一種泡狀番荔枝素的制備方法及抗腫瘤應用
【技術領域】
[0001] 本發明公開了一種植物提取物的制備方法及應用，特別涉及一種泡狀番荔枝素的 制備方法及抗腫瘤應用。
【背景技術】
[0002] 泡狀番荔枝素 （Bullatanocin)，CAS 號 129138-51-8,分子式 C37H66O8，分子量 630. 93,結構式為
泡狀番蓀枝素是來源于番蓀枝科(Annonaceae)泡狀番蓀枝Rich.的 樹皮的一種乙酰精寧類化合物。研究表明，泡狀番荔枝素具有細胞毒活性，對肺和結腸癌細 胞株的細胞毒作用比阿霉素 強10000倍，海IB式驗（BST)的LC50為0. 43 μ g/mL ;具有抗腫 瘤作用。對A - 549、MCF - 7 和HT - 29 的 ED50 依次為 5. lSXIO'yg/mUO· 0242 yg/mL 和1.66父1〇-111^/111匕大凰線粒體生物測試的扣50為50.71^/1^/1^蛋白。目前，番荔枝 科植物次生代謝物番荔枝乙酰精寧類化合物被視為新的抗腫瘤藥物的潛在資源，是抗腫瘤 藥物的候選藥物。
[0003] 通過文獻檢索，國內尚未見泡狀番荔枝素用于制備抗腫瘤藥物。

【發明內容】

[0004] 為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌癥，提供一種泡狀番荔枝素的制備 方法及抗腫瘤應用。
[0005] 為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案： 泡狀番荔枝素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 取泡狀番荔枝樹皮粉碎60-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力15-25MPa、溫 度40-60°C的條件下，通入液態C02超臨界萃取2-3小時，在壓力5-10MPa，溫度50-60°C解 析，得萃取物； (2) 上述萃取物用熱水分散，加入大孔樹脂中吸附，乙醇水溶液梯度洗脫，收集洗脫液 濃縮，得沉淀物； (3) 上述沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得泡狀番荔枝 素。
[0006] 步驟（2)中所述的大孔樹脂可選AB-8、HZ816、D101和HPD100中的一種。
[0007] 步驟（2)中所述的乙醇水溶液梯度洗脫為：先取4-8BV20-60%的乙醇洗脫雜質，再 用3-8BV70-95%乙醇溶液洗脫。
[0008] 所述制備的泡狀番荔枝素，在其口服配方中添加腸吸收促進劑，包含中鏈脂肪酸 鹽、膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。
[0009] 采用本法制備泡狀番荔枝素，工藝簡便易操作，制備量大，產品得率高，而且低污 染；添加腸吸收促進劑，有利于提高生物利用度。
[0010] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 : 泡狀番荔枝素的制備 泡狀番荔枝樹皮原料干燥后粉碎60目，取5kg加入超臨界萃取釜中，通入液態C02,設 置在萃取壓力15MPa、溫度50°C，達到上述參數后，調整液態C02流速為20kg/h，動態萃取 3小時，在壓力5MPa，溫度50°C調件下解析，得到萃取物120g。萃取物加2L熱水分散加入 裝有500gAB-8樹脂的樹脂柱中吸附，取4BV60%的乙醇洗脫雜質，再用5BV 90%乙醇溶液洗 脫有效成分，收集洗脫液減壓濃縮，放置沉淀，沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置結晶，過 濾、洗滌干燥即得泡狀番荔枝素，含量97. 4%。
[0012] 實施例2: 泡狀番荔枝樹皮原料干燥后粉碎80目，取5kg加入超臨界萃取釜中，通入液態C02,設 置在萃取壓力19MPa、溫度60°C，達到上述參數后，調整液態C02流速為25kg/h，動態萃取2 小時，在壓力8MPa，溫度60°C調件下解析，得到萃取物130g。萃取物加2L熱水分散加入裝 有500g HZ816樹脂的樹脂柱中吸附，取5BV50%的乙醇洗脫雜質，再用5BV 80%乙醇溶液洗 脫有效成分，收集洗脫液減壓濃縮，放置沉淀，沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置結晶，過 濾、洗滌干燥即得泡狀番荔枝素，含量96. 7%。
