合，并可單獨使用陽離子聚合物。
[0196] 載玻片的制備：
[0197] 制備以下溶液以處理C0C的表面：
[0198] ?溶液1 :2重量％在IXPBS中的HEC
[0199] ?溶液2 :0. 1重量％的在Milli-Q水中的中性DMAM-C22M(實施例3中所述聚合 物3)
[0200] ?溶液3 :0. 1重量％的在Milli-Q水中的陰離子DMAM-C22(實施例4中所述聚合 物4)
[0201] ?溶液4 :0. 1重量％的在Milli-Q水中的陽離子DMAM-C22(實施例5中所述聚合 物5)〇
[0202] 聚合物溶液在C0C上培育過夜，然后利用50y1IXPBS漂洗一次，接著在IXPBS 浴中5分鐘。
[0203] 利用溶液1、2和3處理過的C0C載玻片接著利用PLL溶液在37°C于培育箱中利用 具有5%0)2的潮濕氣氛處理2小時，然后利用IXPBS漂洗。
[0204] 在沒有PLL的情況下直接使用利用溶液4處理過的C0C載玻片。
[0205] 對各載玻片而言，粘合聚硅氧烷微室，以限定體積為50y1的單元和限制用于粘 附細胞的表面積，進而促進成像。
[0206] 將10y1濃度為2000細胞/y1的上皮細胞（MCF-7系，乳腺癌）溶液注入各室中。
[0207] 在培育箱中利用具有5 % 0)2的潮濕氣氛培養24小時后，載玻片利用IXPBS洗滌 兩次以去除沒有粘附于基質的細胞。接著在3. 7%多聚甲醛溶液中將已粘附于C0C的細胞 固定30分鐘。固定后，載玻片在IXPBS中洗滌兩次。
[0208] EpCAM-FITC標記+DAPI/Vectashield :
[0209] 為了比較處理的效率，通過熒光顯微術觀察利用熒光將它們標記后附著于載玻 片的細胞。在環境溫度下利用anti-EpCAM抗體（20ylEpCAMAb+500ylPBS+1%BSA) 標記細胞膜30分鐘。接著利用50y1包含1 %BSA的IXPBS溶液進行第一次洗滌，然后 在IXPBS浴中于環境溫度下5分鐘。最后，將一滴DAPI/Vectashield應用于細胞的各斑 點，并利用尺寸為50X24mm的蓋玻片覆蓋所有一切。將樣品保持在4°C直至獲得熒光圖像 (DAPI+FITC)。
[0210] 結果：
[0211] ?HEC+PLL溶液改善細胞對C0C表面的粘附。另一方面，該處理似乎不適合MCF-7 細胞的培養。在我們的實驗中，我們觀察到粘附于C0C的細胞的低密度。在圖2a中明顯的 是，許多細胞似乎爆裂或進行細胞凋亡過程，通過EpCAM標記可見的膜沒有良好限定或不 能觀察到。
[0212] ?對C0C+DMAM-C22M(0. 35% )+PLL而言，觀察到在FITC通道中的高背景噪聲，細 胞的合適密度但許多溶解或凋亡的細胞。該處理似乎是將細胞附著于C0C但不是其培養的 良好備選。
[0213] ?對C0C+陰離子DMAM-C22+PLL而言，背景噪聲低，這表明該處理并不促進抗體的 非特異性吸附。然而，附著于C0C表面的細胞的密度低，這意味著細胞在粘附于基質中存在 問題。也觀察到半凋亡的細胞而非溶解的細胞。
[0214] ?陽離子DMAM-C22處理（沒有PLL)似乎適于促進MCF-7細胞的粘附和分裂。在 圖2b中觀察到合適的細胞密度和細胞的雙聯體或多連體，這是分裂的細胞的特性。
[0215]因此發現根據本發明的帶電荷的聚合物可構成相對于現有技術狀況的改善，或以 與陽離子聚合物結合的陰離子形式改善細胞粘附，或單獨使用促進細胞培養。
【主權項】
1. 線性、支化或交聯聚合物，每IOOmol%含有： -a)摩爾比例大于或等于75 %和小于或等于99. 95 %由N，N-二烷基丙烯酰胺產生的單 體單元，其中烷基各自含有1-4個碳原子； -b)摩爾比例大于或等于0.05%和小于或等于1 %由式（I)單體產生的單體單元： CH2 = C (R i) -C ( = 0) -0- [ (CH2-CH (R2) -〇] n-R3 (I) 其中n代表1-50的數，R1代表氫原子或甲基，R2代表氫原子、甲基或乙基，R 3代表含有 8-30個碳原子的飽和或不飽和和直鏈或支鏈脂族烴基，和 -c)任選的摩爾比例大于0%和小于或等于24%由含有游離、部分成鹽或完全成鹽的 強酸官能團的單體產生的單體單元或由式（II)單體產生的單體單元： CH2 = C (R 4) -C ( = 0) -Y- (CH2)n-N(R5) (R6) (II) 其中m代表1-4的數，Y代表0或NH，R4代表氫原子或甲基，相同或不同的1? 5和1?6代 表甲基或乙基，和 -d)任選的摩爾比例大于0%和小于或等于1%二烯屬或多烯屬交聯單體。2. 如權利要求1所定義的聚合物，其中由所述N，N-二烷基丙烯酰胺產生的單體單元由 N，N-二甲基丙烯酰胺或N，N-二乙基丙烯酰胺產生。3. 如權利要求1或2所定義的聚合物，其中由所述式（I)單體產生的單體單元由如下 產生： -二十五重乙氧化的甲基丙烯酸山崳基酯，或 -二十二重乙氧化的甲基丙烯酸硬脂基酯。4. 