專利名稱：新的光學活性三唑衍生物，其制備方法，抗真菌劑和其應用方法
技術領域：
本發明涉及新的光學活性的三唑衍生物或其鹽，其制備方法，含有該衍生物或其藥學上可接受的鹽為活性成分的抗真菌劑，和其應用方法。
近些年來，由免疫缺陷或使用抗癌藥品導致的缺乏免疫力的宿主身上的真菌感染已成為誘發由于真菌感染造成的真菌病的嚴重問題。于是，為解決這個難題研究出了各種抗真菌劑。
EP-A-333059公開了與下述的本發明的式(I)表示的衍生物結構相似的三唑化合物具有農用抗真菌活性；但是，沒有公開其醫學用途和對人或動物的真菌感染的抑制作用。
本發明的目的是提供具有用于治療人和動物的真菌病的抗真菌活性的光學活性三唑衍生物。
本發明的這一目的和其它目的通過下面式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽來實現 其中R1和R2相同或不同，各自代表氫原子，鹵素原子或C1-C6鹵代烷基；R3代表苯基，有一個或多個相同或不同的選自鹵原子、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基和氰基取代基的苯基，或者有一個或多個相同或不同的選自C1-C6烷基、苯基和鹵代苯基取代基的甲硅烷基；和n是整數1或2，條件是R1和R2不能同時為氫原子。
而且，本發明的這一目的和其它目的通過制備式(I)表示的光學活性三唑衍生物的方法來實現，該方法包括用下式(II)表示的化合物 (其中R1和R2與如上定義的相同)與下式(III)表示的格利雅試劑反應R3-(CH2)nMgX(III)(其中R3和n如上定義；且X代表鹵原子)。
此外，本發明的這一目的和其它目的通過藥物組合物來實現，該藥物組合物包括作為活性成分的藥學有效量的式(I)光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽，還有藥學上可接受的載體或稀釋劑。
進一步來說，本發明的這種和其它目的通過預防或治療真菌病的方法來實現，該方法包括對需要這種預防或治療的人或動物施用藥學有效量的式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽，并選擇性地結合有藥學上可接受的載體或稀釋劑。
更進一步來說，本發明的這種和其它目的通過式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽在制備抗真菌組合物中的應用來實現。
式(I)表示的外消旋化合物已有報道(EP-A-0679647)。該化合物含有兩個不對稱碳原子，有四種立體異構體。在EP-A-0679647中，把四種立體異構體的混合物分離成兩對非對映體；一種是赤式和另一種是蘇式。但是未進行每種非對映體的旋光拆分和不對稱合成。因此，真菌病活性所必須的絕對結構是未知的。本發明從這4種異構體和其鹽中發現了最有效的抗真菌活性的光學活性三唑衍生物的立體結構。此外，還同時發現了選擇性制備光學活性三唑衍生物的方法。
在式(I)中，鹵素原子的實例包括氯、氟、溴和碘原子。C1-C6烷基包括有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。C1-C6鹵代烷基的實例包括有1至6個碳原子且被一個或多個相同或不同的鹵素原子取代的鹵代烷基，例如氯甲基、氟甲基、溴甲基、碘甲基、二氯甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯乙基、氟乙基、溴乙基、碘乙基、二氯乙基、二氟乙基、三氟乙基、氯丙基、氟丙基和氟丁基、C1-C6鹵代烷氧基的實例包括有1至6個碳原子且被一個或多個相同或不同的鹵素原子取代的直鏈或支鏈的鹵代烷氧基，例如氯甲氧基、氟甲氧基、三氟甲氧基和三氟乙氧基。
優選的是R1和R2相同或不同且各自代表氯原子或氟原子，和R3代表被氯原子、氟原子或氰基取代的苯基。
本發明式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其酸加成鹽可被用作抗真菌劑。該酸的實例包括無機酸(例如鹽酸、硫酸)和有機酸(例如草酸、甲磺酸、硝酸)。
式(I)表示的光學活性三唑衍生物可通過例如以下方法制備， 其中R1、R2、R3和n如上定義；X代表鹵素原子。在式(III)中，用X表示的鹵素原子的實例包括氯、氟、溴和碘原子。
將通過已知方法制備(例如在Chem.Pharm.Bull.，392241(1991)；Chem.Pharm.Bull.，411035(1993)中所述方法)的式(II)表示的化合物與由式(III)表示的格利雅試劑制備的反應劑和銅鹽反應可制備式(I)表示的光學活性三唑衍生物。在EP-A-0421210和EP-A-0473387中報道了式(II)表示的化合物，該化合物用作起始物來合成與本發明結構不同的抗真菌化合物。在一些文章中也報道了在銅鹽存在下格利雅試劑和環氧化物的反應(Org.Synth.，691(1990).，Tetrahedron，373879(1981).，J.Org.Chem.，484131(1983))。