[0013] 實施例3: 泡狀番荔枝樹皮原料干燥后粉碎60目，取5kg加入超臨界萃取釜中，通入液態C02,設 置在萃取壓力25MPa、溫度50°C，達到上述參數后，調整液態C02流速為20kg/h，動態萃取 3小時，在壓力6MPa，溫度50°C調件下解析，得到萃取物110g。萃取物加2L熱水分散加入 裝有500g DlOl樹脂的樹脂柱中吸附，取6BV40%的乙醇洗脫雜質，再用8BV75%乙醇溶液洗 脫有效成分，收集洗脫液減壓濃縮，放置沉淀。沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置結晶，過 濾、洗滌干燥即得泡狀番荔枝素，含量97. 5%。
[0014] 實施例4 : 泡狀番荔枝素的抗腫瘤應用 1、材料 動物：昆明種小鼠，雌雄各半性，體重20±2g，由南京中醫藥大學提供。
[0015] 細胞株：Sarc〇ma 180腹水型瘤株（S180)，由中國科學院上海藥物研宄所提供。
[0016] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接種S18tl瘤液，次日隨機分成5組，每組10只，分別為生 理鹽水對照組（NS組)、陽性對照組、泡狀番荔枝素低劑量組（2mg/kg)、中劑量組（4mg/kg)、 高劑量組（8mg/kg)。接種24h后泡狀番荔枝素給藥組灌胃給藥，連續7,陽性對照組試驗期 間腹腔注射2次，隔日給藥。期間，每日觀察小鼠的一般活動、皮毛、糞便等情況。最后一次 給藥24h后斷頸處死，稱重，并計算抑瘤率。
[0017] 3、結果 本發明植物提取物對小鼠 S18tl皮下荷瘤有明顯的抑制作用，抑瘤率為71. 58-76. 61%， 結果見表1。
[0018] 抑瘤率（％)=( 1-治療組平均瘤重/空白對照組平均瘤重）X% 表1本發明植物提取物對S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10, I ±S)
注：與陽性對照組相比，#P < 0. 01。
【主權項】
1. 一種泡狀番荔枝素的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 取泡狀番荔枝樹皮粉碎60-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力15-25MPa、溫 度40-60°C的條件下，通入液態C02超臨界萃取2-3小時，在壓力5-10MPa，溫度50-60°C解 析，得萃取物； (2) 上述萃取物用熱水分散，加入大孔樹脂中吸附，乙醇水溶液梯度洗脫，收集洗脫液 濃縮，得沉淀物； (3) 上述沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得泡狀番荔枝 素。2. 根據權利要求1所述的泡狀番荔枝素的制備方法，其特征在于：步驟（2)中所述的大 孔樹脂可選AB-8、HZ816、D101和HPD100中的一種。3. 根據權利要求1所述的泡狀番荔枝素的制備方法，其特征在于：步驟（2)中所述的 乙醇水溶液梯度洗脫為：先取4-8BV20-60%的乙醇洗脫雜質，再用3-8BV70-95%乙醇溶液洗 脫。4. 根據權利要求1~3所述方法制備的泡狀番荔枝素，在其口服配方中添加腸吸收促進 劑。5. 根據權利要求4所述的泡狀番荔枝素，其特征在于腸吸收促進劑包含中鏈脂肪酸 鹽、膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。
【專利摘要】本發明公開了一種植物提取物的制備方法及應用，尤其涉及一種泡狀番荔枝素的制備方法及抗腫瘤應用。制備方法包括以下步驟：（1）取泡狀番荔枝樹皮粉碎60-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力15-25MPa、溫度40-60℃的條件下，通入液態CO2超臨界萃取2-3小時，在壓力5-10MPa，溫度50-60℃解析，得萃取物；（2）上述萃取物用熱水分散，加入大孔樹脂中吸附，乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液濃縮，得沉淀物；（3）上述沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，干燥即得多葉菊蒿素。采用本發明制備方法，工藝操作簡便、得率高，污染小，適合高純度泡狀番荔枝素的生產。泡狀番荔枝素具有抗腫瘤作用，在其口服配方中添加腸吸收促進劑，利于提高生物利用度。
【IPC分類】A61P35/00, A61K31/365, C07D307/58
【公開號】CN104910107
【申請號】CN201510263708
【發明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫藥科技有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月22日