專利名稱：一種免疫球蛋白的提取方法
技術領域：
本發明公開了一種免疫球蛋白(IgG)的提取方法，具體地說是以動物血清為原料在簡單條件下提取較高純度免疫球蛋白的方法。
背景技術：
免疫球蛋白(immunoglobulim，Ig)是指具有抗體活性或化學結構與抗體相似的球蛋白。因為最初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統稱為兩種(γ)球蛋白。后來證明，抗體并不都在γ區；而且位于γ區的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。1964年，世界衛生組織舉行專門會議，將具有抗體活性以及與抗體相關的球蛋白統稱為免疫球蛋白(Ig)。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及“正常人”天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因而免疫球蛋白是結構及化學的概念，而抗體是生物學及功能的概念。可以說，所有抗體都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體。
免疫球蛋白普遍存在于哺乳動物和人類的血液、組織液和外分泌中，并廣泛用于生物醫學各部個領域。但在現有技術中，常規使用的是硫酸銨沉淀法，該方法生產成本高，生產周期長，生產效率低，純度差，在大量提取過程中，該方法因血清溶血過多造成產品外觀不良而導致產品質量下降，同時難去除IgG以外的其它雜蛋白。另外，如中國專利申請號為200410029860.4，發明名稱為“血液中高活性免疫球蛋白提取方法”，
公開日為2005年1月12日，公開號CN1563091A，提取純度只有65％。

發明內容
本發明的目的就是針對上述現有技術存在的問題，而提供的一種提取高免疫球蛋白的方法。
將血清按1∶3比例加入醋酸鹽緩沖液，混勻攪拌，用NaOH調將PH至4-4.5，按25-40ul/ml加入辛酸，稀釋血清，用吸管滴加辛酸，同時攪拌，用錫紙密封容器。在離心瓶中平衡，4000rpm-6000rpm離心，在濾器中濾去漂浮的脂肪，沉淀保存在冰箱備用。稱量溶液體積放入容器中，按升按10％-12％體積比例加入PBS，用NaOH調將PH至7.2-7.6，測NaOH的量，計算溶液總體積溶液體積+所加PBS體積+調PH的NaOH體積＝總體積。加干粉硫酸銨，總體積ml×0.227g/ml＝g為所加硫酸銨量，靜置8-24小時。把溶液到入離心管，平衡，4000rpm-6000rpm離心，倒掉上清溶液，收集沉淀，透析。溶液沉淀按10％-15％比例加入PBS，按75％-85％比例加入緩沖液稀釋，透析后8000rpm-6000rpm離心，濾膜過濾后測定蛋白含量。
經測定應用這種改進方法提取的免疫球蛋白比使用常規提取方法所得到的免疫球蛋白的純度從65％提高到97％，可廣泛用于提取家兔血清、馬血清、羊血清、雞血清和鼠血清中的免疫球蛋白。
本發明的優點和積極效果是1、本方法簡便易行，特別在大量提取過程中當使用常規的硫酸銨沉淀法無法有效去除由于血清溶血過多而造成的產品外觀不良而導致產品質量下降時，使用本提取方法可有效去除血清中由于溶血而存在的血紅素，顯著改善產品外觀。
2、本方法可有效去除IgG以外的其它雜蛋白，顯著提高免疫球蛋白的提取純度。
3、使用本提取方法可有效提高產品質量，降低生產成本，縮短生產周期，提高生產效率，有利于迅速開拓市場。
4、本方法提取的免疫球蛋白初級產品，在生物醫學研究領域中根據不同試驗研究的需要而進行再提純，廣泛用做檢測試劑。
5、本方法提取的免疫球蛋白產品，純度高、便于貯存和攜帶。
具體實施例方式本發明將通過實施例進一步說明實施例一1、血清體積V---1.0L；2、1體積血清加3體積醋酸鹽緩沖液；3、用NaOH調PH至4；4、加辛酸25ul/ml，稀釋血清；總體積V---ml×25ul/ml＝---ul5、用吸管滴加辛酸，同時攪拌，錫紙密封容器；6、將液體到入離心瓶中，平衡，離心4000rpm，30分鐘；7、將上清液到進濾器，濾去漂浮的脂肪，沉淀從瓶中取出保存在冰箱；8、稱量溶液體積，放入適當容器，升(V)---9、按體積10％加加PBS；體積V---x 0.10＝---體積V為所加PBS量；10、用NaOH調PH至7.2，測NaOH的量---
11、計算溶液總體積溶液體積+所加PBS體積+調PH的NaOH體積＝總體積；12、加干粉硫酸銨0.225g/ml總體積ml×0.227g/ml＝g為所加硫酸銨量；13、靜置8小時；14、把溶液到入離心管，平衡，離心4000rpm，30分鐘；15、到掉上清溶液，收集所有沉淀，透析；16、溶液沉淀用PBS；大約原始血清體積的10％比如1L×0.10-0.15＝100-150ml1.2L×0.10-0.15＝120-180ml用75％的緩沖液稀釋，剩余的用來洗離心管；17、透析后8000rpm，離心；18、用濾膜過濾；19、測定蛋白含量。
