本發明屬(shu)于藥(yao)(yao)(yao)物(wu)技術領域，具體地涉及(ji)一類新(xin)穎骨架(jia)石松(song)生物(wu)堿(jian)類化合(he)物(wu)phleghenrines A-D及(ji)其(qi)類似物(wu)，其(qi)藥(yao)(yao)(yao)學上可(ke)接受的鹽，其(qi)制(zhi)備方法，含有該(gai)類化合(he)物(wu)的藥(yao)(yao)(yao)物(wu)組合(he)物(wu)及(ji)植物(wu)提(ti)取(qu)(qu)物(wu)，以及(ji)該(gai)類化合(he)物(wu)及(ji)其(qi)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)組合(he)物(wu)和提(ti)取(qu)(qu)物(wu)在制(zhi)備抗乙酰(xian)膽堿(jian)酯酶抑制(zhi)劑藥(yao)(yao)(yao)物(wu)中、在制(zhi)備治(zhi)療早(zao)老性癡呆癥藥(yao)(yao)(yao)物(wu)中和制(zhi)備抗中老年記(ji)憶和認(ren)知(zhi)能(neng)力減(jian)退疾病藥(yao)(yao)(yao)物(wu)中的應用。

背景技術：
：

老年(nian)(nian)性(xing)癡(chi)呆(dai)癥(zheng)是一種神(shen)經退行性(xing)的(de)(de)疾病(bing)(bing)，隨著世界(jie)人(ren)口(kou)老年(nian)(nian)化的(de)(de)不(bu)斷加劇，老年(nian)(nian)性(xing)癡(chi)呆(dai)癥(zheng)的(de)(de)發病(bing)(bing)率也在逐年(nian)(nian)增加。阿爾茨海默病(bing)(bing)又稱早(zao)老性(xing)癡(chi)呆(dai)病(bing)(bing)(Alzheimer’s Disease，AD)是老年(nian)(nian)性(xing)癡(chi)呆(dai)病(bing)(bing)的(de)(de)一種主(zhu)要類型，在老年(nian)(nian)癡(chi)呆(dai)病(bing)(bing)患者(zhe)中約有60～80％屬于該類型；在65～69歲(sui)的(de)(de)老年(nian)(nian)人(ren)口(kou)中AD的(de)(de)發病(bing)(bing)率約為11％，85歲(sui)以上的(de)(de)患病(bing)(bing)率為32％，而(er)且(qie)(qie)仍在增長之中，且(qie)(qie)患病(bing)(bing)者(zhe)有年(nian)(nian)輕化趨勢；其(qi)主(zhu)要癥(zheng)狀為患者(zhe)的(de)(de)腦功能(neng)(neng)逐漸衰退，記憶(yi)力、抽象思維能(neng)(neng)力和語言表達能(neng)(neng)力減退、行動(dong)不(bu)便和其(qi)他功能(neng)(neng)性(xing)障礙，嚴重危害老年(nian)(nian)人(ren)的(de)(de)健康和生(sheng)活質量，嚴重的(de)(de)可導致(zhi)死亡；不(bu)僅給患者(zhe)家庭且(qie)(qie)給社會(hui)帶來諸多問題。

AD的(de)(de)(de)發病(bing)機理復雜，引起AD的(de)(de)(de)真正病(bing)因至今仍然(ran)沒有(you)信服(fu)的(de)(de)(de)結(jie)論(lun)。然(ran)而(er)大量的(de)(de)(de)研(yan)究結(jie)果表明(ming)，AD與中(zhong)樞神(shen)經系(xi)統(tong)(tong)或外周神(shen)經系(xi)統(tong)(tong)的(de)(de)(de)乙酰膽(dan)(dan)(dan)堿(jian)(AChE)濃(nong)度過(guo)低有(you)關(guan)，乙酰膽(dan)(dan)(dan)堿(jian)酯酶抑制劑(AChEI)可以通過(guo)抑制乙酰膽(dan)(dan)(dan)堿(jian)酯酶對(dui)乙酰膽(dan)(dan)(dan)堿(jian)的(de)(de)(de)降解從而(er)達到提高中(zhong)樞神(shen)經或外周神(shen)經系(xi)統(tong)(tong)的(de)(de)(de)乙酰膽(dan)(dan)(dan)堿(jian)的(de)(de)(de)濃(nong)度，進而(er)實現對(dui)上述(shu)疾病(bing)的(de)(de)(de)改(gai)善和治療，因此開發具有(you)增強(qiang)膽(dan)(dan)(dan)堿(jian)系(xi)統(tong)(tong)功能的(de)(de)(de)藥(yao)物仍然(ran)成為當今治療AD的(de)(de)(de)研(yan)究重(zhong)點之一，并被認為是(shi)至今治療AD最有(you)效的(de)(de)(de)藥(yao)物。

