一種從田基黃中提取分離白前苷b的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種從田基黃中提取分離白前苷B的方法，屬于中藥活性成分提取領 域。
【背景技術】
[0002] 白前苷B(vincetoxicosideB)，又名槲皮素-7-鼠李糖苷，為黃酮醇類化合物， 主要藥理作用有如下幾個方面：（1)抗病毒作用：對乙肝表面抗原（HBsAg)和乙肝核心抗 原（HBeAg)檢測試劑實驗，結果表明能顯著抑制乙肝表面抗原（HBsAg)和乙肝核心抗原 (HBeAg)，具有顯著防治乙肝病毒作用。DurHan-Kwon等（Kwon，DurHan;Choi，WhaJeong; Lee,ChoongHwan；Kim,JinHee；Kim,ManBae.Flavonoidcompoundhavinganantiviral activity.TO2007069823,KR720151.)從中藥魚腥草中采用色譜的方法分離得到該化 合物，實驗研究顯示出抗輪狀病毒和鼻病毒活性。（2)保肝作用：研究表明小鼠腹腔注射 槲皮素-7-鼠李糖苷具有較好的保肝退黃作用。（3)抗菌作用：BonillaRivera，Pablo E.等(BonillaRivera,PabloE.；LockdeUgaz,Olga；JurupeChico,Hilda. Chemical-biologicalstudyoffferneriadactilophylla[J].BoletindelaSociedad QuimicadelPeru，1991，57(3):182_188.)從Werneriadactilophylla中分離得到白前苷 B等幾種黃酮化合物并證明體外對多種細菌具有抗菌活性。
[0003] 田基黃為藤黃科金絲桃屬植物地耳草（HypercumjaponicumThunb.)的干燥全草， 目前，針對田基黃活性成分的分離提取的研究廣泛，但得到的提取產物多為總黃酮類化合 物。易運紅等（正交試驗法優選田基黃中總黃酮提取工藝，易云紅等，化工技術與開發， 2010年12月第39卷第12期）采用正交試驗法優選田基黃中總黃酮提取工藝，用乙醇提 取田基黃得到總黃酮提取物；傅亢等（田基黃黃酮類化學成分的研究，傅亢等，中國天然 藥物，2004, 2(5))用多種色譜方法對田基黃乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分進行化學成 分分離，從田基黃中分離得到7個黃酮類化合物；中國專利文獻CN1660253A中公開了一 種提取田基黃方法，提取物中含有紫杉葉素-7-鼠李糖苷（Taxifolin-7-rhamnoside)、異 槲皮苷（Isoquercitrin)、槲皮苷（Quercitrin)、白前苷（VincetoxicosideB)、槲皮素 (Quercetin)五種化合物；上述研究中均未能分離提取單一的白前苷化合物。
[0004] 現有技術中針對白前苷B的提取研究主要采用多步驟、多種色譜方法相結 合的方式，專利文獻CN1470 518A公開了 一種從田基黃中提取白前苷B單體的方法， 是將藥材粉碎水提取后，進行二次柱分離，得白前苷B單體；非專利文獻（Jinyong Peng,GuorongFan,andYutianffu.PreparativeSeparationandIsolationofThree FlavonoidsandThreePhloroglucinolDerivativesfromHypericumjaponicum Thumb,usingHigh-SpeedCountercurrentChromatographybyStepwiseIncreasing theFlowRateoftheMobilePhase.JournalofLiquidChromatography&Related Technologies, 29:1619 - 1632, 2006)采用高速逆流色譜法從田基黃醇提物中一次性分得 68mg純度為95. 6%的白前苷B。上述提取方法需要將提取與色譜方法結合，分離方法復雜， 不適用于大規模提取分離。鑒于此，研究一種方法簡單、可以用于產業化生產的提取單一白 前苷B的分離方法是本發明亟待解決的問題。

【發明內容】

[0005] 因此，本發明所要解決的技術問題在于克服現有技術中的單一白前苷B分離方法 步驟復雜、不適用于大規模分離提取的技術缺陷，從而提出一種提取方法簡單、可以用于產 業化生產的提取單一白前苷B的分離方法。
