Pou5f1b在腫瘤診斷、治療、預后和預測復發中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及P0U5F1B在腫瘤診斷、治療、預后和預測復發中的應用。
【背景技術】
[0002]食管癌是常見的惡性腫瘤之一，其發病率居惡性腫瘤的第八位，死亡率高居第六位。我國的食管癌發病率極高，約占全球50%，并且我國已成為全球患食管癌死亡率最高的國家。
[0003]目前，針對食管癌的治療方法主要有手術療法、放射療法和化學療法等，但患者的預后效果仍然較差，75%的患者在接受治療后I年內死亡，只有5?10%的患者的生存時間可達到5年。
[0004]腫瘤標志物的發現和合理應用是腫瘤復發預測的前提。迄今為止，全球預測早期復發以及預后不佳的食管癌的標志物尚不成熟，對于新診斷食管癌患者，了解疾病進展風險和指引治療過程的工具也很有限。因此，檢出食管癌復發標志物的研宄己經成為食管癌這種具有高度的分子和臨床異質性的腫瘤防治急需解決的重大科學問題。

【發明內容】

[0005]本發明的目的在于提供一種腫瘤檢測試劑盒。
[0006]本發明的另一目的在于提供一種腫瘤的預后試劑盒。
[0007]本發明的再一目的在于提供一種腫瘤的復發預測試劑盒。
[0008]本發明所采取的技術方案是:
一種腫瘤檢測試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑。
[0009]進一步的，上述試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0010]進一步的，上述試劑盒中含有實時熒光定量檢測基因P0U5F1B轉錄水平的引物序列。
[0011]進一步的，上述試劑盒中含有實時熒光定量檢測基因P0U5F1B轉錄水平的引物序列:上游引物 5’ -GCCATACGGTCACAGAGCTT-3’ (SEQ ID NO:1)和下游引物 5’ -GGAAGCTTAGCCAGGTCAGA-3’ (SEQ ID NO:2)0
[0012]一種腫瘤的預后試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑。
[0013]進一步的，上述試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0014]進一步的，上述試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑。
[0015]一種腫瘤的復發預測試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0016]一種腫瘤治療藥劑，該藥劑中含有抑制基因P0U5F1B表達的試劑。
[0017]進一步的，上述抑制基因P0U5F1B表達的試劑選自可使基因P0U5F1B沉默的試劑。
[0018]本發明的有益效果是: 本發明發現了 P0U5F1B在多種腫瘤如食管癌、乳腺癌、肝癌、和卵巢癌等中顯著擴增。目前用于腫瘤臨床輔助診斷技術尚不完善，而P0U5F1B在腫瘤中與正常組織相比是明顯擴增的，這提示P0U5F1B具有成為腫瘤輔助診斷標記物的潛能。
[0019]本發明通過一系列分析方法發現:在多種腫瘤中P0U5F1B的擴增與腫瘤的轉移、復發、患者預后和腫瘤細胞干性密切相關。通過一系列體內功能實驗發現:高表達P0U5F1B可以促進TIC的形成進而增強食管癌細胞的體內成瘤能力，降低無瘤小鼠的生存率。提示P0U5F1B可作為食管癌治療的靶點。而通過抑制P0U5F1B在癌細胞和組織中的表達水平，可以有效抑制TIC的形成降低食管癌細胞的體內成瘤能力、提高無瘤小鼠的生存率。以上實驗數據均足以證明抑制內源性P0U5F1B可顯著降低食管癌細胞的體內成瘤能力、提高患者生存率，這提示了 P0U5F1B具有成為診斷、治療、預后和預測復發的標記物的潛能。P0U5F1B抑制劑在制備治療腫瘤的藥物組合物上極具臨床應用價值，為腫瘤的有效治療提供了新的藥物和方法。
【附圖說明】
[0020]圖1為通過對Tumorscape數據庫中的數據進行分析得出的人類基因組在3138例腫瘤樣本、2526例腫瘤組織和611個腫瘤細胞系中的擴增圖譜；
圖2為通過GISTIC 2.0對Tumorscape數據庫中的數據進行分析得出的人類基因組在3138例腫瘤樣本、2526例腫瘤組織和611個腫瘤細胞系中的擴增圖譜；
圖3為通過對TCGA數據庫中的數據進行分析得出的人類基因組在5443例原發腫瘤組織、393例轉移組織和63例復發組織中的擴增圖譜；
圖4為通過GISTIC 2.0對TCGA數據庫中的數據進行分析得出的人類基因組在5443例原發腫瘤組織、393例轉移組織和63例復發組織中的擴增圖譜；
圖5為8q24.21區段中基因的分布圖譜；
圖 6 為:8q24.21 區段上的 FAM84B、PCAT1、P0U5F1B、MYC、PVT1、GSDMC、FAM49B 和 ASAPl基因的拷貝數增加的樣本分別在TCGA數據庫中的5443例原發腫瘤組織、393例轉移組織和63例復發組織中所占的比例；
圖7顯示在TCGA數據庫中9297例腫瘤樣本中P0U5F1B拷貝數的擴增(Amplificat1n)和增加(Gain)均與腫瘤患者的總生存率呈顯著負相關；
圖8顯示在TCGA數據庫中9297例腫瘤樣本中P0U5F1B拷貝數的擴增(Amplificat1n)與患者無病生存率呈顯著負相關，P0U5F1B拷貝數擴增(Amplificat1n)的腫瘤病人與P0U5F1B拷貝數增加(Gain)的腫瘤病人的無病生存率具有顯著性差異；