石(shi)松生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)堿(jian)(jian)(jian)是(shi)(shi)(shi)指從(cong)蕨類(lei)(lei)(lei)植物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)石(shi)松及其(qi)近緣親屬植物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中分離得到(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結構相(xiang)似，具有(you)相(xiang)同生(sheng)源的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一類(lei)(lei)(lei)結構獨(du)特且變化(hua)(hua)多樣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)天(tian)然生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)堿(jian)(jian)(jian)。1982年(nian)中國(guo)科(ke)(ke)學院上(shang)海藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)研究所、軍事醫學科(ke)(ke)學院和(he)(he)(he)浙江醫學科(ke)(ke)學院等單位(wei)，從(cong)蛇(she)足石(shi)杉(shan)(Huperizia sererata(Thunb.)Trev.)中分離到(dao)高活性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)(zhi)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)(ji)石(shi)杉(shan)堿(jian)(jian)(jian)甲，20世紀80年(nian)代(dai)石(shi)杉(shan)堿(jian)(jian)(jian)甲在(zai)我(wo)(wo)國(guo)批準(zhun)上(shang)市，用(yong)于(yu)治(zhi)(zhi)療重癥肌無力(li)，90年(nian)代(dai)又用(yong)于(yu)治(zhi)(zhi)療AD。石(shi)杉(shan)堿(jian)(jian)(jian)甲與現行的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)治(zhi)(zhi)療該類(lei)(lei)(lei)疾病的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)處方(fang)(fang)藥(yao)如多萘哌齊(donepezil)，加蘭他(ta)敏(galantamine)，利(li)(li)斯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)明(rivastigmine)和(he)(he)(he)他(ta)克林(tacrine)相(xiang)比在(zai)藥(yao)效(xiao)，生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)利(li)(li)用(yong)度，半衰期(qi)，和(he)(he)(he)乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)(zhi)酶(mei)選(xuan)(xuan)擇性等方(fang)(fang)面均(jun)有(you)優(you)勢(shi)。石(shi)杉(shan)堿(jian)(jian)(jian)甲的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)強效(xiao)，高選(xuan)(xuan)擇性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)(zhi)酶(mei)活性引起了(le)世界(jie)各(ge)國(guo)科(ke)(ke)學家(jia)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)廣泛(fan)注意，是(shi)(shi)(shi)我(wo)(wo)國(guo)獨(du)立自主發現的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)具有(you)國(guo)際影響的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)天(tian)然先(xian)導化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)。其(qi)成功開發使我(wo)(wo)們看到(dao)從(cong)天(tian)然產物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中，特別是(shi)(shi)(shi)從(cong)石(shi)松類(lei)(lei)(lei)植物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中尋找新型(xing)乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)(zhi)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)(ji)治(zhi)(zhi)療AD的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)希(xi)望。現有(you)技術中未見(jian)有(you)一類(lei)(lei)(lei)新穎骨架石(shi)松生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)堿(jian)(jian)(jian)類(lei)(lei)(lei)化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)phleghenrines A-D及其(qi)類(lei)(lei)(lei)似物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)，其(qi)藥(yao)學上(shang)可接受的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)鹽的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)報道，也沒有(you)其(qi)制(zhi)備(bei)方(fang)(fang)法，含有(you)該類(lei)(lei)(lei)化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)組合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)及植物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)提(ti)取物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)，以(yi)及該類(lei)(lei)(lei)化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)及其(qi)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)組合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)和(he)(he)(he)提(ti)取物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)在(zai)制(zhi)備(bei)抗乙酰(xian)膽(dan)(dan)堿(jian)(jian)(jian)酯(zhi)(zhi)(zhi)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)(ji)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中、在(zai)制(zhi)備(bei)治(zhi)(zhi)療早老性癡(chi)呆癥藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中和(he)(he)(he)制(zhi)備(bei)抗中老年(nian)記(ji)憶和(he)(he)(he)認知能力(li)減退疾病藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)應(ying)用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)報道。

技術實現要素：
：

本發明(ming)的(de)(de)目的(de)(de)在(zai)于提供一類(lei)新穎骨架石松生物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)堿類(lei)化合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)phleghenrines A-D及(ji)其(qi)類(lei)似物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)，其(qi)藥(yao)(yao)(yao)學上(shang)可接(jie)受(shou)的(de)(de)鹽，其(qi)制(zhi)備方(fang)法，含有該(gai)類(lei)化合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)組合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)及(ji)植(zhi)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)提取(qu)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)，以及(ji)該(gai)類(lei)化合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)及(ji)其(qi)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)組合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)和提取(qu)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)在(zai)制(zhi)備抗乙酰膽堿酯(zhi)酶抑制(zhi)劑的(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中、在(zai)制(zhi)備治療早老(lao)(lao)性癡呆癥的(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中和制(zhi)備抗中老(lao)(lao)年記憶和認(ren)知能力減退疾病(bing)的(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中的(de)(de)應用。

為了實現(xian)本發(fa)明的上述目的，本發(fa)明提供(gong)了如下的技術方案(an)：

如下結構(gou)式(I)所(suo)示的(de)石松生(sheng)物(wu)堿類化合物(wu)或其藥用鹽，

式中，R₁＝氫、芳基、取代芳基、烷基或取代烷基；R₂＝氫、羥基或鹵原子；R₃＝氫、芳基、取代芳基、烷基或取代烷基；R₄＝氫(qing)、羥基或鹵原子(zi)，

n＝0～4的整數。

如(ru)下(xia)結構(gou)式(shi)所示的石松生物堿類化合物1-4或其藥(yao)用鹽，

如所(suo)述(shu)的(de)(de)石(shi)松(song)生(sheng)物(wu)堿類化合物(wu)或(huo)其藥(yao)(yao)用鹽，其中所(suo)述(shu)的(de)(de)藥(yao)(yao)用鹽是指與有機(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)無(wu)機(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)形成的(de)(de)藥(yao)(yao)學上可(ke)接受的(de)(de)鹽，所(suo)述(shu)的(de)(de)有機(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)為酒石(shi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、檸(ning)檬(meng)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甲酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、乙(yi)(yi)二酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、丙(bing)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、丁酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、草(cao)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、馬來酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、己二酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、藻(zao)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、檸(ning)檬(meng)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、天冬氨酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、苯磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、樟腦(nao)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、樟腦(nao)磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、二葡糖酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、環戊(wu)(wu)烷丙(bing)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、十二烷基(ji)硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、乙(yi)(yi)磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、葡庚糖酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甘油(you)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、半(ban)硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、庚酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、己酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、延胡索酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、2-羥(qian)基(ji)乙(yi)(yi)磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、乳酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甲磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、煙酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、2-萘磺(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、撲酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，果膠酯酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、3-苯基(ji)丙(bing)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、苦味酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、新戊(wu)(wu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、琥珀酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，所(suo)述(shu)的(de)(de)無(wu)機(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)為鹽酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、氫溴酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、氫碘(dian)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)。

