一種貝利司他異構體的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及藥物化學領域，具體設及的是抗腫瘤藥物belinostat順式異構體的 制備方法。
【背景技術】
[000引 貝利司他度elinostat，PXD101)是由丹麥TopotargetAS公司開發的一種組蛋白 脫乙酷基酶抑制劑（HDACi)。組蛋白去乙酷化酶（HDAC)的過度表達或異常調控會使組蛋白 過度去乙酷化，使染色質被重塑為抑制轉錄的構型，引起相應基因表達下降，導致癌變的產 生，因此對HDAC的抑制作用被認為是具有發展前景的抗癌藥物祀標。Belinostat可W直 接作用于基因異常表達運一環節，從而抑制和糾正腫瘤細胞過度增殖、異常分化，針對常見 的耐藥問題，還可W與其他作用機制的藥物聯合用藥。Be1inostat能有效抑制結腸癌、肺 癌、卵巢癌、骨髓瘤等實體瘤細胞的增殖，對白血病和淋己癌等血液系統的惡性腫瘤也有治 療作用。
[0003] 美國FDA于2009年9月指定Belinostat為孤兒藥，列入快速審批通道，用于治 療復發或難治性外周T細胞淋己瘤（R/RPT化)，歐盟于2012年10月也指定本品為孤兒藥 用于PTCL。目前，TopotargetAS及SpectrumPharmaceuticals公司已完成belinostat 治療ΡΤ化的II期臨床試驗，結果超過設計預期值。2013年12月，原研公司向FDA提交 Belinostat的R/RPTCL新藥申請。2014年7月3日，FDA批準Belinostat用于治療有外 周T細胞淋己癌（PTCL)的患者，主要依據是研究表明，在接受了該藥物治療的患者中總緩 解率達到了近26%。
[0004] Belinostat化學名為巧)-N-徑基-3-(3-苯基氨基橫酷基苯基）丙締酷胺，其結 構式如下：
[0005]
[0006]Belinostat存在一個不對稱的雙鍵結構，合成中可能會產生其順式異構體，結構 式如下：
[0007]
[0008]Belinostat結構式為E型，其順式異構體為Z型。為了嚴格控制藥品質量，保證其 臨床用藥的安全有效，在建立Belinostat有關物質的檢查方法的同時，需要高純度的異構 體II作為雜質對照。現有已報道的Belinostat的合成方法產生的異構體II極少，且該異構 體與Belinostat采用傳統純化方法如重結晶和硅膠柱層析難W將其分開，因此制備得到 純度高符合雜質對照品要求的異構體II具有一定的難度。
【發明內容】
[0009] 本發明提供了一種貝利司他順式異構體的制備方法，該方法W3-苯基氨基橫酷 基苯甲醒為起始原料，經Wittig縮合反應，水解，氯化反應，徑胺縮合反應得到Belinostat 和Belinostat異構體混合物，經反相高效制備液相色譜法分離純化，得到純度99%W上的 Belinostat異構體II，能夠作為雜質對照品用于Belinostat有關物質的檢查。
[0010] 本發明提供的一種貝利司他順式異構體的制備方法，其特征在于，按W下路線合 成：
[0011]
[0012] 具體包含W下步驟：
[0013] 1)化合物IV與Wittig試劑、堿試劑在極性質子溶劑中進行Wittig縮合反應，所述 Wittig試劑可選自乙氧甲酯基甲基Ξ苯基氯化麟、乙氧甲酯基甲基Ξ苯基漠化麟或乙氧甲 酷基甲基Ξ苯基艦化麟，所述極性質子溶劑可選自甲醇、乙醇或異丙醇，所述堿試劑可選自 甲醇鋼、乙醇鋼、叔下醇鐘，反應完畢后在反應液中加堿水解后得到化合物V，水解所用堿 可選自氨氧化裡，氨氧化鋼，氨氧化鐘；
[0014] 2)化合物V先進行氯化反應得到氯化產物化合物VI，所得反應液與鹽酸徑胺在堿 試劑存在下反應得到belinostat和belinostat異構體混合物III，所述氯化試劑可選自草 酷氯、氯化亞諷或橫酷氯，堿試劑可選自碳酸氨鋼、碳酸鋼或碳酸鐘；
[0015] 3)將belinostat和belinostat異構體混合物III采用反相高效制備液相色譜法分 離純化得到化合物IIbelinostat異構體。
[0016] 其中，步驟DWittig試劑優選乙氧甲酯基甲基Ξ苯基漠化麟；縮合反應所述極性 質子溶劑優選甲醇；堿試劑優選乙醇鋼；Wittig試劑與化合物IV的摩爾比為1~3 :1，優選 1. 5:1 ;水解所用的堿優選氨氧化鋼；氨氧化鋼與化合物IV的摩爾比為2~5:1，優選3:1。
[0017] 步驟2)所述氯化試劑采用草酷氯時，草酷氯與化合物V的摩爾比2~5 :1，優選 3 :1;堿試劑優選碳酸鋼，碳酸鋼與化合物VI的摩爾比為2~5:1，優選4:1;鹽酸徑胺與化 合物VI的摩爾比為5~20:1，優選10:1。
