原材料可以任何形式作為本發明的原材料，如固體粉末、或磨碎，甚至以上述任何形式的組合均可。
萃取過程本發明采用一般的方法制備水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物。在本發明中，優選采用溶劑萃取法，這亦是現今最常用的方法。
采用溶劑萃取法可完全萃取「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)，這是本發明過程所必需的。
溶劑萃取法所采用的溶劑一般為非極性溶劑。本發明采用水(一種極性溶劑)作為溶劑，是為了遵循傳統馬來西亞人多年來萃取「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)萃取物的方式。再者，水一直被食品行業用作萃取用溶劑，故其高度安全。
只要在大約攝氏80度的溫度下進行萃取，萃取「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)萃取物的方法便可發揮效用，并達到高萃取效率。萃取過程持續3小時，并以持續攪拌的方式進行。此萃取過程會以相同份量的新溶劑重復進行，因此萃取過程實為一兩個階段的過程，而采用的比例是一份已脫水植物加入六份水。
把萃取物濃縮至干燥狀態本發明采用一般的方法把從原材料得到的萃取物干燥。
濃縮的常見方法包括降壓濃縮、加熱濃縮、對流濃縮、冷卻濃縮及噴射濃縮，以上方法可個別或組合使用。本發明優選使用噴射脫水的方法。噴射塔的入口及出口溫度分別預設為攝氏185度及攝氏107度。這種既簡單又廉宜的方法，可去除把原材料脫水的溶劑。
例子1在一個實施例中，將100公斤的干燥及已磨碎的「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)用600升水以攝氏80度的溫度加熱3小時，期間持續攪拌，以進行萃取。在萃取過程終結時，把溶劑換上相同份量的新溶劑，重復萃取植物。把混合物集中并過濾，然后再以噴射脫水的方式過濾。噴灑塔的情況如下入口及出口的溫度分別預設為攝氏185度及攝氏107度。水溶性萃取物粉末的產量為4-5％。
例子2在另一個實施例中，將150公斤的干燥及已磨碎的「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)用900升水以攝氏80度的溫度加熱6小時，期間持續攪拌，以進行萃取。在萃取過程終結時，把溶劑換上相同份量的新溶劑，重復萃取植物。把混合物集中并過濾，然后再以噴射脫水的方式過濾。噴灑塔的情況如下進出口的溫度分別預設于攝氏185度及攝氏107度。水溶性萃取粉末的產量為4-5％。
化學解構本發明采用一般的方法為水溶性萃取物進行化學解構。
本發明采用反向高效能液相色譜儀及可作偵測用途的傳統偵側器，如紫外光、兩極真空管或光電二極管(波長預設于254納米)。
通過啟動反向高效能液相色譜儀，可為水溶性萃取物進行化學解構。本發明所使用的化學解構方法具備可再生效能。
制備樣本作化學解構時，已脫水萃取物準確地量度重量至35-45毫克，并加入10毫升水，以每分鐘20,000轉的轉數在室溫進行15分鐘離心處理。完成后，上清液輸送到10毫升的量積瓶，并以水稀釋，搖勻15分鐘，然后以0.45μm PTFE膜濾器過濾。
參考溶液亦是以類似的方法制備。溶液會進一步作連續稀釋，并用作建構三或五點的定標曲線。
高效能液相色譜儀的系統系數載列如下欄身固定相反向色譜儀的十八烷基硅烷鍵合硅膠250毫米×4.6毫米，120dp＝4μm流動相 A＝CH3CN；B＝H2O(0.25％H3PO4)溶劑系統A/B＝1/99流動率 每分鐘1毫升溫度室溫波長偵測254納米樣本大小50μL采用反向高效能液相色譜儀為「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)進行解構的色譜圖載于圖1。星標(*)顯示指標化合物。
萃取物的指標化合物在反向高效能液相色譜儀解構圖或色譜圖中出現一個高位，于15至17分鐘之間以254納米吸收。
指標化合物在反向高效能液相色譜儀中量化為35-45μg/毫升。
從水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物經分析及量化的指標化合物進行了隔離及結構分析，并以既定的參考標準進行比較。
分隔出指標化合物本發明使用一般的方法從水溶性「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物以色譜法分隔出指標化合物，所用的儀器為半制備或制備反向高效能液相色譜儀。
高效能液相色譜儀的系統系數載列如下溶劑系統移動相，99％(0.1％H3PO4)1％(CH3CN)溫度室溫波長偵測254納米指標化合物于15分鐘至17分鐘之間收集為凈碎片。
在真空狀態中脫水的指標化合物為棕色粉末，在吸水溶劑中難以溶解。
指標化合物的結構分析指標化合物的結構分析一般涉及核磁共振光譜測定法、液相色譜儀、質譜測量法及紫外光光度測定法。
一般而言，指標化合物在利用負離子APCI的液相色譜儀及質譜測量法中會產生以m/z為169.2的M-1離子，從而顯示出其分子量為170，即與C7H6O5的公式相容。168及125的離子顯示缺少H及COOH，即其具有羧基酸。
一般而言，指標化合物會在紫外光中提供約270納米的單一最大數，顯示其為一個簡單的芳香環。
一般而言，以含重氫的二甲亞砜(DMSO-d6)作為溶劑并在攝氏30度的溫度下進行核磁共振光譜測定法，指標化合物會產生質子(1H)光譜，其具備以下共振質子于δ6.92發出單一訊號并結合碳，并于δ9及δ10發出訊號并結合氧。
一般而言，指標化合物在核磁共振光譜測定法在攝氏30度的溫度下操作，并以含重氫的二甲亞砜(DMSO-d6)作為溶劑，產生碳(13C)光譜，具備以下共振δ167.4(1C，羧基酸)、145.4(2C，芳香碳結合氧，氧亦結合相鄰的碳)、138.0(1C，芳香碳結合氧，氧亦結合相鄰的碳)、120.4(芳香碳)、108.7(2C，次甲基(CH)芳香碳)。另外，一般而言，分子須為對稱，共振才可于δ145.4及108.7倍增，另，3個相鄰芳香碳須氧化，共振才可于δ145.4及138.0倍增)。
