治療急性t淋巴細胞白血病的羊毛甾烷型三萜化合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從文冠果的干燥枝中分離得到的一種具有治 療急性Τ淋巴細胞白血病作用的羊毛留烷型三萜類化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 文冠果XanthocerassorbifoliaBunge為無患子科（Sapindaceae)文冠果屬植 物，單屬單種，別名文登閣、僧燈毛道、崖木瓜、山木瓜等。其分布于我國東北、華北及陜西、 甘肅、寧夏、安徽、河南等地的丘陵山坡等，各地也常有栽培，文冠果始載于《救荒本草》，以 文冠花為名，在《本草綱目》中亦有記載。
[0003] 文冠果是我國特有的珍稀木本油料植物，有北方油茶之稱，因其種仁富含脂肪油， 其質量分數高達52%，有很高的經濟價值。除作為油料樹種外，該植物還有良好的藥用、食 用、觀賞等價值。文冠果的莖、枝（文冠木）味甘、微苦，性涼，具有消腫止痛、祛風濕、斂干 黃水的功效，在蒙醫中常用于治療熱性"協日烏素"、瘰疬、風濕性關節炎等疾病。民間用其 種仁治療小兒遺尿癥，中國科學院沈陽應用生態研究所將其開發成治療小兒遺尿的制劑， 療效顯著。
[0004] 從文冠果外果殼、果柄等部位中分離得到的化學成分多以三萜類（尤以玉蕊醇型 三萜類化合物居多）、黃酮類為主，此外還有苯丙素、留類、酚酸、生物堿、單萜及脂肪酸類化 合物。三萜類化合物是文冠果中報道最多的一類成分，其結構母核主要為齊墩果烷骨架結 構的玉蕊醇型（A、B)，此外還有羽扇豆烷型（C)、甘遂烷型（D)、環阿屯烷型、羊毛脂烷型等。
[0005] 文冠果有多方面的藥理活性，如抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抑菌、抑制HIV蛋白酶、改 善學習記憶功能等。其中文冠果種仁中亞油酸、亞麻酸量豐富，經常食用可以預防心腦血管 疾病；花萼片中的秦皮苷可用于解熱、安眠、抗痙；葉中的楊梅苷可用于殺菌、降膽固醇等。 文冠果種仁、果柄和葉的水浸膏用于小兒遺尿癥療效顯著，并可拮抗化學藥物所致的小鼠 學習記憶障礙。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的是提供一種從文冠果的干燥枝中分離得到的一種具有治療急性T 淋巴細胞白血病作用的羊毛留烷型三萜類化合物及其制備方法。
[0007] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0008] 具有下述結構式的化合物（I)，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將文冠果的干燥枝粉 碎，用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗 脫10個柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b)中 75 %乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次 用體積比為25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0011] 進一步地，步驟（a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的 載體。
[0014] 所述的化合物（I)在制備治療急性T淋巴細胞白血病的藥物中的應用。
[0015] 所述的藥物組合物在制備治療急性T淋巴細胞白血病的藥物中的應用。
[0016] 本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0017] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0018] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【附圖說明】
[0019] 圖1為化合物（I)結構式；
[0020] 圖2為化合物（I)理論E⑶值與實驗E⑶值比較。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0022] 實施例1 :化合物（I)分離制備及結構確證
[0023] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0024] 制備方法：（a)文冠果的干燥枝（10kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取（25LX3 次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和 水飽和的正丁醇（3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（398g)和正丁 醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8 個柱體積，再用75 %乙醇洗脫10個柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗 脫物浸膏（163g) ;(c)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體 積比為85:1 (10個柱體積）、45:1 (9個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積）和 1:1 (5個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；(d)步驟（c)中組分3 (49g) 用200-300目正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1 (8個柱體積）、20:1 (10個柱體 積）和10:1 (5個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分 2 (31g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶 液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(244mg)。
