專利名稱：：一類取代苯甲酸類含氮衍生物及其抗腫瘤醫藥用途的制作方法—類取代苯甲酸類含氮衍生物及其抗腫瘤醫藥用途發明領域本發明涉及有機化學、藥物化學和藥理學領域，具體而言，本發明涉及--類取代苯甲酸類含氮衍生物及其制備方法，以及該類化合物對人肝癌(BEL-7404)和白血病(HL-60)腫瘤細胞的細胞毒活性。該類化合物被發現具有一定的抑制所述腫瘤細胞生長的生物活性，可預期作為抗腫瘤藥物用途。發明背景目前，由于工業發展中帶來的環境污染等問題，人類的生存環境質量不斷下降，腫瘤疾病的發病率和致死率也不斷上升。然而治療腫瘤疾病的特效藥并不能令人滿意，并且目前抗腫瘤臨床所用細胞毒性藥物的選擇性不高所導致的對正常細胞的惡性殺傷，限制了該類藥物的普遍適用性。因此，尋找和發現新的選擇性高的細胞毒性抗腫瘤藥物是世界范圍內的研究熱點。我們也致力于抗腫瘤藥物的研究。具有抗腫瘤活性的咖啡酸苯乙酯類化合物，目前被認為是具有重大開發價值的一類天然產物(文獻FoodResearchandDevelopment,2006，27，14-15)，我們著重對開發新型該類衍生物進行探索，設計與合成的衍生物中用苯甲酸骨架代替了咖啡酸苯乙酯化合物的母環結構。此外，因為含氮原子之有機胺或堿性雜環化合物的生理活性物質大量存在，因而我們遵照"沒有氮就沒有生物活性"的思路(文獻ThePracticeofMedicinalChemistry(2ndedition),2003，399-430)，將酯鍵中的基團更換為含氮原子的雜環等取代基；以期能夠找到更為高效低毒的抗腫瘤專屬藥物。我們選擇了人肝癌(BEL-7404)和白血病(HL-60)腫瘤細胞等常見腫瘤細胞株作為體外細胞毒活性藥理評價的指標，據此完成本發明。
發明內容本發明的目的在于提供一種具有人腫瘤細胞毒活性的化合物，具體而言，本發明提供了一種具有式(I)所示的具有細胞毒活性的取代苯甲酸含氮類衍生物以及它們的可藥用鹽或溶劑化物其中R,，&或R:,可以相同或不同，可以為氫，硝基，羥基，含1~8個碳的飽和或不飽和烴基或烷氧基，取代或未取代的芳垸氧基；其中用于芳烷基中芳基上取代的取代基可以是含1~8個碳的烷基或烷氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，含1~8個碳的烷胺基；當R,，R"R3同時為氫時，R不能為末取代苯環或只有—個非氫原子取代基取代的苯環；當R2為硝基時，RmR,不能同時為氫。本發明的另一目的是提供了式(I)化合物的制備方法及其細胞毒活性。本發明的又一目的是提供了式(I)化合物用于制備防治腫瘤疾病，特別是肝癌和白血病藥物的用途。本發明中優選的式(I)化合物是I-a.2'-(3〃，4"-二甲氧基苯胺)-2'-氧代乙基-苯甲酸酯；I-b.2'-對甲氧基苯胺-2'-氧代乙基-對甲氧基苯甲酸酯；I-c.2'-對氯苯胺-2'-氧代乙基-4，5-二甲氧基苯甲酸酯；I-d.2'-苯胺-2'-氧代乙基-4，6-二羥基苯甲酸酯；I-e.2'-對氯苯胺-2'-氧代乙基-4，6-二羥基苯甲酸酯；I-f.2'-苯胺-2'-氧代乙基-4，5，6-三芐氧基苯甲酸酯。代苯甲酸含氮類衍生物以及它們的可藥用鹽或溶劑化物其中R,，R2或R,可以相同或不同，可以為氫，硝基，羥基含1~8個碳的飽和或不飽和烴基或烷氧基，取代或未取代的芳垸氧基；其中用于芳烷基中芳基上取代的取代基可以是含1~8個碳的垸基或垸氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，含18個碳的烷胺基；當R,，R2，R3同時為氫時，R不能為未取代苯環或只有一個非氫原子取代基取代的式(I)苯環當R2為硝基時，R,，R:,不能同時為氫。本發明的另一目的是提供了式(I)化合物的制備方法及其細胞毒活性。本發明的又一目的是提供了式(I)化合物用于制備防治腫瘤疾病，特別是肝癌和白血病藥物的用途。本發明中優選的式(I)化合物是I-a.2'-(3"，4"-二甲氧基苯胺)-2'-氧代乙基-苯甲酸酯；I-b.2'-對甲氧基苯胺-2'-氧代乙基-對甲氧基苯甲酸酯；I-c.2'-對氯苯胺-2'-氧代乙基-4，5-二甲氧基苯甲酸酯；I-d.2'-苯胺-2'-氧代乙基-4，6-二羥基苯甲酸酯；I-e.2'-對氯苯胺-2'-氧代乙基-4，6-二羥基苯甲酸酯；I-f.2'-苯胺-2'-氧代乙基-4，5，6-三芐氧基苯甲酸酯。