一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分子遺傳學技術領域，具體的說是設及一種擴增水稻香味基因Ba化2 序列的方法。
【背景技術】
[0002] 香稻是一種具有獨特香味的功能稻和特種稻，由于食味佳且具有顯著藥效，香稻 米在我國古代就享有"貢米"之稱，其國際市場價格遠遠高于非香米，是非香米優質米的2-3 倍。隨著市場需求量的增加，明確水稻香味產生的原因是發掘香味基因資源和發揮香稻優 勢的有效策略，更是育種家開展優質特色水稻品種培育的首選途徑。早在90年代初，分子 標記方法的應用將水稻的香味基因定位在第8染色體上，但直到2008年，才有相關研究發 現水稻的香味主要受第8染色體上的Ba化2基因控制，并開發了擴增香味基因Ba化2整個 基因序列的引物（該引物也是目前唯一已報道的可擴增Ba化2基因的引物，見表1)。
[0003]利用運一研究結果，對擴增出的Ba化2基因進行測序分析，目前已發現導致香稻 香味產生的原因主要有四種：Ba化2基因第2個外顯子的7bp缺失、第7個外顯子的8bp缺 失、第4-5外顯子803bp的缺失、第13外顯子中插入3bp，并開發了相應分子標記。但由于 氣候條件和地理位置的不同，我國水稻還存在很多特殊的香稻地方品種，在營養成分及微 量元素的含量方面都優于其他品種，利用已開發的4種香味基因型分子標記無法檢測出其 香味類型，且在加大對香稻品種研究的同時，發現利用已報道的引物根本無法擴增出運些 品種的Ba化2整個基因序列，阻礙了香稻新香源的挖掘，極大地影響了香稻資源的育種利 用。
[0004] 表1已發表的擴增整個水稻香味基因Ba化2序列的引物
[0005]
[0006] 針對上述技術的不足，本發明為香味基因Ba化2重新設計了一組引物，并通過對 PCR擴增體系和擴增程序的重新摸索，最終形成了擴增香稻Ba化2整個基因序列的一種新 方法。
[0007] 公開于該【背景技術】部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應 當被視為承認或W任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

【發明內容】

[0008] 針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種擴增水稻香味基因Ba化2序列的 方法。
[0009] 本發明提供的技術方案為：
[0010] 一種擴增水稻香味基因Ba化2序列的方法，包括W下步驟：
[0011] (1)由如序列表SEQIDNo. 1-26所示序列的特異性引物組；
[0012] (2)經過堿基的取代、缺失或添加；
[0013] (3)在PCR擴增體系中經過聚合酶鏈式反應得到水稻香味基因Ba化2序列。
[0014]作為優選，所述的PCR擴增體系由ΚΑΡΑ 2G Robust Mix Jorward primer(10Mm)、 Reverse primer (lOMm)、TemplateDM和d地2〇組成。
[0015] 作為優選，所述的PCR擴增體系共計25μ^其中ΚΑΡΑ 2G Robust Mixl2. 5μ^ F'orward primer (lOMm)1μLReverse primer (lOMm)1μLTemplateDM1μL和d地2〇 9.5μL。
[0016] 作為優選，所述的聚合酶鏈式反應的程序為94°C5min;94°C30sec，60°C30sec， 72°CImin，循環 35 個；72°C5min;12°Cforever。
[0017] 本發明還提供了使用所述的擴增水稻香味基因Ba化2序列的方法擴增谷對實香 懦的Ba化2基因，其具有如序列表SEQIDNo.27所示的核巧酸序列。
[0018] 本發明還提供了所述的擴增水稻香味基因Ba化2序列的方法在鑒定水稻香稻品 種與水稻非香稻品種中的用途。
[0019] 本發明還提供了所述的擴增水稻香味基因Ba化2序列的方法在定向培育水稻香 稻品種基因型鑒定中的用途。
[0020] 與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：
[0021] (1)本發明的方法具有簡單、快速、技術要求較低、結果鑒定準確的特點。
[0022] (2)本發明的方法可用于鑒定水稻香稻品種與水稻非香稻品種；也可用于定向培 育水稻香稻品種基因型的鑒定，可用于常規稻和育種中間材料的基因型鑒定中，在分子標 記定向培育香稻品種各環節中起到重要作用。
【附圖說明】
[002引 圖1為每個引物擴增香味基因Ba化2的擴增范圍。
【具體實施方式】
[0024] 下面結合實施例對本發明的【具體實施方式】進行詳細描述，但應當理解本發明的保 護范圍并不受【具體實施方式】的限制。
[00巧]除非另有其它明確表示，否則在整個說明書和權利要求書中，術語"包括"或其變 換如"包含"或"包括有"等等將被理解為包括所陳述的元件或組成部分，而并未排除其它 元件或其它組成部分。
[0026]連施例1:
[0027] (1)引物設計
[002引參考相關文獻從GenBank數據庫中下載水稻香味基因F、R、Fcx和Rex的序列，利 用DNAStar分別對各個基因核巧酸序列進行分析和比較，尋找出適合設計特異性引物的保 守區域，利用GeXP express profiler工具設計針對4個水稻香味基因的特異性引物（見 表2)。
[002引 表2引物信息
[0030]
[0032] (2)PCR所用到的試劑：KAPA2GRobust(Sku:KM5525)。
[00對 （3)PCR的操作步驟：
[0034] PCR擴增體系為：
[0035]
[0036] PCR擴增程序為：
[0037]
[0038]
[0039] (4)每個引物擴增Ba化2基因的擴增范圍（參照NCBI網上的抓770320序列）：
[0040]







