一種磷脂酸的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于磷脂技術領域，具體涉及一種磷脂酸的制備方法。
【背景技術】
[0002]磷脂酸(PA )是一種簡單的磷脂，是動植物細胞膜、核膜、質體膜的基本成分，是生命的基礎物質。脂酸是一種酸性磷脂，是由甘油基、脂肪酸基團、磷酸基組成。脂肪酸基團常為棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸等。從化學結構上看，PA為兩性化合物，脂肪酸基團的一端具有強的親油性，而磷酸基團的一端具有強的親水性。磷脂酸在生物體內含量雖然很少，但卻是甘油酯和大多數磷脂的合成的中間體，同時磷脂酸是細胞內重要的第二信使。磷脂酸廣泛應用于在食品、藥品、化妝品中。
[0003]現有關于磷脂酸的制備方法比較多，有薄層色譜分離、溶劑提取、酶轉化以及化學合成等方法。薄層色譜分離、溶劑提取、酶轉化法等均以天然磷脂為原料，天然磷脂主要從大豆、花生、葵花子、油菜籽、紅化籽、芥籽、芝麻仁、橄欖仁、玉米、棉籽等提取，或是從蛋黃提取。上述現有的方法普遍存在制備量少，工藝繁瑣，成本高等缺點。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種磷脂酸的制備方法，該制備方法工藝簡潔、能耗和成本較低，易于實現工業化生產，且可大量制備磷脂酸。
[0005]本發明的上述目的是通過采取如下技術手段來實現的:一種磷脂酸的制備方法，包括以下步驟:取粗卵磷脂溶于有機溶劑中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，將粗卵磷脂溶液與磷脂酶D水溶液混合進行酶催化反應，反應完畢分離出有機相，將有機相濃縮干，得濃縮物，將濃縮物采用萃取劑萃取并低溫沉淀，保溫后取萃取劑不溶物濃縮干后過層析柱，采用洗脫溶劑洗脫后將洗脫液干燥，即獲得較高純度的磷脂酸。
[0006]在上述磷脂酸的制備方法中:
本發明所述的粗卵磷脂的來源優選為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，所述的粗卵磷脂中磷脂酰膽堿含量不低于10%。
[0007]本發明所述的有機溶劑優選為乙酸乙酯、乙酸丁酯或正己烷；所述的粗卵磷脂溶液的濃度優選為100~200g/L。
[0008]本發明所述的磷脂酶D水溶液中磷脂酶D的酶活優選為4~5U/mL，其pH優選為5.6?6.5o
[0009]本發明所述的粗卵磷脂溶液與所述的磷脂酶D水溶液的體積比優選為1~4:1。
[0010]本發明酶催化反應的溫度優選為30~37°C，時間優選為30~40小時。
[0011]本發明所述的萃取劑優選為甲醇，其體積百分含量優選為90~95%，甲醇的用量優選為粗卵磷脂總質量的5~10倍，體積質量比。
[0012]本發明萃取時的溫度優選為40~50°C，萃取時間優選為3~5小時；低溫沉淀時的溫度優選為_10~5°C，保溫時間優選為8~16小時。
[0013]本發明所述的層析柱為硅膠層析柱，硅膠與萃取劑不溶物的質量份配比優選為10-20:1，所述硅膠的目數優選為200~300目。
[0014]本發明所述的洗脫溶劑優選為正己烷、環己烷或二氯甲烷。
[0015]與現有技術相比，本發明具有如下有益效果:
(1)本發明所用的原料為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，因磷脂酰膽堿含量較低而價格低廉；
(2)本發明整體工藝簡潔，能耗和成本較低，易于實現規模化工業化，制得的磷脂酸含量60%以上，純度較高，對我國磷脂工業，保健食品以及藥品工業都將具有重要意義。
【具體實施方式】
[0016]以下實施例僅用于闡述本發明，而本發明的保護范圍并非僅僅局限于以下實施例。所述技術領域的普通技術人員依據以上本發明公開的內容和各參數所取范圍，均可實現本發明的目的。
[0017]實施例1
取100g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為10%)，加入1000mL乙酸丁酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液1000mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為4U/mL，調節pH為5.6。混合有機相和水相，于37°C反應30小時。反應完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到85克濃縮物。濃縮物用500mL 90%甲醇40°C溶解攪拌3小時，隨后冷卻至_10°C，保溫8小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物60克。甲醇不溶物通過600克200目硅膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫劑，TLC追蹤監測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，正己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產品18g，經過HPLC檢測磷脂酸含量約為65%。
[0018]實施例2
200g粗葵花籽卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為15%)，加入1000mL乙酸丁酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液1000mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為5U/mL，調節pH為6.5。混合有機相和水相，于30°C反應40小時。反應完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到178克濃縮物。濃縮物用2000mL95%甲醇48°C溶解攪拌4小時，隨后冷卻至_10°C，保溫16小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物128克。甲醇不溶物通過2600克300目硅膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫機，TLC追蹤監測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，環己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產品37g，經過HPLC檢測磷脂酸含量約為67%。
[0019]實施例3