本發明還提(ti)(ti)供了制備所述的石(shi)松(song)生(sheng)物(wu)堿(jian)類化合物(wu)的方(fang)法，取石(shi)松(song)科馬尾杉屬植物(wu)全(quan)草，經(jing)干(gan)燥(zao)、粉碎后，用(yong)(yong)70％乙(yi)醇(chun)/水加熱回(hui)流(liu)充分(fen)提(ti)(ti)取；將提(ti)(ti)取浸膏(gao)加入1％鹽酸(suan)/水溶(rong)液(ye)(ye)混懸后，其水溶(rong)性部(bu)分(fen)用(yong)(yong)飽和碳酸(suan)鈉水溶(rong)液(ye)(ye)調節(jie)pH值(zhi)到9，然(ran)后用(yong)(yong)氯仿充分(fen)萃取；氯仿部(bu)分(fen)反復(fu)用(yong)(yong)硅膠、Sephadex LH-20、RP-18及(ji)高(gao)效液(ye)(ye)相色譜法HPLC分(fen)離純化方(fang)法，再結(jie)合生(sheng)物(wu)堿(jian)TLC檢(jian)測(ce)方(fang)法得(de)石(shi)松(song)生(sheng)物(wu)堿(jian)類化合物(wu)1-4。

以(yi)(yi)及(ji)更(geng)具體的(de)(de)(de)制(zhi)備所述的(de)(de)(de)石松生物(wu)(wu)堿類化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)方(fang)法，取(qu)橢圓馬尾杉干(gan)燥全草，粉(fen)碎后(hou)(hou)用(yong)(yong)(yong)70％工(gong)業乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)/水(shui)(shui)(shui)混合(he)(he)溶劑(ji)60L加(jia)熱回流(liu)提(ti)取(qu)，共提(ti)取(qu)三(san)(san)次(ci)(ci)，第(di)一次(ci)(ci)4小時，后(hou)(hou)兩(liang)(liang)次(ci)(ci)每次(ci)(ci)3小時，合(he)(he)并(bing)提(ti)取(qu)液(ye)(ye)，減壓(ya)蒸(zheng)餾濃縮(suo)除去有機溶劑(ji)后(hou)(hou)得(de)浸(jin)(jin)膏(gao)，將該粗提(ti)物(wu)(wu)分(fen)(fen)(fen)配于1％鹽酸(suan)(suan)(suan)水(shui)(shui)(shui)溶液(ye)(ye)中，pH＝1，10L，用(yong)(yong)(yong)離(li)(li)心機分(fen)(fen)(fen)層(ceng)，除去下層(ceng)不溶物(wu)(wu)，再將上(shang)層(ceng)水(shui)(shui)(shui)溶液(ye)(ye)用(yong)(yong)(yong)乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯(zhi)萃(cui)(cui)取(qu)三(san)(san)次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)8L，以(yi)(yi)除去大部(bu)分(fen)(fen)(fen)非生物(wu)(wu)堿成分(fen)(fen)(fen)；萃(cui)(cui)取(qu)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)水(shui)(shui)(shui)溶性部(bu)分(fen)(fen)(fen)用(yong)(yong)(yong)飽和碳酸(suan)(suan)(suan)鈉溶液(ye)(ye)調節pH值(zhi)到(dao)(dao)(dao)9，然后(hou)(hou)用(yong)(yong)(yong)氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)充(chong)分(fen)(fen)(fen)萃(cui)(cui)取(qu)五次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)8L，得(de)到(dao)(dao)(dao)總的(de)(de)(de)生物(wu)(wu)堿浸(jin)(jin)膏(gao)，將該浸(jin)(jin)膏(gao)用(yong)(yong)(yong)50目(mu)聚酰胺，拌樣，晾干(gan)后(hou)(hou)裝(zhuang)柱(zhu)，層(ceng)析(xi)(xi)柱(zhu)則選用(yong)(yong)(yong)MCI反相(xiang)(xiang)柱(zhu)，連(lian)接(jie)中壓(ya)液(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)譜儀(yi)，選用(yong)(yong)(yong)甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)∶水(shui)(shui)(shui)＝1∶9，3∶7，6∶4，8∶2，1∶0梯度洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)，每個(ge)梯度洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)2L，每250ml接(jie)收一個(ge)流(liu)份，各流(liu)份經(jing)(jing)(jing)減壓(ya)蒸(zheng)餾濃縮(suo)后(hou)(hou)，經(jing)(jing)(jing)TLC氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝9∶1和乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯(zhi)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝8∶2檢(jian)識(shi)(shi)，根據主(zhu)斑(ban)點予(yu)(yu)以(yi)(yi)合(he)(he)并(bing)，得(de)到(dao)(dao)(dao)五個(ge)組(zu)(zu)分(fen)(fen)(fen)Fr.01-05；Fr.02經(jing)(jing)(jing)硅(gui)膠(jiao)(jiao)柱(zhu)200-300目(mu)層(ceng)析(xi)(xi)，洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)系統為(wei)氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝9∶1，8.5∶1.5，8∶2，7∶3，6∶4，1∶1，經(jing)(jing)(jing)TLC氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝8∶2檢(jian)識(shi)(shi)，根據主(zhu)斑(ban)點予(yu)(yu)以(yi)(yi)合(he)(he)并(bing)，得(de)到(dao)(dao)(dao)四個(ge)組(zu)(zu)分(fen)(fen)(fen)Fr.0201-Fr.0204；Fr.0203經(jing)(jing)(jing)硅(gui)膠(jiao)(jiao)柱(zhu)200-300目(mu)層(ceng)析(xi)(xi)，依(yi)次(ci)(ci)用(yong)(yong)(yong)氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝9∶1和乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯(zhi)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)體系＝8∶2為(wei)洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)劑(ji)得(de)到(dao)(dao)(dao)3，Fr.0204，經(jing)(jing)(jing)Sephadex LH-20凝膠(jiao)(jiao)柱(zhu)純甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)體系層(ceng)析(xi)(xi)得(de)到(dao)(dao)(dao)兩(liang)(liang)個(ge)組(zu)(zu)分(fen)(fen)(fen)Fr.020401和Fr.020402；Fr.020402經(jing)(jing)(jing)乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯(zhi)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)∶二乙(yi)(yi)(yi)胺＝6∶1∶2硅(gui)膠(jiao)(jiao)柱(zhu)層(ceng)析(xi)(xi)，最后(hou)(hou)應用(yong)(yong)(yong)制(zhi)備型高(gao)效液(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)譜，洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)條件為(wei)甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)∶含0.5％的(de)(de)(de)三(san)(san)氟乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)水(shui)(shui)(shui)緩沖液(ye)(ye)＝22∶100，10ml/min，分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)得(de)到(dao)(dao)(dao)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)2和1，Fr.03經(jing)(jing)(jing)硅(gui)膠(jiao)(jiao)柱(zhu)層(ceng)析(xi)(xi)，以(yi)(yi)氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝8∶1，7∶1，6∶1，4∶1，2∶1，1∶1梯度洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)，經(jing)(jing)(jing)TLC氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝5∶1檢(jian)識(shi)(shi)，根據主(zhu)斑(ban)點予(yu)(yu)以(yi)(yi)合(he)(he)并(bing)，得(de)到(dao)(dao)(dao)五個(ge)組(zu)(zu)分(fen)(fen)(fen)Fr.0301-Fr.0305，Fr.030103經(jing)(jing)(jing)硅(gui)膠(jiao)(jiao)柱(zhu)層(ceng)析(xi)(xi)，依(yi)次(ci)(ci)用(yong)(yong)(yong)乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯(zhi)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝7∶3和氯(lv)(lv)(lv)(lv)仿(fang)∶甲(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)醇(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)(chun)＝9∶1為(wei)洗(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)(tuo)劑(ji)，得(de)到(dao)(dao)(dao)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)4。