分隔出來的及已進行結構分析的指標化合物的識別，將進一步以既定的參考標準進行比較核證。因此，化合物的結構厘定為3，4，5-三羥基苯甲酸，如下圖所示 因此，通過采用本發明所述的過程，高濃度的草藥萃取物(特別是「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila))即可輕易地從含有「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)的原材料中提煉，且成本廉宜。從本發明所述過程所得到的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物，可作為原材料大量供應予醫藥及食品行業，滿足現時對「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)的龐大需求。此外，從本發明過程所得到的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物可用作原材料，在未來生產個人藥用活躍化合物。
本文件雖然描述了本發明的較佳實施例，但對專業人士而言，本發明亦明顯可作多種變更及修正，而不脫離本發明的精神及范疇。本權利要求書是要覆蓋所述該等在本發明范疇中的修正。
參考數據浡希爾(Burkhill，I.H.)。1993。《馬來半島經濟產品的字典(A Dictionary of theEconomic Products of the Malay Peninsula).v.II(I-Z)》。第三版。吉隆坡農業部。頁次1311。
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權利要求
1.一種制備「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的過程，其通過以水萃取已脫水「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物形成水溶性萃取物，并把所取得的所述萃取物脫水，其特征在于所述已脫水「拉比西亞普米拉」(LabisiaPumila)植物與水的比例為1∶6。
2.根據權利要求1所述的過程，其特征在于所述已脫水「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物的制備方法，是以攝氏40度干燥3天。
3.根據權利要求1所述的過程，其特征在于所述萃取過程是在攝氏80度的溫度下持續攪拌3小時。
4.根據權利要求3所述的過程，其特征在于所述萃取過程重復進行，而「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)植物與水的比例為1∶6。
5.根據權利要求1至4中任一權利要求所述的過程，其特征在于把所取得的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物脫水，并以噴射脫水之方法濃縮。
6.根據權利要求5所述的過程，其特征在于噴射塔入口及出口的溫度分別為攝氏185度及攝氏107度。
7.一種取得「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的最優化的可再生化學解構的過程，包括以下步驟(a)將根據權利要求1至6任一權利要求所述的過程所取得的已脫水萃取物與水的混合物進行離心處理；(b)通過搖均將從步驟(a)所取得的上清液稀釋至10毫升；(c)以0.45μm PTFE膜濾器過濾從步驟(b)所取得的已稀釋上清液；以及(d)以高效能液相色譜儀分析從步驟(c)所取得的已過濾上清液。
8.根據權利要求7所述的過程，其特征在于50-60毫克的已脫水萃取物在10毫升水中以每分鐘20,000轉的轉數在室溫進行15分鐘的離心處理。
9.一種從根據權利要求1至6任一權利要求所述的過程取得的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物中分隔出一種指標化合物的過程，其特征在于其以半制備或制備反向高效能液相色譜儀進行。
10.根據權利要求9所述的過程，其特征在于反向高效能液相色譜儀以室溫、波長為254納米、溶劑為99％(0.1％H3PO4)∶1％(CH3CN)的移動相系統運作。
11.一種分析從權利要求1至6任一權利要求所述的過程取得的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物的指標化合物結構的過程，其特征在于其通過核磁共振光譜測定法、液相色譜儀、質譜測量法或紫外光光度測定法任何一種方式進行。
12.根據權利要求11所述的過程，其特征在于核磁共振光譜測定法在攝氏30度的溫度下操作，并以含重氫的二甲亞砜(DMSO-d6)作為溶劑。
13.根據權利要求1至6任一權利要求所述的過程生產濃縮及可再生植物萃取物。
14.根據權利要求13所述的過程，其特征在于所述植物為「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)或其它任何適用植物。
15.根據權利要求1至6任一權利要求所述的過程生產的「拉比西亞普米拉」(Labisia Pumila)萃取物，用于食品或醫藥用途。
全文摘要
本發明涉及一種從“拉比西亞普米拉”(LabisiaPumila)植物制備“拉比西亞普米拉”(Labisia Pumila)萃取物，以及通過反向高效能液相色譜儀得出可再生化學解構的過程。
文檔編號B01D11/02GK1947764SQ200610065810
公開日2007年4月18日 申請日期2006年3月24日 優先權日2005年10月12日
發明者馬世他·穆罕默德·尤索夫, 溫·那撒蒙·溫·穆罕默德 申請人:馬來西亞科學、技術及創新部代表馬來西亞政府