一種酶法制備甾體消炎藥中間體醋酸四烯物的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及生物制藥和生物化工技術領域，尤其設及一種酶法制備醬體消炎藥中 間體醋酸四締物的方法。
【背景技術】
[0002] 醋酸四締物(化合物I，又名teraene，3TR)，其結構式為
醋酸四 締物作為中間體可W制備得到多種具有良好消炎作用的醬體化合物，如曲安奈德 (Triamcinolone Acetonide)、潑尼松龍（商品名Donison)和地塞米松(Dexamethasone)等， 運些藥物在臨床中有廣泛和大量的應用（Bioorganic &Medicinal Qiemishy 21(2013) 2241-2249'Steroids 78(2013)1281-1287等）。
[0003] 專利CN 201210038066、200910070841 和文獻Steroids 78(2013)1281-1287中公 開了數種制備化合物I的化學方法，通常需要多步反應來進行制備，且在反應過程中需使用 大量有機溶劑和金屬催化劑，而文獻Steroids 68(2003)415-421公開了發酵法制備化合物 I類似物的方法，但是反應底物濃度低(5g/L)，產物分離復雜(細胞量為底物的4倍，難W轉 化完全）。綜上所述，目前尚無高效生產化合物I的生物方法。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，通過此 方法克服了現有技術中采用化學方法制備醬體消炎藥中間體過程中存在的步驟復雜、使用 大量的有機溶劑與金屬催化劑所帶來的環境不友好問題；同時克服了采用發酵法制備過程 中，反應底物濃度低、產物分離復雜的問題。
[0005] 為達到上述目的，本發明采用的技術方案是:一種酶法制備醬體消炎藥中間體醋 酸四締物的方法，W化合物Π 為反應底物，使其在醬體1，2脫氨酶的作用下，在溫度為15~ 30心抑為6.0~8.0的緩沖溶液中，反應生成醬體消炎藥中間體I，
[0006] 所述的化合物Π 的結構式為：
[0007]
[000引所述的醬體消炎藥中間體I的結構式為：
[0009]
[0010]優選地，所述緩沖溶液的抑為7.0~8.0。
[0011] 優選地，在溫度20~30°C條件下進行所述反應。
[0012] 進一步優選地，在溫度25~30°C條件下進行所述反應。
[0013] 優選地，所述的醬體1，2脫氨酶為購自蘇州漢酶生物技術有限公司的牌號為 EW1145的醬體1，2脫氨酶。
[0014] 進一步優選地，所述的醬體1，2脫氨酶的投料質量為所述化合物Π 投料質量的 0.1%~100%。
[0015] 更進一步優選地，所述的醬體1，2脫氨酶的投料質量為所述化合物Π 投料質量的 1% ~10%。
[0016] 優選地，所述的緩沖溶液為憐酸鹽緩沖溶液。
[0017] 進一步優選地，具體實施過程如下:將所述的化合物Π 與醬體1，2脫氨酶加入到所 述的緩沖溶液中，控制反應溫度在15~30°C間，震蕩反應，利用HPLC檢測反應進程，反應結 束后，對反應體系進行離屯、操作，棄上清液，沉淀洗涂、過濾、旋蒸獲得化合物I。
[0018] 由于上述技術方案的運用，本發明與現有技術相比具有下列優點：
[0019] 1)解決了采用化學法制備醋酸四締物過程中，步驟多，且在制備過程中使用大量 的有機溶劑與金屬催化劑，對環境不友好的問題；
[0020] 2)解決了采用發酵法制備醋酸四締物過程中，反應底物濃度低、產物分離復雜的 問題；
[0021] 3)本發明解決了現有技術中無酶法制備醋酸四締物的問題，且本發明的制備步驟 簡單、對環境友好、底物濃度高、酶用量少且生產成本低。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細的說明，但本發明并不限于W下實施 例。實施例中采用的實施條件可W根據具體使用的不同要求做進一步調整，未注明的實施 條件為常規實驗中的條件。
[0023] 實施例1醬體1，2脫氨酶的篩選
[0024] 將lOmg化合物Π 加入到2mL pH7.0的憐酸鹽緩沖溶液中，而后分別加入購自蘇州 漢酶生物技術有限公司生產的不同牌號的醬體1，2脫氨酶lOmg，于30°C震蕩化，檢測底物的 轉化率如表1。
[0025] 表 1
[0026]
[0027]從表1中可看出，在其他條件相同的情況下，采用牌號為EW1145的醬體1，2脫氨酶' 作為醬體1，2脫氨酶時，底物轉化率最高。
[002引實施例2不同溫度條件下的底物轉化率情況
[0029] 將lOmg化合物Π 加入到2mL PH7.0的憐酸鹽緩沖溶液中，加入醬體1，2脫氨酶(購 自蘇州漢酶生物技術有限公司，牌號為EW 1145,下同）lmg，于不同溫度條件下，震蕩反應 12h，檢測底物的轉化率如表2。