實施例二；1、血清體積V---1.0L；2、1體積血清加3體積醋酸鹽緩沖液；3、用NaOH調PH至5；4、加辛酸40ul/ml，稀釋血清；總體積V---ml×40ul/ml＝---ul5、用吸管滴加辛酸，同時攪拌，用錫紙密封容器；6、將液體到入離心瓶中，平衡，離心6000rpm，30分鐘；
7、將上清液到進濾器，濾去漂浮的脂肪，沉淀保存在冰箱；8、稱量溶液體積，放入適當容器，升(V)---9、加PBS，按體積12％加；體積V---×0.10＝---體積V為所加PBS量；10、用NaOH調PH至7.6，測NaOH的量---11、計算溶液總體積溶液體積+所加PBS體積+調PH的NaOH體積＝總體積；12、加干粉硫酸銨0.229g/ml總體積ml×0.227g/ml＝g為所加硫酸銨量；13、靜置24小時；14、把溶液到入離心管，平衡，離心6000rpm，30分鐘；15、到掉上清溶液，收集所有沉淀透析；16、溶液沉淀用PBS大約原始血清體積的15％比如1L×0.10-0.15＝100-150ml2.2L×0.10-0.15＝120-180ml用85％的緩沖液稀釋，剩余的用來洗離心管；17、透析后6000rpm/分，離心；18、用濾膜過濾；24、測定蛋白含量。
權利要求
1.一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于將血清按比例加入醋酸鹽緩沖液，混勻攪拌，用NaOH調整PH值。
2.根據權利要求1所述的一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于血清和醋酸鹽緩沖液比例為1∶3。
3.根據權利要求1所述的一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于用NaOH調整PH值4-4.5。
4.一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于加入辛酸，在離心瓶中平衡、離心，按升體積比例加入PBS，用NaOH調整PH值。
5.根據權利要求4所述的一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于按25-40ul/ml加入辛酸，離心4000rpm-6000rpm。
6.根據權利要求4所述的一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于按10％-12％體積比例加入PBS。
7.根據權利要求4所述的一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于用NaOH調整PH值7.2-7.6。
8.一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于加干粉硫酸銨按總體積ml×0.227g/ml＝g為所加硫酸銨量，靜置8-24小時
9.一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于溶液到入離心管，平衡、離心4000rpm-6000rpm，倒掉上清溶液，收集沉淀，透析。
10.一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于溶液沉淀按比例加入PBS，按比例加入緩沖液稀釋，透析后離心濾膜過濾后測定蛋白含量。
11.根據權利要求10所述的一種免疫球蛋白的提取方法，其特征在于溶液沉淀按10％-15％加入PBS。
12.根據權利要求10所述的一種免疫球蛋白的提取方法，溶液沉淀按75％-85％加入緩沖液。
全文摘要
本發明公開了一種免疫球蛋白(IgG)的提取方法，免疫球蛋白普遍存在于哺乳動物和人類的血液、組織液和外分泌中，并廣泛用于生物醫學各部個領域。發明人將血清按比例加入醋酸鹽緩沖液，用NaOH pH調整pH值，加入辛酸，平衡、離心、濾脂，按升體積比加入PBS，再用NaOH調整pH值，加干粉硫酸銨，通過靜置、平衡、離心，沉淀，透析，過濾等工藝，經測定應用這種改進方法提取的免疫球蛋白比用常規方法得到的免疫球蛋白的純度從65％提高到97％，可廣泛用于提取家兔血清、馬血清、羊血清、雞血清和鼠血清中的免疫球蛋白，使用本提取方法可有效提高產品質量，降低生產成本，縮短生產周期，提高生產效率，有利于迅速開拓市場。
文檔編號C07K1/00GK1680446SQ20051001124
公開日2005年10月12日 申請日期2005年1月24日 優先權日2005年1月24日
發明者宋懷燕 申請人:宋懷燕