本發明(ming)同時(shi)還提供了一(yi)種(zhong)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)，含有所述的(de)石松生物(wu)(wu)堿類化合物(wu)(wu)1-4及其類似物(wu)(wu)中的(de)一(yi)種(zhong)或(huo)其藥用鹽(yan)，以及藥學上(shang)可(ke)以接受的(de)載體。

根據所(suo)述(shu)的(de)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)，所(suo)述(shu)的(de)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)為片劑(ji)(ji)、膠(jiao)囊、丸劑(ji)(ji)、注射劑(ji)(ji)、緩釋制劑(ji)(ji)、控釋制劑(ji)(ji)。

根據所(suo)述的藥物(wu)組(zu)合物(wu)，所(suo)述的藥物(wu)組(zu)合物(wu)為微粒給藥系統。

本(ben)發明另(ling)外還提供(gong)了所(suo)述的石松(song)生(sheng)物(wu)(wu)堿類(lei)化合(he)物(wu)(wu)及其(qi)類(lei)似物(wu)(wu)或其(qi)藥(yao)學(xue)上(shang)可接(jie)受(shou)的鹽(yan)在制(zhi)備早老性癡呆癥(zheng)的藥(yao)物(wu)(wu)中的應用。

以及，所述的(de)(de)石松生物(wu)(wu)(wu)堿(jian)類化合物(wu)(wu)(wu)及其類似(si)物(wu)(wu)(wu)或其藥(yao)學上可接(jie)受的(de)(de)鹽(yan)在制備抗中老年記憶和(he)認(ren)知能力減(jian)退疾(ji)病的(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)中的(de)(de)應用。

以及(ji)，所述的(de)(de)石松生(sheng)物(wu)堿類化合物(wu)及(ji)其(qi)類似物(wu)或其(qi)藥(yao)(yao)學上可接(jie)受的(de)(de)鹽在(zai)制備乙酰(xian)膽堿酯(zhi)酶抑制劑(ji)的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)中的(de)(de)應用。

石(shi)(shi)松生(sheng)(sheng)(sheng)物堿是從蕨類(lei)植(zhi)物石(shi)(shi)松及其近緣親(qin)屬植(zhi)物中(zhong)分離得到的結(jie)(jie)構(gou)相(xiang)(xiang)似，具(ju)有相(xiang)(xiang)同生(sheng)(sheng)(sheng)源(yuan)的一類(lei)結(jie)(jie)構(gou)獨特(te)且變化多樣(yang)的天然生(sheng)(sheng)(sheng)物堿。優選結(jie)(jie)構(gou)式1-4為具(ju)有新穎(6/6/7/6)環系骨架的一類(lei)石(shi)(shi)松生(sheng)(sheng)(sheng)物堿。本發(fa)明(ming)的石(shi)(shi)松生(sheng)(sheng)(sheng)物堿，優選化合(he)物phleghenrines A-D(1-4)。

