Foxm1肽和包含foxm1肽的藥劑的制作方法
【專利說明】F0XM1化和包含F0XM1化的藥劑
[0001] 本申請是中國申請200880112387. 2的分案申請，該母案的國際申請日為2008年 8月12日，本分案采用了與該母案一致的發明名稱。
技術領域
[0002] 本發明設及作為針對高表達叉頭框Ml(FOXM1)的癌癥（如膽管癌、肺癌和膜腺癌） 的疫苗有用的新膚，和包含該些膚的用于治療和預防腫瘤的藥物。
【背景技術】
[0003] 在日本，膽管癌（膽囊癌和膽管癌）死亡的數目正在增加，在2005年，有16,586 人死于此癌。在大多數膽管癌病例中，在早期不存在主觀癥狀。與消化道腔體內形成的癌 癥（如胃癌和結腸癌）相比，膽管癌的準確的顯示和診斷顯影（diagnosticimaging)是困 難的。因此，膽管癌難W早期檢測，當膽管癌被發現時，癌癥往往已經發展并無法切除。除 外科治療之外，還進行放療和化療W治療膽管癌，但它們療效不佳，因此亟需建立新的治療 方法。
[0004] 在日本，肺癌死亡的數目也在增加，在2005年，有62, 063人死于此癌。目前日本 癌癥死亡中肺癌占19. 0%，并已成為2000年W來癌癥死亡的首要原因。吸煙被認為是肺癌 發生的最大原因。除吸煙外，吸入石棉或氮氣也被認為引起肺癌。作為預防肺癌的措施，人 們倡導戒煙和進行健康檢查。然而，盡管吸煙人群在日本正在減少，但2005年仍估計有大 約3千萬人。此外，最近已證明，健康檢查中廣泛進行的簡單胸部X-光顯影和疲液測試對 于肺癌的早期檢測無效，而且它們并不導致癌癥死亡的減少。考慮到上述情況，預期肺癌死 亡的數目在未來會持續增加。
[0005] 肺癌的癥狀包括咳嗽、血疲、呼吸急促和胸痛，但在大多數情況下，癥狀在早期不 存在。在很多病例中當癥狀出現時癌癥已經發展。為此，當最先發現癌癥時，一半W上的患 者是不能手術治療的，因此肺癌被看作難治性癌癥中的一種。手術后恢復率不像其他癌癥 那么好，而且手術后的總的五年存活率僅不及50%。在近年來，隨著W手術切除為中屯、，結 合放療、化療等的多科性治療的進步，早期肺癌的五年存活率正在增加；然而，晚期肺癌的 治療效果沒有很大的改進，而且亟需建立新的治療策略。
[0006] 在日本，膜腺癌死亡的數目正在增加，在2005年，有22, 927人死于此癌。目前，日 本癌癥死亡中膜腺癌占7. 0%，在肺癌、胃癌、結腸癌和肝癌后排名第五位。膜腺癌沒有特異 性的癥狀，而且在很多病例中，當癥狀出現時，癌癥已經發展。即使是診斷顯影發展的今天， 全日本膜腺癌患者中大約40%屬于具有遠端轉移的晚期病例，而且發現很多患者具有不能 切除的局部發展的癌癥。因此，患者總的五年存活率是5%W下，而且診斷后的預后非常差。 由于診斷中的難度，膜腺癌發病作為癌癥死亡的原因特別是發達國家中正逐漸增加。當先， 雖然W手術切除為中屯、，結合放療、化療等的多科性治療正在開展，但是在治療效果方面沒 有明顯的改進，亟需建立新的治療策略。已顯示膜腺癌的發病要因設及多種因素，如生活習 慣（包括吸煙、肥胖、飲食、飲酒和喝咖啡），W及慢性膜腺炎、糖尿病、遺傳因素等。
[0007] 在另一個方面，分子生物學和腫瘤免疫學的近期發展闡明，細胞毒性（殺傷）T細 胞和輔助T細胞可識別癌細胞中特異性高表達的蛋白質被降解而產生、并經由HLA分子被 呈遞到癌細胞或抗原呈遞細胞的表面的膚，并引起免疫反應W破壞癌細胞。此外，已經鑒定 了許多源自該些細胞的、能刺激該樣的免疫反應W攻擊癌癥的腫瘤抗原蛋白質和膚，而且 抗原特異性腫瘤免疫治療正在得到臨床應用。
[000引 HLAI類分子在身體的所有有核細胞的表面上表達。它結合于細胞質或細胞核中 產生的蛋白質在胞內降解所產生的膚，并表達在細胞表面。在正常細胞的表面，源自正常自 體蛋白質的膚結合于HLAI類分子，并且不被免疫系統的T細胞識別和破壞。在另一個方 面，在形成癌癥的過程中，癌細胞有時大量表達在正常細胞中幾乎不表達或略微表達的蛋 白質。此時HLAI類分子結合于癌細胞內特異性高表達的蛋白質胞內降解而產生的膚，然后 在癌細胞的表面上表達膚，于是殺傷T細胞識別并僅破壞癌細胞。通過將所述癌癥-特異 性抗原或膚施用于個體，可破壞癌細胞且可抑制癌生長而不傷害正常細胞。該稱為使用癌 癥-特異性抗原的癌癥免疫療法。HLAII類分子主要在抗原呈遞細胞的表面上表達。所述 分子結合于源自癌癥-特異性抗原的膚，其通過胞內降解由細胞外并入抗原-呈遞細胞的 癌癥-特異性的抗原而產生，然后在細胞的表面上表達膚。識別它們的輔助T細胞被活化， 并通過產生活化其他免疫活性細胞的多個細胞因子來誘導或增強針對腫瘤的免疫反應。
[0009] 因此，如果開發祀向在癌癥中特異性高表達的抗原的免疫療法，該樣的療法可有 效地僅僅消滅癌癥，而不引起對正常自體組織的任何有害事件。還期望的是療法可用于其 他治療均無能為力的任何末期癌癥患者。此外，通過將癌癥特異性抗原和膚作為疫苗預先 施用于具有發生癌癥的高風險的個體，可預防癌癥的發生。
[0010] 本發明人首先使用cDNA微陣列對27, 648個人基因進行了全基因組基因表達分 析，W研究該些基因在25個肝內膽管癌病例中和在多個正常器官（包括它們在胚胎期） 的表達譜（expressionprofile)。結果，本發明人發現叉頭框Ml(FOXMl)(GenBank登錄 號NM_202003)在許多肝內膽管癌病例的組織中非常高度表達。類似于且除肝內膽管癌 之外，還發現F0XM1在幾乎所有的肺癌、膀脫癌和膜腺癌病例中高度表達。此外，F0XM1 的高表達見于多種癌癥如子宮頸癌（cervicalcancer)、卵巢癌、惡性淋己瘤（malignant lymphoma)、乳腺癌、胃癌、食道癌、前列腺癌、肝細胞癌、結腸癌和慢性髓細胞性白血病的 40 %W上病例中。該些事實提示F0XM1可在多種癌癥中作為癌癥-特異性抗原。F0XM1在胚 胎肝中并在正常成人器官中表達，其在消化道如胃、小腸和大腸、胸腺和睪丸中輕微表達； 然而，表達水平明顯低于癌部分。