[0006] 本發明提供一種白前苷B的制備方法，包括：
[0007] 取田基黃藥材，加入水加熱提取，濾過，收集濾液，濃縮至相當于每體積份相當于 含田基黃藥材生藥量〇. 5~2重量份；加入生藥量0. 5-2倍聚乙二醇溶液，混勻，再加入生 藥量0.5-2倍乙酸乙酯萃取，振蕩，靜置使分成不相溶的兩層；取乙酸乙酯層，濃縮回收乙 酸乙酯，得固體，適量水洗，干燥，得粉末狀黃色提取物，即得，所述重量份與體積份比例為 g/ml〇
[0008] 上述制備白前苷B的方法中，優選聚乙二醇的型號為PEG600-4000,優選聚乙 二醇濃度l〇wt% -20wt%，優選提取次數為1-3次；優選聚乙二醇型號為PEG600,濃度 15wt%，萃取 2-3 次。
[0009] 上述制備白前苷B的方法中，優選加水加熱回流提取時加水量為5-15倍，提取 〇.3-1小時；更優選加水量為10倍，提取0. 5小時。
[0010] 上述制備白前苷B的方法中，所述白前苷B的含量為>80%，優選>90%。
[0011] 本發明的上述技術方案相比現有技術具有以下優點：
[0012] 本發明采用聚乙二醇水溶液和乙酸乙酯構成兩相體系，利用聚乙二醇對黃酮的高 溶解能力，選擇性的使白前苷B保留在乙酸乙酯層，而田基黃中的其他黃酮類成分及其他 極性相近成分（比白前苷B極性稍大）截留到聚乙二醇層，從而達到精確萃取的目的。通 過聚乙二醇/乙酸乙酯選擇性萃取黃酮單體，效果良好。和現有技術中所用多步、多種柱色 譜方法相結合的工藝相比本發明的制備方法簡單，使用材料簡單，適宜放大化工業生產，進 行大規模提取分離。
【具體實施方式】
[0013] 為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明 進行進一步詳細說明。
[0014] 實施例1
[0015] 取3000克田基黃藥材，分批多次加水加熱回流提取。提取3次，每次加水5倍量， 提取0. 5小時，濾過，合并所有濾液，濃縮至稠浸膏，減壓低溫干燥至半固體狀。平行分成3 份，每份相當于田基黃藥材1000克。
[0016] 配制20wt%的PEG 600水溶液適量，加入等量的乙酸乙酯使分層。備用。
[0017] 每份提取物（相當于田基黃藥材1000克）用加入上述液體分散分離，重復一次， 每次用量1升。合并上層溶液，減壓回收至近干。以少許去離子水攪拌，濾過，所得固體在 自然狀態下干燥至近干，80°C干燥，即得白前苷B樣品。
[0018] 實施例2
[0019] 取3000克田基黃藥材，分批多次加水加熱回流提取。提取2次，每次加水5倍量， 提取1小時，濾過，合并所有濾液，濃縮至稠浸膏，減壓低溫干燥至半固體狀。平行分成3份， 每份相當于田基黃藥材1〇〇〇克。
[0020] 配制15wt%的PEG2000水溶液適量，加入等量的乙酸乙酯使分層。備用。
[0021] 每份提取物（相當于田基黃藥材1000克）用加入上述液體分散分離，重復一次， 每次用量1升。合并上層溶液，減壓回收至近干。以少許去離子水攪拌，濾過，所得固體在 自然狀態下干燥至近干，80°C干燥，即得白前苷B樣品。
[0022] 實施例3
[0023] 取3000克田基黃藥材，分批多次加水加熱回流提取。提取3次，每次加水15倍量， 提取0. 3小時，濾過，合并所有濾液，濃縮至稠浸膏，減壓低溫干燥至半固體狀。平行分成3 份，每份相當于田基黃藥材1〇〇〇克。
[0024] 配制10wt%的PEG4000水溶液適量，加入等量的乙酸乙酯使分層。備用。
[0025] 每份提取物（相當于田基黃藥材1000克）用加入上述液體分散分離，重復一次， 每次用量1升。合并上層溶液，減壓回收至近干。以少許去離子水攪拌，濾過，所得固體在 自然狀態下干燥至近干，80°C干燥，即得白前苷B樣品。
[0026] 實施例4
[0027] 取3000克田基黃藥材，分批多次加水加熱回流提取。提取2次，每次加水10倍量， 提取0. 5小時，濾過，合并所有濾液，濃縮至稠浸膏，減壓低溫干燥至半固體狀。平行分成3 份，每份相當于田基黃藥材1〇〇〇克。
[0028] 配制15wt%的PEG600水溶液適量，加入等量的乙酸乙酯使分層。備用。
[0029] 每份提取物（相當于田基黃藥材1000克）用加入上述液體分散分離，重復一次， 每次用量1升。合并上層溶液，減壓回收至近干。