本發明對石(shi)松(song)(song)科馬(ma)尾(wei)杉屬(shu)植物(wu)(wu)橢(tuo)圓馬(ma)尾(wei)杉中(zhong)的(de)(de)石(shi)松(song)(song)生物(wu)(wu)堿(jian)類(lei)成分(fen)進(jin)(jin)行(xing)系統的(de)(de)研究，利用(yong)多種(zhong)分(fen)離純化(hua)(hua)手段，包括正相硅膠柱(zhu)層析，反(fan)相中(zhong)壓或者高(gao)壓液相色(se)譜(pu)等(deng)方法(fa)，從中(zhong)獲得了一系列(lie)具有新(xin)穎(6/6/7/6)環(huan)系骨架(jia)的(de)(de)石(shi)松(song)(song)類(lei)生物(wu)(wu)堿(jian)化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)。之后，對分(fen)離得到的(de)(de)該類(lei)化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)進(jin)(jin)行(xing)抗乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶(mei)(AChE)和抗丁(ding)酰(xian)(xian)膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶(mei)(BChE)抑(yi)制活性(xing)篩選。發現化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)phleghenrines A-D(1-4)均顯示出(chu)明顯的(de)(de)抑(yi)制乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶(mei)活性(xing)，為(wei)新(xin)的(de)(de)植物(wu)(wu)來(lai)源(yuan)的(de)(de)抑(yi)制乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶(mei)抑(yi)制化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)，可用(yong)于制備(bei)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶(mei)抑(yi)制劑、早老(lao)(lao)性(xing)癡呆癥(zheng)藥物(wu)(wu)及抗老(lao)(lao)年記憶和認(ren)知能力減(jian)退疾(ji)病藥物(wu)(wu)。

本發明(ming)的所述(shu)石松(song)生(sheng)物(wu)堿類化合物(wu)phleghenrines A-D(1-4)及(ji)其類似物(wu)或其藥(yao)學上容許的鹽，可以列舉例如與鹽酸(suan)(suan)(suan)、硝酸(suan)(suan)(suan)、硫酸(suan)(suan)(suan)、磷酸(suan)(suan)(suan)、氫溴酸(suan)(suan)(suan)等無機酸(suan)(suan)(suan)，或者馬來酸(suan)(suan)(suan)、富馬酸(suan)(suan)(suan)、酒石酸(suan)(suan)(suan)、乳酸(suan)(suan)(suan)、檸檬酸(suan)(suan)(suan)、乙酸(suan)(suan)(suan)、甲(jia)(jia)磺酸(suan)(suan)(suan)、對-苯甲(jia)(jia)磺酸(suan)(suan)(suan)、己(ji)二酸(suan)(suan)(suan)、棕櫚酸(suan)(suan)(suan)、單寧酸(suan)(suan)(suan)等有機酸(suan)(suan)(suan)，鋰(li)，鈉、鉀等堿金(jin)(jin)屬(shu)，鈣、鎂等堿土金(jin)(jin)屬(shu)，賴氨(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)等堿性氨(an)(an)基酸(suan)(suan)(suan)成的鹽。

本(ben)發明所述(shu)的(de)治(zhi)療早老性(xing)癡呆癥及老年(nian)記憶和認知能(neng)力減退相關疾病(bing)的(de)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)，由石松(song)(song)生物(wu)(wu)堿(jian)(jian)類(lei)化合物(wu)(wu)phleghenrines A-D(1-4)及其(qi)類(lei)似物(wu)(wu)與藥學上可(ke)接受的(de)載體(ti)制(zhi)(zhi)(zhi)備的(de)藥物(wu)(wu)劑(ji)(ji)型(xing)包括片劑(ji)(ji)、膠囊、口服液(ye)(ye)、針(zhen)劑(ji)(ji)、注(zhu)射(she)用凍(dong)干劑(ji)(ji)或(huo)粉針(zhen)劑(ji)(ji)等。由于石松(song)(song)生物(wu)(wu)堿(jian)(jian)可(ke)從橢圓馬(ma)尾杉以及同屬植物(wu)(wu)中(zhong)提取分(fen)離，而(er)片劑(ji)(ji)、膠囊、口服液(ye)(ye)、針(zhen)劑(ji)(ji)、注(zhu)射(she)用凍(dong)干劑(ji)(ji)或(huo)粉針(zhen)劑(ji)(ji)等藥物(wu)(wu)劑(ji)(ji)型(xing)的(de)制(zhi)(zhi)(zhi)備也是(shi)本(ben)領域的(de)常規知識(shi)。因此，由石松(song)(song)生物(wu)(wu)堿(jian)(jian)類(lei)型(xing)化合物(wu)(wu)與相應載體(ti)制(zhi)(zhi)(zhi)備的(de)各種(zhong)藥物(wu)(wu)劑(ji)(ji)型(xing)也能(neng)夠(gou)由本(ben)領域技術人員實現。

上文中所述(shu)的藥(yao)學上可接(jie)受的載體是(shi)指(zhi)藥(yao)學領域(yu)常規的藥(yao)物載體，例如(ru)：稀釋(shi)劑、賦形(xing)劑如(ru)水等，填充劑如(ru)淀粉、蔗(zhe)糖等；黏合劑如(ru)纖維素(su)衍生物、藻酸鹽(yan)、明膠和(he)(he)聚(ju)乙(yi)烯吡咯烷酮；濕潤(run)劑如(ru)甘油；崩解劑如(ru)瓊脂、碳酸鈣和(he)(he)碳酸氫鈉；吸收促進劑如(ru)季銨(an)化(hua)合物；表(biao)面活性劑如(ru)十(shi)六烷醇(chun)；吸附載體如(ru)高嶺土和(he)(he)皂黏土；潤(run)滑劑如(ru)滑石粉、硬脂酸鈣和(he)(he)硬脂酸鎂、以及聚(ju)乙(yi)二醇(chun)等。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如(ru)香味(wei)劑、甜(tian)味(wei)劑等。