盡管通常使用催化量的銅鹽，但也可由等當量至過量的范圍內選用合適量。銅鹽的實例包括碘化銅、溴化銅、氰化銅、和溴化銅/二甲亞砜復合物。如果需要還可加入路易士酸，例如三氟化硼、氯化鋁。
反應中使用的惰性溶劑可以是任意的，只要該惰性溶劑不抑制反應的進程就行。其實例包括的惰性溶劑例如乙醚、四氫呋喃、正己烷、甲苯和它們的結合使用。
另一方面，可以用常規方法例如光學活性高效液相色譜(HPLC)和選擇性結晶將式(I)表示的光學活性三唑衍生物的外消旋混合物進行光學拆分制備出本發明的光學活性三唑衍生物。
式(I)表示的本發明光學活性三唑衍生物是用于預防或治療人和動物的真菌病的抗真菌劑，該真菌病例如對于真菌(如發癬菌屬、含珠菌屬、曲霉屬)的局部真菌感染，粘膜真菌感染和系統真菌感染。
本發明衍生物作為抗真菌劑使用時，本發明的衍生物可加工成適于口服或腸胃外給藥的劑型(例如液體、片劑、栓劑、乳劑、軟膏、乳膏、洗液、硬膏)，可單獨使用也可與藥學上可接受的惰性載體或稀釋劑形成組合物。
根據情況如年齡、體重和投藥方式投藥量可以任何適宜的量，但本發明的抗真菌劑可以0.05至100mg/kg的劑量給藥，優選從0.5至50mg/kg，對成人進行系統治療每天1至幾個劑量。
就局部治療而言，活性成分的濃度優選為從0.001至5％，且更優選從0.1至2％。
本發明的抗真菌劑可以與其它抗真菌劑或抗細菌劑(例如兩性霉素B、曲古霉素、擬青霉素、克霉唑)一起使用。
現在，通過下述實施例更加詳細地說明本發明，但是，可以理解的是本發明并不局限于此。
實施例1制備(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-4-(4-氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物1)向200mg碘化銅在8ml無水乙醚的懸浮液中加入在-30℃的10ml無水乙醚中由145mg鎂和870mg 4-氟芐基氯制備的格利雅試劑溶液。在-20℃攪拌30分鐘后，在同樣溫度加入500mg(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-2-[(1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基]環氧乙烷的12ml無水乙醚溶液。在-20℃攪拌2小時后，加入飽和氯化銨水溶液并且用乙酸乙酯萃取目的產物。有機層用鹽水洗滌并用無水硫酸鎂干燥。減壓餾出溶劑，剩余物用硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)。這樣得到466mg無色油狀化合物1的產物。
實施例2制備(2R，3S)-2，4-雙(2，4-二氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物2)向200mg碘化銅在8ml無水乙醚的懸浮液之中，加入在-30℃的10ml無水乙醚中由145mg鎂和1.24g 2，4-二氟芐基溴制備的格利雅試劑溶液。在-20℃攪拌30分鐘后，在同樣溫度加入500mg(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-2-[(1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基]環氧乙烷的12ml無水乙醚溶液。在-20℃攪拌2小時后，加入飽和氯化銨水溶液并用乙酸乙酯萃取目的產物。將有機層用鹽水清洗并用無水硫酸鎂干燥。減壓餾出溶劑，剩余物用硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)。這樣得到603mg無色油狀產物的化合物2。
實施例3制備(2R，3R)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-4-三甲基甲硅烷基-1-(1H，1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物5)向200mg碘化銅的8ml無水乙醚懸浮液加入一份4.2ml在-30℃的12ml無水乙醚中由290mg鎂和1.46g氯甲基三甲基甲硅烷制備的格利雅試劑的溶液，在10℃攪拌一小時后，在-20℃向其中加入300mg(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-2-[(C1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基]環氧乙烷的10ml無水乙醚溶液。在同樣溫度攪拌二小時后，加入飽和氯化銨水溶液并用乙酸乙酯萃取目的產物。將有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌并用無水硫酸鎂干燥。減壓蒸出溶劑和把剩余物用硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)。這樣得到245mg無水油狀產物的化合物5。