圖9顯示P0U5F1B的擴增在特定腫瘤類型中的比例；
圖10顯示通過FISH (熒光原位雜交)證實P0U5F1B在食管癌、乳腺癌和肝癌的組織和細胞系中擴增；
圖11顯示，Real-Time PCR分析結果表明P0U5F1B在3種腫瘤組織，包括食管癌、乳腺癌和肝癌中擴增；
圖12中Kaplan-Meier生存曲線顯示，P0U5F1B拷貝數的擴增與食管癌患者無病生存率呈顯著負相關；
圖13中Kaplan - Meier生存曲線顯示，P0U5F1B拷貝數的擴增與乳腺癌患者無病生存率呈顯著負相關；
圖14中Kaplan -Meier生存曲線顯示，P0U5F1B拷貝數的擴增與肝癌患者無病生存率呈顯著負相關；
圖15為對TCGA數據庫中泛癌的P0U5F1B mRNA水平進行分析，結果顯示P0U5F1B的擴增促進P0U5F1B mRNA表達的上調；
圖16顯示通過Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)分析方法對TCGA中泛癌的P0U5F1B拷貝數變異與腫瘤復發相關的基因集的相關性進行分析，結果；
圖17顯示通過Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)分析方法對TCGA中泛癌的P0U5F1B拷貝數變異與腫瘤預后相關的基因集的相關性進行分析，結果表明P0U5F1B在所有類型的腫瘤中的擴增與預后相關的基因集呈負相關；
圖18顯示通過Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)分析方法對TCGA中泛癌的P0U5F1B拷貝數變異與腫瘤細胞干性相關的基因集的相關性進行分析，結果表明P0U5F1B在所有類型的腫瘤中的擴增與腫瘤細胞干性相關的基因集呈正相關；
圖19接種Eca 9706-P0U5F1B的小鼠比接種Eca 9706-vector的小鼠更容易長腫瘤；圖20顯示，高表達POU5F1B顯著增加食管癌中的腫瘤起始細胞(TIC，tumor initiatedcells)；
圖 21 顯示接種 Eca 9706-shP0U5FlBl#2 和接種 Eca 9706-sh P0U5F1B1#3 的小鼠比接種Eca 9706-Control鼠更容易長腫瘤；
圖22顯示，沉默P0U5F1B顯著增加食管癌中的腫瘤起始細胞(TIC，tumor initiatedcells)；
圖23顯示在16只小鼠中P0U5F1B的高表達與無瘤小鼠生存率顯著負相關；在16只小鼠中P0U5F1B的低表達與無瘤小鼠生存率顯著正相關；
圖24顯示，小鼠腫瘤復發模型實驗結果表明P0U5F1B高表達促進食管癌的復發P0U5F1B高表達促進食管癌的復發。
【具體實施方式】
[0021]一種腫瘤檢測試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑。
[0022]優選的，上述試劑盒中含有定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑為上游引物5’-GCCATACGGTCACAGAGCTT-3’ (SEQ ID NO:1)和下游引物 5’- GGAAGCTTAGCCAGGTCAGA-3’(SEQ ID NO:2)o
[0023]一種腫瘤檢測試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0024]優選的，上述試劑盒中含有實時熒光定量檢測基因P0U5F1B轉錄水平的引物序列。
[0025]優選的，上述試劑盒中含有實時熒光定量檢測基因P0U5F1B轉錄水平的引物序列:上游引物 5’ -GCCATACGGTCACAGAGCTT-3’ (SEQ ID NO:1)和下游引物 5’ -GGAAGCTTAGCCAGGTCAGA-3’ (SEQ ID NO:2)。
[0026]一種腫瘤檢測試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑，以及含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0027]—種腫瘤的預后試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑。
[0028]優選的，上述試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0029]優選的，上述試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B拷貝數的試劑。
[0030]一種腫瘤的復發預測試劑盒，該試劑盒中含有能夠定量檢測基因P0U5F1B表達水平的試劑。
[0031]一種腫瘤治療藥劑，該藥劑中含有抑制基因P0U5F1B表達的試劑。
[0032]優選的，上述抑制基因P0U5F1B表達的試劑選自可使基因P0U5F1B沉默的試劑。
[0033]優選的，上述沉默P0U5F1B的試劑為具有發夾結構的shP0U5FlB，其序列為:5’-CGGAGAAGTCCCAGGACAT-3’ (SEQ ID NO:3)。
[0034]下面結合具體實施例，進一步闡述本
【發明內容】
。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常