其中，式(I)化合物是由取代苯甲酸與取代氯乙酰芳胺制備而得的，具體指下式所示之取代苯甲酸鉀鹽與取代氯乙酰芳胺通過置換反應來制備式(I)所示化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中基團R，，R2，R,及R的定義與權利要求1相同。式(I)化合物具有重要的生物活性，體外對人肝癌(BEL-7404)和白血病(HL-60)腫瘤等共12種腫瘤細胞株生長的抑制作用的藥理實驗結果表明此類化合物對多種腫瘤細胞生長具有強效的抑制作用，有可能發展成為新的防治腫瘤藥物。本發明的式(I)及其可藥用鹽或溶劑化物可以與藥學上常用的輔料或載體結合，制備得到具有腫瘤細胞生長抑制活性從而可以用于防治腫瘤的藥物組合物。上述各類藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。本發明的式(I)及其可藥用鹽或溶劑化物可以與現已上市的抗腫瘤藥物，如鉑類藥物順鉑(DDP)、喜樹堿類藥物伊立替康(Irinatecan，CPT-11)、長春花堿類藥物失碳長春花堿(Vinorebine，NVB諾維本)、脫氧胞昔類藥物吉西他濱(Gemcitabine，Gemzar，健擇)、足葉乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等聯合使用，制備得到具有腫瘤生長抑制活性的細胞毒性組合物，可用于治療腫瘤疾病。該類藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。具體實施方式下面通過具體的實施例進一步說明本發明，其中0Me代表甲氧基(0CH:,)。下述實施例給出了代表性化合物的合成及相關結構鑒定數據。必須說明，下述實施例是用于說明本發明而不是對本發明的限制，根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。實施例1:化合物I-a即2'-(3"，4〃-二甲氧基苯膨-2'-氧代乙基-苯甲酸酯的制備本例涉及到一類具有細胞毒活性的如式(I)所示的取代苯甲酸乙酰芳胺酯類衍生物的一般合成方法。具體涉及到化合物2'-(3"，4"-二甲氧基苯膨-2'-氧代乙基-苯甲酸酯的制備。將氯乙酰基3，4-二甲氧基苯胺(78毫克)溶解于10毫升DMF中，加入碘化鉀(90毫克)在40'C攪拌20分鐘后，再加入苯甲酸鉀鹽C106毫克)，回流4小時后，減壓濃縮除去DMF，所得粗品用乙酸乙酯一水分配萃取后，乙酸乙酯層經水洗至中性，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥過夜。過濾所得濾液濃縮，以石油醚/乙酸乙酯8:1-1:l為洗脫系統，柱層析純化得96毫克化合物I-a。I-a:白色固體；比移值W(正己烷/乙酸乙酯3:1)0.42;核磁共振氫譜'HNMR(400MHz，氘代氯仿CDC1:,):57.88(1H，單峰，N勸，7.76(1H，雙雙峰，/=8.4，2.0Hz，H-6")，7.59(1H，雙峰，/=2.0Hz，H—2")，7.54(2H，雙峰，/=7.6Hz，H-3，7)，7.35(2H，雙雙峰，/=8.0,7.6Hz，H-4，6)，7.15(1H，雙峰，戶7.2Hz，H-5)，6.95(1H，雙峰，/=8.4Hz，H-5")，4.94(2H，單峰，H-l')，3.97(6H，單峰，0C"-5)，3.96(3H，單峰，0C^-4)。根據實施例1的制備方法，制備以下表一所示實施例2-6化合物。表一<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>下面列出表一中各化合物的理化數據:I-b:收率79.2%;白色固體；熔點mp153-155'C;比移值(正己垸/乙酸乙酯3:1)0.46;核磁共振氫譜'HNMR(400MHz，氖代丙酮(CD:,),CO):39.24(1H，寬單峰，眼8.05(2H，雙峰，/=8.4Hz，H-3，7)，7.57(2H，雙峰，/=8.8Hz，H—2"，6")，7.06(2H,雙峰，/=7.6Hz，H—4，6)，6.87(2H，雙峰，/=8.8Hz,H-3"，5")，4.88(2H，單峰，H-l')，3.90(3H,單峰，0C"-5)，3.76(3H，單峰，4");電噴霧質譜ESI-MSyz/z[M+H]+316。