[0011] 提示F0XM1與癌癥發病和細胞增殖調節有關的文件的實例包括非專利文件1至 10。然而，該些文件都沒有描述F0XM1作為針對癌癥的疫苗的用途。
[001引 [非專利文件 1]化shidaY,WangI-C,化derHM,DavidsonNO,CostaRH.:Hie forkheadboxMltranscriptionfactorcontributestothedevelopmentandgrowth ofmousecolorectalcancer.Gastroenterology132:1420-1431,2007.
[0013] [非專利文件 2]加sarcovaGA,WangI-C,MajorML,KalinichenkoVV,Ackerson T,PetroviV，CostaRH.:Acell-penetratingARFpeptideinhibitorofFOXMlinmouse hepatocellularcarcinomatreatment.J.Clin.Invest. 117:99-111，2007.
[0014] [非-專利文件 3]RadhakrishnanSK,趾atUG,Hu組esDE,WangI-C,Costa 民H,Cartel AL. :Identification of a chemical inhibitor of the oncogenic transcription factor forkhead box Ml. Cancer民es. 66:9731-9735,2006.
[0015] [非-專利文件4]Takahashi K, F'urukawa C, Takano A, Ishikawa N, Kato T, Hamaya S, Suzuki C, Yasui W, Inai K, Sone S, Ito T, Nishimura H, Tsuchiya E, Nakamura Y,Daigo Y. : The neuromedin U-growth hormone secretagogue receptor lb/ neurotensin receptor loncogenic signaling pathway as a therapeutic target for lung cancer. Cancer Res. 66:9408-9419,2006.
[0016] [非-專利文件 5]KimI-M,AckersonT,RamakrishnaS,hetiakovaM,Wang I-C,KalinTV,MajorML,GusarovaGA,YoderHM,Costa民H,KalinichenkoVV.:The forkheadboxmltranscriptionfactorstimulatestheproliferationoftumorcells duringdevelopmentoflungcancer.Cancer民es. 66:2153-2161，2006.
[0017] [非-專利文件6]Wonsey DR, Folletie M. :Loss of the forkhead transcription factor FoxMlcauses centresome amplification and mitotic catastrophe. Cancer Res. 65:5181-5189, 2005.
[0018] [非-專利文件7]0bama K, Ura K, Li M, Katagiri T, Tsunoda T, Nomura A, Satoh S,Nakamura Y,Furukawa Y:Genome-wide analysis of gene expression in human intrahepatic cholangiocarcinoma. Hepatology 41:1339-1348,2005.
[0019] [非-專利文件引Laoukili J, Kooistra MRH, Brds A, Kauw J, Kerldioven RM, Morrison A,Clevers H, Medema民比：Foxmlis required for execution of the mitotic programme and chromosome stability. Nature Cell Biol.7:126-136,2005.
[0020] [非-專利文件9]Kalinichenko VV, Major M, Wang X，Petrovic V，Kuechle J, Yoder HM, Shin B, Datta A,民aychaudhuri P, Costa R比：Foxmlb transcription factor is essential for development of hepatocellular carcinomas and is negatively regulated by化e pl9ARF tumor suppre