一種香蕉皮多糖提取及其純化方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及成分提取技術領域，特別涉及一種香蕉皮多糖提取及其純化方法。
【背景技術】
[0002]香蕉，作為中國最主要的經濟作物之一，種植歷史悠久且年產量大。人們大多重視果肉，忽略了香蕉皮帶給人們的價值。香蕉皮大約占其果實的30%左右，目前，絕大多數香蕉皮直接作為廢棄物處理，不僅浪費資源而且污染環境。若能開發利用香蕉皮中的各種功能性成分，將是解決香蕉皮處理的新途徑，又能提高香蕉皮的經濟價值。近年來研宄表明，香蕉皮中含有黃酮類、酚類、有機酸類及植物多糖等化合物。
[0003]研宄表明，香蕉多糖既具有治療作用又具有保健價值，如:在臨床上有抗病毒、抗癌、降血壓、美容、乳化等作用。同時能有效地提升人體免疫力，又是細胞和細胞器結構的重要部分，是人體細胞或細胞器維系正常功能不可或缺的主要成分，而且對人乳細胞有明顯的抑制作用。
【發明內容】
[0004]本發明的首要目的在于克服現有技術中存在的缺點與不足，提供一種香蕉皮多糖提取及其純化方法。
[0005]本發明的另一目的在于提供由上述提取及其純化方法得到的香蕉皮多糖。
[0006]本發明的目的通過下述技術方案實現:一種香蕉皮多糖提取及其純化方法(超聲波-微波協同提取法)，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80°C浸泡30-90min后，超聲波開關開，微波輻射功率60-100W，超聲波-微波協同提取30_60min，離心，取上清液；將濾渣重復提取，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt%三氯乙酸進行萃取，振蕩后離心，取上清液，重復萃取操作，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積10wt% H2O2，振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作至濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀，得到香蕉皮多糖；1克香蕉皮樣品加入10-20毫升純凈水。
[0007]所述的香蕉皮樣品優選采用如下方法進行處理:將香蕉皮清洗干凈，于60°C烘干至恒質量，取出后自然陰干，粉碎，過80目篩，依次用石油醚、80被％乙醇處理，干燥至恒重，得到香蕉皮樣品。
[0008]所述的離心為于4000r/min離心15min。
[0009]所述的重復提取的次數優選為1-2次。
[0010]所述的振蕩后離心優選采用如下方法進行操作:振蕩20min后，3000r/min離心30mino
[0011]所述的重復萃取操作的次數優選為2-3次。
[0012]所述的重復操作的次數優選為2-3次。
[0013]優選的，一種香蕉皮多糖提取及其純化方法(超聲波-微波協同提取法)，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80°C浸泡60min后，超聲波開關開，于10W微波輻射提取30min，離心，取上清液；將濾渣重復提取，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt %三氯乙酸進行萃取，振蕩后離心，取上清液，重復萃取操作，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積1wt % H2O2,振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作至濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀，得到香蕉皮多糖；1克香蕉皮樣品加入20毫升純凈水。
[0014]所述的香蕉皮優選為經過脫脂、粉碎的香蕉皮。
[0015]一種香蕉皮多糖，由上述提取及其純化方法得到。
[0016]本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果:本發明采用超聲波-微波協同提取香蕉皮中的多糖，其提取率明顯高于傳統回流提取法和單獨使用超聲波法或單獨使用微波法，且超聲波-微波協同提取法具有選擇性好，效率高，提取時間短、試劑用量少，傳熱時間快、節能、操作簡便，安全性好，過程容易控制等優點。除了超聲波產生的空化效應、熱效應和機械作用外，微波還具有波動性、高頻性的特性，強化了傳遞過程，熱量通過微波轉換得到而不存在傳遞的問題，從而實現高強度的均勻加熱，而質量的傳遞由于分子的高速擺動及溫度的升高而得到強化。同時植物內介電系數較大的極性分子吸收微波產生熱量，發生汽化或膨脹，內滲透壓增加而破壞植物的細胞結構，使擴散孔道變大，縮短了破碎時間，加強了細胞內物質的釋放、擴散和溶解，從而顯著提高提取效率。
【附圖說明】
[0017]圖1為葡糖糖的標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0018]下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。
[0019]實驗材料與試劑:
[0020]市場上購買新鮮成熟的香蕉，剝取干凈無腐爛的香蕉皮，將香蕉皮洗凈，在60°C恒溫干燥箱中烘干至恒重，取出自然晾干，粉碎，過80目篩，依次用石油醚處理2次，除去脂類，再用80wt%Z醇處理2次，除去單糖等物質，干燥至恒定質量，備用。
[0021]葡萄糖標品(色譜純，上海譜振生物科技有限公司)，甲醇(AR)，無水乙醇(AR)，正丁醇(AR)，氯仿(AR)，濃硫酸(AR)，苯酚(AR)，H2O2 (AR)，三氯乙酸(AR)。以上試劑均為國內產。
[0022]實驗儀器:
[0023]XH-300A微波催化合成/萃取儀(北京祥鵠科技發展有限公司)，UV-2450型紫外可見分光光度計(日本島津)，12E-5299型恒溫水浴鍋(亞興泰機電設備有限公司)，SH-1II型循環水真空泵(鞏義市英峪高科儀器廠)，80-3臺式低速離心機，FW-177型中草藥粉碎機(天津泰斯特)，RE-52A旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)，L-S電子天平(0.lmg，梅特勒-托利多儀器公司)。