100g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為16%)，加入1000mL乙酸乙酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液500mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為4U/mL，調節pH為5.6。混合有機相和水相，于37°C反應30小時。反應完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到87克濃縮物。濃縮物用700mL95%甲醇45°C溶解攪拌3.5小時，隨后冷卻至0°C，保溫12小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物70克。甲醇不溶物通過1050克200目硅膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫機，TLC追蹤監測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，正己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產品20g，經過HPLC檢測磷脂酸含量約為62%。
[0020]實施例4
150g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為18%)，加入1000mL正己烷中攪拌溶解，再配置含酶水溶液300mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為4.5U/mL，調節pH為5.8。混合有機相和水相，于35°C反應30小時。反應完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到90克濃縮物。濃縮物用800mL92%甲醇50°C溶解攪拌5小時，隨后冷卻至_10°C，保溫10小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物69克。甲醇不溶物通過1400克300目娃膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫機，TLC追蹤監測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，二氯甲烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產品21g，經過HPLC檢測磷脂酸含量約為65%。
[0021]實施例5
100g粗葵花籽卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為19%)，加入1000mL乙酸丁酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液250mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為5U/mL，調節pH為5.9。混合有機相和水相，于35°C反應35小時。反應完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到92克濃縮物。濃縮物用900mL95%甲醇42°C溶解攪拌3小時，隨后冷卻至5°C，保溫10小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物80克。甲醇不溶物通過1500克300目娃膠柱分離純化，使用環己烷為洗脫機，TLC追蹤監測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，環己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產品20g，經過HPLC檢測磷脂酸含量約為63%。
【主權項】
1.一種磷脂酸的制備方法，其特征是包括以下步驟:取粗卵磷脂溶于有機溶劑中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，將粗卵磷脂溶液與磷脂酶D水溶液混合進行酶催化反應，反應完畢分離出有機相，將有機相濃縮干，得濃縮物，將濃縮物采用萃取劑萃取并低溫沉淀，保溫后取萃取劑不溶物濃縮干后過層析柱，采用洗脫溶劑洗脫后將洗脫液干燥，即獲得較高純度的磷脂酸。2.根據權利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的粗卵磷脂的來源為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，所述的粗卵磷脂中磷脂酰膽堿含量不低于10%。3.根據權利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的有機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丁酯或正己烷；所述的粗卵磷脂溶液的濃度為100~200g/L。4.根據權利要求1或3所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的磷脂酶D水溶液中磷脂酶D的酶活為4~5U/mL，其pH為5.6-6.5。5.根據權利要求1、3或4所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的粗卵磷脂溶液與所述的磷脂酶D水溶液的體積比為1~4:1。6.根據權利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:酶催化反應的溫度為30-37°C，時間為30~40小時。7.根據權利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的萃取劑為甲醇，其體積百分含量為90~95%，甲醇的用量為粗卵磷脂總質量的5~10倍，體積質量比。8.根據權利要求1或7所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:萃取時的溫度為40~50°C，萃取時間為3~5小時；低溫沉淀時的溫度為_10~5°C，保溫時間為8~16小時。9.根據權利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的層析柱為硅膠層析柱，硅膠與萃取劑不溶物的質量份配比為10~20:1，所述硅膠的目數為200~300目。10.根據權利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的洗脫溶劑為正己烷、環己烷或二氯甲烷。
【專利摘要】本發明公開了一種磷脂酸的制備方法，包括以下步驟：取粗卵磷脂溶于有機溶劑中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，將粗卵磷脂溶液與磷脂酶D水溶液混合進行酶催化反應，反應完畢分離出有機相，將有機相濃縮干，得濃縮物，將濃縮物采用萃取劑萃取并低溫沉淀，保溫后取萃取劑不溶物濃縮干后過層析柱，采用洗脫溶劑洗脫后將洗脫液干燥，即獲得較高純度的磷脂酸。本發明所用的原料為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，因磷脂酰膽堿含量較低而價格低廉；該方法整體工藝簡潔，能耗和成本較低，易于實現規模化工業化，制得的磷脂酸含量60%以上，純度較高，對我國磷脂工業，保健食品以及藥品工業都將具有重要意義。
【IPC分類】C12P9/00
【公開號】CN105420301
【申請號】CN201510773773
【發明人】杜陽吉, 梁麗敏, 劉春鳳, 衛娜
【申請人】廣東省食品工業研究所
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年11月13日