本(ben)發(fa)明(ming)化合(he)物可以以組(zu)合(he)物的形式通過口服、鼻吸入、直腸(chang)或(huo)腸(chang)胃外給(gei)藥的方(fang)式施(shi)用于(yu)(yu)(yu)需(xu)要(yao)這種治療的患者。用于(yu)(yu)(yu)口服時，可將其(qi)制(zhi)(zhi)成(cheng)常(chang)規(gui)的固體(ti)制(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)如(ru)(ru)片劑(ji)(ji)、粉劑(ji)(ji)、粒劑(ji)(ji)、膠(jiao)囊等，制(zhi)(zhi)成(cheng)液體(ti)制(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)如(ru)(ru)水(shui)或(huo)油懸(xuan)浮劑(ji)(ji)或(huo)其(qi)他液體(ti)制(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)如(ru)(ru)糖(tang)漿、酏(yi)劑(ji)(ji)等；用于(yu)(yu)(yu)腸(chang)胃外給(gei)藥時，可將其(qi)制(zhi)(zhi)成(cheng)注(zhu)射用的溶(rong)液、水(shui)或(huo)油性懸(xuan)浮劑(ji)(ji)等。本(ben)發(fa)明(ming)藥物組(zu)合(he)物的各種劑(ji)(ji)型(xing)可以按照藥學領域的常(chang)規(gui)生產(chan)方(fang)法制(zhi)(zhi)備。例如(ru)(ru)使活性成(cheng)分與一種或(huo)多種載體(ti)混合(he)，然后將其(qi)制(zhi)(zhi)成(cheng)所需(xu)的劑(ji)(ji)型(xing)。

本發明的(de)(de)藥物組合物優選含(han)有重量比(bi)為(wei)0.1％～99.5％的(de)(de)活性成分，最(zui)優選含(han)有重量比(bi)為(wei)0.5％～95％的(de)(de)活性成分。

本發(fa)明化合物的施用(yong)量(liang)可根(gen)據用(yong)藥途徑、患(huan)者的年(nian)齡、體重(zhong)、所治(zhi)療的疾病的類(lei)型和嚴重(zhong)程(cheng)度等變(bian)化，其日劑(ji)量(liang)可以(yi)是0.01～10mg/kg體重(zhong)，優選0.1～5mg/kg體重(zhong)。可以(yi)一次(ci)或(huo)多次(ci)施用(yong)。

附圖說明：

圖1為為本發(fa)明石松生(sheng)物(wu)堿類化合(he)物(wu)的結構示意圖；

圖(tu)2為本發明石松生物堿(jian)類化(hua)合物phleghenrines A-D(1-4)的結構示意圖(tu)；

圖(tu)3為本發明的石松生物堿類化(hua)合物phleghenrines A-D(1-4)的制備方法流(liu)程圖(tu)。

具體實施方式：

下面結(jie)合(he)附圖，用(yong)本(ben)(ben)發(fa)明的(de)(de)實(shi)施例來進一步說明本(ben)(ben)發(fa)明的(de)(de)實(shi)質(zhi)性內(nei)容(rong)，但并不以此來限定本(ben)(ben)發(fa)明。根(gen)據本(ben)(ben)發(fa)明的(de)(de)實(shi)質(zhi)對(dui)本(ben)(ben)發(fa)明進行的(de)(de)改(gai)進都屬于本(ben)(ben)發(fa)明的(de)(de)范圍。

實施例1：

石松(song)生物堿類化合物phleghenrines A-D(1-4)的制備方法及結構鑒定：

取橢圓馬尾杉(Phlegmariurus henryi(Baker)Ching)干燥全草4.8Kg，粉碎后用70％工業乙醇/水混合溶劑(60L)加熱回流提取，共提取三次，第一次4小時，后兩次每次3小時，合并提取液，減壓蒸餾濃縮除去有機溶劑后得浸膏共1.2Kg，將該粗提物分配于1％鹽酸水溶液中(pH＝1，10L)，用離心機分層，除去下層不溶物(650g)，再將上層水溶液用乙酸乙酯萃取三次，每次8L，以除去大部分非生物堿成分。萃取后的水溶性部分用飽和碳酸鈉溶液調節pH值到9，然后用氯仿充分萃取五次，每次8L，得到總的生物堿浸膏8.2g。將該浸膏用50目聚酰胺(20g)拌樣，晾干后裝柱，層析柱則選用MCI反相柱。連接中壓液相色譜儀，選用甲醇∶水＝1∶9，3∶7，6∶4，8∶2，1∶0梯度洗脫，每個梯度洗脫2L，每250ml接收一個流份，各流份經減壓蒸餾濃縮后，經TLC(氯仿∶甲醇＝9∶1和乙酸乙酯∶甲醇＝8∶2)檢識，根據主斑點予以合并，得到五個組分(Fr.01-05)。Fr.02(2.4g)經硅膠柱(200-300目)層析，洗脫系統為氯仿∶甲醇＝9∶1，8.5∶1.5，8∶2，7∶3，6∶4，1∶1，經TLC(氯仿∶甲醇＝8∶2)檢識，根據主斑點予以合并，得到四個組分(Fr.0201-Fr.0204)。Fr.0203(200mg)經硅膠柱(200-300目)層析，依次用氯仿∶甲醇＝9∶1和乙酸乙酯∶甲醇體系＝8∶2為洗脫劑得到3(2.5mg)。Fr.0204(430mg)經SephadexLH-20凝膠柱(純甲醇體系)層析得到兩個組分Fr.020401和Fr.020402；Fr.020402(200mg)經乙酸乙酯∶甲醇∶二乙胺＝6∶1∶2硅膠柱層析，最后應用制備型高效液相色譜Agilent 1200，洗脫條件為(甲醇∶含0.5％的三氟乙酸水緩沖液＝22∶100，10ml/min)分離得到化合物2(t_R5.8min，12mg)和1(t_R13.8min，10mg)。Fr.03(1.82g)經硅膠柱層(ceng)析(xi)(xi)，以氯仿∶甲醇(chun)(chun)＝8∶1，7∶1，6∶1，4∶1，2∶1，1∶1)梯度洗(xi)(xi)脫(tuo)，經TLC(氯仿∶甲醇(chun)(chun)＝5∶1)檢識，根(gen)據(ju)主斑點予以合并，得到五個組分(Fr.0301-Fr.0305)。Fr.030103(200mg)經硅膠柱層(ceng)析(xi)(xi)，依次用乙酸(suan)乙酯∶甲醇(chun)(chun)＝7∶3和氯仿∶甲醇(chun)(chun)＝9∶1為洗(xi)(xi)脫(tuo)劑得到化(hua)合物4(3.5mg)。