I-c:收率66.3%;白色固體；比移值(正己烷/乙酸乙酯5:2)0.20;核磁共振氫譜'H麗R(400MHz，氖代丙酮(CD:,),C0):J9.49(1H，寬單峰，眼7.73(1H，雙雙峰，/=8.4，2.0Hz，H-7)，7.70(2H，雙峰，/=8.4Hz，H-2"，6"),7.58(1H，雙峰，/=2.0Hz,H-3),7.34(2H，多重峰，H-3"，5"),7.08(1H，雙峰，/=8.8Hz，H-6)，4.91(2H，單峰，H-l')，3.91(3H，單峰，0C"-5)，3.88(3H，單峰，0Ca-4)。I-d:收率75.3%;白色固體；比移值V/(正己烷/乙酸乙酯2:3)0.46;核磁共振氫譜NMR(400MHz，氘代丙酮(CD3)2C0):39.43(1H,寬單峰，眼8.76(2H,單峰，H-3，7)，7.67(2H,雙峰，./=7.6Hz,H—2"，6"),7.31(2H，雙雙峰，8.0，8.0Hz，H-3"，5")，7.08(1H，雙雙峰，/=8.0，8曙0Hz，H-4")，6.62(1H，單峰，H-5),4.90(2H，單峰，H-l')。I-e:收率68.8%;淡黃色液體；比移值y/(正己垸/乙酸乙酯2:3)0.46;核磁共振氫譜'HNMR(400MHz,氘代丙酮(CD3)2C0):39.56(1H，寬單峰，N動，8.76(1H，單峰，H-3，7),7.70(2H，雙峰，/=8.8Hz,H-2"，6")，7.34(2H，雙峰，/=8.8Hz，H-3"，5"),7.07(2H，寬單峰，0f4，6)，6.62(1H，雙雙峰，/=2.4,2,0Hz,H-5)，4.90(2H，單峰，H-1')。I-f:收率61.9%:白色固體；比移值W(正己烷/乙酸乙酯3:1)0.33;核磁共振氫譜'H腿(400MHz，氖代丙酮(CD:,)瀏:39.36(1H，寬單峰，NM，7.67(2H，雙峰，/二8.0Hz，H-2"，6〃)，7.55-7.11(17H,多重峰，H-3"，5"，Ar-H)，7.53(2H，單峰，H-3，7)，7.09(2H，雙峰，/=7.2Hz，H-4"),5.25(4H，單峰，H-l'〃，l'〃")，5.16(2H，單峰，H-1"〃)，4.92(2H，單峰，H-l")。下面通過藥理實施例進一步說明本發明。藥理實施例給出.了代表性化合物I-f對人肝癌(BEL-7404)和白血病(HL-60)腫瘤細胞的部分活性數據。必須說明，下述藥理實施例是用于說明本發明而不是對本發明的限制，根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。藥理實施例1:化合物I-f對人肝癌(BEL-7404)細胞的細胞毒活性檢測人肝癌(BEL-7404)細胞用RPMI164Q培養基培養，培養基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細胞以每孔5Xl(f的濃度加入到96孔板中，在37'C含5%0)2潮濕空氣的培養箱中培養24小時。細胞存活率的測定用改良MTT法。細胞經過24小時的孵育后，分別將新配的化合物I-f的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最終濃度分別為100微克/毫升，33.3微克/毫升，11.l微克/毫升和3.7微克/毫升。72小時后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的磷酸鹽緩沖液，再繼續在37'C培養4小時后，離心5分鐘除去未轉化的MTT，每孔中加入200微升二甲亞砜，以溶解還原的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶標儀在570nm波長下比色，細胞存活率由樣品相對于對照品的比值計算。其中化合物I-f對人肝癌(BEL-7404)細胞半抑制濃度I(^由劑量效應曲線得到。化合物I-f的ICs',為23.7nM。本試驗以抗腫瘤--線用藥順鉑(DDP)作為陽性對照，DDP對人肝癌(BEL-7404)細胞的半抑制濃度ICw,為7.7uM。本實驗表明此類含氮取代基苯甲酸類衍生物，對肝癌細胞具有較強的細胞毒性，有可能發展成為新的具有抗肝癌作用的藥物。藥理實施例2:化合物I-f對白血病(HL-60)腫瘤細胞的細胞毒活性白血病(HL-60)腫瘤細胞用RPMI1640培養基培養，培養基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細胞以每孔5X10:'的濃度加入到96孔板中，在37'C含5XC02潮濕空氣的培養箱中培養24小時。