實施例4制備(2R，3S)-4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物7)(1)在150ml四氫呋喃中溶解19g 2，4-二氟苯基·乙基酮，接著，在干冰/丙酮浴冷卻下，用20分鐘滴加112ml 1N六甲基二硅疊氮化鋰(Lithiumhexamethyl disilazide)的四氫呋喃溶液。
加完之后，在同樣溫度下將混合物攪拌1小時。用20分鐘滴加14g 4-氰基芐基溴的50ml四氫呋喃溶液并將生成混合物在室溫攪拌過夜。在向其中加入飽和氯化銨水溶液后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯萃取。將有機層用鹽水洗滌并用無水硫酸鎂干燥。減壓餾出溶劑和把剩余物用硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶9)。于是得到13g 2′，4′-二氟-2-甲基-3-(4-氰苯基)-2-苯基·乙基酮，產率為41％。
(2)將1.0g 60％的氫化鈉懸浮于50ml二甲亞砜，在60℃攪拌1小時，接著將反應混和物冷卻至15℃以下并向其中加入5.6g三甲基氧化锍碘化物，室溫下攪拌一小時后，再次將混合物冷卻至15℃以下并向其中加入2.4g 2，4-二氟-2-甲基-3-(4-氰基苯)-苯基·乙基酮的10ml二甲亞砜溶液，在60℃攪拌1小時后，把混和物冷卻至室溫，接著將其傾入冰水中并用乙酸乙酯萃取。將有機層用鹽水洗滌和用無水硫酸鎂干燥。減壓餾出溶劑后，得到2.3g 2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-(4-氰基苯基)-1，2-環氧丁烷，產率95％。
(3)將2.3g 2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-(4-氰基苯基)-1，2-環氧丁烷溶于50ml N，N-二甲基甲酰胺，向其中加入2.1g 1，2，4-三唑和2.0g叔丁醇鉀。在100℃攪拌二小時后，將混合物冷卻至室溫，再把其傾入冰水中并用乙酸乙酯萃取。有機層用鹽水洗滌和用無水硫酸鎂干燥，減壓餾出溶劑后，將剩余物用硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)，得到1.5g 4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-5-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇，產率52％。
(4)將1.2g 4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-5-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基-)丁-2-醇溶于溶劑，通過高效液相色譜的分餾柱[μ-Bondarsphere(Waters Co.，LMT.)；19mm×15cm]分餾，得到0.5赤型化合物(較短保留時間)和0.4g蘇型化合物(較長保留時間)。
將該赤型化合物，即(2R*，3S*)-4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇用高效液相色譜的分餾柱進行光學拆分，于是得到光學活性化合物[[α]D＝-47.3℃(C＝0.11，甲醇)]。表1 表示按照上述實施例的方法制備的式(I)表示的光學活性三唑衍生物的典型實施例。 表1 HPLCChiralsel(商品名)OD(由Daicel Chemical Industries，Ltd.制造，乙醇∶正己烷＝3∶7，0.9ml/min，柱溫30℃)
制劑實施例1發明化合物0.01份0.5％羧甲基纖維素 99.99份將這些組分混懸得到懸浮液。
制劑實施例2發明化合物1.00份聚乙二醇400 99.00份將這些組分均勻溶解得到外用的液體制劑。
制劑實施例3發明化合物2.00份聚乙二醇400 49.00份聚乙二醇4000 49.00份將這些組分加熱熔化，混合在一起，接著冷卻得到軟膏制劑實施例4發明化合物3.00份1，2-丙二醇 5.00份硬酯酸甘油酯 5.00份鯨蠟 5.00份肉豆蔻酸異丙酯10.00份多乙氧基醚4.00份將這些組分加熱再冷卻，接著在攪拌下加入68.00份水得到乳膏。
制劑實施例5發明化合物0.10份十八烷醇 5.00份鯨蠟醇5.00份中鏈脂肪酸三甘油酯10.00份肉豆蔻酸異丙酯 5.00份多乙氧基醚604.00份脫水山梨醇-硬酯酸酯 1.00份對羥基苯甲酸甲酯0.14份對羥基苯甲酸丙酯0.06份二丁基羥基甲苯 0.02份純化水 余量將這些組分的混合物用慣用方法處理得到乳膏。
試驗實施例1將0.1ml Candida albicans IFO 1270(1.0×106Cells/ml)接種在Sabouraud′s葡萄糖肉湯(9.8ml)，接著加入0.1ml每種試驗化合物以適當濃度溶于二甲亞砜的溶液得到濃度10μg/ml和0.1μg/ml。在37℃振動培育兩天后，測出其生長抑制率。結果列于表2。