Phleghenrines A-D(1-4)的結(jie)構鑒定數(shu)據為：

Phleghenrine A(1)：colorless gum；UV(MeOH)λ_max(log ε)315(2.86)，236(2.98)，203(2.98)nm；¹H and¹³C NMR數據，見表1；positive ESIMS m/z 257[M+H]⁺；HREIMS m/z 256.1562[M]⁺(calcd for C₁₆H₂₀N₂O，256.1576).

Phleghenrine B(2)：colorless gum；UV(MeOH)λ_max(log ε)318(3.10)，238(3.22)，204(3.26)nm；¹H and¹³C NMR數據，見表1；positive ESIMS m/z 257[M+H]⁺；HREIMS m/z 256.1570[M]⁺(calcd for C₁₆H₂₀N₂O，256.1576).

Phleghenrine C(3)：colorless gum；UV(MeOH)λ_max(log ε)257(2.85)，203(2.80)nm；¹H and¹³C NMR數據，見表1；positive ESIMS m/z259[M+H]⁺；HREIMS m/z 258.1723[M]⁺(calcd for C₁₆H₂₂N₂O，258.1732).

Phleghenrine D(4)：colorless gum；UV(MeOH)λ_max(log ε)320(3.07)，270(2.96)，238(3.14)，204(3.31)nm；¹H and¹³C NMR數據，見表2；positive ESIMS m/z 251[M+H]⁺；HREIMS m/z 250.1113[M]⁺(calcd for C₁₆H₁₄N₂O，250.1106).

表1.化合物1-3在氘代甲醇中的¹H(600MHz)和¹³C(150MHz)NMR數據(δ in ppm，J in Hz).

表2.化合物4在氘代氯仿中的¹H(600MHz)和¹³C(150MHz)NMR數據(ju)(δ in ppm，J in Hz)

實施例2：

本發明(ming)石松科石松生物(wu)堿(jian)類化合物(wu)phleghenrines A-D(1-4)在(zai)抑(yi)制乙酰膽(dan)堿(jian)酯酶顯示明(ming)顯的抑(yi)制活性。實驗原理、方法和結果如下：

實驗原理：乙酰(xian)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)酯酶能夠催(cui)化其(qi)底物(wu)類似物(wu)碘化硫(liu)代(dai)乙酰(xian)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)降解，生(sheng)成硫(liu)代(dai)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)和乙酸(suan)，反應(ying)(ying)生(sheng)成物(wu)與(yu)顯色(se)劑(ji)DTNB反應(ying)(ying)生(sheng)成黃(huang)色(se)物(wu)質，在405nm處有特異(yi)光吸收(shou)。化合(he)物(wu)與(yu)乙酰(xian)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)酯酶的(de)(de)混合(he)液在30℃反應(ying)(ying)，如(ru)果化合(he)物(wu)對(dui)乙酰(xian)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)酯酶有抑制(zhi)作用，那(nei)么乙酰(xian)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)酯酶催(cui)化底物(wu)類似物(wu)碘化硫(liu)代(dai)乙酰(xian)膽(dan)(dan)(dan)(dan)堿(jian)(jian)降解的(de)(de)量就(jiu)會減(jian)少(shao)，相應(ying)(ying)的(de)(de)與(yu)DTNB反應(ying)(ying)生(sheng)成的(de)(de)黃(huang)色(se)化合(he)物(wu)減(jian)少(shao)，即(ji)在405nm處的(de)(de)光吸收(shou)值變小，以此來篩選具有抑制(zhi)活性的(de)(de)化合(he)物(wu)。

實驗方法：

(1)用磷酸鹽緩沖液(每100mL磷酸鹽緩沖液中含0.1M Na₂HPO₄溶液)94.7mL；0.1M NaH₂PO₄溶液5.3mL，調pH至8.0)將(jiang)AChE稀釋成(cheng)0.1U/mL工作液；

(2)碘化(hua)硫代(dai)乙酰(xian)膽堿和DTNB用磷酸鹽緩沖液配成6.25mM的等體積混(hun)合溶液(工(gong)作液)；

(3)化(hua)合物(wu)(wu)用(yong)DMSO稀釋成(cheng)1mM工作液，保證不同濃(nong)度(du)的(de)化(hua)合物(wu)(wu)溶液中DMSO濃(nong)度(du)相(xiang)同(均(jun)為(wei)(wei)2％)，DMSO在(zai)最(zui)終反應體(ti)系中的(de)終濃(nong)度(du)為(wei)(wei)0.1％，化(hua)合物(wu)(wu)終濃(nong)度(du)為(wei)(wei)50μM。陽性(xing)對(dui)照為(wei)(wei)他克林(lin)，濃(nong)度(du)為(wei)(wei)6.66μM終濃(nong)度(du)為(wei)(wei)0.333μM；陰性(xing)對(dui)照組(NC組)為(wei)(wei)2％DMSO溶劑(ji)對(dui)照。