[004引（5)利用該組引物擴增出的谷對實香懦（品種名）的Ba化2基因序列
[0049] 使用本發明的方法對谷對實香懦（品種名）擴增出的Ba化2基因，如SEQ ID No. 27 所示的核巧酸序列。
[0050] 前述對本發明的具體示例性實施方案的描述是為了說明和例證的目的。運些描述 并非想將本發明限定為所公開的精確形式，并且很顯然，根據上述教導，可W進行很多改變 和變化。對示例性實施例進行選擇和描述的目的在于解釋本發明的特定原理及其實際應 用，從而使得本領域的技術人員能夠實現并利用本發明的各種不同的示例性實施方案W及 各種不同的選擇和改變。本發明的范圍意在由權利要求書及其等同形式所限定。
[0051]











【主權項】
1. 一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 由如序列表SEQIDNo. 1-26所示序列的特異性引物組； (2) 經過堿基的取代、缺失或添加； (3) 在PCR擴增體系中經過聚合酶鏈式反應得到水稻香味基因Badh2序列。2. 根據權利要求1所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法，其特征在于，所述的 PCR擴增體系由ΚΑΡΑ2GRobustMix、Forwardprimer(l〇Mm)、Reverseprimer(lOMm)、 TemplateDNA和ddH20 組成。3. 根據權利要求2所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法，其特征在 于，所述的PCR擴增體系共計 25μL，其中ΚΑΡΑ2GRobustMix12. 5μL、Forward primer(10Mm)lyL、Reverseprimer(10Mm)lyL、TemplateDNAlyL和ddH20 9.5yL〇4. 根據權利要求1所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法，其特征在于，所述 的聚合酶鏈式反應的程序為94°C5min;94°C30sec，60°C30sec，72°Clmin，循環35個； 72°C5min;12°Cforever。5. -種使用權利要求1-4任一所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法擴增谷對實 香糯的Badh2基因，其特征在于，其具有如序列表SEQIDNo. 27所示的核苷酸序列。6. 根據權利要求1-4任一所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法在鑒定水稻香稻 品種與水稻非香稻品種中的用途。7. 根據權利要求1-4任一所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法在定向培育水稻 香稻品種基因型鑒定中的用途。
【專利摘要】本發明屬于分子遺傳學技術領域，具體的說是涉及一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法。一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法，包括以下步驟：(1)由如序列表SEQ？ID？No.1-26所示序列的特異性引物組；(2)經過堿基的取代、缺失或添加；(3)在PCR擴增體系中經過聚合酶鏈式反應得到水稻香味基因Badh2序列。本發明的方法具有簡單、快速、技術要求較低、結果鑒定準確的優點；可用于鑒定水稻香稻品種與水稻非香稻品種；也可用于定向培育水稻香稻品種基因型的鑒定，可用于常規稻和育種中間材料的基因型鑒定中，在分子標記定向培育香稻品種各環節中起到重要作用。
【IPC分類】C12N15/29, C12N15/10, C12Q1/68
【公開號】CN105331619
【申請號】CN201510880349
【發明人】曾宇, 夏秀忠, 張宗瓊, 楊行海, 農保選, 李丹婷
【申請人】廣西壯族自治區農業科學院水稻研究所
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年12月3日