粘質紅酵母菌株、菌劑及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及粘質紅酵母菌株、菌劑及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]噁唑酰草胺是一種芳氧苯氧丙酸酯類除草劑，是一種水稻專用型莖葉除草劑，對水稻田主要雜草，如稗草、千金子、馬唐和牛筋草等具有良好的控制效果，且對水稻安全。近年來廣泛的應用于我國水稻主產區稻田惡性雜草的防除。隨著惡唑酰草胺使用量的上升，其殘留物對后茬作物和環境的安全性，日益受到關注。然而，基于我國農業生產實際，噁唑酰草胺的投入量還會繼續上升，因此，如何消除噁唑酰草胺在生態環境中的殘留污染，成為一個非常重要的環境問題。
[0003]噁唑酰草胺殘留的修復技術中，最具潛力的方法是生物修復，包括植物修復和微生物修復。植物修復技術具有花費較少、對環境安全等優點，但是，由于植物自身特點，需要合適生長條件、生長速率較低，因此，導致其修復效率較低；噁唑酰草胺微生物修復領域的技術難題是，降解菌資源篩選相對較少，且一些降解菌資源本身存在安全性問題，限制了噁唑酰草胺微生物修復技術的實際應用。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種生產成本低，降解效率高且生產工藝簡潔、成本低、無二次污染的粘質紅酵母菌株，還提供了由該粘質紅酵母菌株制備得到的菌劑以及該菌劑在降解噁唑酰草胺中的應用，具有生產成本低、使用方便，降解噁唑酰草胺效果好，使用方便、節約勞動成本等優勢。
[0005]為解決上述技術問題，提供了一種粘質紅酵母菌，所述粘質紅酵母菌株為粘質紅酵母TDF-2 (Rhodo torula mucilaginosa TDF-2)，保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO:M 2012353，保藏單位地址位于中國武漢大學，保藏日期為2012年9 月 16 日，該菌株被命名為粘質紅酵母TDF_2(7i%oi/oiciri/Ja mucilaginosa TDF-2)。
[0006]作為一個總的技術構思，本發明還提供了一種粘質紅酵母菌劑，所述粘質紅酵母菌劑由上述的粘質紅酵母菌株經活化、種子培養、生產培養后制備得到。
[0007]作為一個總的技術構思，本發明還提供了一種上述的粘質紅酵母菌劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)活化:將粘質紅酵母菌株TDF-2的保存種按平板培養法培養至單菌落出現；
(2)種子培養:將所述步驟(1)中的單菌落接種至種子培養基中培養至對數生長期得到菌液；
(3)生產培養:將所述步驟(2)中培養得到的菌液按接種量為5v/v%?10v/v%接種到生產培養基中培養至對數生長期得到粘質紅酵母菌劑。
[0008]上述的制備方法，優選的，所述平板培養法具體為:將所述粘質紅酵母菌株TDF-2的保存種接種到GSY固體培養基中，在pH值為7.0?7.2，培養溫度為30°C?35°C，振蕩速度為150 rpm?200 rpm的條件下振蕩培養至單菌落出現。進一步優選的，將所述粘質紅酵母菌株TDF-2的保存種接種到GSY固體培養基中，在pH值為7.2，培養溫度為35°C，振蕩速度為180 rpm的條件下振蕩培養至單菌落出現。
[0009]上述的制備方法，優選的，所述種子培養具體為:將單菌落接種到GSY液體培養基中，在pH值為7.0?7.2，培養溫度為30°C?35 °C，振蕩速度為150 rpm?200rpm的條件下振蕩培養。進一步優選的，將單菌落接種到GSY液體培養基中，在pH值為7.2，培養溫度為35°C，振蕩速度為180 rpm的條件下振蕩培養。