[0025] 結構確證：無定形粉末；HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z475. 3228,結合核磁特 征可得分子式為C3QH4403，不飽和度為9。核磁共振氫譜數據SH(ppm，DMS0-d6,500MHZ): Η-1(2· 04,m)，Η-1(2· 28,m)，Η-3(2· 15,m)，Η-3(2· 40,m)，Η-5(1· 51，dd，J= 14. 0,3· 5)， Η-6(1· 70,m)，Η-6(1· 98,m)，Η-7(1· 72,m)，Η-7(2· 01，m)，Η-8(1· 81，m)，Η-11(5· 22,dd，J =6· 1，3· 0)，H-12(L78，m)，Η-12(2· 30，m)，H-15(L25，m)，H-15(L61，m)，H-16(L72，m)， Η-16 (1· 97,m)，Η-17 (1· 42,m)，Η-18 (0· 67,s)，Η-19 (1· 48,s)，Η-20 (1· 61，m)，Η-21 (0· 97， d，J= 6· 4)，Η-22(1· 25,m)，Η-22(1· 43,m)，Η-23(4· 93,ddd，J= 11. 0,2· 5,1· 5)， Η-24(6· 89,d，J= 1· 5)，Η-27(1· 81，s)，Η-28(1· 13,s)，Η-29(0· 98,s)，Η-30(0· 71，s); 核磁共振碳譜數據Sc(ppm，DMS0-d6,125MHz) :52.1 (CH2,1-C)，209.8 (C，2-C)，56.1 (CH2， 3-C)，38. 9 (C，4-C)，53. 1 (CH，5-C)，27. 2 (CH2,6-C)，21. 9 (CH2, 7-C)，41. 3 (CH，8-C)， 146. 7 (C，9-C)，38. 5 (C，10-C)，115. 6 (CH，11-C)，36. 7 (CH2,12-C)，44. 1 (C，13-C)，46. 5 (C， 14-C)，33. 2 (CH2, 15-C)，27. 4 (CH2,16-C)，50. 8 (CH，17-C)，14. 2 (CH3, 18-C)，21. 7 (CH3， 19-C)，32. 9 (CH，20-C)，18. 1 (CH3, 21-C)，40. 2 (CH2, 22-C)，78. 4 (CH，23-C)，149. 2 (CH， 24-C)，129. 1 (C，25-C)，174. 1 (C，26-C)，10. 4 (CH3, 27-C)，25. 1 (CH3, 28-C)，21. 4 (CH3， 29-C)，18. 1(CH3,30-C);碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明該化合物含有α，β-不飽 和-γ-內酯（1741cm%羰基（1698cm3以及烯烴（1646cm3。4和^：NMRi普顯示出 一個四取代 2-甲基-2-丁烯酸內酯環[SHL81(s，Me-27)，4.93(ddd，J= 1L0,2.5， 1. 5Hz，H-23)，6· 89 (d，J= 1. 5Hz，H-24) ;δCIO. 4 (C-27)，78. 4 (C-23)，129. 1 (C-25)， 149.2(C-24)和 174.l(C-26)]，一個三取代雙鍵[SH5.22(dd，J= 6.l，3.0Hz，H-ll); δCl15. 6 (C-l1)，146. 7 (C-9)]，一個羰基[δC209. 8 (C-2)]，五個單峰甲基[δHO. 67 (3H，s，Me-18)，0· 71(3H，s，Me-30)，0· 98(3H，s，Me-29)，1· 13(3H，s，Me-28)，1· 48(3H，s， Me-19)]，一個雙峰甲基[δΗΟ. 97(d，J= 6. 4Hz，Me-21)]，以及八個亞甲基。HMBC譜中， Me-19(SHL48)與C-9(SC146.7) ;Η-11(δΗ5·22)與C-9 和C-12〇C36.7)的相關性表 明C-9和C-11 (δC115. 6)之間含有雙鍵。上述側鏈結構表明該化合物為羊毛留烷型三萜 化合物，HMBC譜中Me-27 與C-24,C-25 和C-26 ;Me-21 與C-17,C-20 和C-22 ;以及Η-24 與 C-22,C-23和Me-27的相關性驗證了上述推論。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及 文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過ECD試 驗確定，理論值與實驗值基本一致（圖2)。
[0026] 實施例2 :化合物（I)藥理作用試驗
[0027] -、材料和儀器
[0028] 急性T淋巴細胞白血病Molt4細胞由暨南大學血液病研究所惠贈；慢性粒細胞白 血病細胞K562細胞由暨南大學由生物化學與分子生物學教研室惠贈。化合物（I)為自 制，HPLC歸一化純度大于98 %，用DMS0分析純溶解配制成5. 5μg/mL溶液備