(4)反應在96孔板(ban)(ban)中(zhong)進行，向96孔板(ban)(ban)中(zhong)依(yi)次加入下列試(shi)劑(加入試(shi)劑的體積(ji)為(wei)一個反應的體積(ji))，每個樣(yang)品做3個重復(fu)；

鋪板：200μL/體(ti)系，每孔化合物(wu)的(de)終濃(nong)度(du)為50μM，他克林(lin)的(de)終濃(nong)度(du)為0.333μM

(5)加入顯色劑(ji)和底物后1小時(shi)內，每30秒(miao)鐘檢測一次405nm吸光值。

(6)選(xuan)擇NC組(zu)吸光(guang)值(zhi)平均值(zhi)約為1小時的樣品(pin)吸光(guang)值(zhi)，計(ji)算化合物(wu)(wu)吸光(guang)值(zhi)平均值(zhi)(化合物(wu)(wu)測定值(zhi)-背景(jing)值(zhi))，并按照(NC-化合物(wu)(wu)吸光(guang)值(zhi)平均值(zhi))/NC*100％來(lai)計(ji)算化合物(wu)(wu)AChE抑制(zhi)率(lv)。

實驗結果：四個新化合物phleghenrines A-D(1-4)都對乙酰膽堿酯酶有抑制活性，IC₅₀值分別為4.91，20.50，25.58，和4.32μM，其中陽性對照物他克林(tacrine)的IC₅₀值為0.30μM。值得一提的(de)是化合(he)物(wu)(wu)4的(de)結(jie)構相對比較(jiao)簡單，且含(han)有可供后續結(jie)構修飾(shi)的(de)吡啶環，因此化合(he)物(wu)(wu)4是一個優秀(xiu)的(de)、具有成(cheng)藥前景的(de)抗早老年癡呆疾病(AD)的(de)先導化合(he)物(wu)(wu)。

實施例3：

實施例1所(suo)得(de)化合(he)物1-4，加入4％的硫(liu)酸乙醇(chun)溶液，pH＝4，過濾，干燥(zao)，制成硫(liu)酸鹽(yan)化合(he)物1-4。

實施例4：

實(shi)施例(li)1所(suo)得(de)化合(he)物1-4，加入(ru)4％的鹽酸(suan)溶液，pH＝4，過濾，干燥，制成鹽酸(suan)鹽化合(he)物1-4。

實施例5：

實施(shi)例1所得化合物1-4，加入4％的(de)酒(jiu)石酸溶液，pH＝4，過(guo)濾，干燥，制(zhi)成酒(jiu)石酸鹽(yan)化合物1-4。

實施例6：

實施例(li)1所得化合(he)物(wu)1-4，加入4％的檸檬酸溶(rong)液(ye)，pH＝4，過濾，干燥，制成檸檬酸鹽化合(he)物(wu)1-4。

實施例7：

片劑：實施(shi)例1所(suo)(suo)得(de)化合物1-4或實施(shi)例3-6所(suo)(suo)得(de)的鹽10mg，乳(ru)糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg。

制備方(fang)法：將(jiang)化合(he)(he)物或其鹽、乳糖和淀粉混(hun)(hun)和，用水均(jun)勻濕潤、把濕潤后(hou)的混(hun)(hun)合(he)(he)物過篩并(bing)干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后(hou)將(jiang)混(hun)(hun)合(he)(he)物壓片(pian)，每片(pian)重250mg，化合(he)(he)物含量為10mg。

實施例8：

安瓿劑：實施(shi)例1所(suo)得化合物(wu)1-4或(huo)實施(shi)例3-6所(suo)得的鹽2mg，氯化鈉10mg。

制備(bei)方(fang)法：將(jiang)化(hua)合物或其鹽和氯化(hua)鈉溶(rong)解于適量的(de)注(zhu)射(she)用(yong)水中(zhong)，過(guo)濾所(suo)得(de)溶(rong)液(ye)，在無(wu)菌條件下裝入安瓿瓶中(zhong)。

實施例9：

注(zhu)射用(yong)凍干劑：實施(shi)例1所(suo)得化合(he)物1-4或實施(shi)例3-6所(suo)得的鹽10mg，碳酸氫鈉(na)2mg，甘露醇252mg。

制備方法：將碳酸氫(qing)鈉、甘(gan)露醇(chun)，加(jia)注(zhu)射用水溶(rong)解(jie)，加(jia)活性(xing)碳吸附30min除熱(re)原，過(guo)濾除去活性(xing)碳，在濾液中加(jia)入化合物或(huo)其鹽，超聲處(chu)理(li)使溶(rong)解(jie)，用1N鹽酸調(diao)節pH為5.0-7.0，微孔濾膜(mo)濾過(guo)，加(jia)注(zhu)射用水，分裝(zhuang)，冷凍干燥，上塞，軋蓋，即(ji)得。

實施例10：

膠(jiao)囊劑：實(shi)施例(li)1所得化合物1-4或實(shi)施例(li)3-6所得的(de)鹽10mg，乳糖187mg，硬脂酸鎂3mg。

制備方(fang)法(fa)：將化(hua)合物(wu)或其鹽(yan)與助溶(rong)劑混和，過篩，均勻(yun)混合，把得到(dao)的混合物(wu)裝入硬明膠膠囊(nang)，每(mei)個膠囊(nang)重200mg，活性(xing)成分含(han)量為10mg。