專利名稱：一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法
技術領域：
本發明屬于天然物質的提取技術領域，涉及一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法。
背景技術：
重樓排草為報春花科珍珠菜屬植物重樓排草的全草，又名四片瓦、紅四塊瓦、一把傘、落地梅等。主要分布于湖北、湖南、四川、貴州等地。重樓排草具有祛風除濕、活血止痛、 止咳、解毒之功效，主治風濕疼痛、脘腹疼痛、咳嗽、跌打損傷、癤腫療瘡、毒蛇咬傷等癥。民間用全草煎劑治療風濕麻木、跌打損傷及產后出血不止，其沖劑對子宮有興奮作用和止血作用。重樓排草含有重樓排草苷(paridiformoside)等活性成分。何功倍等通過研究發現重樓排草苷多多種動物的子宮有興奮作用，還證明重樓排草苷興奮子宮作用于劑量呈依賴性關系。目前國內尚未見重樓排草苷提取分離方法專利的相關報道。

發明內容
本發明的目的是提供一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，產品重樓排草苷含量高，經HPLC測定含量在98%以上。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案—種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取重樓排草粉碎，加適量蒸餾水和生物酶常溫酶解2-3天，得酶解原料，加 5-10倍量60-80%乙醇溶液超聲提取2-3次，過濾，合并提取液；(2)上述提取液加活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液；(3)上述濃縮液通過聚酰胺柱層析，依次用蒸餾水和乙醇水溶液洗脫，收集醇洗脫液，濃縮干燥得到粗品；(4)將上述粗品采用高速逆流色譜法進行分離得到高純度的重樓排草苷。所述步驟(1)中生物酶為纖維素酶，用量為原料重量的0. 5_1%，超聲提取頻率為 35-50kHzo所述步驟(2)中活性炭用量為2-5%。所述步驟(3)中乙醇溶液濃度為50-70%。所述步驟(4)中高速逆流色譜的兩相溶劑系統為甲基叔丁基醚-正丁醇-甲醇-水，體積比為1 2-4 1 3-5，上相為固定相，下相為流動相，轉速為750-950r/min。本發明的有益效果(1)本發明方法操作簡單，生物酶酶化，提取率高；(2)本發明采用聚酰胺柱層析和高速逆流色譜法分離純化，具有分離效果好，高效、快速、產品純度高等特點。
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 取重樓排草1kg，粉碎，加適量蒸餾水和0. 5%纖維素酶常溫酶解3天，得酶解原料，加10倍量70 %乙醇溶液超聲提取2次，超聲頻率為45kHz，過濾，合并提取液，加5 % 活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液通過聚酰胺柱層析，先用蒸餾水洗去雜質，再用60%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；以甲基叔丁基醚-正丁醇-甲醇-水為兩相溶劑系統，按體積比為1 3 1 3配制，將溶劑系統置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解粗品， 將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉動，控制轉速為850r/min，同時以Iml/ min流速泵入流動相，待兩相達到動態平衡后，進樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉蒸發濃縮、 干燥得產品4. lg，含量98.6%。實施例2 取重樓排草2kg，粉碎，加適量蒸餾水和1 %纖維素酶常溫酶解2天，得酶解原料， 加5倍量80%乙醇溶液超聲提取3次，超聲頻率為35kHz，過濾，合并提取液，加2%活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液通過聚酰胺柱層析，先用蒸餾水洗去雜質，再用50%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；以甲基叔丁基醚-正丁醇-甲醇-水為兩相溶劑系統，按體積比為1 4 1 5配制，將溶劑系統置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解粗品，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉動，控制轉速為800r/min，同時以3ml/min流速泵入流動相，待兩相達到動態平衡后，進樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉蒸發濃縮、干燥得產品11.48，含量98.2%。實施例3 取重樓排草2kg，粉碎，加適量蒸餾水和1 %纖維素酶常溫酶解2天，得酶解原料， 加10倍量60%乙醇溶液超聲提取2次，超聲頻率為40kHz，過濾，合并提取液，加5%活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液通過聚酰胺柱層析，先用蒸餾水洗去雜質，再用70%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；以甲基叔丁基醚-正丁醇-甲醇-水為兩相溶劑系統，按體積比為1 3 1 5配制，將溶劑系統置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解粗品，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉動，控制轉速為950r/min，同時以2. 