如權利要求1-3中任一項所定義的聚合物，其特征在于，當其含有由具有游離、部分 成鹽或完全成鹽的強酸官能團的所述單體產生的單體單元時，這些由游離、部分成鹽或完 全成鹽的2-甲基-2-[ (1-氧代-2-丙烯基）氨基]-1-丙烷磺酸產生。5. 如權利要求1-3中任一項所定義的聚合物，其特征在于，當含有由所述式（II)單體 產生的單體單元時，這些由如下產生： -甲基丙烯酸二甲基氨基乙基酯，或 -N-[3-(二甲基氨基）丙基]丙烯酰胺。6. 如權利要求1-3中任一項所定義的聚合物，每IOOmol%含有： -a)摩爾比例大于或等于99 %和小于或等于99. 9%由所述N，N-二烷基丙烯酰胺產生 的單體單元；和 -b)摩爾比例大于或等于0. 1 %和小于或等于1 %由式（i'）單體產生的單體單元： CH2 = C (CH 3) -C ( = 0) -0- [ (CH2-CH2-O] n，-R' 3 (I'） 其中n'代表4-25的數，R' 3代表含有12-22個碳原子的飽和或不飽和和直鏈或支鏈烷 基。7. 如權利要求4所定義的聚合物，每IOOmol %含有： -a)摩爾比例大于或等于80%和小于或等于95%由所述N，N-二烷基丙烯酰胺產生的 單體單元； -b)摩爾比例大于或等于〇. 1%和小于或等于〇. 5%來自式a'）單體的單體單元： CH2 = C (CH 3) -C ( = 0) -0- [ (CH2-CH2-O] n，-R' 3 (I'） 其中n'代表4-25的數，R' 3代表含有12-22個碳原子的飽和或不飽和和直鏈或支鏈烷 基，和 -C)摩爾比例大于或等于4%和小于或等于19%由游離、部分成鹽或完全成鹽的2-甲 基-2-[ (1-氧代-2-丙烯基）氨基]-1-丙烷磺酸產生的單體單元。8. 如權利要求5所定義的聚合物，每IOOmol %含有： -a)摩爾比例大于或等于80%和小于或等于95%由所述N，N-二烷基丙烯酰胺產生的 單體單元； -b)摩爾比例大于或等于0. 1%和小于或等于0.5%來自所述式（i'）單體的單體單 元： CH2 = C (CH 3) -C ( = 0) -0- [ (CH2-CH2-O] n，-R' 3 (I'） 其中n'代表4-25的數，R' 3代表含有12-22個碳原子的飽和或不飽和和直鏈或支鏈烷 基，和 -c)摩爾比例大于或等于4%和小于或等于19%由甲基丙烯酸二甲基氨基乙基酯或 N-[3-(二甲基氨基）丙基]丙烯酰胺產生的單體單元。9. 處理全部或部分由疏水材料構成的表面的方法，其特征在于包括： -階段a)，在其過程中使如權利要求1-8中任一項所定義的聚合物的水、水/有機或有 機溶液與所述表面接觸并培育； -階段b)，漂洗從階段a)獲得的所述表面，以從所述表面去除沒有吸附在表面上的所 述聚合物； -任選的階段c)，干燥從階段b)獲得的所述漂洗過的表面。10. 如權利要求9所定義的方法，其中全部或部分由疏水材料構成的所述表面為芯片、 微流體系統、微系統或芯片上的實驗室的表面。11. 如權利要求9和10所定義的方法，其特征在于在階段a)之前，其包括階段d)，成 型或蝕刻階段，以在全部或部分由疏水材料構成的所述表面上產生在一個方向上表現出至 少一個小于Imm的尺寸的通道。12. 如權利要求1-8中任一項所定義的聚合物作為試劑在改變存在于水、水/有機或有 機溶液中的實體與全部或部分由疏水材料構成的表面之間的相互作用中的用途。13. 水、有機或水/有機溶液，以10 4_10%的重量濃度包含如權利要求1-8中任一項所 定義的線性、支化或交聯聚合物。14. 試劑盒，包括： a) 至少一個容器，含有如權利要求1-8中任一項所定義的線性、支化或交聯聚合物，和 b) 至少一個容器，含有能和意欲制備包含所述線性、支化或交聯聚合物的所述水、有機 或水/有機溶液的液體基料。
【專利摘要】本發明涉及線性、支化或交聯聚合物，每100mol％含有：a)摩爾比例不低于75％和不高于99.95％來自N,N-二烷基丙烯酰胺的單體單元；b)摩爾比例不低于0.05％和不高于1％來自式(I)單體的單體單元：CH2＝C(R1)-C(＝O)-O-[(CH2-CH(R2)-O]n-R3(I)；c)任選的摩爾比例高于0％和不高于24％來自部分或全部成鹽的含有游離強酸官能的單體的單體單元，或來自式(II)單體的單體單元：CH2＝C(R4)-C(＝O)-Y-(CH2)m-N(R5)(R6)(II)；d)任選的摩爾比例高于0％和不高于1％二乙烯或多乙烯交聯單體。本發明也涉及使用所述聚合物處理由疏水材料制成的表面的方法，以及所述聚合物作為試劑在改變包含在水、水-有機或有機溶液中的物類與所述疏水表面之間的相互作用中的用途。
【IPC分類】C08F220/56
【公開號】CN105143292
【申請號】CN201480017629
【發明人】J-L·維爾維, O·布勞恩
【申請人】化工產品開發公司Seppic, 科學研究國家中心, 居里研究所, 皮埃爾與瑪麗·居里大學 (巴黎第六大學)
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2014年3月21日
【公告號】WO2014154977A1