[0010]上述的制備方法，優選的，所述生產培養具體為:將菌液接種到GSY液體培養基中，在pH值為7.0?7.2，培養溫度為30 °C?35 °C，振蕩速度為150 rpm?200 rpm的條件下振蕩培養。進一步優選的看，將菌液接種到GSY液體培養基中，在pH值為7.2，培養溫度為35°C，振蕩速度為180 rpm的條件下振蕩培養。
[0011]上述的制備方法，優選的，所述粘質紅酵母菌劑中粘質紅酵母菌TDF-2的濃度為108?10 9 cfu/mL。
[0012]作為一個總的技術構思，本發明還提供了一種上述的粘質紅酵母菌劑或上述制備方法制備得到的粘質紅酵母菌劑在降解噁唑酰草胺中的應用。
[0013]上述的應用方法，優選的，將粘質紅酵母菌劑與化學農藥、肥料混合使用。
[0014]與現有技術相比，本發明的優點在于:
(1)本發明提供的粘質紅酵母菌株TDF-2，生產周期短、成本低，高效、無毒、環保，可通過簡單、快捷的操作方法制備得到酵母菌菌劑，能夠有效用于工業廢水和農業生產中噁唑酰草胺農藥殘留的微生物修復，對噁唑酰草胺去除效率高。本發明的菌株可用于田間作物的生產。本發明的菌株本身具有多種抑制病原物活性物質，能夠有效抑制多種病原物的危害，具有安全、無毒、環保的特點。
[0015](2)本發明提供了一種粘質紅酵母菌劑，具有生產成本低、使用方便，降解噁唑酰草胺效果好等優點，能夠用于農業生產中糧食、水果、蔬菜等的生產。
[0016](3)本發明提供了一種粘質紅酵母菌的應用，該粘質紅酵母菌可以與化學農藥、月巴料等混合使用，在保證作物產量的前提下，不增加額外的勞動量，使用方便、節約勞動成本。此外，由于本發明的菌株可以應用于降解高濃度噁唑酰草胺農藥，因此亦可用于含噁唑酰草胺農藥廢水的處理。
[0017]本發明的粘質紅酵母TDF-2 (Rhodo torula mucilaginosa TDF-2 )，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏單位地址位于中國武漢大學；保藏編號為CCTCC NO:M 2012353，保藏日期為2012年9月16日。
【附圖說明】
[0018]為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整的描述。
[0019]圖1為本發明實施例1的粘質紅酵母菌TDF-2菌株的電鏡掃描圖。
[0020]圖2為實施例3中噁唑酰草胺標準樣品的液相色譜圖。
[0021]圖3為實施例3中不同培養時間下，粘質紅酵母菌劑降解噁唑酰草胺效率及生物量圖。
【具體實施方式】
[0022]以下結合說明書附圖和具體優選的實施例對本發明作進一步描述，但并不因此而限制本發明的保護范圍。
實施例
[0023]以下實施例中所采用的材料和儀器均為市售。
[0024]實施例1:
一種本發明的粘質紅酵母菌TDF-2 (Rhodo torula mucilaginosa TDF-2 )，保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO:M 2012353，保藏單位地址位于中國武漢大學，保藏日期為2012年9月16日，該菌株被命名為粘質紅酵母TDF-2(Rhodo torula mucilaginosa TDF-2)。
[0025]本實施例1的粘質紅酵母菌TDF-2米用以下方法篩選得到:
(1)將采自湖南省農田排水溝的底泥樣品2.0 g加入100 mL GSY液體培養基中得到培養液。GSY液體培養基組分為:4 g/L葡萄糖，0.2g/L K2HP04，0.8 g/L KH2P04，0.lg/L MgS04，
0.2g/L (NH4) #04和 0.005g/L 酵母膏。
[0026](2)調節步驟(1)中培養液的pH 7.2，然后在35±2°C、180 rpm條件下培養至菌液渾濁，時間為10 ho
[0027](3)取步驟(2)中的菌液稀釋涂布到GSY固體培養基上。GSY固體培養基成分:4g/L葡萄糖，0.2g/L Κ2