表2生長抑制率化合物10μg/ml0.1μg/ml說明(％) (％)1 64 48 發明2 66 51 發明3 80 51 發明4 64 50 發明7 70 55 發明A 59 47 對照A順-1-乙酰基-4-[4-[[2-(2，4-二氯苯基)-2-(咪唑-1-基甲基)-1-3-氧雜環戊烷(oxolan)-4-基]甲氧基]苯基]哌嗪(名稱ketoconazole)試驗實施例2將六周齡的ddY小鼠分成有10只小鼠的對照組和每組5只小鼠的試驗組。將已接種在Sabouraud 葡萄糖瓊脂上的4ml/kg的Candida albicans IFO1270(2.5×107Cells/ml)于37℃下培育2小時后，將含有0.02％每種試驗化合物的0.5％CMC水溶液(含有10％聚乙二醇400和0.1％吐溫80)以每天5ml/kg的劑量對小鼠口服給藥4天。計算接種10天后的活的細胞數并算出最后一天的存活率。結果列于表3。
表3化合物存活率說明(％)1 80發明2 60發明3 100 發明4 40發明7 100 發明A 40對照對照藥物與例1中的A一樣。
結果表明本發明的光學活性三唑衍生物是可用于治療真菌病的抗真菌劑。
盡管已經詳細盡地并參考具體實施例描述了本發明，但是很顯然對于本領域熟練人員而言在不背離本發明的精神和在本發明的保護范圍之內可以有多種變化和改進。
權利要求
1.下式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽 其中R1和R2相同或不同，各自代表氫原子，鹵素原子或C1-C6鹵代烷基；R3代表苯基，具有一個或多個相同或不同且選自鹵素原子、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基和氰基的取代基的苯基，或具有一個或多個相同或不同且選自C1-C6烷基、苯基和鹵代苯基的取代基的甲硅烷基；和n是整數1或2，條件是R1和R2不同時為氫原子。
2.權利要求1所述的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中R1和R2相同或不同并且各自代表鹵原子；R3代表具有一個或多個相同或不同且選自鹵素原子和氰基取代基的苯基；和n是整數1。
3.制備下式(I)代表的光學活性三唑衍生物的方法 其中R1和R2相同或不同且各自代表氫原子，鹵素原子或C1-C6鹵代烷基；R3代表苯基，具有一個或多個相同或不同且選自鹵素原子，C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基和氰基取代基的苯基，或具有一個或多個相同或不同且選自C1-C6烷基、苯基和鹵代苯基取代基的甲硅烷基；和n是整數1或2，條件是R1和R2不同時為氫原子，該方法包括使下式(II)表示的化合物 其中R1和R2如上文所定義；與下式(III)表示的格利雅試劑反應R3-(CH2)nMgX (III)其中R3和n如上文所定義；和X代表鹵素原子。
4.藥物組合物，該藥物組合物包括作為活性成分的藥學有效量的由下式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽， 其中R1和R2相同或不同且各自代表氫原子，鹵素原子或C1-C6鹵代烷基；R3代表苯基，具有一個或多個相同或不同且選自鹵素原子、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基和氰基取代基的苯基；或具有一個或多個相同或不同且選自C1-C6烷基、苯基和鹵代苯基取代基的甲硅烷基；和n是整數1或2，條件是R1和R2不同時為氫原子；還包括藥學上可接受的載體或稀釋劑。
5.權利要求4所述的藥物組合物，其中R1和R2相同或不同且各自代表鹵素原子；R3代表具有一個或多個相同或不同且選自鹵素原子和氰基取代基的苯基；和n是整數1。
6.預防或治療真菌病的方法，該方法包括對需要這種治療的人或動物施用藥學有效量的下式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽，并選擇性地結合藥學上可接受的載體或稀釋劑 其中R1和R2相同或不同且各自代表氫原子，鹵素原子或C1-C6鹵代烷基；R3代表苯基，有一個或多個相同或不同且選自鹵素原子、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基和氰基取代基的苯基，或有一個或多個相同或不同且選自由C1-C6烷基、苯基和鹵代苯基取代基的甲硅烷基；和n是整數1或2，條件是R1和R2不同時為氫原子。
7.權利要求6所述的藥物組合物，其中R1和R2相同或不同且各自代表鹵素原子；R3代表有一個或多個相同或不同且選自鹵原子和氰基取代基的苯基；和n是整數1。
8.權利要求1或2所述的式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽用于制備抗真菌組合物。
全文摘要
本發明公開了下式(I)表示的光學活性三唑衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中R
文檔編號C07F7/08GK1149052SQ9611172
公開日1997年5月7日 申請日期1996年7月8日 優先權日1995年7月8日
發明者兒玉浩宜, 海本耕司, 川口道彥, 下隥正宏, 吉田正德 申請人:日本農藥株式會社