[0024]實施例1
[0025](一)一種香蕉皮多糖提取及其純化方法，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80 °C浸泡60min后，超聲波開，于100W微波提取30min，于4000r/min離心15min，取上清液；將濾渣重復提取I次，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt%三氯乙酸進行萃取，振蕩20min后，3000r/min離心30min，取上清液，重復萃取操作2次，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積1wt % H2O2,振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作2次，濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀(得到香蕉皮多糖)，用80°C純凈水溶解，將溶液全部轉移至10mL容量瓶中后定容，作為供試液樣品；1克香蕉皮樣品加入20毫升純凈水。香蕉皮多糖的收率為96.7%。
[0026]( 二)香蕉皮多糖的含量測定:
[0027]以苯酚-硫酸法檢測香蕉皮多糖的含量。準確移取供試液樣品1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，用純凈水補至2.0mL，順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL，振搖均勻，靜置20min，用UV-2450型紫外可見分光光度計在波長為300_600nm范圍內掃描，發現在490nm處有最大吸收峰，證明有多糖存在。
[0028](I)標準曲線的建立
[0029]取葡萄糖標品于烘箱(105°C )內烘干至恒定質量，精確稱取lOOmg，加純凈水溶解并定容至10mL，配置成質量濃度為lOmg/mL的標準溶液。分別精確移取葡萄糖標準液0.00、0.20,0.40,0.60,0.80,1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，各以純凈水補至2.0mL,順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL,振搖均勻，靜置20min，依次配制成質量濃度分別為0.00,0.08,0.16,0.24,0.32,0.40mg 系列溶液，以試劑空白為參比，在490nm波長下測定吸光度，以吸光度為橫坐標(A)，相對應的葡萄糖含量為縱坐標(C)，繪制標準曲線如圖1所示，標準曲線方程為:A = 0.4061C-0.002，R2= 0.9987，表明葡萄糖標準品在0.01?0.40ng.ml/1之間，與吸光度具有良好地線性關系。
[0030](2)多糖含量的測定
[0031 ] 準確移取供試液樣品0.1mL于25mL容量瓶中，按照制作標準曲線溶液的方法配制樣品溶液并定容至25mL，用UV-2450型紫外可見光分光光度計，測定波長490nm處樣品的吸光度；經計算，香蕉皮多糖的含量為7.61 % (η = 3)。
[0032]多糖的提取量(g.mL—1)=多糖質量濃度(mg.mL—1) X 10_3X稀釋倍數
[0033]多糖含量)=多糖提取量X 10mL/香蕉皮樣品質量
[0034]實施例2
[0035](一)一種香蕉皮多糖提取及其純化方法，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80°C浸泡30min后，超聲波開，于60W微波提取40min，于4000r/min離心15min，取上清液；將濾渣重復提取2次，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt%三氯乙酸進行萃取，振蕩20min后，3000r/min離心30min，取上清液，重復萃取操作2次，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積1wt % H2O2,振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作3次，濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀(得到香蕉皮多糖)，用80°C純凈水溶解，將溶液全部轉移至10mL容量瓶中后定容，作為供試液樣品；1克香蕉皮樣品加入10毫升純凈水。香蕉皮多糖的收率為93.6%。
[0036]( 二)香蕉皮多糖的含量測定:
[0037]以苯酚-硫酸法檢測香蕉皮多糖的含量。準確移取供試液樣品1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，用純凈水補至2.0mL，順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL，振搖均勻，靜置20min，用UV-2450型紫外可見分光光度計在波長為300_600nm范圍內掃描，發現在490nm處有最大吸收峰，證明有多糖存在。
[0038](I)標準曲線的建立
[0039]取葡萄糖標品于烘箱(105°C )內烘干至恒定質量，精確稱取lOOmg，加純凈水溶解并定容至10mL，配置成質量濃度為lOmg/mL的標準溶液。分別精確移取葡萄糖標準液0.00、0.20,0.40,0.60,0.80,1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，各以純凈水補至2.0mL,順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL,振搖均勻，靜置20min，依次配制成質量濃