細胞存活率的測定用改良MTT法。細胞經過24小時的孵育后，分別將新配的化合物I-f的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最終濃度分別為100微克/毫升，33.3微克/毫升，11.l微克/毫升和3.7微克/毫升。72小時后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的磷酸鹽緩沖液，再繼續在37'C培養4小時后，離心5分鐘除去未轉化的MTT，每孔中加入200微升二甲亞砜，以溶解還原的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶標儀在570nm波長下比色，細胞存活率由樣品相對于對照品的比值計算。其中化合物I-f對HL-60細胞半抑制濃度ICs(,由劑量效應曲線得到。本試驗以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對照，DDP對HL-60細胞的半抑制濃度ICsn為6.6uM,而化合物I-f的IC5。為5.6uM，藥效活性稍強于順鉑。本實驗表明此類含氮取代基苯甲酸類衍生物，對HL-60細胞具有較強的細胞毒性，有可能發展成為新的具有抗白血病作用的藥物。權利要求1.一種具有式(I)所示結構的具有人肝癌和白血病細胞毒活性的取代苯甲酸含氮類衍生物以及它們的可藥用鹽或溶劑化物式(I)其中R1，R2或R3可以相同或不同，可以為氫，硝基，羥基，含1～8個碳的飽和或不飽和烴基或烷氧基，取代或未取代的芳烷氧基；其中用于芳烷基中芳基上取代的取代基可以是含1～8個碳的烷基或烷氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，含1～8個碳的烷胺基；當R1，R2，R3同時為氫時，R不能為未取代苯環或只有一個非氫原子取代基取代的苯環；當R2為硝基時，R1，R3不能同時為氫。2.根據權利要求1的式(I)化合物，它們是l-a.2'-(3"，4"-二甲氧基苯胺)-2'-氧代乙基-苯甲酸酯；l-b.2'-對甲氧基苯胺-2'-氧代乙基-對甲氧基苯甲酸酯；I-c.2'-對氯苯胺-2'-氧代乙基-4，5-二甲氧基苯甲酸酯；I-d.2'-苯胺-2'-氧代乙基-4，6-二羥基苯甲酸酯；I-e.2'-對氯苯胺-2'-氧代乙基-4，6-二羥基苯甲酸酯；I-f.2'-苯胺-2'-氧代乙基-4，5，6-三芐氧基苯甲酸酯。3.—種由取代苯甲酸與取代氯乙酰芳胺制備式(I)所示化合物的方法，具體指下式所示之取代苯甲酸鉀鹽與取代氯乙酰芳胺通過置換反應來制備式(I)所示化合物；其中基團R'，&，R:,及R的定義與權利要求1相同。4.根據權利要求1和2的化合物，其特征為該類化合物抑制人肝癌式(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(BEL-7404)和白血病(HL-60)腫瘤細胞生長的生理活性。5.根據權利要求1和2的化合物及其可藥用鹽或溶劑化物用于制備防治腫瘤疾病的藥物用途。6.—種用于防治腫瘤疾病的藥物組合物，其特征是治療有效量的作為活性成分的權利要求1和2的化合物及其可藥用鹽或溶劑化物或者它們的混合物與制劑允許的藥物賦形劑或載體制備成藥物組合物。7.或是權利要求5所述的取代苯甲酸含氮類化合物的用途，其特征是所制備的藥物還含有其他抗腫瘤藥物。8.根據權利要求5所述的取代苯甲酸含氮類化合物的用途，其特征是所述藥物的制劑形式包括注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑、或納米制劑。全文摘要本發明涉及一種具有式(I)所示結構的具有細胞毒活性的取代苯甲酸含氮類衍生物以及它們的可藥用鹽或溶劑化物，本發明還涉及制備式(I)化合物的制備方法及其藥物組合物和醫藥用途。本發明的化合物具有較強的抑制人肝癌(BFL-7404)和白血病(HL-60)腫瘤細胞生長的活性，可預期作為抗腫瘤藥物用途。文檔編號C07C235/24GK101157628SQ20071015638公開日2008年4月9日申請日期2007年10月31日優先權日2007年10月31日發明者巫秀美,李校堃,楊雷香,佳瞿,昱趙,鄒宏斌,黃可新申請人:溫州醫學院