專利名稱：果糖－1,6－二磷酸三鈉鹽結晶新工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及利用果糖-1，6-二磷酸水溶液生產晶形果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽(FDPNa3H·8H2O)的新方法并且使用該方法制備果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽注射劑，應用在臨床上明顯降低了藥物對肌肉、血管的刺激性。
背景技術：
果糖-1，6-二磷酸(Fructose 1，6-diphosphate，FDP)也稱哈登-楊氏酯(esterof Harden Young)。它是一種重要的細胞內代謝產物，是人體糖酵解代謝途徑中的中間產物。能直接調節很多代謝途徑，可視為一種代謝調節劑，特別在能量代謝和調節某些酶活性方面具有重要的作用。在臨床上，可調節糖代謝中若干酶的活性，恢復及改善分子水平的細胞代謝，作用于細胞膜，通過刺激磷酸果糖激酶的活性，增加細胞內ATP濃度，促進K+內流，恢復細胞極化狀態，從而有利于在休克、缺氧、缺血、損傷、體外循環、輸血等狀態下的細胞能量代謝及對葡萄糖的利用，促進細胞修復，改善功能狀態。
FDP在剛開始作為商品是以凍干粉的形式出現的，而這種形式的產品在空氣中極易吸濕和潮解。因此對產品的包裝和運輸提出了更高的要求，尤其是限制了蓋侖氏制劑的發展。于是Bergmeyer等于1972年報道了用乙醇—低溫法制備帶8個結晶水的FDP鈉鹽，該形式的產品在空氣中的穩定性大大增強，但是該方法產品收率僅為78％。90年代，塞卡瑞利和徐漢標等人也報道了用有機溶劑—低溫法制備FDP。該方法需要在低于10℃下，將FDP水溶液與總體積等于2-3倍起始于水溶液體積的丙酮混合，攪拌數十小時后，在低溫下靜置至晶體析出。該方法產品收率為90％，純度為98％；由于采用低溫，這樣勢必增加工業生產的費用。由于此種方法生產FDP晶體時易發生初級非均相成核，導致產品顆粒大小參差不齊，穩定性差。

發明內容
本發明的目的在于避免上述現有技術中的不足之處而提供一種乙醇-醋酸鈉體系結晶出大小可控的果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽晶體新工藝。
本發明的目的可以通過以下措施來達到
一種果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是在pH值為4.0-6.0和質量百分數為35％-50％濃度的FDP溶液中，緩緩加入質量百分數為1％-20％的醋酸鈉和乙醇，乙醇的加入量為起始水溶液體積的0.5-3倍，然后在20℃-40℃的溫度下攪拌結晶，攪拌轉速控制在20-200rpm/min；待結晶完全后抽濾，用乙醇洗滌，真空干燥。
本發明的目的還可以通過以下措施來達到加入質量百分數5％-8％的醋酸鈉；pH值為4.5-5.2；乙醇加入量為起始水溶液體積的1.6-2倍；在20℃-35℃的溫度下攪拌結晶；攪拌轉速控制在40-70rpm/min。
本發明相比現有技術具有如下優點本發明就產品收率和質量而論均取得了極好的結果，使產品收率從90％提高到95％，產品純度從98％提高到99.5％。由于采用了常溫結晶，因此在生產過程中無需冷卻裝置，節約投資，而且更易控制操作，重復性好。通過控制成核速率和晶體的生長速率，從而控制晶體的大小，提高晶體顆粒的均一性。
利用本方法結晶FDP具有顆粒大小均勻，光澤度好，呈流沙狀，乙醇用量少的優點。通過溫度加速試驗也證明，使用此法生產的FDP較之國內外當前使用乙醇—低溫結晶法所制得的FDP具有熱分解慢，穩定性好的特點。
利用本工藝結晶FDP可通過調節溶液的pH或結晶溫度制備不同顆粒大小的晶體，有利于FDP無菌結晶粉的自動分裝，但用其他文獻報道的工藝則不能控制晶體顆粒大小。


圖1為采用乙醇醋酸鈉體系制得的晶體放大100倍后的電鏡照片圖。
圖2為采用乙醇低溫體系(傳統方法)制得的晶體放大200倍后的電鏡照片圖。
圖3為注射用果糖二磷酸鈉血管刺激性試驗中乙醇-醋酸鈉體系給予注射用水家兔右耳緣靜脈放大100倍電鏡照片圖。
圖4為注射用果糖二磷酸鈉血管刺激性試驗中給予對照藥家兔右耳緣靜脈放大100倍電鏡照片圖。
圖5為注射用果糖二磷酸鈉肌肉刺激性試驗中乙醇-醋酸鈉體系給予注射用水家兔右股四頭肌放大100倍電鏡照片圖。
圖6為注射用果糖二磷酸鈉肌肉刺激性試驗中給予對照藥家兔右股四頭肌放大100倍電鏡照片圖。
其中，圖1中顯示的晶體平均粒徑162μm，圖2中顯示的晶體粒徑從50μm至110μm不等
具體實施例方式以下實施例將對本發明作進一步說明，但對本發明沒有限制。
實施例1將無水的100gFDP三鈉鹽溶于300mL水中，用醋酸調至pH4.8，加入醋酸鈉10g，攪拌下加入乙醇450ml，在25℃保溫攪拌至結晶完全。將該懸浮液抽濾，用85％的乙醇洗滌所得的白色固體，真空干燥，于是即可以得到產品128g，結晶收率為95％。
產品的分析結果C6H11O12P2Na3·8H2O(分子量為550.18)元素 測定值(％) 理論值(％)C13.6 13.10H5.02 4.96O58.2858.16P11.2311.26Na 12.3112.53實施例2在30％的FDP溶液中，分別調pH值為4.5、4.8、5.0、5.2，加入8％的醋酸鈉，邊攪拌邊加入1.6倍FDP溶液體積的乙醇，在30℃保溫攪拌至結晶完全。抽濾，乙醇洗滌，真空干燥。表1.1給出了產品粒度分布。
由此可得，pH對晶體顆粒分布的影響較大。溶液的pH從4.5增加到5.2相差0.7，而晶體的平均粒度差異卻達84μm，因此，可以通過控制溶液的pH值達到控制晶體顆粒大小的目的。
表1.1 pH對晶體顆粒分布的影響