[0018] 步驟3)所述反相高效制備液相色譜法純化的具體的操作方法包括W下步驟：
[0019] (a)溶解、過濾：將Belinostat和Belinostat異構體混合物III用0. 05~2%憐 酸溶液/乙臘（85/15體積比）混合液溶解，其中Belinostat和Belinostat異構體混合物 III:0. 05~2%憐酸溶液/乙臘（85/15)混合液的比例為Ig:200ml~500ml，溶解后用孔 徑0. 45μm的有機微孔濾膜過濾，濾去不溶物。
[0020] 化）分離、洗脫：將步驟（a)中所得的溶液，注入反相高效制備液相色譜儀，梯度洗 脫，收集Belinostat異構體的制備組分，得Belinostat異構體溶液；
[0021] (C)產品回收：將步驟化）所得到的Belinostat異構體溶液中的乙臘經蒸饋除去 后，用二氯甲燒提取，蒸饋除去二氯甲燒，得Belinostat異構體。
[0022] 發明人在進行反相高效制備液相分離前，用液質聯用確定高效液相色譜中 Belinostat異構體的出峰時間，摸索合適的色譜條件W進一步應用于制備液相用于分離 Belinostat、Belinostat異構體及其它雜質。采用YMC-TriartC18色譜柱，柱溫30°C，紫外 檢測器220皿，流速Iml/min下，通過變換流動相和洗脫梯度摸索能夠將上述各物質分離的 色譜條件，得出下表洗脫程序能將Belinostat、Belinostat異構體及其它雜質全部分開， 出峰順序為雜質f，Belinostat異構體（雜質b)，Belinostat,雜質h，雜質d，雜質C，雜質 邑，雜質曰，分離度最低為1. 9 (見附圖1)。
[0023]
[0024] ~~W上述色譜條件基礎在制備液相上進行條件摸索，由于制備液相的色譜柱與高效 液相的色譜柱不同，本發明制備液相色譜柱采用了動態軸向壓縮柱，流速要大很多，同時考 慮避免使用緩沖液，嘗試將緩沖液換成憐酸溶液，為得到純度和收率均較高的Belinostat 異構體，需對制備液相色譜洗脫程序進行進一步優化。
[00巧]經試驗摸索得出，步驟3)所述反相高效制備液相色譜法，色譜條件為：色譜柱采 用動態軸向壓縮柱，直徑50mm，填料長度250mm，填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠微球，粒徑 為10μm，孔徑120,V洗脫液采用乙臘和憐酸溶液組成的混合溶液；柱溫為室溫；紫外檢測 器在線檢測，檢測波長為221nm;流速為60-100ml/min，優選80ml/min;通過變換洗脫液中 乙臘和憐酸鹽溶液的比例進行梯度洗脫，所述憐酸溶液濃度為0. 05~2 %，優選0. 1 %，優 選按照如下梯度進行洗脫：
[0026]
[0027] 制備液相分離時Belinostat與Belinostat異構體的分離情況見附圖2。
[0028] 本發明提供的貝利司他順式異構體的制備方法，W3-苯基氨基橫酷基苯甲醒 為起始原料，經Wittig縮合反應，水解，氯化反應，徑胺縮合反應得到Belinostat和 Belinostat異構體混合物，混合物中Belinostat順式異構體的含量較現有技術有顯著的 提高。對反應得到Belinostat和Belinostat異構體混合物采用反相高效制備液相色譜法 進行分離純化，梯度洗脫得到純度99%W上的符合Belinostat有關物質檢查中雜質對照 品要求的Belinostat異構體。
[0029] 下面結合【具體實施方式】的實施例和說明書附圖對本發明做進一步說明。
[0030] 說明書附圖
[0031] 附圖1高效液相色譜Belinostat、Belinostat異構體及其它雜質出峰順序圖
[0032] 附圖2制備液相Belinostat、Belinostat異構體出峰圖
【具體實施方式】
[0033] 實施例IBelinostat和Belinostat異構體混合物的制備
[0034] 步驟1 :化合物V的制備
[0035]
[0036] 憐酷基乙酸Ξ乙醋（4. 73g，0. 0211mol)加入反應器中，加入甲醇30血，攬拌溶 解，冷至-5-0°C，加入乙醇鋼（2. 61g，0. 0384mol)，加畢，攬拌10-20分鐘，滴加入化合物 VII巧g，0. 0192mol)和甲醇（20血）的溶液，于室溫下攬拌1-4小時，反應畢，加入1M氨氧化 鋼溶液58ml和甲醇10ml，與室溫下攬拌過夜，反應畢，加入乙酸乙醋（15ml)，水（30ml)，攬 拌15分鐘，分相，棄乙酸乙醋相，水相用10%鹽酸酸化至抑2,與室溫下攬拌1小時，過濾， 水洗，干燥，得化合物V4.Ig，收率70. 7 %。
[0037] 步驟2 :混合物II