5ml/min流速泵入流動相，待兩相達到動態平衡后，進樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉蒸發濃縮、干燥得產品9. 3g，含量98. 5%0實施例4 取重樓排草5kg，粉碎，加適量蒸餾水和0. 8 %纖維素酶常溫酶解2天，得酶解原料，加7倍量70 %乙醇溶液超聲提取2次，超聲頻率為50kHz，過濾，合并提取液，加3 %活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液通過聚酰胺柱層析，先用蒸餾水洗去雜質，再用60 %乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；以甲基叔丁基醚_正丁醇-甲醇-水為兩相溶劑系統，按體積比為1 4 1 5配制，將溶劑系統置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解粗品，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉動，控制轉速為850r/min，同時以5ml/min流速泵入流動相，待兩相達到動態平衡后，進樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉蒸發濃縮、干燥得產品24. 6g，含量98. 1%0實施例5 取重樓排草10kg，粉碎，加適量蒸餾水和0. 6%纖維素酶常溫酶解3天，得酶解原料，加8倍量80 %乙醇溶液超聲提取3次，超聲頻率為35kHz，過濾，合并提取液，加3 %活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液通過聚酰胺柱層析，先用蒸餾水洗去雜質，再用70%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；以甲基叔丁基醚-正丁醇-甲醇-水為兩相溶劑系統，按體積比為1 3 1 5配制，將溶劑系統置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解粗品，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉動，控制轉速為750r/min，同時以5ml/min流速泵入流動相，待兩相達到動態平衡后，進樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉蒸發濃縮、干燥得產品42. 9g，含量98. 8%。
權利要求
1.一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取重樓排草粉碎，加適量蒸餾水和生物酶常溫酶解2-3天，得酶解原料，加5-10倍量60-80 %乙醇溶液超聲提取2-3次，過濾，合并提取液；(2)上述提取液加活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，得到濃縮液；(3)上述濃縮液通過聚酰胺柱層析，依次用蒸餾水和乙醇水溶液洗脫，收集醇洗脫液， 濃縮干燥得到粗品；(4)將上述粗品采用高速逆流色譜法進行分離得到高純度的重樓排草苷。
2.根據權利要求1所述的一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，其特征在于所述步驟(1)中生物酶為纖維素酶，用量為原料重量的0.5-1%，超聲提取頻率為 35-50kHzo
3.根據權利要求1所述的一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，其特征在于所述步驟(2)中活性炭用量為2-5%。
4.根據權利要求1所述的一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，其特征在于所述步驟(3)中乙醇溶液濃度為50-70%。
5.根據權利要求1所述的一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，其特征在于所述步驟(4)中高速逆流色譜的兩相溶劑系統為甲基叔丁基醚-正丁醇-甲醇-水，體積比為1 2-4 1 3-5，上相為固定相，下相為流動相，轉速為750-950r/min。
全文摘要
本發明涉及一種從重樓排草中提取分離重樓排草苷的方法，包括以下步驟取重樓排草粉碎，酶解，加5-10倍量60-80％乙醇溶液超聲提取2-3次，提取液加活性炭脫色，過濾，濾液濃縮回收乙醇，濃縮液上聚酰胺柱層析，醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮干燥得到粗品，粗品采用高速逆流色譜法進行分離得到高純度的重樓排草苷。本發明工藝穩定，獲得的產品重樓排草苷含量高，可達98％以上。
文檔編號C07J71/00GK102234307SQ201110117840
公開日2011年11月9日 申請日期2011年5月6日 優先權日2011年5月6日
發明者萬冬梅, 劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司