實施例3在pH4.5 30％的FDP溶液中，加入8％的醋酸鈉，邊攪拌邊加入1.6倍FDP溶液體積的乙醇，分別在20℃、25℃、30℃保溫攪拌至結晶完全。抽濾，乙醇洗滌，真空干燥。表1.2給出了產品粒度分布。
表1.2溫度對晶體顆粒分布的影響

溫度對FDP結晶的影響較大，尤其是對FDP晶體顆粒大小的影響。結晶溫度從20℃增加到30℃，而晶體顆粒卻從92μm增加到241μm，因此，可以通過調節結晶溫度的方法來生產不同顆粒大小的晶體。
實施例4將無水的2000gFDP三鈉鹽溶于6000mL水中，用醋酸調至pH4.8，加入醋酸鈉200g，攪拌下加入乙醇9L，在25℃保溫攪拌至結晶完全。將該懸浮液抽濾，用85％的乙醇洗滌所得的白色固體，真空干燥，于是可以得到產品2709g，結晶收率為95％。
將該晶體用滅菌注射用水溶解后(藥物濃度為2mg/ml)，進行溶血試驗，靜脈注射血管、肌肉刺激性試驗。方法和結果如下
1、溶血試驗方法日本大耳白雌性無孕家兔1只，2.2kg，取家兔心臟血20ml，按常規方法制備血球，并用生理鹽水稀釋成2％的混懸液供測試用。
判斷標準全溶血(溶液澄明紅色，管底無細胞殘留部分)；溶血(紅細胞全部下沉，上層液體無色澄明)；聚集(雖不溶血，但出現紅細胞聚集，振搖后不能分散)。
結果37攝氏度水浴中保溫3小時，不溶血，也不發生聚集。
2、靜脈注射血管刺激性試驗方法日本大耳白家兔4只，雌雄不拘(雌性兔無孕)，2.2～2.5kg，分兩組(乙醇-醋酸鈉體系組、乙醇低溫體系組即對照組)，每組2只，按常規方法進行試驗和檢查。
結果家兔每日以7.5ml/kg耳緣靜脈滴注0.2g/ml的注射用果糖二磷酸鈉，連續5次，24h后注射部位血管未見明顯充血及水腫，血管邊緣清晰，病理組織檢查未見組織變性及壞死等病理改變；對照藥注射側的血管亦未見異常改變；見圖3。
3、靜脈注射肌肉刺激性試驗方法日本大耳白家兔8只，雌雄不拘(雌性兔無孕)，2.2～2.5kg，分兩組(乙醇-醋酸鈉體系組、乙醇低溫體系組即對照組)，每組4只，按常規方法進行試驗和檢查。
結果家兔股四頭肌肌注0.1g/ml和0.2g/ml的注射用果糖二磷酸鈉1ml，家兔無異常反應，48h后注射部位血管均未見家兔有刺激現象和充血、水腫、變性，病理組織檢查未見組織變性及壞死等病理改變，見圖1。注射對照藥的一側，在0.2g/ml濃度注射時家兔有刺激現象，出現蹬腿、掙扎情況，處死后見注射部位有＜1cm的充血區；0.1g/ml濃度注射時家兔無異常，見圖4。
上述的試驗結果證明，使用本發明的新方法所制注射劑安全性高，刺激性小。
權利要求
1.一種果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是在pH值為4.0-6.0和質量百分數為35％-50％濃度的FDP溶液中，緩緩加入質量百分數為1％-20％的醋酸鈉和乙醇，乙醇的加入量為起始水溶液體積的0.5-3倍，然后在20℃-40℃的溫度下攪拌結晶，攪拌轉速控制在20-200rpm/min；待結晶完全后抽濾，用乙醇洗滌，真空干燥。
2.根據權利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是加入質量百分數5％-8％的醋酸鈉。
3.根據權利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是pH值為4.5-5.2。
4.根據權利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是乙醇加入量為起始水溶液體積的1.6-2倍。
5.根據權利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是在20℃-35℃的溫度下攪拌結晶。
6.根據權利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三鈉鹽結晶新工藝，其特征是攪拌轉速控制在40-70rpm/min。
全文摘要
本發明提供一種乙醇－醋酸鈉體系結晶出大小可控的果糖－1，6－二磷酸三鈉鹽晶體新工藝。該工藝，其特征是在pH值為4.0－6.0和質量百分數為35％－50％濃度的FDP溶液中，緩緩加入質量百分數為1％－20％的醋酸鈉和乙醇，乙醇的加入量為起始水溶液體積的0.5－3倍，然后在20℃－40℃的溫度下攪拌結晶，攪拌轉速控制在20－200rpm/min；待結晶完全后抽濾，用乙醇洗滌，真空干燥。
文檔編號C07H11/00GK1651448SQ20041006544
公開日2005年8月10日 申請日期2004年12月6日 優先權日2004年12月6日
發明者應漢杰, 歐陽平凱, 呂浩, 趙谷林, 史雋 申請人:南京工業大學