[0030] 表 2
[0031]
[0032] ~從表2中可W看出，在其他條件相同的情況下，反應溫度控制在30°C時，化合物Π 的轉化率最高。
[0033] 實施例3不同pH條件下的底物轉化率情況
[0034] 將lOmg化合物Π 加入至lj2mL不同抑的憐酸鹽緩沖溶液中，加入醬體1，2脫氨酶Img， 于30°C震蕩反應12h，檢測底物的轉化率如表3。
[0035] 表 3
[0036]
[0037] ~從表3中可W看出，在其他條件相同的情況下，在pH為7.0的緩沖溶液中進行上述' 反應，底物的轉化率最高。
[0038] 實施例4放大反應
[0039] 將20g化合物Π 加入到500mL pH7.0的憐酸鹽緩沖溶液中，加入醬體1，2脫氨酶Ig， 于30°C震蕩12h，檢測轉化率為100 %。而后對產物進行lOOOOg離屯、lOmin，棄上清，加入50mL Ξ氯甲燒洗涂沉淀，過濾、旋蒸得到產物醋酸四締物19.8g，其純度為98%，含量為99%。
[0040] 在運里，轉化率的分析方法具體如下:采用HPLC(島津LC-2010)裝備有C18色譜柱 (4.6*50mm，5皿），流動相：0-5min，40 %乙臘，50 %濃度為0.1 %甲酸水溶液，流速0.3mL/ min，檢測波長254nm，柱溫30°C，出峰時間為:底物3.2min，產物3.8min。
[0041] 上述實施例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人 ±能夠了解本發明的內容并加 W實施，并不能W此限制本發明的保護范圍，凡根據本發明 精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于，W化合物π為反 應底物，使其在醬體1，2脫氨酶的作用下，在溫度為15~30°C、ρΗ為6.0~8.0的緩沖溶液中， 反應生成醬體消炎藥中間體I， 所述的化合物Π 的結構式為：所述的醬體消炎藥中間體I的結構式為：2. 根據權利要求1所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述緩沖溶液的pH為7.0~8.0。3. 根據權利要求1所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于： 在溫度20~30°C條件下進行所述反應。4. 根據權利要求3所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于： 在溫度25~30°C條件下進行所述反應。5. 根據權利要求1所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述的醬體1，2脫氨酶為購自蘇州漢酶生物技術有限公司的牌號為EW1145的醬體1，2脫氨 酶。6. 根據權利要求1或5所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在 于:所述的醬體1，2脫氨酶的投料質量為所述化合物Π 投料質量的0.1 %~100%。7. 根據權利要求6所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述的醬體1，2脫氨酶的投料質量為所述化合物Π 投料質量的1 %~10%。8. 根據權利要求1所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述的緩沖溶液為憐酸鹽緩沖溶液。9. 根據權利要求1所述的酶法制備醬體消炎藥中間體醋酸四締物的方法，其特征在于， 具體實施過程如下:將所述的化合物Π 與醬體1，2脫氨酶加入到所述的緩沖溶液中，控制反 應溫度在15~30°C間，震蕩反應，利用HPLC檢測反應進程，反應結束后，對反應體系進行離 屯、操作，棄上清液，沉淀洗涂、過濾、旋蒸獲得化合物I。
【專利摘要】<b>本發明公開了一種酶法制備甾體消炎藥中間體醋酸四烯物的方法，該方法以化合物Ⅱ為反應底物，使其在甾體1,2脫氫酶的作用下，在溫度為15~30℃、pH為6.0~8.0的緩沖溶液中，反應生成甾體消炎藥中間體Ⅰ。該方法解決了現有技術中無酶法制備甾體消炎藥中間的問題，與傳統方法相比，該方法的底物濃度高、酶用量低，制備步驟簡單、對環境友好且生產成本低，適合規模化生產。</b>
【IPC分類】C12P33/02
【公開號】CN105543319
【申請號】CN201511020171
【發明人】陶軍華, 梁曉亮, 楊鍇
【申請人】蘇州漢酶生物技術有限公司
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2015年12月30日